一種玉米和杜仲葉制畜禽用乳酶生的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種玉米和杜仲葉制畜禽用乳酶生的制備方法，它的主要特征在于將藥食同源的杜仲葉和人用藥乳酶生生物發(fā)酵生產(chǎn)技術(shù)、玉米生產(chǎn)淀粉和葡萄糖生產(chǎn)技術(shù)有機(jī)結(jié)合在一起，經(jīng)液體和固態(tài)雙重發(fā)酵，促進(jìn)其主要活性成分乳酸腸鏈球菌的生長繁殖，其代謝產(chǎn)物甘露聚糖肽等有效成分成正比例上升，營養(yǎng)物質(zhì)得到進(jìn)一步降解，各成分之間協(xié)同作用，增強(qiáng)和拓寬了產(chǎn)品的作用和功效。此外，本發(fā)明顯著縮短了生產(chǎn)環(huán)節(jié)，降低了60%玉米用量，有效利用60%的可再生植物資源，減少玉米加工成固態(tài)葡萄糖生產(chǎn)過程中的能源消耗，具有顯著地經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。
【專利說明】一種玉米和杜仲葉制畜禽用乳酶生的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及到乳酶生，具體來說是一種玉米和杜仲葉制畜禽用乳酶生的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]人用藥品乳酶生是一種乳酸腸鏈球菌的活菌制劑，其主要臨床藥理作用為腸鏈球菌發(fā)酵糖產(chǎn)生乳酸抑制腸道腐敗菌生長，調(diào)整腸道菌群平衡實(shí)現(xiàn)預(yù)防和治療腸道疾病的目的。衛(wèi)生部部標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定:乳酶生含活性腸鏈球菌數(shù)每克不少于1000萬個(gè)，粉劑有效期兩年，片劑有效期一年半。乳酶生為助消化藥，用于小兒綠便和腸道異常發(fā)酵引起的腸脹氣、腹瀉。該品種在我國的生產(chǎn)歷史長達(dá)40余年，至今仍然暢銷不衰。
[0003]據(jù)生產(chǎn)企業(yè)介紹，乳酶生產(chǎn)量的80%都被大量用于畜禽當(dāng)作飼料添加劑使用，且應(yīng)用效果良好，預(yù)防和治療畜禽腸道疾病以及促進(jìn)畜禽生長發(fā)育效果十分顯著。
[0004]如圖1所示為現(xiàn)行的乳酶生的生產(chǎn)工藝，該種工藝在近幾十年的應(yīng)用中均未有較大的改進(jìn)。本發(fā)明在現(xiàn)有生產(chǎn)工藝的基礎(chǔ)上，結(jié)合“玉米生產(chǎn)淀粉工藝”和“雙酶法生產(chǎn)葡萄糖工藝”，利用杜仲葉較高的藥用價(jià)值和豐富的營養(yǎng)成分，與乳酸腸鏈球菌發(fā)酵生產(chǎn)有機(jī)結(jié)合，提供了一種利用酶解玉米粉和杜仲葉粉產(chǎn)物作為乳酸腸鏈球菌發(fā)酵培養(yǎng)基，經(jīng)液態(tài)和固態(tài)雙重發(fā)酵，生產(chǎn)畜禽飼料添加劑及其制備方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明提供了一種玉米和杜仲葉制畜禽用乳酶生的制備方法，它是一種無毒無害、綠色純天然的畜禽飼料添加劑，可部分替代抗生素在飼料中的應(yīng)用，消除抗生素大量應(yīng)用所帶來的不良影響。
[0006]本發(fā)明實(shí)現(xiàn)上述效果采用以下技術(shù)方案:
一種玉米和杜仲葉制畜禽用乳酶生的制備方法，其制備步驟如下:
O制漿:將玉米和杜仲葉除去雜質(zhì)后，按玉米和杜仲葉粉質(zhì)量比為4:1比例混合制得混合料，將上述混合料用凈水浸泡24小時(shí)，其中混合料和凈水的質(zhì)量比例為1:1，粉碎制成30%?50%的玉米杜仲葉混合漿料；
2)糊化:將上述漿料加溫并控制溫度70?80°C，糊化10?30min；
3)液化:調(diào)整糊化后的漿料PH為6?7，加入中溫淀粉酶，中溫淀粉酶用量為每克淀粉6?12個(gè)單位，控制液化溫度70?80°C，液化至稀碘液檢測(cè)由藍(lán)色轉(zhuǎn)為稀碘液原色；
4)糖化:將上述液化好的漿料調(diào)整PH為4?5，控制溫度40?60°C，加入糖化酶，糖化酶的用量為每克淀粉100?200個(gè)單位，糖化I?6小時(shí)；
5)于上述糖化好的漿料中，補(bǔ)充漿料總重I?2%的氮源，補(bǔ)充漿料總重0.3?2%無機(jī)鹽以及漿料總重50%的杜仲葉粉；其中氮源為蛋白胨1-1.5%、牛肉膏0.3-0.5%，無機(jī)鹽為其中氯化鈉0.3?0.5%,碳酸鈣0.5?1.5% ；
6)將上述混合料通蒸汽加熱115°C滅菌25?30min后,迅速冷卻降溫至38?40°C ； 7)接種三級(jí)乳酸腸鏈球菌的發(fā)酵液，在無菌條件下接種量為滅菌后固體物料的3-5%，物料與發(fā)酵液充分混合后，在潔凈條件下，轉(zhuǎn)入達(dá)到凈化級(jí)別的固體發(fā)酵間，控制固體發(fā)酵溫度38?40°C，培養(yǎng)發(fā)酵38-42小時(shí)；
8)將發(fā)酵好的物料轉(zhuǎn)入沸騰干燥間，控制沸騰干燥溫度40?44°C，待物料水分達(dá)到5-10%時(shí)，即可取樣送檢，標(biāo)準(zhǔn)化處理，檢驗(yàn)合格后，按規(guī)定要求分裝和包裝。
[0007]所述的三級(jí)乳酸腸鏈球菌的發(fā)酵液培養(yǎng)基配方和發(fā)酵工藝參數(shù)為:
蛋白胨2-4%，牛肉膏0.1-0.5%，氯化鈉0.2-0.5%，葡萄糖1_4%，碳酸鈣0.5-2.5%，培養(yǎng)液調(diào)PH6.8-7.5，接種量1-5%，36?40°C培養(yǎng)；培養(yǎng)時(shí)間為一級(jí)、二級(jí)培養(yǎng)20-22小時(shí)，三級(jí)培養(yǎng)16-18小時(shí)。
[0008]所述的三級(jí)乳酸腸鏈球菌的發(fā)酵液的制備方法如下:
O培養(yǎng)基的制備:按照上述配方稱取相應(yīng)原料，混合均勻后進(jìn)行定容，并分別置于150mm試管、250ml三角瓶、1000ml三角瓶中，培養(yǎng)基的裝入量分別為9一 10ml、150— 170ml、750— 800ml，控制滅菌溫度115?121°C，滅菌時(shí)間25?30min，滅菌后分別冷卻至室溫置于冰箱冷藏備用或直接供接、轉(zhuǎn)種使用；
2)液體菌種制備:取生產(chǎn)用腸鏈球菌斜面菌種I支，按無菌操作要求接種一級(jí)試管，一級(jí)試管菌種成熟后轉(zhuǎn)種二級(jí)三角瓶、二級(jí)三角瓶菌種成熟后轉(zhuǎn)種三級(jí)三角瓶、三級(jí)三角瓶菌種成熟后轉(zhuǎn)種300-500L不銹鋼種子罐；培養(yǎng)發(fā)酵溫度37?40°C，培養(yǎng)發(fā)酵時(shí)間22?44小時(shí)，300-500L不銹鋼種子罐菌種成熟后接種于前述滅菌后的固體發(fā)酵培養(yǎng)基中。
[0009]本發(fā)明的主要特征在于將藥食同源的杜仲葉和人用藥乳酶生生物發(fā)酵生產(chǎn)技術(shù)、玉米生產(chǎn)淀粉和葡萄糖生產(chǎn)技術(shù)有機(jī)結(jié)合在一起，經(jīng)液體和固態(tài)雙重發(fā)酵，促進(jìn)其主要活性成分乳酸腸鏈球菌的生長繁殖，其代謝產(chǎn)物甘露聚糖肽等有效成分成正比例上升，營養(yǎng)物質(zhì)得到進(jìn)一步降解，各成分之間協(xié)同作用，增強(qiáng)和拓寬了產(chǎn)品的作用和功效。此外，本發(fā)明顯著縮短了生產(chǎn)環(huán)節(jié)，降低了 60%玉米用量，有效利用60%的可再生植物資源，減少玉米加工成固態(tài)葡萄糖生產(chǎn)過程中的能源消耗，具有顯著地經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0010]圖1為現(xiàn)行的人用藥品乳酶生的生產(chǎn)工藝。
[0011]圖2為本發(fā)明的工藝流程。
【具體實(shí)施方式】
[0012]為了能清楚的了解本發(fā)明的技術(shù)手段，以下特舉較佳實(shí)例詳細(xì)說明:
實(shí)施例1
首先是IOOOml三級(jí)乳酸腸鏈球菌發(fā)酵液的制備。
[0013]I)培養(yǎng)基制備:
①稱取蛋白胨30g,牛肉膏3g,氯化鈉3.5g,乳糖或葡萄糖30g,碳酸I丐18g ；
②現(xiàn)將稱量好的蛋白胨、牛肉膏、氯化鈉置于500ml的純凈水中，加熱溶解，調(diào)節(jié)PH6.8后，用純凈水補(bǔ)充到1500ml ；
③將上述制備好的培養(yǎng)基分裝于Φ15X 150mm試管中(每支9ml), 250ml三角瓶中(每瓶150ml)、IOOOml三角瓶中(每瓶750ml)，同時(shí)加入稱量好的乳糖或葡萄糖，包扎好置于滅菌鍋中，119°C滅菌28 min后，冷卻備用。
[0014]2)發(fā)酵液的制備:
取生產(chǎn)用斜面一支，按斜面轉(zhuǎn)試管操作要求轉(zhuǎn)接乳酸腸鏈球菌于一級(jí)試管中38°C培養(yǎng)22小時(shí)，然后取發(fā)酵好的一級(jí)發(fā)酵液按4%接種量接種到含有150ml 二級(jí)培養(yǎng)液的三角瓶中40°C培養(yǎng)22小時(shí)，然后取發(fā)酵好的二級(jí)發(fā)酵液按4%接種量接種到含有750ml三級(jí)培養(yǎng)液的三角瓶中40°C培養(yǎng)18小時(shí)。
[0015]乳酶生的制備方法如下:
O原料的預(yù)處理:將玉米和杜仲葉除雜粉碎，分別粉碎到30目備用；將標(biāo)準(zhǔn)乳酸腸鏈球菌菌種，按規(guī)定進(jìn)行鑒定強(qiáng)化后，轉(zhuǎn)入生產(chǎn)用斜面，制得斜面菌種，供一級(jí)培養(yǎng)發(fā)酵用；
2)制漿糊化:分別取上述處理的玉米粉4kg，杜仲葉粉1kg，置入30L不銹鋼發(fā)酵罐，力口入IOkg水，制成漿料，加溫到80°C，糊化25min，調(diào)整糊化后的漿料PH為6.8，加入中溫淀粉酶7.2g，控制液化溫度76°C，以稀碘液檢驗(yàn)，液化液由藍(lán)色變?yōu)橄〉庖涸礊橐夯K點(diǎn)；
3)糖化:啟動(dòng)攪拌，將液化好的漿料調(diào)PH為5.0，控制溫度50°C，緩緩加入糖化酶6.9克，保溫糖化5小時(shí)，糖化結(jié)束后，補(bǔ)充0.8kg碳酸鈣和6kg杜仲葉粉，調(diào)整物料含水量為45%，調(diào)整PH為7.2，加熱滅菌，119°C滅菌28 min后，迅速冷卻降溫至40°C?；鹧娣ń臃N預(yù)先準(zhǔn)備好的三級(jí)乳酸腸鏈球菌發(fā)酵液1000ml，關(guān)閉接種閥門，充分?jǐn)嚢杈鶆蚝筠D(zhuǎn)無菌發(fā)酵間；
4)固體發(fā)酵培養(yǎng):將混合乳酸腸鏈球菌發(fā)酵液的固體物料均勻分?jǐn)傇趲в胁讳P鋼絲網(wǎng)容器的不銹鋼絲網(wǎng)上，控制料層厚度在8.5cm,控制料溫度在40°C，發(fā)酵42小時(shí)，經(jīng)檢PH下降到4.8時(shí)，即可轉(zhuǎn)入44°C的電熱恒溫干燥箱中烘干，待物料水分達(dá)到8%時(shí)，即可取樣送檢，標(biāo)準(zhǔn)化處理，檢驗(yàn)合格后，按規(guī)定要求分裝和包裝。
[0016]實(shí)施例2
100L三級(jí)乳酸腸鏈球菌發(fā)酵液的制備。
[0017]I) 一二三級(jí)培養(yǎng)基制備:
①稱取蛋白胨30g，牛肉膏4g，氯化鈉4g，乳糖或葡萄糖32g，碳酸鈣20g；
②現(xiàn)將稱量好的蛋白胨、牛肉膏、氯化鈉置于500ml的純凈水中，加熱溶解，調(diào)節(jié)PH7.0后，用純凈水補(bǔ)充到1500ml ；
③將上述制備好的培養(yǎng)基分裝于Φ15X 150mm試管中(每支9ml), 250ml三角瓶中(每瓶150ml)、IOOOml三角瓶中(每瓶750ml)，同時(shí)加入稱量好的乳糖或葡萄糖，包扎好置于滅菌鍋中，120°C滅菌25 min后，冷卻備用。
[0018]2) 100L發(fā)酵液制備:
①取生產(chǎn)用斜面一支，按斜面轉(zhuǎn)試管操作要求轉(zhuǎn)接乳酸腸鏈球菌于一級(jí)試管中39°C培養(yǎng)22小時(shí)，然后取發(fā)酵好的一級(jí)發(fā)酵液按4%接種量接種到含有150ml 二級(jí)培養(yǎng)液的三角瓶中40°C培養(yǎng)22小時(shí)，然后取發(fā)酵好的二級(jí)發(fā)酵液按4%接種量接種到含有750ml三級(jí)培養(yǎng)液的三角瓶中40°C培養(yǎng)18小時(shí)；
②稱取蛋白胨3kg,牛肉膏0.4kg,氯化鈉0.4kg,乳糖或葡萄糖3kg,碳酸I丐2.0kg。先將稱量好的蛋白胨、牛肉膏、氯化鈉置于20L的純凈水中，加熱溶解，調(diào)節(jié)PH為7.0后，全部轉(zhuǎn)移到300L不銹鋼發(fā)酵罐中，用水補(bǔ)充到80L，關(guān)閉發(fā)酵罐投料口，先用夾套升溫到80°C后，兩路或三路進(jìn)蒸汽升溫到120°C，保溫120°C滅菌25min后迅速冷卻到38°C后，火焰接種法轉(zhuǎn)接三級(jí)發(fā)酵液8L，38°C培養(yǎng)18小時(shí)即可。
[0019]乳酶生的制備方法如下:
1)原料的預(yù)處理:將玉米和杜仲葉除雜粉碎，分別粉碎到30目備用。將標(biāo)準(zhǔn)乳酸腸鏈球菌菌種，按規(guī)定進(jìn)行鑒定強(qiáng)化后，轉(zhuǎn)入生產(chǎn)用斜面，制得斜面菌種，供一級(jí)培養(yǎng)發(fā)酵用；
2)制漿糊化:分別取上述處理的玉米粉400kg，杜仲葉粉100kg，置入5m3滅菌器中，力口入800kg水，制成漿料，加溫到75°C，糊化25min。調(diào)整糊化后的漿料PH為6.5，加入中溫淀粉酶700g，控制液化溫度75°C，以稀碘液檢驗(yàn)，液化液由藍(lán)色變?yōu)橄〉庖涸礊橐夯K
占.3)糖化:啟動(dòng)攪拌，將液化好的漿料調(diào)PH5.2，控制溫度50°C，緩緩加入糖化酶700克，保溫糖化4.5小時(shí)。糖化結(jié)束后，補(bǔ)充20kg碳酸鈣和700kg杜仲葉粉，調(diào)整PH為7.0，加熱滅菌，120°C滅菌25min后，迅速冷卻降溫至40°C。接種預(yù)先準(zhǔn)備好的三級(jí)乳酸腸鏈球菌發(fā)酵液100L，關(guān)閉接種閥門，充分?jǐn)嚢杈鶆蚝筠D(zhuǎn)無菌發(fā)酵間；
4)固體發(fā)酵培養(yǎng):將混合乳酸腸鏈球菌發(fā)酵液的固體物料均勻分?jǐn)傇趲в胁讳P鋼絲網(wǎng)容器的不銹鋼絲網(wǎng)上，控制料層厚度在7.5cm，控制料溫度在40°C，發(fā)酵42小時(shí)，經(jīng)檢PH下降到4.5時(shí)停止發(fā)酵，收集無菌固體發(fā)酵間發(fā)酵好的固體物料，進(jìn)行沸騰干燥，控制沸騰干燥溫度42°C，控制干燥后水分8%，標(biāo)準(zhǔn)化處理，檢驗(yàn)合格后，按規(guī)定要求分裝和包裝。
[0020]實(shí)施例3
150L三級(jí)乳酸腸鏈球菌發(fā)酵液的制備。
[0021 ] I) 一二三級(jí)培養(yǎng)基制備:
①稱取蛋白胨30g,牛肉膏4g,氯化鈉3.5g,乳糖或葡萄糖35g,碳酸I丐IOg ；
②將稱量好的蛋白胨、牛肉膏、氯化鈉置于500ml的純凈水中，加熱溶解，調(diào)節(jié)PH6.5后，用純凈水補(bǔ)充到1500ml ；
③將上述制備好的培養(yǎng)基分裝于Φ15X 150mm試管中(每支9ml), 250ml三角瓶中(每瓶150ml)、IOOOml三角瓶中(每瓶750ml)，同時(shí)加入稱量好的乳糖或葡萄糖，包扎好置于滅菌鍋中，115°C滅菌30 min后，冷卻備用。
[0022]2)150L發(fā)酵液制備:
①取生產(chǎn)用斜面一支，按斜面轉(zhuǎn)試管操作要求轉(zhuǎn)接乳酸腸鏈球菌于一級(jí)試管中37°C培養(yǎng)20小時(shí)，然后取發(fā)酵好的一級(jí)發(fā)酵液按4%接種量接種到含有150ml 二級(jí)培養(yǎng)液的三角瓶中37°C培養(yǎng)20小時(shí)，然后取發(fā)酵好的二級(jí)發(fā)酵液按4%接種量接種到含有750ml三級(jí)培養(yǎng)液的三角瓶中37°C培養(yǎng)16小時(shí)；
②稱取蛋白胨6kg,牛肉膏0.8kg,氯化鈉0.7kg,乳糖或葡萄糖4_8kg,碳酸I丐1.5kg。先將稱量好的蛋白胨、牛肉膏、氯化鈉置于50L的純凈水中，加熱溶解，調(diào)節(jié)PH6.5后，全部轉(zhuǎn)移到500L不銹鋼發(fā)酵罐中，用水補(bǔ)充到100L，關(guān)閉發(fā)酵罐投料口，先用夾套升溫到80°C后，兩路或三路進(jìn)蒸汽升溫到115°C，保溫115°C滅菌25-30min后迅速冷卻到38_40°C后，火焰接種法轉(zhuǎn)接三級(jí)發(fā)酵液7L，37°C培養(yǎng)16小時(shí)即可。
[0023]乳酶生的制備方法如下:
O原料的預(yù)處理:將玉米和杜仲葉除雜粉碎，分別粉碎到30目備用，將標(biāo)準(zhǔn)乳酸腸鏈球菌菌種，按規(guī)定進(jìn)行鑒定強(qiáng)化后，轉(zhuǎn)入生產(chǎn)用斜面，制得斜面菌種，供一級(jí)培養(yǎng)發(fā)酵用；
2)制漿糊化:分別取上述處理的玉米粉800kg，杜仲葉粉200kg，置入5m3滅菌器中，力口Λ 1000kg水，制成漿料，加溫到70°C，糊化25min。調(diào)整糊化后的漿料PH為6.5，加入中溫淀粉酶1.4kg，控制液化溫度70°C，以稀碘液檢驗(yàn)，液化液由藍(lán)色變?yōu)橄〉庖涸礊橐夯?br> H占.廣、>、、、?
3)糖化:啟動(dòng)攪拌，將液化好的漿料調(diào)PHl.5，控制溫度45°C，緩緩加入糖化酶1.4kg，保溫糖化3小時(shí)。糖化結(jié)束后，補(bǔ)充30kg碳酸鈣和1200kg杜仲葉粉，調(diào)整物料含水量為45%，調(diào)整PH為7.0，加熱滅菌，115°C滅菌25 min后，迅速冷卻降溫至38°C。接種預(yù)先準(zhǔn)備好的三級(jí)乳酸腸鏈球菌發(fā)酵液150L，關(guān)閉接種閥門，充分?jǐn)嚢杈鶆蚝筠D(zhuǎn)無菌發(fā)酵間；
4)固體發(fā)酵培養(yǎng):將混合乳酸腸鏈球菌發(fā)酵液的固體物料均勻分?jǐn)傇趲в胁讳P鋼絲網(wǎng)容器的不銹鋼絲網(wǎng)上，控制料層厚度在7.5cm,控制料溫度在37°C，發(fā)酵38小時(shí)，經(jīng)檢PH下降到4.5時(shí)停止發(fā)酵，收集無菌固體發(fā)酵間發(fā)酵好的固體物料，進(jìn)行沸騰干燥，控制沸騰干燥溫度40°C，控制干燥后水分8%，標(biāo)準(zhǔn)化處理，檢驗(yàn)合格后，按規(guī)定要求分裝和包裝。
[0024]實(shí)施例4
1000ml三級(jí)乳酸腸鏈球菌發(fā)酵液的制備。
[0025]I)培養(yǎng)基制備:
①稱取蛋白胨30g，牛肉膏4g，氯化鈉3.5g，乳糖或葡萄糖30g，碳酸鈣20g ；
②現(xiàn)將稱量好的蛋白胨、牛肉膏、氯化鈉置于500ml的純凈水中，加熱溶解，調(diào)節(jié)PH6.9后，用純凈水補(bǔ)充到1500ml ；
③將上述制備好的培養(yǎng)基分裝于Φ15X 150mm試管中(每支9ml), 250ml三角瓶中(每瓶150ml)、1000ml三角瓶中(每瓶750ml)，同時(shí)加入稱量好的乳糖或葡萄糖，包扎好置于滅菌鍋中，120°C滅菌30 min后，冷卻備用。
[0026]2)發(fā)酵液的制備: 取生產(chǎn)用斜面一支，按斜面轉(zhuǎn)試管操作要求轉(zhuǎn)接乳酸腸鏈球菌于一級(jí)試管中39°C培養(yǎng)21小時(shí)，然后取發(fā)酵好的一級(jí)發(fā)酵液按4.5%接種量接種到含有150ml 二級(jí)培養(yǎng)液的三角瓶中39°C培養(yǎng)21小時(shí)，然后取發(fā)酵好的二級(jí)發(fā)酵液按4.5%接種量接種到含有750ml三級(jí)培養(yǎng)液的三角瓶中39°C培養(yǎng)17小時(shí)。
[0027]乳酶生的制備方法如下:
1)原料的預(yù)處理:將玉米和杜仲葉除雜粉碎，分別粉碎到30目備用。將標(biāo)準(zhǔn)乳酸腸鏈球菌菌種，按規(guī)定進(jìn)行鑒定強(qiáng)化后，轉(zhuǎn)入生產(chǎn)用斜面，制得斜面菌種，供一級(jí)培養(yǎng)發(fā)酵用；
2)制漿糊化:分別取上述處理的玉米粉4kg，杜仲葉粉1kg，置入30L不銹鋼發(fā)酵罐，加入8kg水，制成漿料，加溫到75V，糊化20min。調(diào)整糊化后的漿料PH為6.5，加入中溫淀粉酶7g，控制液化溫度75°C，以稀碘液檢驗(yàn)，液化液由藍(lán)色變?yōu)橄〉庖涸礊橐夯K點(diǎn)；
3)糖化:啟動(dòng)攪拌，將液化好的漿料調(diào)PH5.0，控制溫度50°C，緩緩加入糖化酶7克，保溫糖化4.5小時(shí)。糖化結(jié)束后，補(bǔ)充碳酸鈣0.8kg、杜仲葉粉7kg,蛋白胨13g、牛肉膏4g、氯化鈉4g，調(diào)整物料含水量為50%，調(diào)整PH為7.2，加熱滅菌，120°C滅菌30 min后，迅速冷卻降溫至39°C?；鹧娣ń臃N預(yù)先準(zhǔn)備好的三級(jí)乳酸腸鏈球菌發(fā)酵液1000ml，關(guān)閉接種閥門，充分?jǐn)嚢杈鶆蚝筠D(zhuǎn)無菌發(fā)酵間；
4)固體發(fā)酵培養(yǎng):將混合乳酸腸鏈球菌發(fā)酵液的固體物料均勻分?jǐn)傇趲в胁讳P鋼絲網(wǎng)容器的不銹鋼絲網(wǎng)上，控制料層厚度在7.5cm,控制料溫度在39°C，發(fā)酵40小時(shí)，經(jīng)檢PH下降到4.7時(shí)，即可轉(zhuǎn)入42°C的電熱恒溫干燥箱中烘干，待物料水分達(dá)到8%時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)化處理，檢驗(yàn)合格后，按規(guī)定要求分裝和包裝。
[0028]實(shí)施例5
100L三級(jí)乳酸腸鏈球菌發(fā)酵液的制備。
[0029]I ) 一二三級(jí)培養(yǎng)基制備:
①稱取蛋白胨30g,牛肉膏4g,氯化鈉4.5g,乳糖或葡萄糖35g,碳酸I丐20g ；
②現(xiàn)將稱量好的蛋白胨、牛肉膏、氯化鈉置于500ml的純凈水中，加熱溶解，調(diào)節(jié)PH7.2后，用純凈水補(bǔ)充到1500ml ；
③將上述制備好的培養(yǎng)基分裝于Φ15X 150mm試管中(每支9ml), 250ml三角瓶中(每瓶150ml )、IOOOml三角瓶中(每瓶750ml )，同時(shí)加入稱量好的乳糖或葡萄糖。包扎好置于滅菌鍋中，120°C滅菌30 min后，冷卻備用。
[0030]2 ) 100L發(fā)酵液制備:
①取生產(chǎn)用斜面一支，按斜面轉(zhuǎn)試管操作要求轉(zhuǎn)接乳酸腸鏈球菌于一級(jí)試管中40°C培養(yǎng)22小時(shí)，然后取發(fā)酵好的一級(jí)發(fā)酵液按5%接種量接種到含有150ml 二級(jí)培養(yǎng)液的三角瓶中40°C培養(yǎng)22小時(shí)，然后取發(fā)酵好的二級(jí)發(fā)酵液按5%接種量接種到含有750ml三級(jí)培養(yǎng)液的三角瓶中40°C培養(yǎng)18小時(shí)；
②稱取蛋白胨3kg,牛肉膏0.4kg,氯化鈉0.45kg,乳糖或葡萄糖3.5kg,碳酸I丐2.0kg。先將稱量好的蛋白胨、牛肉膏、氯化鈉置于20L的純凈水中，加熱溶解，調(diào)節(jié)PH7.2后，全部轉(zhuǎn)移到300L不銹鋼發(fā)酵罐中，用水補(bǔ)充到80L，關(guān)閉發(fā)酵罐投料口，先用夾套升溫到80°C后，兩路或三路進(jìn)蒸汽升溫到120°C，保溫120°C滅菌30min后迅速冷卻到40°C后，火焰接種法轉(zhuǎn)接三級(jí)發(fā)酵液10L，40°C培養(yǎng)18小時(shí)即可。
[0031]乳酶生的制備方法如下。
[0032]I)原料的預(yù)處理:將玉米和杜仲葉除雜粉碎，分別粉碎到40目備用。將標(biāo)準(zhǔn)乳酸腸鏈球菌菌種，按規(guī)定進(jìn)行鑒定強(qiáng)化后，轉(zhuǎn)入生產(chǎn)用斜面，制得斜面菌種，供一級(jí)培養(yǎng)發(fā)酵用。
[0033]2)制漿糊化:分別取上述處理的玉米粉400kg，杜仲葉粉100kg，置入5m3滅菌器中，加入IOOOkg水，制成漿料，加溫到80°C，糊化lOmin。調(diào)整糊化后的漿料PH為6.8，加入中溫淀粉酶700g，控制液化溫度78V,以稀碘液檢驗(yàn)，液化液由藍(lán)色變?yōu)橄〉庖涸礊橐夯K點(diǎn)；
3)糖化:啟動(dòng)攪拌，將液化好的漿料調(diào)PH5.0，控制溫度60°C，緩緩加入糖化酶700克，保溫糖化5小時(shí)。糖化結(jié)束后，補(bǔ)充碳酸I丐21.5kg、杜仲葉600kg、蛋白胨1.2kg、牛肉膏420g、氯化鈉385g，調(diào)整物料含水量47%，調(diào)整PH為7.2，加熱滅菌，120°C滅菌25min后，迅速冷卻降溫至40°C。接種預(yù)先準(zhǔn)備好的三級(jí)乳酸腸鏈球菌發(fā)酵液100L，關(guān)閉接種閥門，充分?jǐn)嚢杈鶆蚝筠D(zhuǎn)無菌發(fā)酵間；
4)固體發(fā)酵培養(yǎng):將混合乳酸腸鏈球菌發(fā)酵液的固體物料均勻分?jǐn)傇趲в胁讳P鋼絲網(wǎng)容器的不銹鋼絲網(wǎng)上，控制料層厚度在6cm，控制料溫度在40°C，發(fā)酵42小時(shí)，經(jīng)檢PH下降到4.8時(shí)停止發(fā)酵，收集無菌固體發(fā)酵間發(fā)酵好的固體物料，進(jìn)行沸騰干燥，控制沸騰干燥溫度44°C，控制干燥后水分7%，標(biāo)準(zhǔn)化處理，檢驗(yàn)合格后，按規(guī)定要求分裝和包裝。
[0034]實(shí)施例6
150L三級(jí)乳酸腸鏈球菌發(fā)酵液的制備。[0035]I) 一二三級(jí)培養(yǎng)基制備:
①稱取蛋白胨25g,牛肉膏4g,氯化鈉3.5g,乳糖或葡萄糖25g,碳酸I丐15g ；
②現(xiàn)將稱量好的蛋白胨、牛肉膏、氯化鈉置于500ml的純凈水中，加熱溶解，調(diào)節(jié)PH7.0后，用純凈水補(bǔ)充到1500ml ；
③將上述制備好的培養(yǎng)基分裝于Φ15X 150mm試管中(每支9ml), 250ml三角瓶中(每瓶150ml )、IOOOml三角瓶中(每瓶750ml )，同時(shí)加入稱量好的乳糖或葡萄糖。包扎好置于滅菌鍋中，115°C滅菌30 min后，冷卻備用。
[0036]2)150L發(fā)酵液制備:
①取生產(chǎn)用斜面一支，按斜面轉(zhuǎn)試管操作要求轉(zhuǎn)接乳酸腸鏈球菌于一級(jí)試管中38°C培養(yǎng)21小時(shí)，然后取發(fā)酵好的一級(jí)發(fā)酵液按3%接種量接種到含有150ml 二級(jí)培養(yǎng)液的三角瓶中37°C培養(yǎng)21小時(shí)，然后取發(fā)酵好的二級(jí)發(fā)酵液按3%接種量接種到含有750ml三級(jí)培養(yǎng)液的三角瓶中37°C培養(yǎng)16小時(shí)；
②稱取蛋白胨7kg,牛肉膏0.8kg,氯化鈉0.8kg,乳糖或葡萄糖7kg,碳酸I丐2.5kg。先將稱量好的蛋白胨、牛肉膏、氯化鈉置于50L的純凈水中，加熱溶解，調(diào)節(jié)PH7.1后，全部轉(zhuǎn)移到500L不銹鋼發(fā)酵罐中，用水補(bǔ)充到100L，關(guān)閉發(fā)酵罐投料口，先用夾套升溫到80°C后，兩路或三路進(jìn)蒸汽升溫到115°C，保溫115°C滅菌30min后迅速冷卻到38°C后，火焰接種法轉(zhuǎn)接三級(jí)發(fā)酵液20L，37°C培養(yǎng)18小時(shí)即可。
[0037]乳酶生的制備方法如下:
1)原料的預(yù)處理:將玉米和杜仲葉除雜粉碎，分別粉碎到20目備用。將標(biāo)準(zhǔn)乳酸腸鏈球菌菌種，按規(guī)定進(jìn)行鑒定強(qiáng)化后，轉(zhuǎn)入生產(chǎn)用斜面，制得斜面菌種，供一級(jí)培養(yǎng)發(fā)酵用；
2)制漿糊化:分別取上述處理的玉米粉800kg，杜仲葉粉200kg，置入5m3滅菌器中，力口入1500kg水，制成漿料，加溫到70°C，糊化15min。調(diào)整糊化后的漿料PH為7，加入中溫淀粉酶1.5kg，控制液化溫度80°C，以稀碘液檢驗(yàn)，液化液由藍(lán)色變?yōu)橄〉庖涸礊橐夯K
占.3)糖化:啟動(dòng)攪拌，將液化好的漿料調(diào)PH5.5，控制溫度60°C，緩緩加入糖化酶1.5kg，保溫糖化5小時(shí)。糖化結(jié)束后，補(bǔ)充碳酸I丐45kg、杜仲葉1500kg、蛋白胨2.5kg、牛肉膏800g、氯化鈉850g，調(diào)整物料含水量為45%，調(diào)整PH為7.2，加熱滅菌，115°C滅菌25min后，迅速冷卻降溫至38°C。接種預(yù)先準(zhǔn)備好的三級(jí)乳酸腸鏈球菌發(fā)酵液150L，關(guān)閉接種閥門，充分?jǐn)嚢杈鶆蚝筠D(zhuǎn)無菌發(fā)酵間；
4)固體發(fā)酵培養(yǎng):將混合乳酸腸鏈球菌發(fā)酵液的固體物料均勻分?jǐn)傇趲в胁讳P鋼絲網(wǎng)容器的不銹鋼絲網(wǎng)上，控制料層厚度在9cm，控制料溫度在37°C，發(fā)酵42小時(shí)，發(fā)酵物料PH下降到4.7時(shí)，收集無菌固體發(fā)酵間發(fā)酵好的固體物料，進(jìn)行沸騰干燥，控制沸騰干燥溫度42°C，控制干燥后水分6.5%，標(biāo)準(zhǔn)化處理，檢驗(yàn)合格后，按規(guī)定要求分裝和包裝。
【權(quán)利要求】
1.一種玉米和杜仲葉制畜禽用乳酶生的制備方法，其特征在于:其制備原料為玉米、杜仲葉、淀粉酶、糖化酶和乳酸腸鏈球菌。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種玉米和杜仲葉制畜禽用乳酶生的制備方法，其特征在于: 其制備步驟如下: O制漿:將玉米和杜仲葉除去雜質(zhì)后，按玉米和杜仲葉粉質(zhì)量比為4:1比例混合制得混合料，將上述混合料用凈水浸泡24小時(shí)，其中混合料和凈水的質(zhì)量比例為1:1，粉碎制成30%?50%的玉米杜仲葉混合漿料(也可將玉米和杜仲葉粉先粉碎后混合制漿)； 2)糊化:將上述漿料加溫并控制溫度70?80°C，糊化10?30min； 3)液化:調(diào)整糊化后的漿料PH為6?7，加入中溫淀粉酶，中溫淀粉酶用量為每克淀粉6?12個(gè)單位，控制液化溫度70?80°C，液化至稀碘液檢測(cè)由藍(lán)色轉(zhuǎn)為稀碘液原色； 4)糖化:將上述液化好的漿料調(diào)整PH為4?5，控制溫度40?60°C，加入糖化酶，糖化酶的用量為每克淀粉100?200個(gè)單位，糖化I?6小時(shí)； 5)于上述糖化好的漿料中，補(bǔ)充漿料總重I?2%的氮源，補(bǔ)充漿料總重0.3?2%無機(jī)鹽以及漿料總重50%的杜仲葉粉；其中氮源為蛋白胨1-1.5%、牛肉膏0.3-0.5%，無機(jī)鹽為其中氯化鈉0.3?0.5%,碳酸鈣0.5?1.5% ； 6)將上述混合料通蒸汽加熱115°C滅菌25?30min后,迅速冷卻降溫至38?40°C ； 7)接種三級(jí)乳酸腸鏈球菌的發(fā)酵液，在無菌條件下接種量為滅菌后固體物料的3-5%，物料與發(fā)酵液充分混合后，在潔凈條件下，轉(zhuǎn)入達(dá)到凈化級(jí)別的固體發(fā)酵間，控制固體發(fā)酵溫度38?40°C，培養(yǎng)發(fā)酵38-42小時(shí)； 8)將發(fā)酵好的物料轉(zhuǎn)入沸騰干燥間，控制沸騰干燥溫度40?44°C，待物料水分達(dá)到5-10%時(shí)，即可取樣送檢，標(biāo)準(zhǔn)化處理，檢驗(yàn)合格后，按規(guī)定要求分裝和包裝。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種玉米和杜仲葉制畜禽用乳酶生的制備方法，其特征在于:所述的三級(jí)乳酸腸鏈球菌的發(fā)酵液培養(yǎng)基配方和發(fā)酵工藝參數(shù)為:蛋白胨2-4%，牛肉膏0.1-0.5%，氯化鈉0.2-0.5%，葡萄糖1-4%，碳酸鈣0.5-2.5%，培養(yǎng)液調(diào)PH6.8-7.5，接種量1-5%，36?40°C培養(yǎng)；培養(yǎng)時(shí)間為一級(jí)、二級(jí)培養(yǎng)20?22小時(shí)，三級(jí)培養(yǎng)16?18小時(shí)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種玉米和杜仲葉制畜禽用乳酶生的制備方法，其特征在于: 所述的三級(jí)乳酸腸鏈球菌的發(fā)酵液的制備方法如下: O培養(yǎng)基的制備:按照上述配方稱取相應(yīng)原料，混合均勻后進(jìn)行定容，并分別置于150mm試管、250ml三角瓶、1000ml三角瓶中，培養(yǎng)基的裝入量分別為9?10ml、15(Tl70ml、75(T800ml，控制滅菌溫度115?1211:，滅菌時(shí)間25?30min，滅菌后分別冷卻至室溫置于冰箱冷藏備用或直接供接、轉(zhuǎn)種使用； 2)液體菌種制備:取生產(chǎn)用腸鏈球菌斜面菌種I支，按無菌操作要求接種一級(jí)試管，經(jīng)37°C _39°C恒溫培養(yǎng)22-24小時(shí)，一級(jí)試管菌種成熟后轉(zhuǎn)種二級(jí)三角瓶，同樣經(jīng)370C -39°C恒溫培養(yǎng)22-24小時(shí)，二級(jí)三角瓶菌種成熟后轉(zhuǎn)種三級(jí)三角瓶、三級(jí)三角瓶菌種經(jīng)37°C _39°C恒溫培養(yǎng)16-18小時(shí)成熟后采用火焰接種法轉(zhuǎn)種300-500L不銹鋼種子罐；保持培養(yǎng)發(fā)酵溫度37?40°C，間隔I小時(shí)攪拌5-10分鐘，培養(yǎng)發(fā)酵時(shí)間22?44小時(shí)，300-500L不銹鋼種子罐菌種成熟后接種于前述滅菌后的固體發(fā)酵培養(yǎng)基中。
【文檔編號(hào)】A23K1/14GK103931875SQ201410029184
【公開日】2014年7月23日 申請(qǐng)日期:2014年1月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月22日
【發(fā)明者】鄒吉祥, 王建峰, 邵海峰 申請(qǐng)人:三門峽梅奧生物工程有限公司