小鼠燙傷模型的建立方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于病理學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及小鼠燙傷模型的建立方法。本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是為小鼠燙傷模型的建立提供一種新方法。本發(fā)明的技術(shù)方案是小鼠燙傷模型的建立方法，包括如下步驟：將小鼠麻醉，采用恒溫恒壓燙傷儀，在50～90℃的燙傷溫度對(duì)小鼠燙傷3s，燙傷壓力為500g。本發(fā)明簡單易行的建立了各種燙傷深度模型，為燒傷創(chuàng)面的治療提供了新的研究平臺(tái)。
【專利說明】小鼠燙傷模型的建立方法
【技術(shù)領(lǐng)域】[0001]本發(fā)明屬于病理學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及小鼠燙傷模型的建立方法。
【背景技術(shù)】
[0002]在燒傷創(chuàng)面感染和疤痕增生防治藥物的應(yīng)用中，促進(jìn)創(chuàng)面愈合非常關(guān)鍵，也是燒傷創(chuàng)面愈合的研究重點(diǎn)。燒傷創(chuàng)面修復(fù)的研究中，首先須建立一個(gè)穩(wěn)定、規(guī)范的燒傷創(chuàng)面治療藥物藥效學(xué)評(píng)價(jià)的動(dòng)物燙傷模型。一個(gè)理想、規(guī)范的燙傷模型有助于準(zhǔn)確的研究燙傷后機(jī)體各系統(tǒng)及局部創(chuàng)面的發(fā)生、發(fā)展演變規(guī)律，探索針對(duì)性的治療措施。目前多采用恒溫水浴鍋、各種火焰、各種蒸汽制備燒(燙)傷創(chuàng)面模型，但存在諸多缺點(diǎn)，如致傷溫度不精確、燙傷深度不易控制、無法控制致傷壓力、致傷面積不易精確、致傷深度不均勻等，對(duì)于燒傷創(chuàng)創(chuàng)面修復(fù)相關(guān)研究影響極大，相關(guān)報(bào)道燙傷的實(shí)驗(yàn)條件差異較大，穩(wěn)定性差，不能作為通用標(biāo)準(zhǔn)。有關(guān)燒傷動(dòng)物模型的制作，文獻(xiàn)報(bào)道有多種致傷方法，如輻射法、燃燒法和熱水燙傷法等。輻射法優(yōu)點(diǎn)是簡易且清潔，致傷所需時(shí)間較短；若嚴(yán)格控制致傷條件，重復(fù)性較好，但該法易受擬燒傷區(qū)是否平坦、電壓是否恒定及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在非麻醉狀態(tài)下所致的體位改變等因素的影響，創(chuàng)面深度可出現(xiàn)深淺不一。燃燒法簡單易行，將燃料如凝固汽油，無水酒精等涂布于擬致傷區(qū)域；燃燒一段時(shí)間后滅火。由于其在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的非麻醉狀態(tài)下實(shí)行，可增加由于動(dòng)物掙扎而產(chǎn)生的意外，同時(shí)引發(fā)休克；由于操作不當(dāng)可導(dǎo)致創(chuàng)面感染及創(chuàng)面摩擦而創(chuàng)面加深。熱水燙傷法大都采用恒溫恒壓水浴鍋，但其缺點(diǎn)為致傷面積不易精確；致傷溫度不易精確；無法控制致傷壓力，致傷深度不均勻。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是為小鼠燙傷模型的建立提供一種新方法。
[0004]本發(fā)明的技術(shù)方案是小鼠燙傷模型的建立方法，包括如下步驟:將小鼠麻醉，采用恒溫恒壓燙傷儀，在50~90°C的燙傷溫度對(duì)小鼠燙傷3s，燙傷壓力為500g。
[0005]具體的，燙傷面積<小鼠體表面積的5%，選擇小鼠兩后腿中間部背部皮膚為燙傷創(chuàng)面。
[0006]具體的，小鼠背部脫毛采用8%的硫化鈉，脫毛后24小時(shí)進(jìn)行燙傷。
[0007]具體的，小鼠麻醉方法為，用1%戊巴比妥鈉按60mg/kg體重進(jìn)行腹腔注射。
[0008]其中，所述的燙傷溫度為55°C，得到I度燙傷模型。
[0009]其中，所述的燙傷溫度為60-65°C，得到淺II度燙傷模型。
[0010]其中，所述的燙傷溫度為70-75°C，得到深I(lǐng)I度燙傷模型。
[0011]其中，所述的燙傷溫度為80-90°C，得到III度燙傷模型。
[0012]本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明方法具有燙傷面積、深度控制準(zhǔn)確，操作簡便、重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)，簡單易行的建立了各種燙傷深度模型。本發(fā)明為燒傷創(chuàng)面的治療提供了新的研究平臺(tái)，具有廣闊的應(yīng)用前景?！緦＠綀D】

【附圖說明】
[0013]圖1YLS-5Q臺(tái)式超級(jí)控溫燙傷儀示意圖；
[0014]圖2成年健康小鼠背部正常皮膚組織切片HE染色示意圖。圖片放大倍數(shù)為200倍。
[0015]圖3燙傷溫度為50°C時(shí)表皮層細(xì)胞核無明顯嗜堿性改變，蘇木素染色均一，細(xì)胞膜完整，細(xì)胞無明顯腫脹、溶解現(xiàn)象，創(chuàng)周無明顯炎癥反應(yīng)。燙傷溫度為55°C時(shí)表皮層細(xì)胞核嗜堿性改變，與真皮層比較表皮層HE染色偏弱，表皮層細(xì)胞細(xì)胞膜不完整，部分細(xì)胞出現(xiàn)溶解現(xiàn)象，部分生發(fā)層無明顯損傷表現(xiàn)，符合I度燙傷模型。圖片放大倍數(shù)為200倍。
[0016]圖4燙傷溫度為60°C時(shí)整個(gè)表皮層和部分真皮乳頭層細(xì)胞核嗜堿性改變，細(xì)胞膜不完整，部分細(xì)胞出現(xiàn)溶解現(xiàn)象，細(xì)胞死亡明顯；燙傷溫度為65°C時(shí)損傷深度加深，侵及毛囊、汗腺等皮膚附件，但仍殘余部分毛囊、汗腺等皮膚附件無明顯損傷；因此燙傷溫度為60~65°C時(shí)燙傷符合淺II度燙傷模型。圖片放大倍數(shù)為200倍。
[0017]圖5燙傷溫度為70~75°C時(shí)皮膚組織層次性稍紊亂，毛囊及汗腺等皮膚附件大部分損傷，但仍可見局部殘留部分網(wǎng)狀層及部分毛囊組織，符合深I(lǐng)I度燙傷模型。圖片放大倍數(shù)為200倍。
[0018]圖6燙傷溫度為80~90°C時(shí)皮膚組織層次性紊亂，毛囊及汗腺等皮膚附件組織損傷殆盡，無明顯殘留，發(fā)生嚴(yán)重炎癥反應(yīng)，炎癥細(xì)胞侵蝕，部分皮膚組織缺失，符合III度燙傷模型。圖片放大倍數(shù)為200倍。
【具體實(shí)施方式】·
[0019]本發(fā)明中，采用超衡溫燙傷儀建立成年C57bl/6小鼠燙傷模型，通過溫度和時(shí)間兩個(gè)因素控制燙傷的深度，進(jìn)行病理切片做組織學(xué)檢查，判定燙傷的深度。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，在相同燙傷時(shí)間為3秒不同燙傷溫度下，隨著燙傷溫度的增加，24h取材HE切片中表皮細(xì)胞細(xì)胞核嗜堿性改變，發(fā)生細(xì)胞核溶解現(xiàn)象，細(xì)胞核由深藍(lán)色逐漸變淺，高溫時(shí)表皮壞死，毛囊鞘上皮細(xì)胞破壞；真皮深層血管擴(kuò)張明顯，真皮深層膠原纖維明顯腫脹，真皮層大量淋巴及單核細(xì)胞浸潤。采用現(xiàn)國內(nèi)普遍使用的中國九分法估計(jì)燒傷深度，結(jié)果表明:采用臺(tái)式超級(jí)控溫燙傷儀在相同燙傷時(shí)間下，I度燙傷模型的燙傷溫度以55°C為佳；淺II度燙傷模型的燙傷溫度優(yōu)選為60~65°C ;深I(lǐng)I度燙傷模型的燙傷的優(yōu)選溫度為70~75°C JII度燙傷模型的燙傷溫度以80~90°C為佳。
[0020]實(shí)驗(yàn)性燒/燙傷的損傷程度主要取決于致傷溫度、致傷面積、致傷壓力，為此本發(fā)明采用恒溫恒壓燙傷儀，其特點(diǎn)是:1、溫度控制:該燙傷儀具有精確的控溫系統(tǒng)，將儀器燙頭的表面溫度控制在±0.1度；最大限度地提高燙頭的容溫性，保證燙頭接觸動(dòng)物皮膚后溫降達(dá)到最小值；2、時(shí)間控制，儀器計(jì)時(shí)精確到0.01s，并有了自動(dòng)開始計(jì)時(shí)和計(jì)時(shí)結(jié)束自動(dòng)報(bào)警提示功能；3、燙頭觸壓力控制:該燙傷儀器設(shè)計(jì)了觸壓力調(diào)整結(jié)構(gòu)，可根據(jù)動(dòng)物的不同，選擇不同的觸壓力。該儀器達(dá)到了制作理想燙傷制模較理想的要求，在實(shí)際的使用中也確實(shí)達(dá)到了燙傷深度的可控性和燙傷模型的一致性。本發(fā)明采用恒溫恒壓燙傷儀下以相同燙傷時(shí)間及壓力，控制燙傷溫度來觀察燙傷創(chuàng)面深度，以建立各種燙傷深度模型；具有燙傷面積、深度控制準(zhǔn)確，操作簡便、重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)。
[0021]下述實(shí)施例中使用的主要的儀器見表1。[0022]表1下述實(shí)施例使用的主要儀器
[0023]
【權(quán)利要求】
1.小鼠燙傷模型的建立方法，其特征在于:包括如下步驟:將小鼠麻醉，采用恒溫恒壓燙傷儀，在50~90°C的燙傷溫度對(duì)小鼠燙傷3s，燙傷壓力為500g。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小鼠燙傷模型的建立方法，其特征在于:燙傷面積<小鼠體表面積的5%，選擇小鼠兩后腿中間部背部皮膚為燙傷創(chuàng)面。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的小鼠燙傷模型的建立方法，其特征在于:小鼠背部脫毛采用8%的硫化鈉，脫毛后24小時(shí)進(jìn)行燙傷。
4.根據(jù)權(quán)利要求1~3任一項(xiàng)所述的小鼠燙傷模型的建立方法，其特征在于:小鼠麻醉方法為，用1%戊巴比妥鈉按60mg/kg體重進(jìn)行腹腔注射。
5.根據(jù)權(quán)利要求1~4所述的小鼠燙傷模型的建立方法，其特征在于:所述的燙傷溫度為55°C，得到I度燙傷模型。
6.根據(jù)權(quán)利要求1~4所述的小鼠燙傷模型的建立方法，其特征在于:所述的燙傷溫度為60~65°C，得到淺II度燙傷模型。
7.根據(jù)權(quán)利要求1~4所述的小鼠燙傷模型的建立方法，其特征在于:所述的燙傷溫度為70~75°C，得到深I(lǐng)I度燙傷模型。
8.根據(jù)權(quán)利要求1~4所述的小鼠燙傷模型的建立方法，其特征在于:所述的燙傷溫度為80~90°C，得到III度 燙傷模型。
【文檔編號(hào)】A61D1/00GK103735334SQ201410033402
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2014年1月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月24日
【發(fā)明者】詹日興, 羅高興, 吳軍 申請人:中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院