一種葡萄有孢漢遜酵母菌及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種葡萄有孢漢遜酵母菌（Hanseniaspora?uvarum），菌株為Y68，保藏號(hào)為：CGMCC?No.8042。本發(fā)明中的葡萄有孢漢遜酵母菌（Hanseniaspora?uvarum）Y68對(duì)桃、櫻桃采后褐腐病菌、葡萄采后灰霉病菌、西紅柿灰霉病、蘋果采后灰霉病菌、蘋果采后青霉病菌和梨采后青霉病菌具有抑制作用；對(duì)桃采后褐腐病、櫻桃褐腐病、葡萄灰霉病、西紅柿灰霉病、蘋果采后灰霉病、梨采后青霉病、蘋果采后青霉病具有抑制作用。葡萄有孢漢遜酵母菌（Hanseniaspora?uvarum）Y68尤其對(duì)灰霉病菌的抑制作用非常明顯，抑菌圈直徑均在10mm以上。
【專利說明】一種葡萄有孢漢遜酵母菌及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種葡萄有孢漢遜酵母菌及其應(yīng)用，屬于微生物【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]植物真菌病害給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶來了巨大的損失，而果實(shí)采后真菌病害是一類重要的病害，造成了果實(shí)的大量減產(chǎn)，嚴(yán)重影響了果實(shí)的食用價(jià)值和市場(chǎng)價(jià)值，導(dǎo)致了果農(nóng)的經(jīng)濟(jì)收入降低。在發(fā)達(dá)國(guó)家，果實(shí)采后病害引起的損失量占果實(shí)總量的15%以上，在發(fā)展中國(guó)家由于缺少必要的防控技術(shù)和設(shè)備，果實(shí)采后病害引起的損失量占總量的30%甚至更高上。果實(shí)采后病害的發(fā)生已給現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)尤其是高端果蔬產(chǎn)品生產(chǎn)與加工造成了嚴(yán)重影響。而目前，國(guó)內(nèi)大多的研究多集中于果實(shí)的田間及園間防治，而對(duì)于果實(shí)采后病害的防治工作做的相對(duì)較少。
[0003]由灰葡萄孢(Botrytis cinerea)病原菌引起的葡萄灰霉病目前在世界范圍內(nèi)都是葡萄的重要病害。在我國(guó)由灰葡萄孢(Botrytis cinerea)引起的灰霉病是葡萄上的第一大病害，也是影響我國(guó)葡萄產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要因素。目前我國(guó)葡萄栽培面積已超過50萬公頃，產(chǎn)量超過750萬噸。在我國(guó)葡萄果樹栽培面積位列世界前六，產(chǎn)量位居世界前五。葡萄灰霉病發(fā)于葡萄園間，但是引起果實(shí)減產(chǎn)和腐爛大多發(fā)生于果實(shí)采摘期間和采后貯藏期間。由于葡萄采后大多都需要遠(yuǎn)距離運(yùn)輸和長(zhǎng)期貯藏，因此，對(duì)葡萄采后灰霉病的防控顯得非常重要。而目前，國(guó)內(nèi)對(duì)葡萄灰霉病能夠有效防治的手段不多，即便是化學(xué)農(nóng)藥，有效的種類也不是很多。而葡萄作為人們桌上的經(jīng)常食用的果實(shí)，對(duì)食品安全方面有著更高的要求。
[0004]由Monilinia spp.病原真菌引起的桃褐腐病目前在世界范圍內(nèi)都是桃子的第一大病害，也是影響桃產(chǎn)業(yè)發(fā)`展的第一大問題。據(jù)統(tǒng)計(jì)，在發(fā)達(dá)國(guó)家如美國(guó)、以色列、意大利、法國(guó)等，采后褐腐病導(dǎo)致的損失量就占桃總產(chǎn)量的10%-30%;在發(fā)展中國(guó)家由于缺少必要的防治技術(shù)和相關(guān)設(shè)備其損失量達(dá)30%-50%，甚至更高；有些地區(qū)，桃褐腐病的大面積嚴(yán)重發(fā)生，幾乎導(dǎo)致桃果實(shí)絕收。因此，對(duì)桃褐腐病的防治和控制顯得迫切和重要。
[0005]目前生產(chǎn)中對(duì)葡萄灰霉病和桃褐腐病的防治仍然以化防為主，但由此帶來的“3R”負(fù)面影響非常嚴(yán)重?；瘜W(xué)農(nóng)藥的大量使用嚴(yán)重破壞了生態(tài)環(huán)境，導(dǎo)致果實(shí)中大量的農(nóng)藥殘留，影響人們身體健康。生物防治，利用拮抗微生物防治病害，已成為病害綜合防治的重要組成部分，是化學(xué)農(nóng)藥試劑應(yīng)用最有前景的替代手段之一。
[0006]葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum)在自然環(huán)境中普遍存在,主要存在于含糖量較為豐富的果實(shí)表面和花上。該菌生長(zhǎng)速度快，營(yíng)養(yǎng)簡(jiǎn)單，生長(zhǎng)力強(qiáng)。在作為生防防治方面，它擁有自己獨(dú)特的優(yōu)勢(shì):1)該酵母菌對(duì)環(huán)境的污染較少，不產(chǎn)生毒素；2)該酵母菌不產(chǎn)生抗生素，對(duì)人類相對(duì)比較安全；3)相對(duì)于真菌而言，該酵母菌不產(chǎn)生致敏孢子；
4)該酵母生長(zhǎng)所需營(yíng)養(yǎng)比較簡(jiǎn)單；5)該酵母適合商業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)；6)酵母菌細(xì)胞結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，基因組較小，比較容易在分子水平上進(jìn)行操作。因此，它具有很好的應(yīng)用前景。
[0007]葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum)在自然界中分布十分廣闊,而目前國(guó)內(nèi)還未有防治葡萄灰霉病和桃褐腐病的葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum)的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明的目的在于提供一種葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum),菌株為 Y68，保藏號(hào)為=CGMCC N0.8042。
[0009]本發(fā)明的目的也在于提供一種病原菌抑制劑，其活性成分為上述葡萄有孢漢遜酵母菌和/或上述葡萄有孢漢遜酵母菌的代謝物。所述病原菌抑制劑對(duì)下述至少一種病原菌具有抑制作用: [0010]A、桃采后褐腐病菌；
[0011]B、蘋果采后灰霉病菌；
[0012]C、蘋果采后青霉病菌；
[0013]D、葡萄采后灰霉病菌；
[0014]E、梨米后青霉病菌；
[0015]F、櫻桃采后褐腐病菌；
[0016]G、西紅柿灰霉病圃。
[0017]所述桃米后褐腐病菌為Monilinia fructicola 或 Monilinia Iaxa 或 Moniliniafructigena ;所述蘋果采后灰霉病菌為Botrytis cinerea ;所述蘋果采后青霉病菌為Penicillium expansum ;所述葡萄采后灰霉病菌為Botrytis cinerea ;所述梨采后青霉病菌為Penicillium expansum ;所述西紅柿灰霉病菌為Botrytis cinerea ;所述樓桃采后褐腐病菌為 Monilinia fructicola。
[0018]本發(fā)明的目的還在于提供一種病害抑制劑，其活性成分為上述葡萄有孢漢遜酵母菌和/或上述葡萄有孢漢遜酵母菌的代謝物。
[0019]所述病害為下述至少一種:
[0020]A、桃褐腐病；
[0021 ] B、平果米后灰霉??；
[0022]C、平果米后青霉?。?br> [0023]D、葡萄灰霉??；
[0024]E、梨米后青霉?。?br> [0025]F、櫻桃褐腐?。?br> [0026]G、西紅柿灰霉病。
[0027]本發(fā)明的葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum),菌株號(hào)為Y68,其在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心的登記入冊(cè)編號(hào)為CGMCC N0.8042。
[0028]所述葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum) Y68為從果實(shí)表面分離得到。
[0029]所述葡萄有抱漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum)Y68的5.8S rDNA基因及TSl/ITS2序列如SEQ ID N0.1所示，26S rDNA基因序列如SEQ ID N0.2所示。
[0030]所述所述葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum) Y68的形態(tài)學(xué)特征:白色奶油樣菌落，營(yíng)養(yǎng)體細(xì)胞出芽生殖，兩極出芽，檸檬狀細(xì)胞，無假菌絲。25°C在5%Difco麥芽糖瓊脂培養(yǎng)基上通過細(xì)胞與芽接合形成子囊孢子，每個(gè)子囊包含1-2個(gè)盔甲狀的子囊孢子。
[0031]所述葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum) Y68的生理生化特征:可進(jìn)行葡萄糖發(fā)酵，不可進(jìn)行棉子糖和乳糖發(fā)酵；碳源同化方面:山梨糖、蔗糖、麥芽糖、海藻糖、D-甘露醇為陽性，半乳糖、乳糖、阿拉伯糖、鼠李糖、核糖醇、赤蘚糖醇為陰性。所述葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum) Y68于含有5% (質(zhì)量含量)氯化鈉的培養(yǎng)基中均可正常生長(zhǎng)，于PH4.0-5.5的培養(yǎng)基中均可正常生長(zhǎng)，在環(huán)境溫度為4°C下生長(zhǎng)勢(shì)弱，在40°C以上不可生長(zhǎng)；最佳適宜生長(zhǎng)溫度為25-30°C。所述葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniasporauvarum) Y68產(chǎn)具有抑菌作用較強(qiáng)的物質(zhì)。
[0032]本發(fā)明的目的還在于提供上述葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum)Y68和/或其代謝物在抑制病原菌、制備病原菌抑制劑、抑制病害、制備病害抑制劑中的應(yīng)用。
[0033]上述所述病原菌為下述至少一種:
[0034]A、桃采后褐腐病菌；
[0035]B、蘋果采后灰霉病菌；
[0036]C、蘋果采后青霉病菌；
[0037]D、葡萄采后灰霉病菌；
[0038]E、梨米后青霉病菌；
[0039]F、櫻桃采后褐腐病菌；
[0040]G、西紅柿灰霉病菌；
[0041]所述病害為下述至少一種:
[0042]A、桃褐腐?。?br> [0043]B、平果米后灰霉??；
[0044]C、平果米后青霉??；
[0045]D、葡萄灰霉?。?br> [0046]E、梨米后青霉??；
[0047]F、櫻桃褐腐病；
[0048]G、西紅柿灰霉病。
[0049]所述桃米后褐腐病菌為Monilinia fructicola 或 Monilinia Iaxa 或 Moniliniafructigena ;所述蘋果采后灰霉病菌為Botrytis cinerea ;所述蘋果采后青霉病菌為Penicillium expansum ;所述葡萄采后灰霉病菌為Botrytis cinerea ;所述梨采后青霉病菌為Penicillium expansum ;所述西紅柿灰霉病菌為Botrytis cinerea ;所述樓桃采后褐腐病菌為 Monilinia fructicola。
[0050]所述葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum) Y68的代謝物可從所述葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum) Y68的發(fā)酵液中獲得。所述葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum) Y68的代謝物具體可按照如下方法制備:在液體培養(yǎng)基(包括YPD、PD等能使酵母菌生長(zhǎng)的液體培養(yǎng)基)中培養(yǎng)葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniasporauvarum)Y68,除去液體培養(yǎng)物(發(fā)酵液)中的葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum)Y68即得到所述葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum)的代謝物。
[0051]本發(fā)明中的葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum) Y68對(duì)桃、樓桃米后褐腐病菌、葡萄采后灰霉病菌、西紅柿灰霉病、蘋果采后灰霉病菌、蘋果采后青霉病菌和梨采后青霉病菌具有抑制作用；對(duì)桃采后褐腐病、櫻桃褐腐病、葡萄灰霉病、西紅柿灰霉病、蘋果采后灰霉病、梨采后青霉病、蘋果采后青霉病具有抑制作用。葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum) Y68尤其對(duì)灰霉病菌的抑制作用非常明顯,抑菌圈直徑均在IOmm以上。
[0052]生物材料保藏說明
[0053]分類命名:葡萄有抱漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum)
[0054]菌株編號(hào):Y68
[0055]保藏機(jī)構(gòu):中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心
[0056]保藏機(jī)構(gòu)簡(jiǎn)稱:CGMCC
[0057]地址:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)
[0058]保藏日期:2013年8月16日
[0059]保藏中心登記入冊(cè)編號(hào):CGMCC N0.8042。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0060]圖1為所述葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum) Y68顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)，Y68生長(zhǎng)于YNBD培養(yǎng)基上，280C，48h，“一”代表10 μ m。
[0061]圖2為所述葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum)Y68在桃子上對(duì)桃褐腐病菌(Monilinia fructicola)引起的病斑的抑制效果。
[0062]圖3為所述葡萄 有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum)Y68在樓桃上對(duì)褐腐病菌(Monilinia fructicola)引起的病斑的抑制效果。
[0063]圖4為所述葡萄有抱漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum)Y68在PDA培養(yǎng)基上對(duì)葡萄灰霉病菌(Botrytis cinerea)的抑制效果。
[0064]圖5為所述葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum)Y68在西紅柿上對(duì)灰霉病菌(Botrytis cinerea)引起的病斑的抑制效果。
[0065]圖6為所述葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum)Y68在蘋果上對(duì)青霉病菌(Penicillium expansum)引起的病斑的抑制效果。
[0066]圖7為所述葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum)Y68在蘋果上對(duì)蘋果灰霉病菌(Botrytis cinerea)引起的病斑的抑制效果。
[0067]圖8為所述葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum)Y68在梨上對(duì)青霉病菌(Penicillium expansum)引起的病斑的抑制效果。
【具體實(shí)施方式】
[0068]以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0069]下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0070]桃褐腐病菌-鏈核盤菌(Monilinia fructicola(wint.)Rehm)(王菲等.桃褐
腐病的發(fā)生與防治.果樹花卉.2012年第5期p58)；
[0071]樓桃褐腐病菌-鏈核盤菌(Monilinia fructicola (wint.) Honey)(張濤等.西
安市櫻桃褐腐病發(fā)生特點(diǎn)及綜合防治措施.中國(guó)植保導(dǎo)刊.2011年第I期p20);[0072]蘋果采后灰霉病-半知菌亞門真菌，灰葡萄孢(Botrytis cinerea Per.ex
Fr);(郭小芳等.6株放線菌定殖能力及對(duì)蘋果灰霉病防治效果.西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào).2009年第5 期 pll6)
[0073]蘋果采后青霉病-擴(kuò)展青霉(Penicillium expansum Link, 1809);(趙文亞
等.拮抗酵母菌對(duì)蘋果青霉病的防治效果.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué).2011年第5期p2676)
[0074]葡萄灰霉病-半知菌亞門真菌，灰葡萄孢(Botrytis cinerea Per.ex Fr);(謝
長(zhǎng)榮等.葡萄灰霉病的發(fā)生及綜合防治技術(shù).現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技.2010年第18期pl55)
[0075]梨采后青霉病-擴(kuò)展青霉(Penicillium expansum Link, 1809);(齊東梅等.枯
草芽孢桿菌HllO對(duì)蘋果梨采后青霉病和黑斑病的防治效果.應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào).2005年第11期)
[0076]西紅柿灰霉病-半知菌亞門真菌，灰葡萄孢(Botrytis cinerea Per.ex Fr)；
(徐明等.番茄灰霉病病原菌生物學(xué)特性的研究.貴州農(nóng)業(yè)科學(xué).2009年第3期p68) [0077]實(shí)施例1
[0078]本發(fā)明葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum) Y68的分離與菌株鑒定
[0079]1、樣品采集
[0080]從有中國(guó)有機(jī)葡萄園,采集葡萄。
[0081]2、菌株的分離篩選及拮抗篩選
[0082]從有機(jī)水果上分離菌株，采用常規(guī)梯度稀釋涂布分離，用PDA (含有硫酸鏈霉素)和YPD瓊脂(含有硫酸鏈霉素)共2種培養(yǎng)基分別在28°C條件下培養(yǎng)，挑取菌落形態(tài)差異較大并可純培養(yǎng)的細(xì)菌，在YB)瓊脂培養(yǎng)基上純化保存，并以葡萄灰霉病菌為靶標(biāo)病原菌進(jìn)行拮抗菌的初篩和多次復(fù)篩，最終得到一株抑菌活性強(qiáng)的酵母菌菌株，命名其為Y68。
[0083]3、菌株的鑒定
[0084]對(duì)菌株Y68進(jìn)行形態(tài)學(xué)、生理生化特性和部分保守序列的分析。參考《TheYeasts,a Taxonomic Study》(Kurtzman, C.P.(1998a).Williopsis Zender.1n TheYeasts, a Taxonomic Study, 4th edn, pp.529-920.Edited by C.P.Kurtzman&J.ff.Fell.Amsterdam:Elsevier.)中描述方法進(jìn)行生理生化測(cè)定和分子生物學(xué)鑒定。結(jié)果表明，Y68的形態(tài)學(xué)特征:白色奶油樣菌落，營(yíng)養(yǎng)體細(xì)胞出芽生殖，兩極出芽，檸檬狀細(xì)胞，無假菌絲。25°C在5%Difco麥芽糖瓊脂培養(yǎng)基上通過細(xì)胞與芽接合形成子囊孢子，每個(gè)子囊包含1-2個(gè)藍(lán)甲狀的子囊孢子。葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum)Y68的生理生化特征:可進(jìn)行葡萄糖發(fā)酵，不可進(jìn)行棉子糖和乳糖發(fā)酵；碳源同化方面:山梨糖、蔗糖、麥芽糖、海藻糖、D-甘露醇為陽性，半乳糖、乳糖、阿拉伯糖、鼠李糖、核糖醇、赤蘚糖醇為陰性。
[0085]葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum) Y68于含有5% (質(zhì)量含量)氯化鈉的培養(yǎng)基中均可正常生長(zhǎng)，于PH4.0-5.5的培養(yǎng)基中均可正常生長(zhǎng)，在環(huán)境溫度為4°C下生長(zhǎng)勢(shì)弱，在40°C以上不可生長(zhǎng)；最佳適宜生長(zhǎng)溫度為25-30°C。所述葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum)Y68產(chǎn)具有抑菌作用較強(qiáng)的物質(zhì)。菌株Y68的5.8S rDNA基因及ITS1/ITS2核苷酸序列如SEQ ID N0.1所示，其26S rDNA基因D1/D2區(qū)域核苷酸序列如SEQID N0.2 所示。
[0086]葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum) Y68顯微鏡下細(xì)胞形態(tài),如圖1所示，Y68生長(zhǎng)于YNBD培養(yǎng)基上，280C，48h, “一”代表10 μ m。[0087]實(shí)施例2
[0088]本發(fā)明所述葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum) Y68抑菌譜的測(cè)定
[0089]供試病原菌:
[0090]桃褐腐病菌一鏈核盤菌(Moniliniafructicola (wint.) Rehm);
[0091]樓桃褐腐病菌一鏈核盤菌(Moniliniafructicola (wint.) Rehm);
[0092]蘋果采后灰霉病菌一灰葡萄孢(Botrytis cinerea Per.ex Fr)；
[0093]蘋果米后青霉病菌一展青霉菌(Penicilliumexpansum Link, 1809)；
[0094]梨米后青霉病菌一展青霉菌(Penicilliumexpansum Link, 1809)；
[0095]葡萄灰霉病菌一灰葡萄抱(Botrytiscinerea Per.ex Fr)；
[0096]西紅柿灰霉病菌一灰葡萄抱(Botrytis cinerea Per.ex Fr)；
[0097]對(duì)葡萄灰霉病菌的抑制效果測(cè)定，采用體外平板對(duì)峙法進(jìn)行:選擇葡萄灰霉病菌為指示真菌:采用平板對(duì)峙培養(yǎng)法。具體操作如下:葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniasporauvarum) Y68菌株 在PDA培養(yǎng)基上28°C恒溫培養(yǎng)48h。葡萄灰霉病菌在PDA平板上25°C恒溫培養(yǎng)3-4天，自菌落邊緣用直徑0.7cm無菌不銹鋼打孔器打制帶菌瓊脂片；用無菌接種針挑取病原菌菌片，菌絲面朝下接種于PDA平板中心處，同時(shí)在距病原真菌菌片兩側(cè)均約
3.0Ocm處用無菌接種環(huán)劃線葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum) Y68,以僅接病原菌的平板為對(duì)照，每個(gè)處理三次重復(fù)，25°C恒溫培養(yǎng)5-7天，測(cè)量病原真菌邊緣與葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum)Y68的菌落帶寬中心之間的抑菌帶寬度。葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum) Y68對(duì)灰霉病菌的抑制作用非常明顯，抑菌圈直徑均在IOmm以上,如圖4。圖4說明葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum)Y68具有穩(wěn)定、高效、的抗菌性能。
[0098]對(duì)桃、樓桃米后揭腐病病囷、平果米后灰霉病囷、平果米后青霉病囷、梨米后青霉病、西紅柿灰霉病菌的病原菌抑菌效果測(cè)定，采用果實(shí)體內(nèi)人為打孔接種法進(jìn)行。具體操作(以防治蘋果采后灰霉病為例進(jìn)行說明)如下:
[0099]將葡萄有抱漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum) Y68菌株在YPD液體培養(yǎng)基上28°C恒溫培養(yǎng)48h，用蒸餾水調(diào)至菌液濃度為5X108cfu/ml。蘋果灰霉病菌B.cinerea在PDA平板上25°C恒溫培養(yǎng)5-7天，收集灰霉菌孢子，用蒸餾水制成5X 108cfu/ml的孢子懸浮液；成熟的蘋果，先用0.5%次氯酸鈉消毒之后，用滅過菌的移液器槍頭，沿著蘋果腰部插孔，每個(gè)果子扎孔3個(gè),每個(gè)孔為30mmX 30mm。每孔接種30ul Y68菌液,室溫晾干，然后再接種30 μ I的病原菌孢子懸浮液。最后，處理的果子放置于25°C下，5-7天后，測(cè)定果實(shí)腐爛斑大小。腐爛斑小于IOmm被視為不發(fā)病。根據(jù)腐爛病斑的占總接種孔數(shù)的多少，計(jì)算發(fā)病率，未發(fā)病的病斑數(shù)占總接種孔數(shù)的多少，計(jì)算病斑抑制率。
[0100]實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum) Y68對(duì)桃、樓桃米后褐腐病病菌、西紅柿灰霉病菌、蘋果采后青霉病菌、蘋果采后灰霉病菌等引起的果實(shí)病斑有較好的抑制效果。見圖2-3，圖5-8及表1.[0101]表1.葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum) Y68對(duì)不同果蔬上病原菌的
抑制效果
[0102]
【權(quán)利要求】
1.一種葡萄有孢漢遜酵母菌(Hanseniaspora uvarum),菌株為Y68,保藏號(hào)為:CGMCCN0.8042。
2.一種病原菌抑制劑，其活性成分為權(quán)利要求1所述葡萄有孢漢遜酵母菌和/或權(quán)利要求I所述葡萄有孢漢遜酵母菌的代謝物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的病原菌抑制劑，其特征在于，所述病原菌抑制劑對(duì)下述至少一種病原菌具有抑制作用: A、桃米后揭腐病囷； B、蘋果采后灰霉病菌； C、蘋果采后青霉病菌； D、葡萄采后灰霉病菌； E、梨米后青霉病菌； F、櫻桃采后褐腐病菌； G、西紅柿灰霉病囷。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的病原菌抑制劑，其特征在于，所述桃采后褐腐病菌為Monilinia fructicola 或 Monilinia Iaxa 或 Monilinia fructigena ;所述蘋果米后灰霉病菌為Botrytis cinerea ;所述蘋果采后青霉病菌為Penicillium expansum ;所述葡萄采后灰霉病菌為Botrytis cinerea ;所述梨采后青霉病菌為Penicillium expansum ;所述西紅柿灰霉病菌為Botrytis cinerea ;所述樓桃采后褐腐病菌為Monilinia fructicola。
5.一種病害抑制劑，其活性成分為權(quán)利要求1所述葡萄有孢漢遜酵母菌和/或權(quán)利要求I所述葡萄有孢漢遜酵母菌的代謝物。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的病害抑制劑，其特征在于，所述病害為下述至少一種: A、桃褐腐病； B、平果米后灰霉病； C、蘋果米后青霉?。? D、葡萄灰霉病； E、梨米后青霉病； F、櫻桃褐腐病； G、西紅柿灰霉病。
7.權(quán)利要求1所述葡萄有孢漢遜酵母菌和/或權(quán)利要求1所述葡萄有孢漢遜酵母菌的代謝物的下述任一應(yīng)用: 1)權(quán)利要求1所述葡萄有孢漢遜酵母菌和/或權(quán)利要求1所述葡萄有孢漢遜酵母菌的代謝物在抑制病原菌中的應(yīng)用； 2)權(quán)利要求1所述葡萄有孢漢遜酵母菌和/或權(quán)利要求1所述葡萄有孢漢遜酵母菌的代謝物在制備病原菌抑制劑中的應(yīng)用； 3)權(quán)利要求1所述葡萄有孢漢遜酵母菌和/或權(quán)利要求1所述葡萄有孢漢遜酵母菌的代謝物在抑制病害中的應(yīng)用； 4)權(quán)利要求1所述葡萄有孢漢遜酵母菌和/或權(quán)利要求1所述葡萄有孢漢遜酵母菌的代謝物在制備病害抑制劑中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述病原菌為下述至少一種:A、桃米后掲腐病囷； B、蘋果釆后灰霉病菌； C、蘋果釆后青霉病菌； D、葡萄釆后灰霉病菌； E、梨米后青霉病菌； F、櫻桃釆后褐腐病菌； G、西紅柿灰霉病囷； 所述病害為下述至少一種: A、桃褐腐病； B、平果米后灰霉病； C、蘋果米后青霉??； D、葡萄灰霉??； E、梨米后青霉病； F、櫻桃褐腐??； G、西紅柿灰霉病。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述桃釆后褐腐病菌為Monilinia fructicola 或 Monilinia Iaxa 或 Monilinia fructigena ;所述蘋果米后灰霉病菌為Botrytis cinerea ;所述蘋果釆后青霉病菌為Penicillium expansum ;所述葡萄釆后灰霉病菌為Botrytis cinerea ;所述梨釆后青霉病菌為Penicillium expansum ;所述西紅柿灰霉病菌為Botrytis cinerea ;所述樓桃釆后褐腐病菌為Monilinia fructicola。
【文檔編號(hào)】A01N63/04GK103740604SQ201410037086
【公開日】2014年4月23日 申請(qǐng)日期:2014年1月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月26日
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