一種旱冬瓜腋芽外植體采集與誘導(dǎo)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種旱冬瓜腋芽外植體采集與誘導(dǎo)方法，涉及植物無性繁殖【技術(shù)領(lǐng)域】。該方法選擇6年生以上的旱冬瓜主干2m以下萌生的3～5cm長的健壯幼嫩腋芽，經(jīng)消毒后剪切成帶1個腋芽的1～2cm莖段作為外植體，發(fā)明選擇取主干上的芽比取側(cè)枝上的芽幼化效果更好，經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)，其誘導(dǎo)率達(dá)55%以上。且成苗能更好地保持了優(yōu)樹的優(yōu)良特性，如優(yōu)樹的生長特性、樹干通直性、木材質(zhì)量等。
【專利說明】一種旱冬瓜腋芽外植體采集與誘導(dǎo)方法【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物無性繁殖【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及旱冬瓜組織培養(yǎng)繁殖技術(shù)中腋芽外植體的采集與誘導(dǎo)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]旱冬瓜(Alnus nepalensis)別名蒙自榿木、榿木樹、西南榿木等，屬于樺木科榿木屬，為樺木科榿木屬的一種闊葉落葉喬木，是云南省廣泛分布的優(yōu)良鄉(xiāng)土速生用材樹種，是值得推廣的荒山綠化樹種，是營建生態(tài)林、用材林等多功能林的優(yōu)良樹種，也是云南重要的薪材樹種。但其良種化程度不高，良種資源十分缺乏。多年來由于人口負(fù)荷增大、全球氣候變遷、環(huán)境污染加重、旱冬瓜木制家具走俏等諸多因素，天然旱冬瓜種質(zhì)資源損失和破壞日趨嚴(yán)重。目前生產(chǎn)上主要采用傳統(tǒng)的播種育苗方法培育造林苗木，良種運用不充分，林木生長相對緩慢，且造林后生長表型不一，分化嚴(yán)重，很難達(dá)到群體高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的目標(biāo)。采用植物組織培養(yǎng)繁殖技術(shù)可以快速繁殖基因優(yōu)良的無性系苗木，從而造林后可達(dá)到群體高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的目的，但組織培養(yǎng)過程中外植體的采集與誘導(dǎo)是一個關(guān)鍵技術(shù)，常常成為阻礙旱冬瓜物織培養(yǎng)技術(shù)應(yīng)用的瓶頸。

【發(fā)明內(nèi)容】
[0003]發(fā)明目的是選用適宜的外植體，使其誘導(dǎo)率得到大幅提高，組培成苗后樹干直立
[0004]生長、干形通直，培育出高產(chǎn)、優(yōu)良的無性系苗木。
[0005]為達(dá)到本發(fā)明目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
[0006]一種旱冬瓜腋芽外植體采集與誘導(dǎo)方法，按以下步驟進(jìn)行:
[0007]1.一種旱冬瓜腋芽外植體采集與誘導(dǎo)方法，按以下步驟進(jìn)行:
[0008]( I)腋芽外植體的采集
[0009]①優(yōu)良母樹的選擇
[0010]選擇6年生以上的旱冬瓜優(yōu)樹；
[0011]②主干腋芽的促萌方法
[0012]在9月~11月，對選中的母樹周圍直徑3米~5米范圍內(nèi)的雜草、灌木進(jìn)行清除；
[0013]③米集腦芽外植體
[0014]第二年3月~4月，剪取從上往下至地表面2m之間的主干上萌生的2~3cm長的健壯幼嫩腋芽，經(jīng)消毒后剪切成帶I個腋芽的I~2cm莖段作為腋芽外植體；
[0015](2)腋芽外植體的誘導(dǎo)培養(yǎng)
[0016]將腋芽外植體垂直接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度23~28°C,光照強(qiáng)度3000~5000Lx,每天光照明間8~12小時，培養(yǎng)室空氣相對濕度70%~80%，培養(yǎng)時間40~60天，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:l/2MS+6-BAl.0mg/L+NAA0.lmg/L+ 蔗糖 30000mg/L+ 瓊脂 5500mg/L+ 聚乙烯吡咯烷酮5000mg/L, pH值為5.8~6.2。
[0017]步驟(1)③采集腋芽外植體中所述的消毒是將2~3cm長的健壯幼嫩腋芽先用3%無磷洗滌劑水浸泡20min，然后在超凈工作臺上用75%的酒精消毒10~15s，再用0.1%的升汞消毒5~lOmin，最后用無菌水沖洗干凈，所述的百分?jǐn)?shù)為質(zhì)量分?jǐn)?shù)。
[0018]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是:
[0019]1、本發(fā)明選擇6年生以上旱冬瓜樹主干2m以下萌生的帶腋芽的莖段為腋芽外植體，芽幼化效果更好，更有利于誘導(dǎo)成功，大幅度提高了誘導(dǎo)率，誘導(dǎo)率達(dá)55%以上。
[0020]2、本發(fā)明從主干取芽，充分利用了位置效應(yīng)，能更好地保持優(yōu)樹的優(yōu)良特性，如優(yōu)樹的生長特性、樹干通直性、木材質(zhì)量等
[0021]3、與采用傳統(tǒng)的播種育苗方法相比，該發(fā)明方法能顯著地提高木材質(zhì)量，可形成林木干形圓滿、紋理通直，提高了林農(nóng)收入。提高了科技興林的意識，使采用良種良法營建無性系林的意識更加深入人心。
【具體實施方式】
[0022]下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步描述。以下各實施例中所用的復(fù)合肥、農(nóng)藥等材料均可在市場購買。
[0023]實施例中無特別說明的均為常規(guī)方法。
[0024]實施例1本發(fā)明方法實施例
[0025]實施地點:云南省玉溪市蛾山縣
[0026]按以下步驟進(jìn)行(3次重復(fù)):
[0027]( 1)腋芽外植體的采集
[0028]①優(yōu)良母樹的選擇
[0029]2011年在6年生旱冬瓜人工林中選擇優(yōu)樹10棵。所述的旱冬瓜優(yōu)樹是按常規(guī)的5株優(yōu)勢木對比法，在立地條件相對一致的同齡林分里，以候選樹為中心，半徑10~15m的范圍內(nèi)選擇5株優(yōu)勢木作為對比木(優(yōu)勢木是指在候選樹同一林分的一定范圍內(nèi)，生長、立地和樹齡相同或接近，在評選優(yōu)樹時，作為比較對象的僅次于候選樹的對比木)，測定對比木和候選木的胸徑、樹高、枝下高，并計算材積，采用鄧肯多重比較，在5%的顯著水平下，候選樹的胸徑、樹高、枝下高、材積指標(biāo)顯著高于優(yōu)勢木，并且目測候選樹干通直圓滿，裂紋通直、無扭曲，樹冠完整，自然整枝良好、側(cè)枝較細(xì)，健康無病蟲害的單株即為旱冬瓜優(yōu)樹。
[0030]②主干腋芽的促萌方法
[0031 ] 2011年在10月，對選中的母樹周圍直徑5米范圍內(nèi)的雜草、灌木進(jìn)行清除，使樹干充分接受陽光照射，30~50天后，待其萌芽。
[0032]③采集腋芽外植體
[0033]2012年3月，剪取從上往下至地表面2m之間的主干上萌生的2~3cm長的健壯幼嫩腋芽，經(jīng)消毒后剪切成帶1個腋芽的1~2cm莖段作為腋芽外植體；共采集腋芽外植體75條，所述的消毒是將2~3cm長的健壯幼嫩腋芽先用3%無磷洗滌劑水浸泡20min，然后在超凈工作臺上用75%的酒精消毒10~15s,再用0.1%的升萊消毒5~lOmin,最后用無菌水沖洗干凈，所述的百分?jǐn)?shù)為質(zhì)量分?jǐn)?shù)。
[0034](2)腋芽外植體的誘導(dǎo)培養(yǎng)
[0035]將消毒處理后的腋芽外植體垂直接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)溫度26 V~28°C,光照強(qiáng)度3000~5000Lx，每天光照明間12小時，培養(yǎng)室空氣相對濕度70%~80%，培養(yǎng)時間45天，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:l/2MS+6-BAl.0mg/L+NAA0.lmg/L+蔗糖 30000mg/L+瓊脂 5500mg/L+聚乙烯吡咯烷酮5000mg/L, pH值為5.8~6.2。
[0036]用本方本進(jìn)行旱冬瓜外植體的采集與誘導(dǎo)，誘導(dǎo)成功率60%。
[0037]實施例2
[0038]實施地點:云南省會澤縣
[0039]本實施例除以下步驟不同外，其余步驟與實施例1相同。
[0040]( I)腋芽外植體的采集
[0041]①優(yōu)良母樹的選擇
[0042]2012年在10年生旱冬瓜人工林中選擇優(yōu)樹10棵。
[0043]②主干腋芽的促萌方法
[0044]2012年在11月，對選中的母樹周圍直徑4米范圍內(nèi)的雜草、灌木進(jìn)行清除，使樹干充分接受陽光照射，30~50天后，主干上會萌出新芽。
[0045]③米集腦芽外植體
[0046]2013年4月，共采集腋芽外植體60條。
[0047](2)腋芽外植體的誘導(dǎo)培養(yǎng)
[0048]誘導(dǎo)培養(yǎng)的培養(yǎng)溫度23°C~25°C，，每天光照明間10小時，培養(yǎng)時間60天。
[0049]用本方本進(jìn)行旱冬瓜腋芽外植體的采集與誘導(dǎo)，誘導(dǎo)成功率55%。
[0050]表1實施例1一實施例2旱冬瓜腋芽外植體的誘導(dǎo)成功率調(diào)查表
【權(quán)利要求】
1.一種旱冬瓜腋芽外植體采集與誘導(dǎo)方法，按以下步驟進(jìn)行:(1)腋芽外植體的采集①優(yōu)良母樹的選擇選擇6年生以上的旱冬瓜優(yōu)樹；②主干腋芽的促萌方法在9月~11月，對選中的母樹周圍直徑3米~5米范圍內(nèi)的雜草、灌木進(jìn)行清除；③采集腋芽外植體第二年3月~4月，剪取從上往下至地表面2m之間的主干上萌生的2~3cm長的健壯幼嫩腋芽，經(jīng)消毒后剪切成帶1個腋芽的1~2cm莖段作為腋芽外植體；(2)外植體的誘導(dǎo)培養(yǎng)將消毒處理后的腋芽外植體垂直接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度23~28°C，光照強(qiáng)度3000~5000Lx，每天光照明間8~12小時，培養(yǎng)室空氣相對濕度70%~80%，培養(yǎng)時間40 ~60 天，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:l/2MS+6-BAl.0mg/L+NAA0.lmg/L+ 蔗糖 30000mg/L+ 瓊脂5500mg/L+聚乙烯吡咯烷酮5000mg/L，pH值為5.8~6.2。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的旱冬瓜腋芽外植體采集與誘導(dǎo)方法，步驟(1)③采集腋芽外植體中所述的消毒是將2~3cm長的健壯幼嫩腋芽先用3%無磷洗滌劑水浸泡20min，然后在超凈工作臺上用75%的酒精消毒10~15s,再用0.1%的升萊消毒5~lOmin,最后用無菌水沖洗干凈，所述 的百分?jǐn)?shù)為質(zhì)量分?jǐn)?shù)。
【文檔編號】A01H4/00GK103734021SQ201410042147
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2014年1月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月28日
【發(fā)明者】聶艷麗, 施彬, 查貴生, 董曉光, 周汝敏, 楊衛(wèi), 楊正華, 楊建榮, 李秀君, 鐵學(xué)江 申請人:云南省林業(yè)技術(shù)推廣總站