桑黃培養(yǎng)基質(zhì)優(yōu)化及短段木栽培方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種菌類植物栽培，即桑黃培養(yǎng)基質(zhì)優(yōu)化及短段木栽培方法。桑黃母種培養(yǎng)基：葡萄糖20g，大豆蛋白胨2g，瓊脂18g，磷酸二氫鉀0.46g，磷酸氫二鉀1g，硫酸鎂0.5g，水1000ml。桑黃短段木栽培方法，步驟如下：（1）采用子實(shí)體組織分離法分離桑黃菌母種。（2）桑黃原種培養(yǎng)。（3）桑黃栽培種培養(yǎng)。（4）短段木栽培材料的制備。選用柞木段做成菌棒，柞木段人工栽培桑黃生產(chǎn)資料的成本低廉，產(chǎn)量高，質(zhì)量好，有效成分含量高，可獲豐厚的經(jīng)濟(jì)回報(bào)。
【專利說明】桑黃培養(yǎng)基質(zhì)優(yōu)化及短段木栽培方法
[0001]【技術(shù)領(lǐng)域】
本發(fā)明涉及一種菌類植物栽培，即桑黃培養(yǎng)基質(zhì)優(yōu)化及短段木栽培方法。
【背景技術(shù)】
[0002]在現(xiàn)有技術(shù)中，桑黃是一種珍稀的大型藥用真菌，其藥用價(jià)值早在唐朝的《藥性論》就有記載?！侗静菥V目》記載，桑黃可治癖飲積聚、腹痛金瘡；《中藥大辭典》敘述其可治療內(nèi)科多種疾病。其子實(shí)體入藥，味微苦，能利五臟、宣腸氣、止血、排毒、和胃止瀉?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，桑黃除了具有傳統(tǒng)中醫(yī)理論上的藥理作用以外，還具有抗癌、抗腫瘤、抗衰老、抗疲勞、抗氧化、抗纖維化、骨髓造血功能損傷的保護(hù)、免疫調(diào)節(jié)、保肝和抗肝硬化等功效。桑黃為多年生木腐菌，由于受生理生態(tài)的特殊性和復(fù)雜性以及外部環(huán)境條件的制約，在自然界中形成的子實(shí)體稀少，再加上近年來，桑黃的用量日益加大，特別是國(guó)外對(duì)我國(guó)野生資源掠奪式的收購(gòu)，野生資源越來越少。因此需要通過多種途徑獲得其活性物質(zhì)，如進(jìn)行人工木段栽培，液體和固體發(fā)酵等。人工木段栽培剛剛起步，尚未有關(guān)于人工木段栽培桑黃的具體報(bào)道，人工栽培的成品桑黃子實(shí)體國(guó)內(nèi)還沒有采收先例。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是針對(duì)上述不足而提供一種改善培養(yǎng)基，實(shí)現(xiàn)人工栽培桑黃可行的桑黃培養(yǎng)基質(zhì)優(yōu)化及短段木栽培方法。
[0004]本發(fā)明的技術(shù)解決方案是:一種桑黃母種培養(yǎng)基，由以下重量的原料制成:葡萄糖20g，大豆蛋白胨2g，瓊脂18g，磷酸二氫鉀0.46g，磷酸氫二鉀lg，硫酸鎂0.5g，水1000ml。
[0005]—種桑黃原種培養(yǎng)基，由以下重量的原料制成:昨木屑77%,麥麩10%,玉米粉10%,葡萄糖2%，石膏1%。
[0006]—種桑黃栽培種培養(yǎng)基，由以下重量的原料制成:昨木屑50%,棉籽殼39%,麥麩10%,石骨 1%。
[0007]—種桑黃短段木栽培方法，其特征在于步驟如下:
(1)采用子實(shí)體組織分離法分離桑黃菌母種:對(duì)采自長(zhǎng)白山區(qū)野生桑黃子實(shí)體進(jìn)行表面消毒處理，鉤取一小塊桑黃子實(shí)體放于斜面母種培養(yǎng)基上；置于27°C -30°C恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，待子實(shí)體組織塊周圍長(zhǎng)出乳黃色菌絲，在菌落邊緣挑取先端菌絲體移植到新的試管移植母種培養(yǎng)基斜面上，27°C -30°C恒溫培養(yǎng)，IOd菌絲即可長(zhǎng)滿試管，如此反復(fù)移植2-3次，所得菌株作為母種；所述的母種培養(yǎng)基是:葡萄糖20g，大豆蛋白胨2g，瓊脂18g，磷酸二氫鉀0.46g，磷酸氫二鉀lg，硫酸鎂0.5g，水1000ml。
[0008](2)桑黃原種培養(yǎng):原種培養(yǎng)基為柞木屑77%，麥麩10%，玉米粉10%，葡萄糖2%，石膏1% ; 28 °C恒溫室中暗室培養(yǎng)。
[0009](3)桑黃栽培種培養(yǎng):栽培種培養(yǎng)基為昨木屑50%,棉籽殼39%,麥麩10%,石膏1% ；28 °C恒溫室中暗室培養(yǎng)。[0010](4)短段木栽培材料的制備:
選柞木做成菌棒，高壓滅菌后備用。所述的菌棒選柞木樹種作為段木栽培材料，稍頭直徑4-8cm，截成18-20 cm長(zhǎng)的短木段，劈成兩半，拼成約15 cm的段木梱，裝入低壓聚乙烯菌袋中，木段兩頭填充一層木屑麥麩皮營(yíng)養(yǎng)料，木屑、麩皮比例為3: 1，加水拌勻，扎好袋口，同時(shí)將段木袋扎兩道，使段木與塑料袋貼合的較為緊密，高壓滅菌后備用。
[0011](5)菌棒接種與發(fā)菌期培養(yǎng):
按無(wú)菌操作，選用菌絲生長(zhǎng)旺盛的桑黃栽培菌種，采用兩頭接種法，接種量在20%，以菌種封蓋料面為度。
[0012]發(fā)菌培養(yǎng)期間培養(yǎng)溫度為28°C，遮光培養(yǎng)，每天通風(fēng)I次，培養(yǎng)時(shí)間35-40d。
[0013](6)子實(shí)體生長(zhǎng)發(fā)育期培養(yǎng):
當(dāng)菌棒內(nèi)菌絲顏色有淺黃變?yōu)樯铧S時(shí)，在菌棒兩側(cè)側(cè)切開口，開口性狀月牙形，長(zhǎng)2cm，月牙形寬度小于lcm，每個(gè)菌袋可以在菌袋兩側(cè)分別開兩個(gè)口。
[0014]菌木埋土栽培:先在大棚地面作栽培床，棚上覆蓋塑料薄膜，遮陽(yáng)網(wǎng)或草簾遮蔭，劃口立木埋土栽培,先按深6 cm,株行距10 cm X 10 cm挖坑,再將菌袋一端距袋底6 cm處環(huán)切，脫掉袋底，立木放于坑中，培上沙土，然后再用刀片將菌袋環(huán)劃兩刀，割透塑料膜為度，只劃出兩道出菇口或縫。栽培床按6m寬的大棚可作三個(gè)菌床，中間菌床寬2m，兩邊菌床各1.2m，床間留60 cm作用道，棚兩邊各留20 cm排水溝。
[0015]子實(shí)體發(fā)育期管理:當(dāng)菌棒內(nèi)菌絲顏色由淺黃色進(jìn)入原基分化期，此時(shí)采用晝夜溫差的方法，即白天培養(yǎng)溫度28°C，夜間溫度降為20°C，連續(xù)處理3d;空氣相對(duì)濕度控制在85%-95%之間；給予散射光照射。
[0016]子實(shí)體發(fā)育階段，生長(zhǎng)溫度25°C，空氣相對(duì)濕度保持在85%_95%之間，每天通風(fēng)2次，每次30min ;散射光照射。
[0017]子實(shí)體采收:桑黃子實(shí)體應(yīng)2-3年采收一次，采大留小。
[0018]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是:1、本發(fā)明從桑黃母種培養(yǎng)基選擇、原種培養(yǎng)基選擇、栽培種培養(yǎng)基的選擇三方面著手，確定了桑黃培養(yǎng)基合理參數(shù)，以期獲得優(yōu)良桑黃菌種，為成功培養(yǎng)桑黃菌子實(shí)體提供前提保障。2、選用柞木段做成菌棒，采用埋土栽培，確定合理栽培條件，如發(fā)菌培養(yǎng)期間培養(yǎng)溫度為28°C，遮光培養(yǎng)，每天通風(fēng)I次，培養(yǎng)時(shí)間35-40d ;進(jìn)入原基分化期時(shí)，此時(shí)采用晝夜溫差的方法，即白天培養(yǎng)溫度28°C，夜間溫度降為20°C，連續(xù)處理3d ；空氣相對(duì)濕度控制在85%-95%之間；給予散射光照射；子實(shí)體發(fā)育階段，生長(zhǎng)溫度25°C，空氣相對(duì)濕度保持在85%-95%之間，每天通風(fēng)2次，每次30min ;散射光照射，保證了桑黃人工栽培方法可行，并工業(yè)化生產(chǎn)。3、柞木段人工栽培桑黃生產(chǎn)資料的成本低廉，產(chǎn)量高，質(zhì)量好，有效成分含量高；可獲豐厚的經(jīng)濟(jì)回報(bào)。4、本研究以挽救和開發(fā)桑黃菌這一珍貴藥用真菌資源，彌補(bǔ)野生桑黃菌因自然資源有限和過度采摘所導(dǎo)致的物種資源瀕臨枯竭、科學(xué)實(shí)驗(yàn)和研究難以開發(fā)和市場(chǎng)開發(fā)利用受限的實(shí)際問題，具有重大的經(jīng)濟(jì)效益、社會(huì)效益和生態(tài)效益。
[0019]下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方式作進(jìn)一步詳細(xì)描述。
【具體實(shí)施方式】
[0020]實(shí)驗(yàn)例I桑黃菌絲培養(yǎng)條件的研究 I材料與方法
1.1桑黃菌株(火木層孔菌Phellinus igniarius),采自長(zhǎng)白山系的老齡山脈森林中的柞木(蒙古櫟)上。
[0021]1.2供試培養(yǎng)基
基礎(chǔ)培養(yǎng)基:葡萄糖20g，大豆蛋白胨2g，瓊脂18g，磷酸二氫鉀0.46g，磷酸氫二鉀lg，硫酸鎂0.5g，水1000ml。
[0022]1.3實(shí)驗(yàn)方法
1.3.1菌種分離及純化培養(yǎng)
采用子實(shí)體組織分離法分離桑黃菌母種。在嚴(yán)格無(wú)菌操作條件下對(duì)采自長(zhǎng)白山區(qū)野生桑黃子實(shí)體進(jìn)行表面消毒處理，用75%酒精反復(fù)涂擦子實(shí)體表面后置于無(wú)菌平板培養(yǎng)皿中，再將培養(yǎng)皿放入超凈工作臺(tái)內(nèi)備用。用火焰灼燒滅菌的解剖刀從桑黃子實(shí)體基部縱向切開，然后再用解剖刀從剖面中心在欲分離部位刻劃數(shù)個(gè)‘井’字，用火焰灼燒滅菌的接種鉤鉤取一小塊桑黃子實(shí)體(綠豆大小)放于斜面基礎(chǔ)培養(yǎng)基上。置于28°C恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)。2天后菌絲開始萌發(fā)，待子實(shí)體組織塊周圍長(zhǎng)出乳黃色菌絲，在菌落邊緣挑取先端菌絲體移植到新的試管基礎(chǔ)培養(yǎng)基斜面上，28°C恒溫培養(yǎng)，IOd菌絲即可長(zhǎng)滿試管，如此反復(fù)移植2-3次，所得菌株作為母種，菌絲長(zhǎng)滿試管后置4°C冰箱內(nèi)保藏備用。
[0023]1.3.2接種培養(yǎng)及觀測(cè)方法
將滅菌的試管基礎(chǔ)培養(yǎng)基倒入直徑9cm的無(wú)菌平板培養(yǎng)皿中，每個(gè)培養(yǎng)皿加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基15ml ;待培養(yǎng)基凝固后,在培養(yǎng)皿中接一直徑5mm的菌塊,每一處理接種3個(gè)培養(yǎng)皿(即三次重復(fù))。每隔3天測(cè)量一次菌落直徑，計(jì)算菌絲生長(zhǎng)速度，并觀察菌落變化及長(zhǎng)勢(shì)。
[0024]1.3.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法
原始數(shù)據(jù)的處理、相關(guān)性分析及圖表，用Excel軟件處理，方差分析用SPSS12.0軟件處理，應(yīng)用Duncan單因素方差分析比較各處理之間的差異顯著性(P < 0.05)。
[0025]1.3.4不同碳源對(duì)桑黃菌絲生長(zhǎng)的影響
分別用麥芽糖、蔗糖、乳糖、甘露醇代替基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的葡萄糖，28°C，黑暗條件下培養(yǎng)，觀測(cè)不同碳源對(duì)桑黃菌絲生長(zhǎng)的影響。
[0026]1.3.5不同氮源對(duì)桑黃菌絲生長(zhǎng)的影響
分別用牛肉膏、酵母膏、硫酸銨、氯化銨代替基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的大豆蛋白胨，28°C，黑暗條件下培養(yǎng)，觀測(cè)不同氮源對(duì)桑黃菌絲生長(zhǎng)的影響。
[0027]1.3.6不同溫度對(duì)桑黃菌絲生長(zhǎng)的影響
使用基礎(chǔ)培養(yǎng)基，分別在18°C、21°C、24°C、27 V、30°C、33°C，黑暗條件下培養(yǎng)，觀測(cè)不同溫度對(duì)桑黃菌絲生長(zhǎng)的影響。
[0028]1.3.7不同pH對(duì)桑黃菌絲生長(zhǎng)的影響
使用基礎(chǔ)培養(yǎng)基， 調(diào)pH值分別在5.0,5.5,6.0,6.5,7.0,7.5，28°C，黑暗條件下培養(yǎng)，觀測(cè)不同PH值對(duì)桑黃菌絲生長(zhǎng)的影響。
[0029]2結(jié)果與分析
2.1不同碳源對(duì)桑黃菌絲生長(zhǎng)的影響(結(jié)果見表1-1)
表1-1不同碳源對(duì)桑黃菌絲生長(zhǎng)的影響(x±S.D η = 3)
【權(quán)利要求】
1.一種桑黃母種培養(yǎng)基，其特征在于由以下重量的原料制成:葡萄糖20g，大豆蛋白胨2g，瓊脂18g，磷酸二氫鉀0.46g，磷酸氫二鉀lg，硫酸鎂0.5g，水1000ml。
2.—種桑黃原種培養(yǎng)基，其特征在于由以下重量的原料制成:昨木屑77%,麥麩10%,玉米粉10%,葡萄糖2%,石膏1%。
3.一種桑黃栽培種培養(yǎng)基，其特征在于由以下重量的原料制成:昨木屑50%,棉籽殼39%，麥麩10%，石膏1%。
4.一種桑黃短段木栽培方法，其特征在于步驟如下: (1)采用子實(shí)體組織分離法分離桑黃菌母種:對(duì)采自長(zhǎng)白山區(qū)野生桑黃子實(shí)體進(jìn)行表面消毒處理，鉤取一小塊桑黃子實(shí)體放于斜面母種培養(yǎng)基上；置于27V -30°C恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，待子實(shí)體組織塊周圍長(zhǎng)出乳黃色菌絲，在菌落邊緣挑取先端菌絲體移植到新的試管移植母種培養(yǎng)基斜面上，27°C -30°C恒溫培養(yǎng)，IOd菌絲即可長(zhǎng)滿試管，如此反復(fù)移植2-3次，所得菌株作為母種；所述的母種培養(yǎng)基是:葡萄糖20g，大豆蛋白胨2g，瓊脂18g，磷酸二氫鉀0.46g，磷酸氫二鉀lg，硫酸鎂0.5g，水1000ml ； (2)桑黃原種培養(yǎng):原種培養(yǎng)基為柞木屑77%，麥麩10%，玉米粉10%，葡萄糖2%，石膏1% ; 28 °C恒溫室中暗室培養(yǎng)； (3)桑黃栽培種培養(yǎng):栽培種培養(yǎng)基為柞木屑50%，棉籽殼39%，麥麩10%，石膏1%；28°C恒溫室中暗室培養(yǎng)； (4)短段木栽培材料的制備: 選柞木做成菌棒，高壓滅菌后備用； (5)菌棒接種與發(fā)菌期培養(yǎng): 按無(wú)菌操作，選用菌絲生長(zhǎng)旺盛的桑黃栽培菌種，采用兩頭接種法，接種量在20%，以菌種封蓋料面為度； 發(fā)菌培養(yǎng)期間培養(yǎng)溫度為28°C，遮光培養(yǎng)，每天通風(fēng)I次，培養(yǎng)時(shí)間35-40d ； (6)子實(shí)體生長(zhǎng)發(fā)育期培養(yǎng): 當(dāng)菌棒內(nèi)菌絲顏色有淺黃變?yōu)樯铧S時(shí)，在菌棒兩側(cè)側(cè)切開口，每個(gè)菌袋可以在菌袋兩側(cè)分別開兩個(gè)口； 菌木埋土栽培:先在大棚地面作栽培床，棚上覆蓋塑料薄膜，遮陽(yáng)網(wǎng)或草簾遮蔭，劃口立木埋土栽培； 子實(shí)體發(fā)育期管理:當(dāng)菌棒內(nèi)菌絲顏色由淺黃色進(jìn)入原基分化期，此時(shí)采用晝夜溫差的方法，即白天培養(yǎng)溫度28°C，夜間溫度降為20°C，連續(xù)處理3d ;空氣相對(duì)濕度控制在85%-95%之間；給予散射光照射； 子實(shí)體發(fā)育階段，生長(zhǎng)溫度25°C，空氣相對(duì)濕度保持在85%-95%之間，每天通風(fēng)2次，每次30min ;散射光照射； 子實(shí)體采收:桑黃子實(shí)體應(yīng)2-3年采收一次，采大留小。
5.按照權(quán)利要求 4所述的桑黃短段木栽培方法，其特征在于所述的菌棒選柞木樹種作為段木栽培材料，稍頭直徑4-8cm，截成18-20 cm長(zhǎng)的短木段，劈成兩半，拼成約15 cm的段木梱，裝入低壓聚乙烯菌袋中，木段兩頭填充一層木屑麥麩皮營(yíng)養(yǎng)料，木屑、麩皮比例為3:1，加水拌勻，扎好袋口，同時(shí)將段木袋扎兩道，使段木與塑料袋貼合的較為緊密，高壓滅囷后備用。
6.按照權(quán)利要求4所述的桑黃短段木栽培方法，其特征在于栽培床按6m寬的大棚可作三個(gè)菌床，中間菌床寬2m，兩邊菌床各1.2m，床間留60 cm作用道，棚兩邊各留20 cm排水溝。
7.按照權(quán)利要求4所述的桑黃短段木栽培方法，其特征在于劃口立木埋土栽培是指先按深6 cm,株行距10 cm X 10 cm挖坑,再將菌袋一端距袋底6 cm處環(huán)切,脫掉袋底,立木放于坑中，培上沙土，然后再用刀片將菌袋環(huán)劃兩刀，割透塑料膜為度，只劃出兩道出菇口或縫。
【文檔編號(hào)】A01G1/04GK103804054SQ201410056197
【公開日】2014年5月21日 申請(qǐng)日期:2014年2月20日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月20日
【發(fā)明者】李喜范, 李春娥, 楊坤, 楊靜 申請(qǐng)人:通化長(zhǎng)白山藥谷集團(tuán)有限公司