一種殺菌原液及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種殺菌原液，包括藥性成份與溶劑，藥性成份為甲基烯丙基三硫醚，溶劑為有機(jī)試劑和去離子水。本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明提供的藥劑對香蕉枯萎病菌具有高效的抑制作用，能高效致死香蕉枯萎病菌，破壞其孢子結(jié)構(gòu)，而且能顯著抑制香蕉枯萎病菌的發(fā)病率，減輕發(fā)病程度；另外，甲基烯丙基三硫醚在工業(yè)上主要用作食品添加劑，所以捋該物質(zhì)開發(fā)用于香蕉枯萎病的防控，對人畜無毒，對環(huán)境無害，具有高效、安全、環(huán)境友好的特性，符合目前“公共種植”和“綠色植?！钡姆N植理念，符合人類發(fā)展的需求，而且使用方便，操作簡單，非常適合大面積推廣使用。
【專利說明】一種殺菌原液及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及防控香蕉枯萎病菌【技術(shù)領(lǐng)域】，具體而言，涉及一種殺菌原液及其應(yīng)用?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]香蕉是世界上重要的熱帶亞熱帶水果之一，也是一些發(fā)展國家的重要的糧食作物。但是全球香蕉正在經(jīng)受著枯萎病的嚴(yán)重威脅，該病是尖孢鐮刀菌古巴轉(zhuǎn)化型引起。目前該病在全球香蕉園中普遍存在，上世紀(jì)由于該病的危害，中美洲數(shù)千個香蕉園被毀，直接損失約$400，000，000，如加上香蕉園被毀帶來的工人失業(yè)等，造成的經(jīng)濟(jì)損失無法估量。
[0003]我國香蕉主要產(chǎn)區(qū)包括廣東、廣西、海南、云南及臺灣等地，在這些地區(qū)，香蕉枯萎病均有分布。由于香蕉枯萎病的威脅，很多香蕉園改種其他作物甚至直接丟棄荒蕪，對香蕉產(chǎn)業(yè)造成了不可估量的損失。
[0004]到目前為止，針對香蕉枯萎病還沒有找到有效的化學(xué)藥劑。該病目前主要通過抗病品種、輪作、有益生防菌、轉(zhuǎn)基因等方法進(jìn)行防控，但是抗病品種選育速度此較慢，而且一些抗性較好的品種，由于品質(zhì)、產(chǎn)量等各方面的原因，難以在市場上獲得認(rèn)可；與非寄主作物進(jìn)行輪作，可以有效防控香蕉枯萎病的發(fā)生，但該模式受地域及病菌寄主等因素的限制，而且需要輪作2-3年也能有較好的效果，防控周期長，因而也難以大面積推廣應(yīng)用；生物菌防控香蕉枯萎病的相關(guān)研究有較多報道，但是多處于試驗(yàn)階段，并沒有在生產(chǎn)中真正應(yīng)用；通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育抗病品種是今后未來的發(fā)展方向，近年來也有報道了幾丁質(zhì)酶、3-1，3葡聚糖酶和葡萄糖氧化酶等基因等轉(zhuǎn)基因植株的研究成果，但也只停留在實(shí)驗(yàn)室研究階段。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為解決現(xiàn)有技術(shù)中香蕉枯萎病沒有有效防控藥劑的難題，本發(fā)明提供了一種殺菌原液及其應(yīng)用。其目的為將該殺菌原液用于防控香蕉枯萎病菌，具備高效、安全、環(huán)保的特點(diǎn)。
[0006]為達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供了一種殺菌原液，包括藥性成份與溶劑，藥性成份為甲基烯丙基三硫醚，溶劑為有機(jī)試劑和去離子水
[0007]本技術(shù)方案中，本發(fā)明提供的藥劑中主要的藥性成分為甲基烯丙基三硫醚(CAS:34135-85-8)。甲基烯丙基三硫醚天然存在于洋蔥、大蒜、細(xì)香蔥等植物中，化學(xué)合成物在工業(yè)上主要用于食品添加劑。對人畜無毒、對環(huán)境無害。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)甲基烯丙基三硫醚能夠高效抑制香蕉枯萎病菌的生長，能破壞香蕉枯萎病菌的結(jié)構(gòu)，也能顯著降低香蕉枯萎病菌的發(fā)病率，減輕發(fā)病程度。而且實(shí)施方便，操作簡單，是一種潛在的高效安全、綠色環(huán)保的香蕉枯萎病防控藥劑。
[0008]進(jìn)一步的，甲基烯丙基三硫醚與有機(jī)試劑的體積此為1: 1，每升去離子水中甲基烯丙基三硫醚的體積為25~50 μ l。
[0009]對甲基烯丙基三硫醚與有機(jī)溶劑的體積此做進(jìn)一步的限定。甲基烯丙基三硫醚不溶于水，需要有機(jī)溶劑溶解后，才能溶于水中形成穩(wěn)定的溶液。本發(fā)明中，捋甲基烯丙基三硫醚與有機(jī)溶劑的體積比為1:1此例進(jìn)行溶解，即10 μ I甲基烯丙基三硫醚與10μ I有機(jī)溶劑溶解后，再溶解于980 μ I水中，形成濃度為10 μ I/ml的母液。在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前捋母液稀釋成工作液即可。在實(shí)際應(yīng)用中，也可以根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整甲基烯丙基三硫醚與有機(jī)溶劑的此例，已保證其充分溶解的情況下，盡可能少的引入有機(jī)溶劑為原則。
[0010]進(jìn)一步的，甲基烯丙基三硫醚抑菌的有效濃度為每升去離子水中甲基烯丙基三硫醚的體積為25~50μ 1，本技術(shù)方案中，先捋甲基烯丙基三硫醚與有機(jī)溶劑按照體積比I: I混合，充分溶解后加入滅菌后的去離子水稀釋至25 μ 1/L~50 μ 1/L的范圍。在離體情況下，25μ 1/L~50μ 1/L的甲基烯丙基三硫醚對香蕉枯萎病菌的生長具有顯著的抑制作用，處理24小時后，40μ 1/L的甲基烯丙基三硫醚對香蕉枯萎病菌生長的抑制率高達(dá)100%，并且能顯著破壞香蕉枯萎病菌結(jié)構(gòu)。在離體條件下，對香蕉枯萎病的防控效果高達(dá)72.1%，在溫室條件下，對香蕉枯萎病的防控效果高達(dá)68.6%。由上述描述可知，該藥劑具有高效防控香蕉枯萎病的巨大潛力，而且施用方法簡單，非常適合大面積推廣應(yīng)用。
[0011]優(yōu)選的，有機(jī)溶劑為二甲基亞砜。甲基烯丙基三硫醚不溶于水，需要有機(jī)溶劑溶解后，才能溶于水中形成穩(wěn)定的溶液。本技術(shù)方案中，選用二甲基亞砜為甲基烯丙基三硫醚的溶劑。本發(fā)明中將甲基烯丙基三硫醚溶解在二甲基亞砜溶液中，然后在與水互溶，形成藥劑溶液。而且二甲基亞砜作為甲基烯丙基三硫醚的載體，可以迅速滲入土壤及香蕉植株內(nèi)部，提高起到對香蕉枯萎病菌的致死作用。在實(shí)際應(yīng)用中，可以選用其它的可以與水互溶的有機(jī)溶劑作為甲基烯丙基三硫醚的溶劑。
[0012]本發(fā)明所述殺菌原液的應(yīng)用，捋該原液作為防治香蕉枯萎病菌殺菌原液的應(yīng)用。
[0013]本發(fā)明的有益 效果為:本發(fā)明以甲基烯丙基三硫醚為藥性成份，得到殺菌原液，該殺菌原液對香蕉枯萎病菌生長的抑制能力高達(dá)100%，也可以顯著降低香蕉枯萎病菌的發(fā)病率減，輕發(fā)病程度。另外，甲基烯丙基三硫醚天然存在與洋蔥、大蒜、細(xì)香蔥等植物中，化學(xué)合成物主要用于食品添加劑。因此，將該物質(zhì)開發(fā)用于香蕉枯萎病的防控，對人畜無毒，對環(huán)境無害，具有高效、安全、環(huán)境友好的特性，符合當(dāng)前“公共種植”和“綠色植?！钡闹脖＠砟睿先祟惏l(fā)展的需求。該方法使用方便，操作簡單，非常適合大面積推廣使用。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0014]圖1為本發(fā)明實(shí)施例1中在不同時間內(nèi)，施加不同濃度的藥劑與香蕉枯萎病菌斑大小的柱形圖；
[0015]圖2為本發(fā)明實(shí)施例1中在不同時間內(nèi)，施加不同濃度的藥劑與香蕉枯萎病菌的抑制率的柱形圖；
[0016]圖3為本發(fā)明實(shí)施例2中在不同時間內(nèi)，不同濃度的甲基烯丙基三硫醚溶液中香蕉枯萎病菌菌絲形態(tài)的掃描電鏡圖一；
[0017]圖4為本發(fā)明實(shí)施例2中在不同時間內(nèi)，不同濃度的甲基烯丙基三硫醚溶液中香蕉枯萎病菌菌絲形態(tài)的掃描電鏡圖二 ；
[0018]圖5為本發(fā)明實(shí)施例2中香蕉枯萎病菌菌絲形態(tài)對照掃描電鏡圖；
[0019]圖6為本發(fā)明實(shí)施例2中香蕉枯萎病菌菌絲形態(tài)對照的投射電鏡圖；
[0020]圖7為本發(fā)明實(shí)施例2中甲基烯丙基三硫醚溶液中香蕉枯萎病菌菌絲形態(tài)的投射電鏡圖一；
[0021]圖8為本發(fā)明實(shí)施例2中甲基烯丙基三硫醚溶液中香蕉枯萎病菌菌絲形態(tài)的投射電鏡圖二 ；
[0022]圖9為本發(fā)明實(shí)施例3中離體條件下，對照香蕉苗生長情況圖；
[0023]圖10為本發(fā)明實(shí)施例3中離體條件下，甲基丙烯基三硫醚處理的香蕉苗生長情況圖；
[0024]圖11為本發(fā)明實(shí)施例4中溫室條件下，含有對照溶液中香蕉苗生長情況圖；
[0025]圖12為本發(fā)明實(shí)施例4中溫室條件下，甲基丙烯基三硫醚處理的香蕉苗生長情況圖。【具體實(shí)施方式】
[0026]下面通過具體的實(shí)施例并結(jié)合附圖對本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)描述。
[0027]實(shí)施例一:本發(fā)明開發(fā)出的一種殺菌原液，包括藥性成份與溶劑，藥性成份為甲基烯丙基三硫醚，溶劑為有機(jī)試劑和去離子水。所用的溶劑只要能將甲基烯丙基三硫醚溶解于去離子水即可。
[0028]實(shí)驗(yàn)1，驗(yàn)證本發(fā)明提供的殺菌原液對香蕉枯萎病菌生長的抑制作用
[0029]1、藥性成分的選擇:實(shí)驗(yàn)用的甲基烯丙基三硫醚(CAS:34135-85-8)購自sigma公司。
[0030]2、準(zhǔn)備病菌:選擇香蕉枯萎病菌4號生理小種，其保存于廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹研究所。
[0031]3、制備殺菌原液:(I)取10μ I的甲基烯丙基三硫醚于1.5ml離心管中，并加入10μ I 二甲基亞楓，使甲基烯丙基三硫醚充分溶解在二甲基亞楓中，充分溶解后形成混合溶液；(2)在上述混合溶液中，加入滅菌后的去離子水補(bǔ)充體積至ΙΟΟΟμ 1，進(jìn)行稀釋，制成10 μ Ι/ml的藥劑母液。
[0032]4、采用二倍稀釋法將藥劑母液進(jìn)行稀釋配制成工作液:準(zhǔn)備5個離心管，在第一個離心管中加入800 μ I的藥劑母液(10 μ 1/ml);從第一個離心管中取出400 μ I加入第二個離心管中，再向第二個離心管加入400 μ I的滅菌后的去離子水，充分搖勻后，配制成濃度為5 μ 1/ml的工作液；從第二個離心管中取出400 μ I的液體，加入至第三個離心管中，再向第三個離心管中加入400 μ I的滅菌后的去離子水，充分搖勻后，配制成濃度為2.5 μ I/ml的工作液；從第三個離心管中取出400 μ I的工作液，加入至第四個離心管中，再加入400 μ I的滅菌后的去離子水，充分搖勻后，配制成濃度為1.25 μ 1/ml的工作液；從第四個離心管中取出400 μ I的工作液，加入至第五個離心管中，再加入400 μ I的滅菌后的去離子水，充分搖勻后，配制成濃度為0.625 μ Ι/ml的工作液。
[0033]5、具體實(shí)驗(yàn)包括以下步驟:
[0034](I)取5ml馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基加入至直徑為6cmm的培養(yǎng)皿(體積25ml),待其凝固后，在培養(yǎng)皿中央接種Iv直徑為0.5cm的香焦枯委病囷4號生理小種囷餅；
[0035](2)在培養(yǎng)皿蓋上放置一個2cmX 2cm的滅菌濾紙，吸取100 μ I的上述配制的各種濃度(10 μ 1/ml, 5 μ 1/ml, 2.5 μ 1/ml, 1.25 μ l/ml,0.625 μ 1/ml)的甲基烯丙基三硫醚工作液，滴加于滅菌濾紙上；[0036](3)同時做空白對照，在空白對照的培養(yǎng)皿蓋上放置濾紙，滴加100 μ I含有10%的二甲基亞楓的水溶液為對照實(shí)驗(yàn)組；
[0037](4)捋所有的培養(yǎng)皿蓋蓋上，用封口膜密封后，倒置放于28°C的培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng);
[0038](5)此時培養(yǎng)皿中空間體積為20ml (培養(yǎng)皿總體積25ml減去培養(yǎng)基的體積5ml)，因此各個處理的培養(yǎng)皿空間中甲基烯丙基三硫醚的有效濃度分別為50μ 1/L、25y 1/L、12.5 μ 1/L,6.25 μ 1/L,3.125 μ 1/L ；
[0039](6)將上述培養(yǎng)基分別培養(yǎng)24小時、48小時、72小時和96小時，培養(yǎng)后分別測量菌斑直徑，并利用公式(I)計(jì)算抑制率，用以評估甲基烯丙基三硫醚對香蕉枯萎病4號生理
小種的抑制作用。
[0040]
【權(quán)利要求】
1.一種殺菌原液，包括藥性成份與溶劑，其特征在于，藥性成份為甲基烯丙基三硫醚，溶劑為有機(jī)試劑和去離子水。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的殺菌原液，其特征在于，甲基烯丙基三硫醚與有機(jī)試劑的體積此為1:1，每升去尚子水中甲基稀丙基二硫釀的體積為25~50 μ I。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的殺菌原液，其特征在于，有機(jī)試劑為二甲基亞砜。
4.權(quán)利要求1所述殺菌原液的應(yīng)用，其特征在于，將該原液作為防治香蕉枯萎病菌殺菌原 液的應(yīng)用。
【文檔編號】A01P3/00GK103783042SQ201410070544
【公開日】2014年5月14日 申請日期:2014年2月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月28日
【發(fā)明者】黃永紅, 易干軍, 胡春華, 董濤, 魏岳榮, 左存武 申請人:廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹研究所