一種通過種間雜交獲得高比例雌性泥鰍的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種通過種間雜交獲得高比例雌性泥鰍的方法，它是以雌性四倍體泥鰍與雄性大鱗副泥鰍為親本進行雜交：對雌性四倍體泥鰍、雄性大鱗副泥鰍腹腔注射催產(chǎn)藥物，催產(chǎn)12-16小時后，采集雄性大鱗副泥鰍的精巢和雌性四倍體泥鰍的卵粒，將精巢與保存液研磨混勻后再與卵?；靹颍檬芫?，將受精卵進行孵化，飼養(yǎng)孵化后獲得的雜交泥鰍苗，得到高比例的雌性泥鰍。本發(fā)明獲得的三倍體雜交泥鰍群體，其中雌性雜交泥鰍的比例高達78.76-90.30%，而且雌魚可育且可同時產(chǎn)生兩種不同倍性的卵子，雄魚不育。
【專利說明】一種通過種間雜交獲得高比例雌性泥鰍的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及魚類單性繁育方法，更具體地說，它涉及一種通過種間雜交獲得高比例雌性泥鰍的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]許多的研究表明魚類單性群體(全雌或全雄群體)在生長速度或維護健康的生態(tài)環(huán)境方面有著明顯的優(yōu)勢。目前國內(nèi)外生產(chǎn)魚類單性群體的方法主要有以下幾種:性激素直接投喂、三系配套法、雌核發(fā)育和種間雜交。性激素直接投喂實現(xiàn)魚類性別的逆轉(zhuǎn)在以前用的比較多，通過長時間投喂高濃度的雌性或雄性激素往往可以比較順利地獲得全雌或全雄群體。然而通過此方法獲得的魚類單性群體存在很大的食品安全問題，大量的性激素會通過攝食性逆轉(zhuǎn)魚類流入到人體中，對人類造成巨大的危害。鑒于此，一種新的方法，即三系配套法，得以發(fā)明并獲得廣泛的認可和推廣。以性別決定機制為XX-XY型的魚類為例，如果需要獲得全雄群體，首先可通過投喂雌 性激素將正常的XY魚性逆轉(zhuǎn)為生理上的雌魚，然后再與正常的XY雄魚進行交配，獲得YY超雄魚，這種超雄魚需要通過后代測交的方法或利用性別標記進行篩選確定。有研究表明，利用三系配套法可以成功地獲得超雄黃顙魚。另外，有學(xué)者還對此方法進行了改進，通過采用激素性逆轉(zhuǎn)結(jié)合雌核發(fā)育，可大大縮短獲得超雄黃顙魚的時間。雌核發(fā)育現(xiàn)今也常被應(yīng)用到魚類單性群體的生產(chǎn)中，例如通過雌核發(fā)育結(jié)合染色體加倍的方法，就可以比較輕易地獲得XX-XY型魚類的全雌群體。相比于性激素直接投喂、三系配套法和雌核發(fā)育等方法，通過種間雜交獲得魚類單性群體的方法既不存在食品安全問題，同時還操作簡便、效率高。但利用種間雜交獲得魚類單性群體的例子比較少見，最成功的一個案例是利用雌性尼羅羅非魚(XX)與雄性奧里亞羅非魚(ZZ)進行雜交獲得近乎全雄的羅非魚群體(奧尼羅非魚)(雄性比83%-100%)。
[0003]泥鰍和大鱗副泥鰍具有較高的食用和藥用價值，是我國最重要的兩種經(jīng)濟鰍類。近年來因這兩種鰍類的市場價格節(jié)節(jié)攀升，國內(nèi)掀起了一場巨大的泥鰍養(yǎng)殖熱潮，市場對優(yōu)良的泥鰍種質(zhì)資源需求量巨大。自然界中泥鰍的染色體存在著廣泛的核型多態(tài)性，我國的泥鰍以二倍體和四倍體為主。根據(jù)雌核發(fā)育結(jié)果和細胞遺傳學(xué)證據(jù)推測二倍體泥鰍、四倍體泥鰍和大鱗副泥鰍(二倍體)的性別決定分別為XX-XY型、XXXX-XXXY型和ZW-ZZ型。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種通過種間雜交獲得高比例雌性泥鰍的方法，通過該方法可獲得高比例的雌性雜交泥鰍。
[0005]上述目的是采用以下技術(shù)方案實現(xiàn)的:
[0006]一種通過種間雜交獲得高比例雌性泥鰍的方法，該方法是:以雌性四倍體泥鰍與雄性大鱗副泥鰍為親本進行雜交。
[0007]優(yōu)選地，所述雌性四倍體泥鰍與雄性大鱗副泥鰍的親本比例為4-8:3。
[0008]進一步優(yōu)選地，所述雜交的方法是:對雌性四倍體泥鰍、雄性大鱗副泥鰍腹腔注射催產(chǎn)藥物，催產(chǎn)12-16天后，采集雄性大鱗副泥鰍的精巢和雌性四倍體泥鰍的卵粒，將精巢與保存液研磨混勻后再與卵?；靹?，得受精卵，將受精卵進行孵化，飼養(yǎng)孵化后獲得的雜交泥鰍苗，得到高比例的雌性泥鰍。
[0009]進一步優(yōu)選地，所述催產(chǎn)藥物為促排卵素2號和地歐酮。
[0010]進一步優(yōu)選地，所述催產(chǎn)藥物的注射劑量為:雌性四倍體泥鰍注射促排卵素2號35 μ g/kg+地歐酮4mg/kg,雄性大鱗副泥鰍減半。
[0011]進一步優(yōu)選地，所述保存液的配方為:氯化鈉7.5g，氯化鉀0.3g，氯化鈣0.3g，葡萄糖3.0g,雙蒸水定容到1000ml。
[0012]本發(fā)明的有益效果是:
[0013]1.采用本發(fā)明獲得的三倍體雜交泥鰍群體，其中雌性雜交泥鰍的比例高達78.76%-90.30%，而且雌魚可育且可同時產(chǎn)生兩種不同倍性(單倍體和三倍體，見附圖3)的卵子,雄魚不育。
[0014]2.與現(xiàn)有的方法(如三系配套法)相比，本發(fā)明所需要的育種世代數(shù)少，通過一代雜交即可獲得高比例的雌性泥鰍，同時方法簡單、高效、可重復(fù)性強；本發(fā)明不需要借助激素投喂性反轉(zhuǎn)技術(shù)、雌核發(fā)育和染色體加倍等技術(shù)，也不必借助測交、回交和自交等手段，不存在食品安全問題。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0015]圖1是利用流式細胞儀對四倍體泥鰍、大鱗副泥鰍和雜交泥鰍的倍性鑒定圖譜，參照為二倍體公雞血；
[0016]圖2是雜交泥鰍雌雄成體外觀形態(tài)、性腺外觀和性腺切片圖，圖中:A:雜交泥鰍成體，黑色箭頭指向雌性雜交泥鰍，白色`箭頭指向雄性雜交泥鰍:雜交泥鰍成魚性腺，左邊為卵巢，右邊為精巢；C:雜交泥鰍卵巢解剖圖；D:雜交泥鰍卵巢切片圖。
[0017]圖3雜交泥鰍雌魚產(chǎn)生的大小卵(A)、以及與雄性二倍體泥鰍雜交產(chǎn)生的子代(B)和子代倍性鑒定圖譜(C、D)。
【具體實施方式】
[0018]下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進行詳細說明。
[0019]實施例1
[0020]首先從湖北鄂州市獲得健康優(yōu)良的8尾野生雌性四倍體泥鰍和6尾雄性大鱗副泥鰍為親本(利用流式細胞儀鑒定親本倍性)(見附圖1)，雌雄鰍親本比例約為4:3。對親本注射催產(chǎn)藥物促排卵素2號(LRH-A2)和地歐酮(D0M)，雌魚的注射劑量為LRH_A235 μ g/kg+D0M4mg/kg,雄魚劑量減半，注射方法為腹腔一次注射法。催產(chǎn)藥物注射后，將雌雄魚分開暫養(yǎng)于不同水箱中，水溫24-26°C。注射催產(chǎn)藥物12-16h后，人工采集精巢，置于研缽中，加入少量的泥鰍精子保存液(保存液配方:氯化鈉7.5g，氯化鉀0.3g，氯化鈣0.3g，葡萄糖
3.0g，雙蒸水定容到1000ml)進行充分研磨。制備精液的同時，往擦干的干凈小盆中擠入卵粒，一邊擠卵一邊加入精液，充分混勻精子和卵粒，清水活化受精卵1-2分鐘后，再用清水洗滌受精卵2遍，然后將受精卵均勻鋪灑于水箱箱底，曝氣石增氧，水深為15-20cm，水溫25-26°C進行孵化，經(jīng)過約36h，雜交泥鰍苗完全出膜。雜交泥鰍出膜后約48h (雜交泥鰍苗開口)，開始投喂鹵蟲飼養(yǎng)，鹵蟲飼養(yǎng)4天后，開始使用飼料飼養(yǎng)(6d)，雜交泥鰍苗開口 IOd后，隨機取1000尾雜交泥鰍苗轉(zhuǎn)入微流水中繼續(xù)用飼料飼養(yǎng)，直至泥鰍成年。
[0021]隨機采集113尾雜交泥鰍(全長為13.6-22.1cm)，流式細胞儀檢測雜交泥鰍為三倍體(見附圖1)。雜交泥鰍的性別利用外觀形態(tài)觀察、內(nèi)部解剖以及性腺切片觀察等方法進行綜合鑒定(見表1和附圖2)。113尾雜交泥鰍中有89尾為雌性(雌性比為78.76%)，雌性雜交泥鰍的胸鰭圓滑呈扇形，第二鰭條基部無骨板，卵巢中清晰可見大小兩種卵粒，對卵巢進行石蠟切片觀察可見發(fā)育良好的卵母細胞；24尾為雄性，雄性雜交泥鰍的胸鰭鰭條延長呈尖刀狀，第二鰭條基部存在突起骨板，精巢發(fā)育不良、細小、質(zhì)地透明。
[0022]表1四倍體泥鰍早X大鱗副泥鰍?雜交子代的性別比例
[0023]
【權(quán)利要求】
1.一種通過種間雜交獲得高比例雌性泥鰍的方法，其特征在于:以雌性四倍體泥鰍與雄性大鱗副泥鰍為親本進行雜交。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的通過種間雜交獲得高比例雌性泥鰍的方法，其特征在于:所述雌性四倍體泥鰍與雄性大鱗副泥鰍的親本比例為4-8:3。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的通過種間雜交獲得高比例雌性泥鰍的方法，其特征在于:所述雜交的方法是:對雌性四倍體泥鰍、雄性大鱗副泥鰍腹腔注射催產(chǎn)藥物，催產(chǎn)12-16小時后，采集雄性大鱗副泥鰍的精巢和雌性四倍體泥鰍的卵粒，將精巢與保存液研磨混勻后再與卵?；靹颍檬芫?，將受精卵進行孵化，飼養(yǎng)孵化后獲得的雜交泥鰍苗，得到高比例的雌性泥鰍。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的通過種間雜交獲得高比例雌性泥鰍的方法，其特征在于:所述催產(chǎn)藥物為促排卵素2號和地歐酮。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的通過種間雜交獲得高比例雌性泥鰍的方法，其特征在于:所述催產(chǎn)藥物的注射劑量為:雌性四倍體泥鰍注射促排卵素2號35 μ g/kg+地歐酮4mg/kg，雄性大鱗副泥鰍減半。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的通過種間雜交獲得高比例雌性泥鰍的方法，其特征在于:所述保存液的配方為:氯化鈉7.5g，氯化鉀0.3g，氯化鈣0.3g，葡萄糖3.0g,雙蒸水定容到 ，1000 ml0
【文檔編號】A01K61/00GK103875568SQ201410110587
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2014年3月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月24日
【發(fā)明者】曹小娟, 王衛(wèi)民, 黃松錢, 田先暢, 高堅 申請人:華中農(nóng)業(yè)大學(xué)