松果菊‘王冠’的組織培養(yǎng)方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種松果菊‘王冠’的組織培養(yǎng)方法，該方法包括：（1）無菌材料的獲得、（2）不定芽的誘導、（3）生根培養(yǎng)、（4）煉苗與移栽四個步驟，其中誘導培養(yǎng)基為MS+0.1~1.0mg/L6-芐氨基腺嘌呤+0.1~1.0mg/L萘乙酸+30~32g/L蔗糖+6.8~7.0g/L瓊脂粉，pH5.6~5.8，培養(yǎng)28~30天時間，培養(yǎng)條件溫度在23~26℃，光照強度為1500~2000Lux，光照時間12h；生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.1~1.0mg/L吲哚丁酸+30~32g/L蔗糖+6.8~7.0g/L瓊脂粉，pH為5.6~5.8，18~20天后，基部長出3~24條主根，主根長度均值為4.5cm。采用該種組織培養(yǎng)方法，可以提高松果菊‘王冠’的誘導成活率，有利于松果菊‘王冠’在我國短期內(nèi)的推廣種植。
【專利說明】松果菊‘王冠’的組織培養(yǎng)方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種植物的組織培養(yǎng)方法，尤其涉及一種松果菊‘王冠’的組織培養(yǎng)方法，屬于農(nóng)業(yè)種植【技術領域】。
【背景技術】
[0002]松果菊‘王冠’為歐洲松果菊品種，國內(nèi)幾乎沒有種植培養(yǎng)，它是一種不尋常的紫紅色松果菊，首輪花開放基本都是以單瓣的形式，之后開放的花朵會開始呈現(xiàn)雙層花朵的效果。松果菊植株強健，花期長，屬于蜜源植物，可以吸引蜜蜂和蝴蝶。因此，作為國外引種品種，松果菊‘王冠’在園林上具有很高的應用推廣價值。植物的組織培養(yǎng)是根據(jù)植物細胞具有“全能性”的理論，于近年來發(fā)展起來的一項無性繁殖的新技術。植物的組織培養(yǎng)廣義又叫離體培養(yǎng)，指從植物體分離出符合需要的組織、器官或細胞、原生質(zhì)體等，通過無菌操作，在人工控制條件下進行培養(yǎng)以獲得再生的完整植株或生產(chǎn)具有經(jīng)濟價值的其他產(chǎn)品的技術。狹義則是指用植物各部分組織，如形成層、薄壁組織、葉肉組織、胚乳等進行培養(yǎng)獲得再生植株，也指在培養(yǎng)過程中從各器官上產(chǎn)生愈傷組織的培養(yǎng)，愈傷組織再經(jīng)過再分化形成再生植物。植物的組織培養(yǎng)具有:(1)占用空間小、不受地區(qū)、季節(jié)限制；(2)培養(yǎng)周期短、可短時間大量繁殖；(3)不存在變異、可保持原母本的一切遺傳特征；(4)培養(yǎng)脫毒作物；(5)投資少，經(jīng)濟效益高等眾多優(yōu)點，正逐漸成為多種植物培育的新方式。但目前尚未有關于松果菊‘王冠’的組織培養(yǎng)方法的相關研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是為了解決松果菊‘王冠’在我國尚未有有推廣種植應用的問題，提供了一種提高松果菊‘王冠’快速繁殖和促進生長、提高成活率的一種組織培養(yǎng)方法。
[0004]本發(fā)明采用如下的技術方案:一種松果菊‘王冠’的組織培養(yǎng)方法，包括以下步驟:
(1)無菌材料的獲得
選取飽滿的種子為材料，在超凈工作臺上用75%的酒精消毒l(T40s，然后用無菌水沖洗3飛遍，再用次氯酸鈉溶液消毒10-30分鐘，然后用無菌水沖洗4飛遍，用無菌濾紙吸干多余水分后接種到MS培養(yǎng)基中，28~30天后待種子長出無菌苗；
(2)不定芽的誘導
將步驟(1)中獲得的無菌苗作為材料，切下2-4cm的葉柄作為外植體，接種到誘導培養(yǎng)基上，調(diào)節(jié)pH至5.6^5.8，培養(yǎng)28~30天時間，培養(yǎng)溫度為23~26 V，光照強度為150(T2000Lux，光照時間為 10~12h ；
(3)生根培養(yǎng)
將步驟(2)中誘導的高度2~5cm的叢生苗切成單株接種到生根培養(yǎng)基上，調(diào)節(jié)pH至
5.6^5.8，培養(yǎng)18~20天后，基部長出3~24條主根，主根長度均值達到4.5cm ；
(4)煉苗與移栽將高度在2~5cm，葉片數(shù)在2飛片、根系長度在3飛cm的組培苗進行煉苗，打開瓶蓋2~3天，使其適應外界環(huán)境，2~3天后洗掉根部的培養(yǎng)基，用700-900倍的多菌靈浸泡f 10分鐘，移栽至大棚內(nèi)，覆膜保濕且遮光。
[0005]2、如權利要求1所述的松果菊‘王冠’的組織培養(yǎng)方法，其特征在于:所述步驟(2)中的誘導培養(yǎng)基為MS+0.1~1.0 mg/L 6-芐氨基腺嘌呤+0.1~1.0mg/L萘乙酸+30~32 g/L蔗糖+6.8^7.0g/L瓊脂粉。
[0006]3、如權利要求1所述的松果菊‘王冠’的組織培養(yǎng)方法，其特征在于:所述步驟(3)中的生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.1~1.0 mg/L吲哚丁酸+30~32 g/L蔗糖+6.8~7.0g/L瓊脂粉。
[0007]本發(fā)明通過組培技術，利用植物組織培養(yǎng)手段對松果菊‘王冠’繁殖，具有繁殖快速、生長速度快、節(jié)省時間，植物成活率高，適應能力強，適于松果菊‘王冠’在短期內(nèi)的推廣種植。
【具體實施方式】
[0008]下面將結合【具體實施方式】對本發(fā)明作進一步說明。
[0009]實施例1
(I)無菌材料的獲得:
選取飽滿的種子為材料，在超凈工作臺上用75%的酒精消毒10s，然后用無菌水沖洗3遍，再用次氯酸鈉 溶液消毒10分鐘，然后用無菌水沖洗4遍，用無菌濾紙吸干多余水分后接種到MS培養(yǎng)基中，30天后待種子長出無菌苗。
[0010](2)不定芽的誘導:
將步驟(1)中獲得的無菌苗作為材料，切下長為2cm的葉柄作為外植體，接種到誘導培養(yǎng)基上，誘導培養(yǎng)基為MS+0.lmg/L 6-芐氨基腺嘌呤+0.lmg/L萘乙酸+30 g/L蔗糖+7g/L瓊脂粉，調(diào)節(jié)pH至5.8，培養(yǎng)30天時間，培養(yǎng)條件溫度在23°C，光照強度為1500Lux，光照時間12h。
[0011](3)生根培養(yǎng)
將步驟(2)中誘導的高度2cm的叢生苗切成單株接種到生根培養(yǎng)基上。生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.lmg/L吲哚丁酸+30 g/L蔗糖+7g/L瓊脂粉，調(diào)節(jié)pH至5.8，20天后，基部長出3-6條主根。
[0012](4)煉苗與移栽
將高度在2cm，葉片數(shù)在2片、根系長度在3cm的組培苗進行煉苗。打開瓶蓋3天，使其適應外界環(huán)境。3天后洗掉根部的培養(yǎng)基，用800倍的多菌靈浸泡I分鐘，移栽至大棚內(nèi)，覆膜保濕，適度遮光。
[0013]實施例2
(I)無菌材料的獲得:
選取飽滿的種子為材料，在超凈工作臺上用75%的酒精消毒20s，然后用無菌水沖洗4遍，再用次氯酸鈉溶液消毒15分鐘，然后用無菌水沖洗4遍，用無菌濾紙吸干多余水分后接種到MS培養(yǎng)基中，28天后待種子長出無菌苗。
[0014](2)不定芽的誘導:
將步驟(1)中獲得的無菌苗作為材料，切下長為3cm的葉柄作為外植體，接種到誘導培養(yǎng)基上，誘導培養(yǎng)基的為MS+0.5mg/L 6-芐氨基腺嘌呤+0.4mg/L萘乙酸+32 g/L蔗糖+6.8g/L瓊脂粉，調(diào)節(jié)pH至5.6，培養(yǎng)28天時間，培養(yǎng)條件溫度在25°C，光照強度為1500Lux，光照時間10h。
[0015](3)生根培養(yǎng)
將步驟(2)中誘導的高度2cm的叢生苗切成單株接種到生根培養(yǎng)基上。生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.2mg/L吲哚丁酸+32g/L蔗糖+6.8g/L瓊脂粉，調(diào)節(jié)pH至5.6，18天后，基部長出3-24條主根,主根長度均值達到4.5cm。
[0016](4)煉苗與移栽
將高度在3cm，葉片數(shù)在3片、根系長度在4.8cm的組培苗進行煉苗。打開瓶蓋2天，使其適應外界環(huán)境。3天后洗掉根部的培養(yǎng)基，用800倍的多菌靈浸泡5分鐘，移栽至大棚內(nèi)，覆膜保濕，適度遮光。
[0017]實施例3
(I)無菌材料的獲得:
選取飽滿的種子為材料，在超凈工作臺上用75%的酒精消毒40s，然后用無菌水沖洗5遍，再用次氯酸鈉溶液消毒30分鐘，然后用無菌水沖洗6遍，用無菌濾紙吸干多余分水分后接種到MS培養(yǎng)基中，30天后待種子長出無菌苗。
[0018](2)不定芽的誘導:`
將步驟(1)中獲得的無菌苗作為材料，切下長為5cm的葉柄作為外植體，接種到誘導培養(yǎng)基上，誘導培養(yǎng)基的為MS+1.0mg/L 6-芐氨基腺嘌呤+1.0mg/L萘乙酸+30 g/L蔗糖+7g/L瓊脂粉，調(diào)節(jié)pH至5.8，培養(yǎng)30天時間，培養(yǎng)條件溫度為26°C，光照強度為2000Lux，光照時間12h。
[0019](3)生根培養(yǎng)
將步驟(2)中誘導的高度5cm的叢生苗切成單株接種到生根培養(yǎng)基上。生根培養(yǎng)基為1/2MS+1.0mg/L吲哚丁酸+30 g/L蔗糖+7g/L瓊脂粉，調(diào)節(jié)pH至5.8，20天后，基部長出3-24條主根。
[0020](4)煉苗與移栽
將高度在5cm，葉片數(shù)在6片、根系長度在6cm的組培苗進行煉苗。打開瓶蓋3天，使其適應外界環(huán)境，3天后洗掉根部的培養(yǎng)基，用800倍的多菌靈浸泡10分鐘，移栽至大棚內(nèi)，覆膜保濕，適度遮光。
【權利要求】
1.一種松果菊‘王冠’的組織培養(yǎng)方法，其特征在于:包括以下步驟: (1)無菌材料的獲得 選取飽滿的種子為材料，在超凈工作臺上用75%的酒精消毒l(T40s，然后用無菌水沖洗3飛遍，再用次氯酸鈉溶液消毒10-30分鐘，然后用無菌水沖洗4飛遍，用無菌濾紙吸干多余水分后接種到MS培養(yǎng)基中，28~30天后待種子長出無菌苗； (2)不定芽的誘導 將步驟(1)中獲得的無菌苗作為材料，切下2-4cm的葉柄作為外植體，接種到誘導培養(yǎng)基上，調(diào)節(jié)pH至5.6^5.8，培養(yǎng)28~30天時間，培養(yǎng)溫度為23~26 V，光照強度為150(T2000Lux，光照時間為 10~12h ； (3)生根培養(yǎng) 將步驟(2)中誘導的高度2~5cm的叢生苗切成單株接種到生根培養(yǎng)基上，調(diào)節(jié)pH至5.6^5.8，培養(yǎng)18~20天后，基部長出3~24條主根，主根長度均值達到4.5cm ； (4)煉苗與移栽 將高度在2~5cm，葉片數(shù)在2飛片、根系長度在3飛cm的組培苗進行煉苗，打開瓶蓋2~3天，使其適應外界環(huán)境，2~3天后洗掉根部的培養(yǎng)基，用700-900倍的多菌靈浸泡f 10分鐘，移栽至大棚內(nèi)，覆膜保濕且遮光。
2.如權利要求1所述的 松果菊‘王冠’的組織培養(yǎng)方法，其特征在于:所述步驟(2)中的誘導培養(yǎng)基為MS+0.1~1.0 mg/L 6-芐氨基腺嘌呤+0.1~?.0mg/L萘乙酸+30~32 g/L蔗糖+6.8~7.0g/L瓊脂粉。
3.如權利要求1所述的松果菊‘王冠’的組織培養(yǎng)方法，其特征在于:所述步驟(3)中的生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.1~1.0 mg/L吲哚丁酸+30~32 g/L蔗糖+6.8~7.0g/L瓊脂粉。
【文檔編號】A01H4/00GK103858772SQ201410132580
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2014年4月3日 優(yōu)先權日:2014年4月3日
【發(fā)明者】王瑩, 趙湘, 代克巖, 周麗 申請人:江蘇美尚生態(tài)景觀股份有限公司