植物乳桿菌、干酪乳桿菌和地衣芽孢桿菌復(fù)合菌劑的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于益生菌發(fā)酵【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種以豆粕、麩皮和玉米粉為基質(zhì)，以益生菌植物乳桿菌HM-10(Lactobacillus?plantarum?HM-10)、干酪乳桿菌HM-09(Lactobacillus?casei?HM-09)和地衣芽孢桿菌BL-09(Bacillus?licheniformis?BL-09)為菌種的混合固態(tài)發(fā)酵技術(shù)，可廣泛應(yīng)用于微生態(tài)領(lǐng)域的益生菌固體發(fā)酵技術(shù)，此方法可以生產(chǎn)出具有特殊酸香味的發(fā)酵型飼料產(chǎn)品，且發(fā)酵產(chǎn)品的活菌數(shù)高，豆粕蛋白質(zhì)的降解率高。此制備方法生產(chǎn)成本低，可以提高經(jīng)濟(jì)效益并且操作簡(jiǎn)單。
【專利說明】植物乳桿菌、干酪乳桿菌和地衣芽孢桿菌復(fù)合菌劑的制備
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于益生菌發(fā)酵【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種以豆柏、麩皮和玉米粉為基質(zhì)，以益生菌植物乳桿菌HM-1O (Lactobacillus pi ant arum HM-10)、干釀乳桿菌HM-09 (Lactobacillus casei HM-09)和地衣芽抱桿菌 BL-09 (Bacillus licheniformisBL-09)為菌種的混合固態(tài)發(fā)酵技術(shù)，此技術(shù)可廣泛應(yīng)用于動(dòng)物微生態(tài)等方面。
【背景技術(shù)】
[0002]目前，益生菌制品多采用益生菌直接與液態(tài)牛乳和豆乳發(fā)酵，得到功能性的酸牛奶或者酸豆奶，其余則采用液態(tài)發(fā)酵，直接收集益生菌菌體，制作成益生菌粉劑、片劑或者膠囊。采用液態(tài)發(fā)酵會(huì)產(chǎn)生大量的廢水，對(duì)環(huán)境污染較大，后處理比較困難，機(jī)器設(shè)備操作繁瑣。因此本申請(qǐng)采用植物乳桿菌HM-1O、干酪乳桿菌HM-09和地衣芽孢桿菌BL-09混合固態(tài)發(fā)酵豆柏、麩皮和玉米粉，采用固態(tài)發(fā)酵，其生產(chǎn)成本低，投資的資金較少，在下游處理方便，污染小，設(shè)備結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、易操作。采用植物乳桿菌HM-10、干酪乳桿菌HM-09和地衣芽孢桿菌BL-09進(jìn)行混菌固態(tài)發(fā)酵，可生產(chǎn)出一種具有酸香氣味的發(fā)酵制品，改善動(dòng)物飼料的適口性。其蛋白質(zhì)被分解成小肽和游離氨基酸，有利于動(dòng)物腸胃消化吸收。
[0003]專利《一種有效預(yù)防及改善牛乳房炎的復(fù)合乳酸菌微生態(tài)制劑》，CN103202391A,公開了含有干酪乳桿菌HM-09、植物乳桿菌HM-10的復(fù)合微生態(tài)制劑。所述干酪乳桿菌和植物乳桿菌已于2012年10月29日在地址為北京市大屯路，中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，干酪乳桿菌HM_09(L.casei HM-09)保藏號(hào):CGMCC N0.6736 ;植物乳桿菌 HM-10 (L.Plantarum HM-10)保藏號(hào):CGMCC N0.6741。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明目的在于提供一種以豆柏、麩皮和玉米粉為基質(zhì)，采用植物乳桿菌HM-10 (Lactobacillus pi ant arum HM-10)、干酪乳桿菌 HM-09 (Lactobacillus caseiHM-09)和地衣芽孢桿菌BL-09 (Bacillus licheniformis BL-09)進(jìn)行混合固態(tài)發(fā)酵，可廣泛應(yīng)用于微生態(tài)領(lǐng)域的益生菌固體發(fā)酵技術(shù)，此方法可以生產(chǎn)出具有特殊酸香味的發(fā)酵型飼料產(chǎn)品，且發(fā)酵產(chǎn)品的活菌數(shù)高，豆柏蛋白質(zhì)的降解率高。此制備方法生產(chǎn)成本低，可以提高經(jīng)濟(jì)效益并且操作簡(jiǎn)單。
[0005]本發(fā)明目的是通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。
[0006]一種以豆柏、麩皮和玉米粉為基質(zhì)可廣泛應(yīng)用于微生態(tài)領(lǐng)域的益生菌固體發(fā)酵技術(shù)，包括植物乳桿菌HM-10、干酪乳桿菌HM-09和地衣芽孢桿菌BL-09的培養(yǎng)及其混合固態(tài)發(fā)酵，得到益生菌的固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)品。
[0007]所述混合固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)為:先分別以1-5%接種量(v/w)將植物乳桿菌HM-10和干酪乳桿菌HM-09接種于固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，控溫30-37°C，相對(duì)濕度50%_60%，發(fā)酵0_12h后以2-8%接種量(v/w)接入地衣芽孢桿菌BL-09進(jìn)行混合固態(tài)發(fā)酵，其他條件不變，繼續(xù)發(fā)酵 24-36h。[0008]固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基組成包括豆柏、麩皮和玉米粉，所述豆柏、麩皮和玉米粉的質(zhì)量比例為:豆柏、麩皮、玉米粉=10:8-10:0.5-1。水份含量控制在40-75%。
[0009]在最佳控制條件下，固態(tài)發(fā)酵中同時(shí)接種1% (v/w)的植物乳桿菌HM-10和1% (ν/w)的干酪乳桿菌ΗΜ-09，其他條件保持一致，混菌發(fā)酵12h后，再接種5% (v/w)的地衣芽孢桿菌BL-09，再繼續(xù)混菌發(fā)酵36h。測(cè)定游離氨基態(tài)氮含量可達(dá)到1090.0 μ mol/g，較發(fā)酵前提高約11倍。地衣芽孢桿菌BL-09芽孢率較單獨(dú)發(fā)酵提高約3倍?；旌习l(fā)酵的益生菌活菌數(shù)在101Qcfu/g以上，其中植物乳桿菌HM-10活菌數(shù)達(dá)3.55\090血/^、干酪乳桿菌麗-09活菌數(shù)達(dá)3.89X09cfu/g、地衣芽孢桿菌BL-09活菌數(shù)達(dá)1.29 X 10lclcfu/g。
[0010]所述植物乳桿菌HM-10、干酪乳桿菌HM-09和地衣芽孢桿菌BL-09在混合固態(tài)發(fā)酵前分別經(jīng)過種子培養(yǎng)。種子培養(yǎng)基為(g/L):蛋白胨10-20，葡萄糖10-20，其余為水，pH7.0-7.2。地衣芽孢桿菌BL-09的種子培養(yǎng)條件:搖床轉(zhuǎn)速為150_180r/min，溫度為34-370C，培養(yǎng)20-24h。所述的植物乳桿菌HM-10和干酪乳桿菌腿_09的種子培養(yǎng)條件，分別置于恒溫培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度30_37°C,培養(yǎng)時(shí)間為20_24h。
[0011]所述地衣芽孢桿菌BL-09于2011年12月31日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)為CGMCC N0.5686，分類名:地衣芽孢桿菌(Bacilluslicheniformis)，保藏地址為:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵編100101。
[0012]所述地衣芽孢桿菌BL-09是一株分離自內(nèi)蒙古自治區(qū)呼和浩特市地區(qū)健康牛腸道樣品中的芽孢桿菌，屬于兼性厭氧的、革蘭氏陽性芽孢桿菌。菌體呈棒桿狀，偶爾見長(zhǎng)桿狀，芽孢中生，呈橢圓形。最適生長(zhǎng)溫度為37± 1°C，最適生長(zhǎng)pH為7.0-7.4，固態(tài)發(fā)酵烘干產(chǎn)物常溫儲(chǔ)存6個(gè)月，芽孢損失率低于5%.營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)12h左右，菌落不規(guī)則、邊緣不光滑，菌落中央具有明顯的凸起峰；培養(yǎng)至24-36h，菌落褶皺明顯且褶皺內(nèi)物質(zhì)呈液體狀，接種環(huán)挑取具有拉絲情況，鏡檢芽孢基本脫落。經(jīng)過伯杰氏細(xì)菌手冊(cè)(第9版)及細(xì)菌、菌落形態(tài)確定為地衣芽孢桿菌，命名為地衣芽孢桿菌BL-09。體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)，該菌株具有良好的耐高溫、耐酸、耐膽鹽等生化特性，還能夠高產(chǎn)蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等多種酶類及氨基酸、維生素、抗菌物質(zhì)等多種生理活性物質(zhì)，發(fā)酵后的固態(tài)培養(yǎng)基粘度很大，拉絲嚴(yán)重，培養(yǎng)器皿底部可見少量液體物質(zhì)，證明其固態(tài)發(fā)酵中的保濕能力相對(duì)較強(qiáng)。
[0013]耐酸試驗(yàn):
[0014]地衣芽孢桿菌BL-09于肉湯種子液中，37°C，150r/min培養(yǎng)24h，于4°C、4000r/min離心10min收集菌體，用0.85%無菌生理鹽水漂洗一次后，懸浮于pH分別為2.0、3.0及4.0的緩沖溶液中，37°C培養(yǎng)l_3h，檢測(cè)活菌數(shù)變化，結(jié)果顯示地衣芽孢桿菌BL-09具有良好的
耐酸性。
[0015]
【權(quán)利要求】
1.一種復(fù)合益生菌發(fā)酵制劑，由植物乳桿菌CGMCC N0.6741、干酪乳桿菌CGMCCN0.6736、地衣芽孢桿菌經(jīng)混合固態(tài)發(fā)酵制得，其特征在于，所述地衣芽孢桿菌的保藏編號(hào)為CGMCC N0.5686 ;所述混合固態(tài)發(fā)酵包括:先分別以l_5%v/w接種量將植物乳桿菌和干酪乳桿菌接種于固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，控溫30-37°C，相對(duì)濕度50%-60%，發(fā)酵0_12h后以2-8%v/w接種量接入地衣芽孢桿菌BL-09進(jìn)行混合固態(tài)發(fā)酵，其他條件不變，繼續(xù)發(fā)酵24-36h。
2.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合益生菌發(fā)酵制劑，其特征在于，所述固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基的組成包括豆柏、麩皮和玉米粉，所述豆柏、麩皮和玉米粉的質(zhì)量比例為:豆柏、麩皮、玉米粉=10:8-10:0.5-1，水份含量控制在 40-75%。
3.如權(quán)利要求1或2所述的復(fù)合益生菌發(fā)酵制劑，其特征在于，所述復(fù)合益生菌發(fā)酵制劑中游離氨基態(tài)氮含量達(dá)到1090.0μπιΟ1/^，益生菌活菌數(shù)在101(lCfu/g以上，其中植物乳桿菌活菌數(shù)達(dá)3.55X09cfu/g、干酪乳桿菌活菌數(shù)達(dá)3.89X09cfu/g、地衣芽孢桿菌活菌數(shù)達(dá) 1.29X1010cfu/go
4.如權(quán)利要求1或2所述的復(fù)合益生菌發(fā)酵制劑，其特征在于，所述植物乳桿菌、干酪乳桿菌和地衣芽孢桿菌在混合固態(tài)發(fā)酵前分別經(jīng)過種子培養(yǎng)，種子培養(yǎng)基為:蛋白胨10-20g/L，葡萄糖10-20g/L，其余為水，pH7.0-7.2 ;地衣芽孢桿菌的種子培養(yǎng)條件:搖床轉(zhuǎn)速為150-180r/min，溫度為30_37°C，培養(yǎng)20_24h ;植物乳桿菌和干酪乳桿菌的種子培養(yǎng)條件:分別置于恒溫培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度30-37°C,培養(yǎng)時(shí)間為20-24h。
5.權(quán)利要求1-4任一所述的復(fù)合益生菌發(fā)酵制劑的固態(tài)發(fā)酵方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟:植物乳桿菌CGMCC N0.6741、干酪乳桿菌CGMCC N0.6736和地衣芽孢桿菌CGMCCN0.5686分別經(jīng)過種子培養(yǎng)制備菌劑；混合固態(tài)發(fā)酵:先分別以1_5%V/W接種量將植物乳桿菌和干酪乳桿菌接種于固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，控溫30-37°C，相對(duì)濕度50%-60%，發(fā)酵0-12h后以2-8%接種量接入地衣芽孢桿菌BL-09進(jìn)行混合固態(tài)發(fā)酵，其他條件不變，繼續(xù)發(fā)酵 24-36h。
6.權(quán)利要求1-4任一所述的復(fù)合益生菌發(fā)酵制劑在飼料添加劑中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A23K1/16GK103952346SQ201410154685
【公開日】2014年7月30日 申請(qǐng)日期:2014年4月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月17日
【發(fā)明者】高鵬飛, 賀潤(rùn)晶, 姚國(guó)強(qiáng) 申請(qǐng)人:青島九和宜生生物科技有限公司