用于培育優(yōu)質(zhì)蝴蝶蘭實(shí)生苗的無(wú)激素培養(yǎng)基及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】一種用于培育優(yōu)質(zhì)蝴蝶蘭實(shí)生苗的無(wú)激素培養(yǎng)基，包括A、B、C三種培養(yǎng)基：培養(yǎng)基A：花多多11號(hào)，1.5～2.8g/L；胰蛋白胨，1.5～2.5g/L；活性炭，1.0～3.0g/L；谷胱甘肽20～30mg/L；蔗糖，20～30g/L；瓊脂粉，8.0～9.0g/L；最終pH調(diào)節(jié)為5.2～5.5；培養(yǎng)基B和培養(yǎng)基C。使用培育優(yōu)質(zhì)蝴蝶蘭實(shí)生苗的無(wú)激素系列培養(yǎng)基包括A、B、C三種培養(yǎng)基在培育優(yōu)質(zhì)蝴蝶蘭實(shí)生苗的應(yīng)用。使用該系列培養(yǎng)基及方法簡(jiǎn)便、適用。而應(yīng)用方便的培育適用現(xiàn)有蝴蝶蘭屬內(nèi)絕大多數(shù)園藝種的自交或品種間雜交種的無(wú)菌播種，不僅能獲得大量的蝴蝶蘭不同品種的優(yōu)質(zhì)實(shí)生苗，而且因不添加任何激素而減少了實(shí)生苗的變異率，加快了優(yōu)質(zhì)蝴蝶蘭實(shí)生苗的培育速度。
【專利說(shuō)明】用于培育優(yōu)質(zhì)蝴蝶蘭實(shí)生苗的無(wú)激素培養(yǎng)基及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于農(nóng)林業(yè)花卉培養(yǎng)，特別涉及一種用于培育優(yōu)質(zhì)蝴蝶蘭實(shí)生苗的無(wú)激素培養(yǎng)基及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]蝴蝶蘭屬蘭科蝴蝶蘭屬植物，其花形狀奇異清秀，花大艷麗，具有極高的觀賞價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。隨著人們生活水平的不斷提高，蝴蝶蘭的市場(chǎng)需求量也越來(lái)越大，但蝴蝶蘭為典型的單莖性熱帶附生蘭，植物很少發(fā)生側(cè)枝，分株繁殖系數(shù)極低。蝴蝶蘭需經(jīng)人工授粉才能獲得種子，但其種子發(fā)育不全，沒(méi)有胚乳，只有一層極薄的種皮，自然條件下很難萌發(fā)，需經(jīng)組織培養(yǎng)無(wú)菌播種才能獲得植株。在蝴蝶蘭開(kāi)花時(shí)進(jìn)行自交或雜交授粉，授粉成功的花朵3— 4個(gè)月后果莢方便可進(jìn)行試管無(wú)菌播種。由于果莢內(nèi)種子數(shù)量較多，I個(gè)果莢便可繁殖出成千上萬(wàn)的植株。采用無(wú)菌播種途徑快繁蝴蝶蘭，能夠在短期內(nèi)獲得大量幼小植株，且成本較低，是現(xiàn)階段經(jīng)濟(jì)有效的快速繁殖方法，也是工廠化育苗的重要途徑。
[0003]蝴蝶蘭種苗的繁殖主要通過(guò)組培苗培養(yǎng)的方法繁殖。Kundson(1922)經(jīng)過(guò)系列研究，成功地在含糖培養(yǎng)基上用種子培育出蘭花幼苗，建立了一套蘭花種子無(wú)菌萌發(fā)實(shí)驗(yàn)方法和萌發(fā)所需的恰當(dāng)培養(yǎng)基配方，無(wú)菌萌發(fā)獲得的蘭花幼苗可以正常生長(zhǎng)開(kāi)花，此方法為以后的雜交育種和蘭花工業(yè)的發(fā)展提供了必備條件；GaVin0R0ter(1949)首先對(duì)蘭花進(jìn)行組織培養(yǎng)獲得成功，他將蝴蝶蘭莖節(jié)接種于KundsonC培養(yǎng)基上獲得再生苗；Morel (1960)開(kāi)創(chuàng)了蘭花莖尖組織培養(yǎng)工業(yè)化生產(chǎn)技術(shù)，并被蘭花生產(chǎn)者應(yīng)用到新品種的快速繁殖中來(lái)，蘭花工業(yè)從此興起。Potor (1949)采用蝴蝶蘭花梗上的休眠芽作為外植體，進(jìn)行無(wú)菌培養(yǎng)成為完整的植株，引 起人們關(guān)注，曾一度成為蝴蝶蘭的主要無(wú)性繁殖方式。Intuwong等(1974)采用蝴蝶蘭莖尖作為外植體，誘導(dǎo)PLB(原球莖)分化成植株，為實(shí)現(xiàn)蝴蝶蘭工廠化生產(chǎn)奠定了基礎(chǔ)。此后，國(guó)外蘭花組織培養(yǎng)文獻(xiàn)大量增加，東洋蘭花的組織培養(yǎng)方面，在日本和韓國(guó)有大量的應(yīng)用研究，在此不一一列舉。在我國(guó)，蘭花的組織培養(yǎng)起步較晚，吳應(yīng)祥(1960)研究了蘭花種子無(wú)菌萌發(fā)；1980年以后，國(guó)蘭與洋蘭組織培養(yǎng)與快速繁殖文獻(xiàn)量激增；云南植物研究所(1982)對(duì)蕙蘭屬10個(gè)種的種子進(jìn)行了無(wú)菌播種技術(shù)的研究；四川省農(nóng)科院原子能應(yīng)用研究所(1987)報(bào)道了中囯蘭45個(gè)品種的組織培養(yǎng)繁殖研究，成功誘導(dǎo)了 20個(gè)品種。進(jìn)入20世紀(jì)90年代后期，日本、韓國(guó)特別是臺(tái)灣地區(qū)的蝴蝶蘭花企業(yè)紛紛涌入我國(guó)發(fā)展蝴蝶蘭花產(chǎn)業(yè)，帶來(lái)了大量蘭花新品種和培育新技術(shù)，催生了我國(guó)“蘭花工業(yè)”，目前，蝴蝶蘭、文心蘭、卡特蘭、石斛蘭、大花蕙蘭等洋蘭和春蘭、春劍、建蘭、墨蘭、寒蘭等國(guó)蘭巳大部分品種實(shí)現(xiàn)了組織培養(yǎng)規(guī)?；a(chǎn)，其中僅蝴蝶蘭組培試管苗全國(guó)年產(chǎn)量超過(guò)4000萬(wàn)株。目前國(guó)內(nèi)外栽培的蝴蝶蘭品種絕大多數(shù)都是通過(guò)雜交育種得到的。在蝴蝶蘭雜交育種中，也常遇到雌、雄孢子不親和性，雜種胚發(fā)育不良，沒(méi)有胚乳，只有一層極薄的種皮，自然條件下很難萌發(fā)，需經(jīng)組織培養(yǎng)無(wú)菌播種才能獲得大量蘭花苗。通過(guò)無(wú)菌播種與組織培養(yǎng)，獲得大量?jī)?yōu)良植株，可以保持優(yōu)良品質(zhì)特征，是進(jìn)行大規(guī)模商品生產(chǎn)和新品種選育的關(guān)鍵，雜種胚培養(yǎng)已成為蝴蝶蘭雜交育種中不可缺少的技術(shù)手段，也成為蘭花育苗的一項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)程序；通過(guò)無(wú)菌播種與組織培養(yǎng)，縮短了雜交育種周期，提高了育種效率，加快了蝴蝶蘭規(guī)模化生產(chǎn)的進(jìn)程。自從Kundson(1922)成功地在含糖培養(yǎng)基上用種子培育出蘭花幼苗以來(lái)，我國(guó)吳應(yīng)祥(I960)也研究了蘭花種子無(wú)菌萌發(fā)，但這些均是地生蘭的研究；對(duì)氣生熱帶蘭的研究一直不太多。20世紀(jì)80年代，國(guó)內(nèi)對(duì)蝴蝶蘭無(wú)菌的播種和組織培養(yǎng)開(kāi)始起步，近年囯內(nèi)有許多學(xué)者(魏翠華，等，2000年)、(楊美純，等，2002年)、(王慧瑜，等，2003年)、(徐曉薇，等，2004年)、(姚麗娟，等，2004年)、(梁宏偉，等，2004年)、(章玉平，等，2004年)、(俞繼英，等，2004年)、(陳超等，2006年)、(曹君邁，等，2006年)、(楊杞，等，2006年)、(范成五等，2006年)、(余慧琳，等，2009年)、(丘亮偉，等，2009年)、(蒲海萍，等，2011年)先后報(bào)道了蝴蝶蘭無(wú)菌播種的結(jié)果，并且有的已應(yīng)用于蝴蝶蘭雜交育種和實(shí)生種苗的繁育生產(chǎn)。
[0004]所見(jiàn)以上報(bào)道所釆用的培養(yǎng)基具有以下特點(diǎn):
[0005](I)源于種子的再生體系，大多數(shù)釆用愈傷組織再生途徑和晶胚再生途徑及原球莖再生途徑等，但所用培養(yǎng)基成分較多，原料保存和配制很不便。例如，Chen Y C，等(2000年)采用蝴蝶蘭‘Nebula’白花授粉120天的種子作為外植體，誘導(dǎo)的愈傷組織培養(yǎng)基為1/4MS+蛋白胨 1.0g/L+AC2.0g/L+香蕉泥 50g/LL+肌醇 100mg/L+鹿糖 20mg/L+Gelrite (凝固劑)3.0g/L，并逐漸形成原球莖；愈傷組織增殖培養(yǎng)基為1/2MS+肌醇100mg/L+煙酸
0.5mg/L+VB60.5mg/L+VB10.lmg/L+ 甘氨酸 2.0mg/L+ 蛋白胨 1.0g/L+NaH2P04170.0mg/L+蔗糖 20g/L+Gelrite2.2mg/L+TDZl.0mg/L。Chen J T，等(2004 年)采用蝴蝶蘭 Phal.amabilis白花授粉后3個(gè)月的種子作為外植體培養(yǎng)基為1/2改良MS+肌醇100mg/L+煙酸 0.5mg/L+VB60. 5mg/L+VB10.lmg/L+ 甘氨酸 2.0mg/L+ 蛋白胨 1.0g/L+NaH2P04170.0mg/L+鹿糖20g/L+Celrite(凝固劑)2.2g/L+TDZ3.0mg/L,可誘導(dǎo)出大量的晶胚,再轉(zhuǎn)入不含激素的上述培養(yǎng)基中，培養(yǎng)4~6周，可形成帶有5~6片葉，3~4條根的小苗。王云惠等(2007年)采用白花授粉后120天的蝴蝶蘭種子作為外植體，誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS十ΒΑ0.5mg/L+NAA1.0mg/L+ACl.0g/L+ 蔗糖 20L+ 瓊脂 5.8g/L，可獲得大量的 PLB。
[0006](2)培養(yǎng)基大多添加了植物激素，不僅延長(zhǎng)繁殖周期，也增加了體細(xì)胞變異的可能性。例如，楊美純，等(2002年)認(rèn)為MS+BA3mg/L+NAA0.05mg/L有利于蝴蝶蘭種子的萌發(fā)及幼苗生長(zhǎng)。代容春等(2003年)以蝴蝶蘭無(wú)菌幼苗(株高約1.5 (3m)為外植體，其分株的最適增殖培養(yǎng)基為:l/2MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.2mg/L+CM20g/L。徐曉薇，等(2004年)報(bào)道蝴蝶種子萌發(fā)后，MS+6-BA0.5~1.0mg/L為原球莖最佳分化培養(yǎng)基。章玉平，等(2004年)認(rèn)為在種子萌發(fā)后，附加KTlmg/L+2，4-D0.lmg/L有利于類原球莖狀體PLB的誘導(dǎo)，附加lmg/LNAA+1~3mg/LKT或6-BA3~5mg/L有利于PLB的增殖。朱紅華等(2006年)在蝴蝶蘭試管苗繼代及生根培養(yǎng)的研究結(jié)果，認(rèn)為蝴蝶蘭的繼代培養(yǎng)以MS+6-BA5ms/L+NAA0.5mg/L+活性炭1.5L為最適合，而在生根培養(yǎng)中，以MS+NAA1.0ms/L+活性炭1.5g/L為最好。余慧琳，等(2009年)則認(rèn)為蝴蝶蘭適宜的種子萌發(fā)培養(yǎng)基為1/2MS+NAA1.0mg/L+6-BA0.2mg/L+香蕉20g/L+活性碳2g/L+蔗糖20g/L。范成五等(2006年)則將蝴蝶蘭種子播種于MS+BAlmg/L+NAA0.lmg/L+AC2g/L 的培養(yǎng)基中萌發(fā)。
[0007]此外，以上研究報(bào)道由于釆用的蝴蝶蘭品種基因型和培養(yǎng)基配方不同，所得結(jié)果還存在不同甚至相反的結(jié)論，已有的研究報(bào)道都僅在個(gè)別品種上獲得成功，限制了研究結(jié)果的實(shí)際應(yīng)用。[0008]迄今，但尚未見(jiàn)到有關(guān)蝴蝶蘭無(wú)菌播種時(shí)使用完全無(wú)激素培養(yǎng)基的報(bào)道。因此，研發(fā)出完全無(wú)激素培養(yǎng)基并能在絕大多數(shù)蝴蝶蘭園藝種的自交或品種間雜交種的無(wú)菌播種中使用具有很大的應(yīng)用推廣價(jià)值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明的目的是在克服上述現(xiàn)有技術(shù)中不足的同時(shí)，提供一種簡(jiǎn)便、適用而應(yīng)用方便的培育優(yōu)質(zhì)蝴蝶蘭實(shí)生苗的無(wú)激素系列培養(yǎng)基(包括A、B、C三種培養(yǎng)基)及其應(yīng)用技術(shù)，使用該系列培養(yǎng)基及方法，適用現(xiàn)有蝴蝶蘭屬內(nèi)絕大多數(shù)園藝種的自交或品種間雜交種的無(wú)菌播種，不僅能獲得大量的蝴蝶蘭不同品種的優(yōu)質(zhì)實(shí)生苗，而且因不添加任何激素而減少了實(shí)生苗的變異率，加快了優(yōu)質(zhì)蝴蝶蘭實(shí)生苗的培育速度。[0010]本發(fā)明具體方案內(nèi)容:
[0011]本發(fā)明所提供的技術(shù)方案是:
[0012]一種用于培育優(yōu)質(zhì)蝴蝶蘭實(shí)生苗的無(wú)激素系列培養(yǎng)基(包括A、B、C三種培養(yǎng)基)及其應(yīng)，包含下列組分:培養(yǎng)基A:花多多11號(hào)，1.5~2.8g/L ;胰蛋白胨，1.5~2.5g/L ;活性炭，1.0~3.0g/L ;谷胱甘肽20~30mg/L ;蔗糖，20~30g/L ;瓊脂粉，8.0~9.0g/L ;最終pH調(diào)節(jié)為5.2~5.5。培養(yǎng)基B:花多多11號(hào)，1.5~2.8g/L ;胰蛋白胨，1.5~2.5g/L ;活性炭，1.0~3.0g/L ;蘋果酸30~50mg/L ;腺嘌呤5.0~I Omg/L ;香蕉泥30~60g/L ；蔗糖，10~15g/L;瓊脂粉，8.0~9.0g/L;最終pH調(diào)節(jié)為5.0~5.5。培養(yǎng)基C:花多多11號(hào)，1.5~2.8g/L ;胰蛋白胨，2.5~3.5g/L ;活性炭，1.0~3.0g/L ;蘋果酸30~50mg/L ；香蕉泥50~80g/L ;鹿糖，10~15g/L ;瓊脂粉，8.0~9.0g/L ;最終pH調(diào)節(jié)為5.0~5.5。
[0013]用于培育優(yōu)質(zhì)蝴蝶蘭實(shí)生苗的無(wú)激素系列培養(yǎng)基(包括A、B、C三種培養(yǎng)基)及其應(yīng)用，包括如下步驟:(I)選擇優(yōu)良蝴蝶蘭單株進(jìn)行人工授粉自交或雜交獲得果莢；(2) 5個(gè)月采收果莢，利用權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基A對(duì)蝴蝶蘭雜交種子進(jìn)行無(wú)菌播種:在無(wú)菌超凈工作臺(tái)上，將發(fā)育成熟的蝴蝶蘭果莢用75%酒精擦洗干凈，用0.1%的H g C 12消毒8~10分鐘，無(wú)菌水沖洗5~6次，用無(wú)菌吸水紙吸干多余水份；用消毒手術(shù)刀片將果莢內(nèi)細(xì)如粉塵的種子取出，置于權(quán)利要求1或2所述的培養(yǎng)基中，播種10~15天，種胚吸水膨大，逐漸撐破種皮，形成淡黃色的原球莖，30天后原球莖轉(zhuǎn)成綠色，并有散射狀吸收毛分布；
(3)將培育的原球莖轉(zhuǎn)入權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基B中培養(yǎng)，轉(zhuǎn)入10~15天，可見(jiàn)綠色的原球莖產(chǎn)生出擬葉并經(jīng)20~25天進(jìn)一步分化出具有2~3片葉小苗；(4)將已分化出的小苗定植到權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基C上進(jìn)行壯苗生根培養(yǎng)，經(jīng)40~45天長(zhǎng)成2~3片葉、3~4厘米高、根系4~6條的完整小苗煉苗后可出瓶移栽。
[0014]本發(fā)明的有益效果:
[0015]本發(fā)明提供一種簡(jiǎn)便、適用而應(yīng)用方便的培育優(yōu)質(zhì)蝴蝶蘭實(shí)生苗的無(wú)激素系列培養(yǎng)基(包括A、B、C三種培養(yǎng)基)及其應(yīng)用技術(shù)，使用該系列培養(yǎng)基及方法簡(jiǎn)便、適用。而應(yīng)用方便的培育適用現(xiàn)有蝴蝶蘭屬內(nèi)絕大多數(shù)園藝種的自交或品種間雜交種的無(wú)菌播種，不僅能獲得大量的蝴蝶蘭不同品種的優(yōu)質(zhì)實(shí)生苗，而且因不添加任何激素而減少了實(shí)生苗的變異率，加快了優(yōu)質(zhì)蝴蝶蘭實(shí)生苗的培育速度。
【具體實(shí)施方式】[0016]首先配制蝴蝶蘭實(shí)生苗的無(wú)激素系列培養(yǎng)基(包括A、B、C三種培養(yǎng)基)，該系列培養(yǎng)基的制作采用組培常規(guī)的培養(yǎng)基配制方法。
[0017]用于無(wú)菌播種的培養(yǎng)基A，包含以下組分:花多多11號(hào)，2.2g/L;胰蛋白胨2.5g/L ;活性炭2.0g/L ;谷胱甘肽30mg/L ;蔗糖20g/L ;瓊脂粉9.0g/L ;最終pH調(diào)節(jié)為5.2~
5.5o
[0018]用于原球莖分化小苗培養(yǎng)的培養(yǎng)基B,它包含以下組分:花多多11號(hào),2.2g/L ;胰蛋白胨2.0g/L ;活性炭1.5g/L ;蘋果酸30mg/L ;腺嘌呤I Omg/L ;香蕉泥50g/L ;鹿糖15g/L ；瓊脂粉8.0g/L ;最終pH調(diào)節(jié)為5.0~5.5。
[0019]用于蝴蝶蘭實(shí)生小苗的壯苗生根培養(yǎng)的培養(yǎng)基C，它包含以下組分:花多多11號(hào)，
2.4g/L ;胰蛋白胨2.5g/L ;活性炭1.0g/L ;蘋果酸30mg/L ;香蕉泥80g/L ;蔗糖15g/L ;瓊脂粉9.0g/L ;最終pH調(diào)節(jié)為5.0~5.5。
[0020]培養(yǎng)基中的各種原料平時(shí)，保存在4°C冰箱中。配制各將培養(yǎng)基時(shí)培養(yǎng)基中的各成分按需要量稱取并溶于定量的蒸餾水或純凈水中，用IN NaOH調(diào)節(jié)pH，煮沸后分裝到培養(yǎng)瓶中，在121°C滅菌120分鐘，冷卻后備用。
[0021]選擇優(yōu)良蝴蝶蘭單株進(jìn)行人工授粉自交或雜交以獲得果莢；在采用無(wú)菌播種進(jìn)行蝴蝶蘭種苗生產(chǎn)時(shí)，要對(duì)父母本進(jìn)行嚴(yán)格的選擇，以確保后代性狀的盡可能一致。
[0022]采用授粉后100~135天，果莢外部變得光滑飽滿，顏色由綠轉(zhuǎn)黃，蒴果尚未開(kāi)裂時(shí)采收果莢；利用權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基A對(duì)蝴蝶蘭雜交種子進(jìn)行無(wú)菌播種:在無(wú)菌超凈工作臺(tái)上，將發(fā)育成熟的蝴蝶蘭果莢用75%酒精擦洗干凈，用0.1 %的H g C 12消毒8~10分鐘，無(wú)菌水沖洗5~6次，用無(wú)菌吸水紙吸干多余水份；用消毒手術(shù)刀片將果莢內(nèi)細(xì)如粉塵的種子取出，置于權(quán)利要求1或2所述的培養(yǎng)基中，將接種的培養(yǎng)瓶放在800~ΙΟΟΟΙχ，光周期為照光14小時(shí)和黑暗10小時(shí)的條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為25土 1°C。播種10~15天，種胚吸水膨大，逐漸撐破種皮，形成淡黃色的原球莖，30天后原球莖轉(zhuǎn)成綠色，并有散射狀吸收毛分布；
[0023]將培育的原球莖轉(zhuǎn)入權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基B中培養(yǎng)，轉(zhuǎn)入10~15天，將培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到光照條件。從這以后均為:光照強(qiáng)度1000~15001X，光周期為照光16小時(shí)和黑暗8小時(shí)，溫度25± I°C的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)?？梢?jiàn)綠色的原球莖產(chǎn)生出擬葉并經(jīng)20~25天進(jìn)一步分化出具有2~3片葉小苗；
[0024]將已分化出的小苗定植到權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基C上進(jìn)行壯苗生根培養(yǎng)，經(jīng)40~45天長(zhǎng)成2~3片葉、3~4厘米高、根系4~6條的完整小苗煉苗后可出瓶移栽。
[0025]使用上述蝴蝶蘭實(shí)生苗的無(wú)激素系列培養(yǎng)基(包括A、B、C三種培養(yǎng)基)，可以對(duì)現(xiàn)有市場(chǎng)所見(jiàn)的所有蝴蝶蘭品種的自交或雜交種均成功地誘導(dǎo)出大量的優(yōu)質(zhì)實(shí)生苗植株；近年我們利用上述蝴蝶蘭實(shí)生苗的無(wú)激素系列培養(yǎng)基，已獲得220多蝴蝶蘭品種的自交或雜交種的實(shí)生苗植株，用于蝴蝶蘭新品種選種培育和種苗繁育生產(chǎn)。
【權(quán)利要求】
1.一種用于培育優(yōu)質(zhì)蝴蝶蘭實(shí)生苗的無(wú)激素培養(yǎng)基，其特征在于:用于培育優(yōu)質(zhì)蝴蝶蘭實(shí)生苗的無(wú)激素系列培養(yǎng)基，包括A、B、C三種培養(yǎng)基:各包含下列組分: 培養(yǎng)基A:花多多11號(hào)，1.5~2.8g/L ;胰蛋白胨，1.5~2.5g/L ;活性炭，1.0~3.0g/L ;谷胱甘肽20~30mg/L ;蔗糖，20~30g/L ;瓊脂粉，8.0~9.0g/L ;最終pH調(diào)節(jié)為5.2~5.5 ； 培養(yǎng)基B:花多多11號(hào)，1.5~2.8g/L ;胰蛋白胨，1.5~2.5g/L ;活性炭，1.0~3.0g/L ;蘋果酸30~50mg/L ;腺嘌呤5.0~10mg/L ;香蕉泥30~60g/L ;鹿糖，10~15g/L ;瓊脂粉，8.0~9.0g/L ;最終pH調(diào)節(jié)為5.0~5.5 ; 培養(yǎng)基C:花多多11號(hào)，1.5~2.8g/L ;胰蛋白胨，2.5~3.5g/L ;活性炭，1.0~3.0g/L ;蘋果酸30~50mg/L ;香蕉泥50~80g/L ;鹿糖，10~15g/L ;瓊脂粉，8.0~9.0g/L ;最終pH調(diào)節(jié)為5.0~5.5。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于培育優(yōu)質(zhì)蝴蝶蘭實(shí)生苗的無(wú)激素培養(yǎng)基其在培育優(yōu)質(zhì)蝴蝶蘭實(shí)生苗應(yīng)用:使用培育優(yōu)質(zhì)蝴蝶蘭實(shí)生苗的無(wú)激素系列培養(yǎng)基包括A、B、C三種培養(yǎng)基在培育優(yōu)質(zhì)蝴蝶蘭實(shí)生苗的應(yīng)用: 包括如下步驟: (1)選擇優(yōu)良蝴蝶蘭單株進(jìn)行人工授粉自交或雜交獲得果莢； (2)5個(gè)月采收果莢，利用所述的培養(yǎng)基A對(duì)蝴蝶蘭雜交種子進(jìn)行無(wú)菌播種:在無(wú)菌超凈工作臺(tái)上，將發(fā)育成熟的蝴蝶蘭果莢用75%酒精擦洗干凈，用0.1 %的H g C 12消毒8~10分鐘，無(wú)菌水沖洗5~6次，用無(wú)菌吸水紙吸干多余水份；用消毒手術(shù)刀片將果莢內(nèi)細(xì)如粉塵的種子取出，置于所述的培養(yǎng)基中，播種10~15天，種胚吸水膨大，逐漸撐破種皮，形成淡黃色的原球莖，30天后原球莖轉(zhuǎn)成綠色，并有散射狀吸收毛分布； (3)將培育的原球莖轉(zhuǎn) 入培養(yǎng)基B中培養(yǎng)，轉(zhuǎn)入10~15天，可見(jiàn)綠色的原球莖產(chǎn)生出擬葉并經(jīng)20~25天進(jìn)一步分化出具有2~3片葉小苗； (4)將已分化出的小苗定植到培養(yǎng)基C上進(jìn)行壯苗生根培養(yǎng)，經(jīng)40~45天長(zhǎng)成2~3片葉、3~4厘米高、根系4~6條的完整小苗煉苗后可出瓶移栽。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK103975858SQ201410232463
【公開(kāi)日】2014年8月13日 申請(qǐng)日期:2014年5月29日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月29日
【發(fā)明者】張友強(qiáng), 夏時(shí)云, 李雁鵬, 劉月兵, 吳金鳳, 孫瑞 申請(qǐng)人:天津?yàn)I城天龍農(nóng)業(yè)科技有限公司