一種卵形鯧鲹早期性別判定的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種卵形鯧鲹早期性別判定的方法，取幼齡卵形鯧鲹，剪去左側(cè)體壁，找出性腺，原位觀察性腺特征，取出并解剖性腺，觀察性腺解剖面特征，通過分析性腺特征判定卵形鯧鲹性別。該方法器械簡單，操作快速，結(jié)果準(zhǔn)確，不使用有毒化學(xué)試劑，是一種方便高效的卵形鯧鲹早期性別判定方法，可為進一步尋找卵形鯧鲹性別特異的分子標(biāo)記研究提供可靠的材料。
【專利說明】一種卵形鯧鰺早期性別判定的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于水產(chǎn)生物【技術(shù)領(lǐng)域】中的魚類性別鑒定技術(shù)，更具體地說，本發(fā)明涉及一種卵形鯧鰺早期性別判定的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]卵形鯧鰺(TracAiz7Ote1S orates)，俗稱金鯧，黃臘鯧，屬鱸形目，鰺科。卵形鯧鰺魚肉細嫩，味道鮮美，營養(yǎng)價值高，是名貴的食用魚類，深受市場歡迎。同時卵形鯧鰺生長速率快、抗病力強、產(chǎn)量高、效益好，是養(yǎng)殖戶非常喜愛的養(yǎng)殖品種。但卵形鯧鰺性成熟時間長，一般需4至5年，且卵形鯧鰺其整個生命過程中，雌雄魚均不具備性別特異的外形特征。因此，養(yǎng)殖者在進行親魚培育和催產(chǎn)的時候不易區(qū)分雌雄，增加了親魚培育和催產(chǎn)的生產(chǎn)成本。而且，隨著卵形鯧鰺產(chǎn)業(yè)化發(fā)展，品種選育和規(guī)?；绶N繁育，均需要大量性別明確的親本進行人工繁殖和家系建立。尋找性別特異的分子標(biāo)記，建立基于PCR的分子生物學(xué)性別判定方法是進行卵形鯧鰺早期性別鑒定的有效手段，而進行性別特異分子標(biāo)記的篩選，需要性別確定的個體作為篩選材料。
[0003]在缺乏卵形鯧鰺分子生物學(xué)性別判定方法條件下，通過鑒定其性腺特征可以判定卵形鯧鰺性別。目前研究幼魚性腺特征來判定性別的方法主要有超聲波法和制片法，根據(jù)觀察到的性腺形態(tài)和構(gòu)造，可以判定性腺為精巢或卵巢，進而判定幼魚性別。如中國專利200810208110.1 (申請?zhí)?公開了一種鱘魚超聲波性別鑒定方法，該方法采用超聲波檢測儀鑒定發(fā)育至II期的鱘魚性腺來鑒定性別，超聲波檢查前，鱘魚經(jīng)過2個月的低溫養(yǎng)殖時期，鱘魚檢查前停止投喂兩周，超聲波檢查時，保存觀察到較清晰和典型的性腺超聲波檢查圖像，與不同發(fā)育時期精巢 和卵巢的超聲波圖像特征進行比對來鑒別鱘魚的性別。中國專利201310466149.4 (申請?zhí)?公開了一種鑒別雜交黃顙魚幼魚性別的方法，該方法運用活體性腺壓片一醋酸洋紅染色一乙醇結(jié)晶紫染色的方法，鑒定個體體長規(guī)格為3厘米以上雜交黃顙魚性別。超聲波法研究幼魚性腺，幼魚需要經(jīng)過特殊的處理，并且超聲檢測儀價格昂貴，檢測人員技術(shù)要求高，不適合廣大養(yǎng)殖戶的需求。制片法研究幼魚性腺，需要配置多種較為復(fù)雜的化學(xué)試劑，操作步驟多，技術(shù)要求較嚴(yán)格，且需要配備生物顯微鏡，不適宜大量樣品的鑒定。
[0004]目前還沒有關(guān)于卵形鯧鰺性別鑒定方法的文獻報道和發(fā)明專利，給卵形鯧鰺苗種繁育中的催產(chǎn)和選育家系的建立工作造成了很大的困難，不利于卵形鯧鰺養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。因此，發(fā)展一種簡單、快速、準(zhǔn)確的卵形鯧鰺性別鑒定方法，可為尋找卵形鯧鰺性別特異的分子標(biāo)記研究提供可靠的材料，對建立卵形鯧鰺分子生物學(xué)性別鑒定方法尤為重要，更是產(chǎn)業(yè)發(fā)展的迫切需求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)不足，提供一種卵形鯧鰺早期性別判定的方法，取幼齡卵形鯧鰺，從內(nèi)臟組織中取出完整的單側(cè)性腺，通過比較性腺特征判定卵形鯧鰺性別。
[0006]本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的:
一種卵形鯧鰺早期性別判定的方法，包括以下步驟:
(I)取幼齡卵形鯧鰺，剪去體壁，暴露內(nèi)臟。
[0007](2)自泄殖孔往腹腔方向找到左右性腺，原位觀察性腺位置、形狀、顏色及大小特征。
[0008](3)剝除性腺周圍組織，取出完整單側(cè)性腺，解刨性腺，觀察性腺解剖面結(jié)構(gòu)特征。
[0009](4)根據(jù)步驟(2)和(3)觀察到的性腺特征對卵形鯧鰺性別進行判定:性腺位于鰾的背部兩側(cè)，形狀為細長線狀、乳白色，體積較小，解剖面呈實心結(jié)構(gòu)的為精巢，判定卵形鯧鰺為雄性，或性腺位于鰾的背部兩側(cè)，緊貼體壁和腎臟，形狀為中間粗兩端細、淡黃色、體積較大，解剖面呈空心結(jié)構(gòu)的為卵巢，判定卵形鯧鰺為雌性。
[0010]作為本發(fā)明的進一步限定，在步驟(1)中，所述幼齡卵形鯧鰺為一齡卵形鯧鰺。
[0011]作為本發(fā)明的進一步限定，在步驟(1)中，所述體壁為左側(cè)體壁。 [0012]作為本發(fā)明的進一步限定，在步驟(2)中，所述觀察為肉眼觀察。
[0013]作為本發(fā)明的進一步限定，在步驟(3)中，所述解剖性腺為將性腺從中部橫向切斷。
[0014]作為本發(fā)明的進一步限定，在步驟(3)中，所述觀察為肉眼觀察和解剖鏡觀察。
[0015]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點:
(I)一齡卵形鯧鰺即可判定性別，判定時期早，可為下一步建立卵形鯧鰺早期性別分子生物學(xué)鑒定方法提供研究材料，盡早為親魚培育提供技術(shù)支持。性成熟個體解剖后可通過性腺形態(tài)直接判定性別，但成本昂貴。
[0016](2)性腺分離過程簡單、快速，剪刀或者手術(shù)刀即可完成，適合廣大養(yǎng)殖戶操作。
[0017](3)性腺特征觀察方法技術(shù)要求低，肉眼或解剖鏡都可以進行，提高了觀察效率。
[0018](4)不同性別的性腺特征差異明顯，判定方法容易、結(jié)果準(zhǔn)確。
[0019](5)該方法不需要任何化學(xué)試劑、不需要昂貴的器械，成本極低，適合大規(guī)模樣品的快速判定需求，而傳統(tǒng)的通過石蠟切片觀察細胞形態(tài)判定性別，需要繁瑣的實驗步驟，并需用到多聚甲醛、二甲苯等有毒試劑。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0020]圖1為本發(fā)明一種卵形鯧鰺早期性別判定的方法工藝流程圖。
【具體實施方式】
[0021]下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進一步詳細說明。
[0022]實施例1
1、取一齡卵形鯧鰺，剪去左側(cè)體壁，暴露內(nèi)臟組織。
[0023]2、自泄殖孔往腹腔方向找到腸道和左右性腺，原位觀察性腺位于鰾的背部兩側(cè)，性腺呈細長線狀，乳白色，體積較小。
[0024]3、小心剝?nèi)コ韵偻獾钠渌鼉?nèi)臟組織，取出完整的單側(cè)性腺，自中部橫向切斷，肉眼觀察和解剖鏡下觀察，均為實心結(jié)構(gòu)。[0025]4、判定性腺為精巢，卵形鯧鰺為雄性。
[0026]為了驗證此方法的準(zhǔn)確性，進行了以下切片實驗:
取出另一側(cè)性腺于4% PFA溶液中固定24h，經(jīng)70%~100%梯度的乙醇脫水后，進行常規(guī)石蠟切片和HE染色。在光學(xué)顯微鏡下觀察性腺細胞形態(tài)，為精巢組織，有典型的精小囊結(jié)構(gòu)、精原細胞和各期精母細胞。
[0027]本實施例共驗證30條魚，平均體重0.62±0.057kg，平均體長24.56± 1.143cm，其中利用本發(fā)明方法驗證有18條魚為雄性(性腺呈細長線狀，乳白色，體積較小，剖面為實心結(jié)構(gòu))，再經(jīng)切片驗證，雄性魚為18條，形態(tài)判定準(zhǔn)確率100%。
[0028]實施例2
1、取一齡卵形鯧鰺，剪去左側(cè)體壁，暴露內(nèi)臟組織。
[0029]2、自泄殖孔往腹腔方向找到腸道和左右性腺，原位觀察性腺位于鰾的背部兩側(cè)，緊貼體壁和腎臟，性腺形 狀呈中間粗兩端細，淡黃色，體積較大。
[0030]3、小心剝?nèi)コ韵偻獾钠渌鼉?nèi)臟組織，取出完整的單側(cè)性腺，自中部橫向切斷，肉眼觀察和解剖鏡下觀察，均為空心結(jié)構(gòu)，顯微鏡下可見卵腔內(nèi)壁著生的顆粒狀卵母細胞。
[0031]4、判定性腺為卵巢，卵形鯧鰺為雌性。
[0032]為了驗證此方法的準(zhǔn)確性，進行了以下切片實驗:
取出另一側(cè)性腺于4% PFA溶液中固定24h，經(jīng)70%~100%梯度的乙醇脫水后，進行常規(guī)石蠟切片和HE染色。在光學(xué)顯微鏡下觀察性腺橫切面細胞形態(tài)，為卵巢組織，卵巢中間為卵巢腔，卵巢小葉緊密著生于卵巢腔壁。卵巢小葉中大量分布一期卵母細胞。
[0033]本實施例共驗證30條魚，平均體重0.66±0.059kg，平均體長24.66±1.027cm，其中利用本發(fā)明方法驗證有15條魚為雌性(性腺形狀呈中間粗兩端細，淡黃色，體積較大，剖面為空心結(jié)構(gòu))，再經(jīng)切片驗證，雌性魚為15條，形態(tài)判定準(zhǔn)確率100%。
【權(quán)利要求】
1.一種卵形鯧鰺早期性別判定的方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)取幼齡卵形鯧鰺，剪去體壁，暴露內(nèi)臟； (2)自泄殖孔往腹腔方向找到左右性腺，原位觀察性腺位置、形狀、顏色及大小特征； (3)剝除性腺周圍組織，取出完整單側(cè)性腺，解剖性腺，觀察性腺解剖面結(jié)構(gòu)特征； (4)根據(jù)步驟(2)和(3)觀察到的性腺特征對卵形鯧鰺性別進行判定:性腺位于鰾的背部兩側(cè)，形狀為細長線狀、白色，解剖面呈實心結(jié)構(gòu)的為精巢，判定卵形鯧鰺為雄性；或性腺位于鰾的背部兩側(cè)，緊貼體壁和腎臟，形狀為中間粗兩端細、黃色，解剖面呈空心結(jié)構(gòu)的為卵巢，判定卵形鯧鰺為雌性。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種卵形鯧鰺早期性別判定的方法，其特征在于:在步驟(1)中，所述幼齡卵形鯧鰺為一齡卵形鯧鰺。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種卵形鯧鰺早期性別判定的方法，其特征在于:在步驟(1)中，所述體壁為左側(cè)體壁。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種卵形鯧鰺早期性別判定的方法，其特征在于:在步驟(2)中，所述觀察為肉眼觀察。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種卵形鯧鰺早期性別判定的方法，其特征在于:在步驟(3)中，所述解剖為將性腺從中部橫向切斷。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種卵形鯧鰺早期性別判定的方法，其特征在于:在步驟(3)中，所述觀察為肉眼觀察及解剖鏡觀察。
【文檔編號】A01K61/00GK103975886SQ201410241717
【公開日】2014年8月13日 申請日期:2014年6月3日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月3日
【發(fā)明者】彭金霞, 李詠梅, 陳曉漢, 彭敏, 蔣小珍, 韋嬪媛, 蔣偉明, 黎銘 申請人:廣西壯族自治區(qū)水產(chǎn)科學(xué)研究院