一種嗜酸乳桿菌xd13r制備的生物制劑在減少寵物體內抗藥性細菌比例的應用方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了本發(fā)明的目的在于提供嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophilus)XD13R，保藏號為CCTCCM2014216，制備的生物制劑在減少寵物體內抗藥性細菌比例的應用方法。該方法利用嗜酸乳桿菌菌株XD13R制備生物制劑降低寵物體內抗藥性細菌比例，降低寵物體內的免疫抑制，降低中毒指數(shù)，提高健康指數(shù)。
CCTCC NO：M2014216
2014.05.22
【專利說明】一種嗜酸乳桿菌XD13R制備的生物制劑在減少寵物體內抗 藥性細菌比例的應用方法

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及了一種生物制劑的應用方法，尤其涉及一種利用能減少動物體內抗藥 性細菌比例的嗜酸乳桿菌XD13R制備的生物制劑在減少寵物體內抗藥性細菌比例上的應 用方法。

【背景技術】
[0002] 寵物養(yǎng)殖已經(jīng)越來越普及，其中以寵物狗、寵物貓最為普及。以寵物狗為例，從體 型上分類有大型犬、中型犬、小型犬，從品種上分類有波美、等等。
[0003] 寵物來自野生動物，自從被人們領養(yǎng)以后，得到了寵物主的百般關愛，從生活條 件、生活環(huán)境、食物結構、活動方式等等，均與野生動物截然不同，由于和人類完全生活在一 起，大大中城市生活，從空氣質量、飲用水質量、飼料等等均與野生條件由很大的差別，污染 嚴重。
[0004] 因此寵物養(yǎng)殖中90%以上的寵物主均是給寵物飲用自來水，由于目前的自來水質 量日益下降，消毒劑等有毒有害物質含量較高，沒有煮沸直接給寵物飲用，對寵物的健康有 較大的影響。
[0005] 從調查數(shù)據(jù)看，目前的寵物亞健康情況非常嚴重，其健康指數(shù)越來越低，免疫抑制 越來越嚴重，中毒指數(shù)越來越高，特別是體內的抗藥性細菌比例高，比較容易得病，得病后 的治愈能讀越來越大。


【發(fā)明內容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種降解寵物體內抗藥性細菌比例的方法，特別是一種嗜酸 乳桿菌（Lactobacillus acidophilus) XD13R，其保藏號為CCTCC NO :M 2014216,制備的生 物制劑在減少寵物體內抗藥性細菌比例的應用方法，該方法能有效降低寵物體內抗藥性細 菌的比例，降低寵物體內的免疫抑制，降低中毒指數(shù)，提高健康指數(shù)。
[0007] 本發(fā)明的目的通過以下技術措施來實現(xiàn)：一種嗜酸乳桿菌（Lactobacillus acidophilus) XD13R制備的生物制劑在減少寵物體內抗藥性細菌比例的應用方法，所 述生物制劑由嗜酸乳桿菌（Lactobacillus acidophilus) XD13R，保藏號：CCTCC NO :M 2014216,發(fā)酵而得，所述生物制劑添加至水或寵物飼料中，在日常養(yǎng)殖中供寵物飲用或食 用。
[0008] 本發(fā)明所述的生物制劑中，酸乳桿菌（Lactobacillus acidophilus) XD13R的含 量為1\105?1父108。包/1111。
[0009] 所述生物制劑與水或寵物飼料的重量比為1 : 50-5000。
[0010] 具體地，本發(fā)明的應用方法可以包括以下幾種： 第一：制成專用的水劑產(chǎn)品，如寵物水或寵物飲料或寵物飼料伴侶直接供寵物日常飲 用，即將上述通過液體發(fā)酵的生物制劑與純凈水按重量比1 : 50-5000的比例混合均勻后， 裝入飲料包裝瓶中，與瓶裝飲料一樣直接作為商品銷售給寵物飲用； 第二：制成寵物的添加劑添加到寵物飲用水中供寵物日常飲用，即將上述通過液體發(fā) 酵的生物制劑直接裝入包裝瓶中，作為一種寵物飲用水添加劑，每天按添加劑與飲用水的 重量比1 : 50-5000的比例，添加到寵物的飲用水中給寵物飲用； 第三：制成寵物飼料伴侶在喂養(yǎng)寵物時拌入寵物飼料中，供寵物食用，即將上述通過液 體發(fā)酵的生物制劑直接裝入包裝瓶中，作為一種寵物飼料添加劑，每天按添加劑與飼料的 重量比1 : 50-5000的比例，添加到寵物的飼料中給寵物食用。
[0011] 作為本發(fā)明的一個實施例，上述嗜酸乳桿菌XD13R制備生物制劑的制備方法，包 括以下步驟： ⑴培養(yǎng)基的制作：以蔗糖、蛋白胨、酵母膏、KH2PO4、西紅柿汁和水為主要原料配制培 養(yǎng)基，它們的重量百分比為： 蔗糖2. (Γ5. 0%、蛋白胨1. 5?4%、酵母膏0. 5?3%、KH2PO4 0. 2?3%、西紅柿汁：Γ8%，水余 量； (2)取嗜酸乳桿菌XD13R菌液接種至經(jīng)過高溫滅菌的所述步驟（1)制備的培養(yǎng)基中， 調整起始PH至5飛.5,在發(fā)酵罐中進行厭氧發(fā)酵：Γ15天，至終點pH為：Γ4,即得該嗜酸乳 桿菌制備的生物制劑。
[0012] 所述步驟（2)中嗜酸乳桿菌（Lactobacillus acidophilus) XD13R菌液的制備方 法：接種嗜酸乳桿菌（Lactobacillus acidophilus) XD13R的新鮮培養(yǎng)物至裝有MRS培養(yǎng) 基的三角瓶中，在30-40°C的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18?48h，獲得XD13R菌液。
[0013] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比具有以下優(yōu)點： 本發(fā)明利用嗜酸乳桿菌菌株XD13R經(jīng)過液體發(fā)酵的發(fā)酵物作為制備的減少寵物體內 抗藥性細菌比例的生物制劑，將其應用在寵物養(yǎng)殖上，改變了傳統(tǒng)寵物養(yǎng)殖中寵物直接飲 用自來水的養(yǎng)殖方法，從而有效降低寵物體內抗藥性細菌的比例，降低寵物體內的免疫抑 制，降低中毒指數(shù)，提高健康指數(shù)，消除目前寵物普遍存在的亞健康狀態(tài)，減少寵物攜帶的 抗藥性傳統(tǒng)給人的機會。
[0014] 本發(fā)明的嗜酸乳桿菌（Lactobacillus acidophilus) XD13R 已經(jīng)于 2014年 5 月 22 日在中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，地址：武漢市武昌珞珈山武漢大學，并收到保藏登記號 (CCTCC NO :M 2014216)。

【專利附圖】

【附圖說明】 圖1是本發(fā)明的嗜酸乳桿菌株XD13R的DNA測序圖。

【具體實施方式】
[0015] 實施例一： 嗜酸乳桿菌菌株XD13R的馴化和篩選：從廣東省微生物研究所菌種保藏中心購買了 4 株芽孢桿菌（XD05B-XD08B)，3株乳酸菌（XD05R-XD07R)，1株酵母（XD05J)，從廣州百佳超市 購買了 2株酵母（XD06J-XD07J)，再從自然界分離篩選了 8株菌斑形態(tài)、菌體形態(tài)均有別于 上述菌株的乳酸菌（XD08-RXD15R)，合計共收集了 4株芽孢桿菌（XD05B-XD08B)，11株乳酸 菌（XD05R-XD15R)，3株酵母（XD05J-XD07J)，然后將它們分別經(jīng)10代高抗藥性細菌比例的 生豬糞水環(huán)境的誘變培養(yǎng)，最后挑選出能適應上述生豬糞水環(huán)境的，能降低抗藥性細菌比 例的菌株。
[0016] 上述的高抗藥性細菌比例的生豬糞水：是從十多個養(yǎng)殖場取來新鮮豬糞各15公 斤，按豬糞比水的重量比為1 : 5的比例配制后，濾去糞渣，將糞水分別添加0mg/kg、25mg/ kg、50mg/kg、100mg/kg的鏈霉素和鹽酸林可霉素后，在35度培養(yǎng)箱培養(yǎng)36小時，分別進行 細菌總數(shù)的計數(shù)，將各種抗生素分別添加25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg的細菌總數(shù)除以添 加 Omg/kg的對照組的細菌總數(shù)，得出該糞水中的細菌在該抗生素該濃度下的抗藥性細菌 比例，挑選出抗藥性細菌比例最高的糞水來自清遠市清城區(qū)沙田養(yǎng)豬場，作為用于篩選具 有降低抗藥性細菌比例功能的糞水。
[0017] 上述的降低抗藥性細菌比例的檢驗方法：將上述方法制成的糞水分別裝入144個 500ml的三角瓶中，分別接種上述的18種菌，每種菌接種8瓶，在35度的培養(yǎng)箱培養(yǎng)8小 時后，分別添加0mg/kg、25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg的鏈霉素和鹽酸林可霉素，在35度培 養(yǎng)箱培養(yǎng)36小時，分別進行細菌總數(shù)的計數(shù)，將各種抗生素分別添加25mg/kg、50mg/kg、 100mg/kg的細菌總數(shù)除以添加 Omg/kg的對照組的細菌總數(shù)，得出該糞水中的細菌在該抗 生素該濃度下的抗藥性細菌比例，首先篩選出具有降低糞水中抗藥性細菌比例的菌株，再 經(jīng)過上述步驟重復10次，最終篩選出降低抗藥性細菌能力最強的菌株為XD13R，對該菌株 我們送華南農(nóng)業(yè)大學分子遺傳實驗室進行DNA測序(見圖1)，結果證明該菌株是一株嗜酸 乳桿菌的菌株。
[0018] 實施例二： (1)制備嗜酸乳桿菌XD13R菌液：接種嗜酸乳桿菌（Lactobacillus acidophilus) XD13R的新鮮培養(yǎng)物至裝有MRS培養(yǎng)基的1(Γ20個500ml三角瓶中，在30°C的培養(yǎng)箱中培 養(yǎng)48h，得XD13R菌液。
[0019] ⑵培養(yǎng)基的制作：以蔗糖、蛋白胨、酵母膏、KH2PO4、西紅柿汁和水為主要原料配 制培養(yǎng)基，它們的重量百分比為： 蔗糖4%、蛋白胨2. 5%、酵母膏1%、KH2PO4 1%、西紅柿汁4%、水余量。
[0020] (3)取上述嗜酸乳桿菌XD13R菌液接種至經(jīng)過高溫滅菌的上述培養(yǎng)基中，調整起 始pH至5飛.5,在發(fā)酵罐中進行厭氧發(fā)酵15天，至終點pH為：Γ4,即得該嗜酸乳桿菌制備 的生物制劑。
[0021] 實施例三： (1)制備嗜酸乳桿菌XD13R菌液：接種嗜酸乳桿菌（Lactobacillus acidophilus) XD13R的新鮮培養(yǎng)物至裝有MRS培養(yǎng)基的1(Γ20個500ml三角瓶中，在38°C的培養(yǎng)箱中培 養(yǎng)40h，得XD13R菌液。
[0022] (2)培養(yǎng)基的制作：以蔗糖、蛋白胨、酵母膏、KH2PO4、西紅柿汁和水為主要原料配 制培養(yǎng)基，它們的重量百分比為： 蔗糖4%、蛋白胨2. 5%、酵母膏1%、KH2PO4 1%、西紅柿汁4%、水余量。
[0023] (3)取上述嗜酸乳桿菌XD13R菌液接種至經(jīng)過高溫滅菌的上述培養(yǎng)基中，調整起 始pH至5飛.5,在發(fā)酵罐中進行厭氧發(fā)酵4天，至終點pH為：Γ4,即得該嗜酸乳桿菌制備的 生物制劑。
[0024] 實施例四： (1)制備嗜酸乳桿菌XD13R菌液：接種嗜酸乳桿菌（Lactobacillus acidophilus) XD13R的新鮮培養(yǎng)物至裝有MRS培養(yǎng)基的1(Γ20個500ml三角瓶中，在40°C的培養(yǎng)箱中培 養(yǎng)18h，得嗜酸乳桿菌XD13R菌液。
[0025] (2)培養(yǎng)基的制作：以蔗糖、蛋白胨、酵母膏、KH2PO4、西紅柿汁和水為主要原料配 制培養(yǎng)基，它們的重量百分比為： 蔗糖5%、蛋白胨2%、酵母膏1. 5%、KH2PO4 1. 2%、西紅柿汁6%、水余量。
[0026] (3)取上述嗜酸乳桿菌XD13R菌液接種至經(jīng)過高溫滅菌的上述培養(yǎng)基中，調整起 始pH至5飛.5,在發(fā)酵罐中進行厭氧發(fā)酵5天，至終點pH為：Γ4,即得該嗜酸乳桿菌制備的 生物制劑。
[0027] 實施例五： (1)制備嗜酸乳桿菌XD13R菌液：接種嗜酸乳桿菌（Lactobacillus acidophilus) XD13R的新鮮培養(yǎng)物至裝有MRS培養(yǎng)基的1(Γ20個500ml三角瓶中，在35°C的培養(yǎng)箱中培 養(yǎng)35h，得XD13R菌液。
[0028] (2)培養(yǎng)基的制作：以蔗糖、蛋白胨、酵母膏、KH2PO4、西紅柿汁和水為主要原料配 制培養(yǎng)基，它們的重量百分比為： 蔗糖5. 0%、蛋白胨4%、酵母膏3%、KH2PO4 3%、西紅柿汁8%、水余量。
[0029] (3)取上述嗜酸乳桿菌XD13R菌液接種至經(jīng)過高溫滅菌的上述培養(yǎng)基中，調整起 始pH至5飛.5,在發(fā)酵罐中進行厭氧發(fā)酵10天，至終點pH為：Γ4,即得該嗜酸乳桿菌制備 的生物制劑。
[0030] 試驗例一： 將所篩選出來的嗜酸乳桿菌XD13R菌株制成的生物制劑在廣東省清遠市清城區(qū)沙田 養(yǎng)豬場、廣東省鶴山市鶴城鎮(zhèn)鄧三輝養(yǎng)豬場，鶴山市源生態(tài)農(nóng)民專業(yè)合作社馬山養(yǎng)殖場進 行養(yǎng)殖了 3個批次共90頭肉豬的養(yǎng)殖試驗，試驗的方法是選擇30公斤左右的普通瘦肉型 中豬，將上述實施例三所制成的生物制劑按重量比1 : 50的比例稀釋后每天供生豬飲用， 經(jīng)60-90天的喂養(yǎng)試驗結果表明，這種生物制劑適口性好，生豬喜歡飲用，安全性好，沒有 出現(xiàn)任何不良反應，吃了這種飼料的生豬極少發(fā)病，欄舍內的氨氣濃度一直保持在〇-5ppm 之間，明顯優(yōu)于國家行業(yè)標準(欄舍內氨氣濃度< 30ppm)，生豬糞便中的抗藥性細菌比例如 表一所不： 表一：

【權利要求】
1. 一種嗜酸乳桿菌（Lactobacillus acidophilus) XD13R制備的生物制劑在 減少寵物體內抗藥性細菌比例的應用方法，其特征在于，所述生物制劑由嗜酸乳桿菌 (Lactobacillus acidophilus) XD13R，保藏號：CCTCC Μ 2014216,發(fā)酵而得，所述生物制 劑添加至水或寵物飼料中，在日常養(yǎng)殖中供寵物飲用或食用。
2. 根據(jù)權利要求1所述的應用方法，其特征在于，所述生物制劑中，嗜酸乳桿菌 (Lactobacillus acidophilus) XD13R 的含量為 1Χ105?lX108cfu/ml。
3. 根據(jù)權利要求1所述的應用方法，其特征在于，所述生物制劑與純凈水按重量比1 : 5(Γ5000混合后，供寵物飲用。
4. 根據(jù)權利要求1所述的應用方法，其特征在于，所述生物制劑與飲用水按重量比1 : 5(Γ5000混合后，供寵物飲用。
5. 根據(jù)權利要求1所述的應用方法，其特征在于，所述生物制劑與飼料按重量比1 : 5(Γ5000混合后，供寵物食用。
【文檔編號】A23K1/16GK104286408SQ201410262605
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2014年6月13日 優(yōu)先權日:2014年6月13日
【發(fā)明者】楊雄 申請人:楊雄