藥用盾葉薯蕷組培一步成苗批量化生產(chǎn)的方法
【專利摘要】本發(fā)明是藥用盾葉薯蕷組培一步成苗批量化生產(chǎn)的方法，包括(1)基礎(chǔ)苗獲得；(2)一步成苗批量化生產(chǎn)：將帶芽愈傷組織塊分成小塊，接在MS大量+B5微量+MS有機(jī)+MS鐵鹽+6-BA0.2～2.0mg/L+KT0.2～0.8mg/L+多效唑0.5～5.0mg/L+矮壯素2.0～4.0mg/L+IAA0.2～0.8mg/L+NAA0.2～0.8mg/L的瓊脂固體培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖和生根；(3)試管苗移栽；(4)大田塊莖繁育。本發(fā)明通過(guò)組織培養(yǎng)技術(shù)短期內(nèi)擴(kuò)大了優(yōu)選單株群體，大大縮短了盾葉薯蕷優(yōu)良種系的選育時(shí)間，能以最快的速度將研究成果轉(zhuǎn)化為現(xiàn)實(shí)生產(chǎn)力，充分顯示了現(xiàn)代生物技術(shù)在薯蕷產(chǎn)業(yè)化生長(zhǎng)中的高效益應(yīng)用。
【專利說(shuō)明】藥用盾葉薯蕷組培一步成苗批量化生產(chǎn)的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于藥用盾葉薯蕷的組培【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種藥用盾葉薯蕷組培苗批一步成苗量化生產(chǎn)的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]薯蕷屬植物(D1scorea)具有重要的藥用價(jià)值，其根莖皂甙元是合成避孕藥和甾體激素類藥物的重要起始原料，在醫(yī)藥工業(yè)中占有重要地位。在《中國(guó)珍稀瀕危保護(hù)植物名錄》中被列為國(guó)家級(jí)二級(jí)漸危物種而受到保護(hù)。因盾葉薯蕷根狀莖的薯蕷皂甙元含量最高而成為薯蕷屬植物產(chǎn)業(yè)化開(kāi)發(fā)的首選原料。盾葉薯蕷主要靠人工種植，長(zhǎng)期以來(lái)由于只種不選，導(dǎo)致品種種性退化，藥材質(zhì)量和產(chǎn)量下降，化學(xué)成本不穩(wěn)定。采用植物細(xì)胞工程技術(shù)和方法進(jìn)行盾葉薯蕷大規(guī)模組培快繁、規(guī)范化種植對(duì)于促進(jìn)制藥業(yè)的發(fā)展有著重要作用。
[0003]本發(fā)明為解決盾葉薯蕷品種退化問(wèn)題、提高藥材產(chǎn)量和質(zhì)量，采用組織培養(yǎng)技術(shù)，加快其優(yōu)良品種的生產(chǎn)應(yīng)用推廣工作。本發(fā)明主要采用組織培養(yǎng)技術(shù)擴(kuò)大優(yōu)選單株群體，并對(duì)盾葉薯蕷組織培養(yǎng)生產(chǎn)工藝、培養(yǎng)方法與條件進(jìn)行整體優(yōu)化和改進(jìn)，主要針對(duì)如何縮短培養(yǎng)時(shí)間、提高培養(yǎng)效率、降低培養(yǎng)成本，以期創(chuàng)造出盾葉薯蕷一步成苗的最佳方法，建立一套高效低耗量的培養(yǎng)體系，以最快的速度將研究成果轉(zhuǎn)化為現(xiàn)實(shí)生產(chǎn)力。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]本發(fā)明的目的是提供一種高效低耗量的盾葉薯蕷組織培養(yǎng)方法，該方法配方效果佳，培養(yǎng)周期短，易操作，培養(yǎng)程序簡(jiǎn)單，培養(yǎng)效率高，穩(wěn)定性好、生產(chǎn)成本低，是一種在最短的時(shí)間內(nèi)獲得大量試管苗的快速繁殖方法。而且本發(fā)明方法不污染環(huán)境，非常適合工業(yè)化生產(chǎn)，已達(dá)到產(chǎn)業(yè)化水平。
[0005]本發(fā)明的目的是通過(guò)以下方式實(shí)現(xiàn)的:
[0006]藥用盾葉薯蕷組培一步成苗批量化生產(chǎn)的方法，包括以下步驟:
[0007](1)基礎(chǔ)苗獲得:選擇優(yōu)良藥用盾葉薯蕷植株的莖段和頂芽為外植體，外植體消毒后在MS大量+B5微量+MS有機(jī)+2 XMS鐵鹽+6-BA2.0~4.0mg/L+KT0.2~0.8mg/L+多效唑 2.0 ~8.0mg/L+ 矮壯素 2.0 ~5.0mg/L+IAA0.2 ~0.8mg/L+NAA0.2 ~0.8mg/L 瓊脂固體培養(yǎng)基上，同步誘導(dǎo)出帶芽的愈傷組織；
[0008](2) 一步成苗批量化生產(chǎn):將步驟(1)獲得的帶芽愈傷組織塊分成小塊，接在MS大量+B5微量+MS有機(jī)+MS鐵鹽+6-BA0.2~2.0mg/L+KT0.2~0.8mg/L+多效唑0.5~
5.0mg/L+矮壯素 2.0 ~4.0mg/L+IAA0.2 ~0.8mg/L+NAA0.2 ~0.8mg/L 的瓊脂固體培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖和生根；
[0009](3)試管苗移栽:試管苗出瓶移栽前，將根葉俱全的叢生幼苗分成單株，出瓶的幼苗先用500~800倍的多菌靈或代森錳鋅浸泡10~15分鐘，隨后將幼苗移至有頂玻璃的移栽容器中，在溫度為20~30°C，濕度80~90%的條件下生長(zhǎng)，25~30d長(zhǎng)出新葉時(shí)，既已成活；
[0010](4)大田塊莖繁育:將移栽成活的幼苗，在自然條件煉苗3~5d后，移栽至大田進(jìn)行塊莖繁育。
[0011]步驟(1)中將外植體剪成含有I節(jié)I芽的規(guī)格，首先用洗衣粉清洗干凈，在無(wú)菌操作臺(tái)上用無(wú)菌水洗5~7次，用70%酒精浸潤(rùn)30秒-1分鐘，再放入0.1 %的升汞溶液中滅菌12~18分鐘，無(wú)菌水沖洗5~6次，備用。
[0012]步驟(1)和(2)的培養(yǎng)溫度為24°C ±2，1000~20001x弱光環(huán)境中，每天10~12小時(shí)光照培養(yǎng)。
[0013]步驟(1)誘導(dǎo)出的芽繼代培養(yǎng)時(shí)，去老莖留新芽，新芽莖段或頂芽再分成I節(jié)I芽轉(zhuǎn)入相同的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，每隔25~30d繼代一次。
[0014]步驟⑵是將愈傷組織塊按0.5~IcmX0.5~Icm的規(guī)格分成小塊。
[0015]步驟⑵培養(yǎng)時(shí)每隔25~30d繼代一次。
[0016]步驟(1)優(yōu)選使用的培養(yǎng)基:MS大量+B5微量+MS有機(jī)+2XMS#&+6-BA2.0mg/L+KT0.4mg/L+ 多效唑 4.0mg/L+ 矮壯素 2.0mg/L+IAA0.2mg/L+NAA0.4mg/L?；蛘邇?yōu)選使用培養(yǎng)基:MS 大量 +B5 微量 +MS 有機(jī) +2XMS 鐵鹽 +6-BA3.0mg/L+KT0.4mg/L+ 多效唑 4.0mg/L+ 矮壯素 2.0mg/L+IAA0.4mg/L+NAA0.4mg/L ；
[0017]步驟⑵優(yōu)選使用的培養(yǎng)基:MS大量+B5微量+MS有機(jī)+MS鐵鹽+6-BA0.5mg/L+KT0.2mg/L+ 多效唑 2.0mg/L+ 矮壯素 2.0mg/L+IAA0.2mg/L+NAA0.2mg/L?；蛘邇?yōu)選使用培養(yǎng)基:MS大量+B5微量 +MS有機(jī)+MS鐵鹽+6-BA0.8mg/L+KT0.5mg/L+多效唑2.0mg/L+矮壯素 3.0mg/L+IAA0.2mg/L+NAA0.2mg/L。
[0018]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于:
[0019]1、針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的不足之處，本發(fā)明通過(guò)組織培養(yǎng)技術(shù)短期內(nèi)擴(kuò)大了優(yōu)選單株群體，大大縮短了盾葉薯蕷優(yōu)良種系的選育時(shí)間，能以最快的速度將研究成果轉(zhuǎn)化為現(xiàn)實(shí)生產(chǎn)力，充分顯示了現(xiàn)代生物技術(shù)在薯蕷產(chǎn)業(yè)化生長(zhǎng)中的高效益應(yīng)用。
[0020]2、根據(jù)前人的研究，盾葉薯蕷的組織培養(yǎng)主要采用外植體一愈傷組織(誘導(dǎo)培養(yǎng))一分化幼苗(分化培養(yǎng))一生根(生根培養(yǎng))等多個(gè)培養(yǎng)程序完成，至少需要90d。本發(fā)明將初代與繼代、增殖與生根，多個(gè)培養(yǎng)程序簡(jiǎn)化為一步完成。
[0021]3、大規(guī)模工廠化生產(chǎn)時(shí)，本發(fā)明根據(jù)生產(chǎn)需要設(shè)計(jì)培養(yǎng)方法，首先同步誘導(dǎo)愈傷和芽，抑制根的形成，提高增殖倍數(shù)，加快基礎(chǔ)苗的繁殖；批量化生產(chǎn)階段同步誘導(dǎo)愈傷組織、芽、不定根，增殖與生根簡(jiǎn)化為一步完成，即“一步成苗”方法，形成完整植株只需30天左右，節(jié)約了 25~30天的生根時(shí)間。
[0022]4、常規(guī)技術(shù)生產(chǎn)100萬(wàn)株盾葉薯蕷組培苗，根據(jù)每瓶繼代苗形成15株用于生根的組培苗，需生產(chǎn)14萬(wàn)瓶組培苗，其中包括7萬(wàn)瓶繼代苗，7萬(wàn)瓶生根苗。本發(fā)明技術(shù)生產(chǎn)100萬(wàn)株盾葉薯蕷組培苗，僅需生產(chǎn)5.5萬(wàn)瓶繼代生根苗。本發(fā)明不僅減少了無(wú)菌操作步驟，而且節(jié)約了培養(yǎng)室空間，簡(jiǎn)化了健康種苗生產(chǎn)程序，降低了生產(chǎn)成本，提高了生產(chǎn)效率。
[0023]5、前人研究證明，盾葉薯蕷的人工馴化引種和離體培養(yǎng)快速繁殖的研究取得了較大的進(jìn)展，但無(wú)菌短枝難生根、試管苗的移栽成活率很低，這兩大核心問(wèn)題成為盾葉薯蕷組培快繁技術(shù)擴(kuò)大化生產(chǎn)的瓶頸。本發(fā)明不僅創(chuàng)造出一步成苗方法，而且移栽成活率高(達(dá)95%以上)；栽培當(dāng)年(8個(gè)月左右)，獲30g/株左右的優(yōu)質(zhì)種莖。
【專利附圖】
【附圖說(shuō)明】
[0024]圖1為盾葉薯蕷莖段和頂芽誘導(dǎo)的無(wú)菌苗生長(zhǎng)情況；
[0025]圖2為盾葉薯蕷初代培養(yǎng)同步誘導(dǎo)愈傷和芽生長(zhǎng)情況；
[0026]圖3為盾葉薯蕷繼代培養(yǎng)同步誘導(dǎo)愈傷、芽和根生長(zhǎng)情況；
[0027]圖4為移栽成活的盾葉薯蕷試管苗生長(zhǎng)情況；
[0028]圖5為栽培當(dāng)年(8個(gè)月左右)盾葉薯蕷試管苗的單株種莖生長(zhǎng)情況。
【具體實(shí)施方式】
[0029]以下結(jié)合實(shí)施例旨在進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，而非限制本發(fā)明。
[0030]實(shí)施例1、組織培養(yǎng)快速繁殖盾葉薯蕷
[0031]一、培養(yǎng)基配制和滅菌
[0032]初代培養(yǎng)基用于基礎(chǔ)苗繁殖:MS大量+B5微量+MS有機(jī)+2 X MS鐵鹽+6-BA2.0mg/L+KT0.4mg/L+ 多效唑(PP333) 4.0mg/L+ 矮壯素(CCC) 2.0mg/L+IAA0.2mg/L+NAA0.4mg/L ；
[0033]繼代培養(yǎng)基用于一步成苗批量化生產(chǎn):MS大量+B5微量+MS有機(jī)+MS鐵鹽+6-BA0.5mg/L+ KT0.2mg/L+ 多效唑(PP333) 2.0mg/L+ 矮壯素(CCC) 2.0mg/L+IAA0.2mg/L+NAA0.2mg/L ；
[0034]以上培養(yǎng)基121 °C下，滅菌20分鐘。
[0035]二、基礎(chǔ)苗繁殖
[0036]取盾葉薯菌(salvia hispanica L)頂芽和莖段,首先用洗衣粉清洗干凈,在無(wú)菌操作臺(tái)上用無(wú)菌水洗5~7次，用70%酒精浸潤(rùn)I分鐘，再放入0.1 %的升汞溶液中滅菌12~18分鐘，無(wú)菌水沖洗5~6次，將頂芽和腋芽轉(zhuǎn)入裝有初代培養(yǎng)基上三角瓶(容量50毫升)中，每個(gè)三角瓶外植體個(gè)數(shù)為3~5個(gè)，在下述培養(yǎng)條件下進(jìn)行培養(yǎng):24°C左右，每天10小時(shí)光照，光照強(qiáng)度為1000~20001X左右；頂芽接種300個(gè)，腋芽接種320個(gè)。培養(yǎng)4周左右，獲320個(gè)形成2-5個(gè)節(jié)和Icm左右大小愈傷塊的無(wú)菌外植體，同步誘導(dǎo)愈傷和芽生長(zhǎng)情況如圖1所示。繼代培養(yǎng)時(shí)，將愈傷組織分成小塊，新芽莖段或頂芽再分成I節(jié)I芽轉(zhuǎn)入初代培養(yǎng)基中，每隔30d繼代一次，每次繼代中，每塊愈傷組織增大4-6倍，同步誘導(dǎo)愈傷和芽生長(zhǎng)情況如圖2所示。這一步需要抑制根的形成，以防影響基礎(chǔ)苗的繁殖。根據(jù)生產(chǎn)規(guī)模，繁殖充足的基礎(chǔ)苗，再進(jìn)行批量化生產(chǎn)。
[0037]三、一步成苗批量化生產(chǎn)
[0038]取上述320個(gè)株系中的320個(gè)株系進(jìn)行繼代繁殖，具體方法如下:將步驟二獲得的愈傷組織和芽按0.5cmX0.5cm的規(guī)格分成小塊，接種在繼代培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件同步驟二 ；培養(yǎng)4周后，每塊愈傷組織的叢芽均長(zhǎng)成2-6cm高的叢生芽，同時(shí)從莖段基部長(zhǎng)出3-7條根的完整植株。
[0039]該愈傷組織再按照上述方法每4周繼代一次，共繼代5次。每次繼代中，每塊愈傷組織增大4-6倍，愈傷組織表面均長(zhǎng)出2-6cm高的叢生芽，同時(shí)從莖段基部長(zhǎng)出3-7條根的完整植株。同步增殖生根的試管苗生長(zhǎng)情況如圖3所示；
[0040]四、試管苗移栽:
[0041]試管苗出瓶移栽前，將根葉俱全的叢生幼苗分成單株，出瓶的幼苗先用500~800倍的多菌靈或代森錳鋅浸泡15分鐘，隨后將幼苗移至有頂玻璃的移栽容器中，在溫度為20~30°C，濕度80~90%的條件下生長(zhǎng)，25~30d長(zhǎng)出新葉時(shí)，既已成活；
[0042]五、大田塊莖繁育:
[0043]將移栽成活的幼苗，在自然條件煉苗3~5d后，移栽至大田進(jìn)行塊莖繁育。
[0044]本發(fā)明所提供的盾葉薯蕷組織培養(yǎng)繁殖方法，頂芽或莖段為外植體，取材容易，數(shù)量大，遺傳穩(wěn)定性高，生長(zhǎng)良好等優(yōu)勢(shì)。在初代培養(yǎng)過(guò)程中，不僅頂芽或腋芽生長(zhǎng)速度快，而且能同步誘導(dǎo)愈傷組織和芽，繁殖系數(shù)大。批量化生產(chǎn)階段，采用同步誘導(dǎo)愈傷、芽、不定根的方法，簡(jiǎn)化了健康種苗生產(chǎn)程序，常規(guī)技術(shù)生產(chǎn)100萬(wàn)株盾葉薯蕷組培苗，根據(jù)每瓶繼代苗形成15株用于生根的組培苗，需生產(chǎn)14萬(wàn)瓶組培苗，其中包括7萬(wàn)瓶繼代苗，7萬(wàn)瓶生根苗。本發(fā)明技術(shù)生產(chǎn)100萬(wàn)株盾葉薯蕷組培苗，僅需生產(chǎn)5.5萬(wàn)瓶繼代生根苗。本發(fā)明不僅減少了無(wú)菌操作步驟，而且節(jié)約了培養(yǎng)室空間，降低了生產(chǎn)成本，提高了生產(chǎn)效率。而且盾葉薯蕷的無(wú)菌短枝難生根、試管苗的移栽成活率很低，這兩大核心問(wèn)題成為盾葉薯蕷組培快繁技術(shù)擴(kuò)大化生產(chǎn)的瓶頸。本發(fā)明不僅創(chuàng)造出一步成苗方法，而且移栽成活率高(達(dá)95%以上)；栽培當(dāng)年(8個(gè)月左右)，獲30g/株左右的優(yōu)質(zhì)種莖。
[0045]實(shí)施例2、組織培養(yǎng)快速繁殖盾葉薯蕷
[0046]一、培養(yǎng)基配制和滅菌
[0047]初代培養(yǎng)基:MS大量 +B5 微量 +MS 有機(jī) +2XMS 鐵鹽 +6-BA3.0mg/L+KT0.4mg/L+多效唑(PP333) 4.0mg/L+矮壯素(CCC) 2.0mg/L+IAA0.4mg/L+NAA0.4mg/L ;繼代培養(yǎng)基:MS 大量 +B5 微量 +MS 有機(jī) +MS 鐵鹽 +6-BA0.8mg/L+KT0.5mg/L+ 多效唑(PP333) 2.0mg/L+ 矮壯素(CCC)3.0mg/L+IAA0.2 mg/L+NAA0.2mg/L ；
[0048]以上培養(yǎng)基121 °C下，滅菌20分鐘。
[0049]取盾葉薯菌(salvia hispanica L)頂芽或莖段,基本操作方法同實(shí)施例1 一致；效果與實(shí)施例1相差不大。
[0050]實(shí)施例3
[0051 ] 初代培養(yǎng)基:MS大量+B5微量+MS有機(jī)+2 X MS鐵鹽+6-BA2.0~4.0mg/L+KT0.2~0.8mg/L+ 多效唑 2.0 ~8.0mg/L+ 矮壯素 2.0 ~5.0mg/L+IAA0.2 ~0.8mg/L+NAA0.2 ~
0.8mg/L瓊脂固體培養(yǎng)基；
[0052]繼代培養(yǎng)基:MS大量+B5微量+MS有機(jī)+MS鐵鹽+6-BA0.2~2.0mg/L+KT0.2~
0.8mg/L+ 多效唑 0.5 ~5.0mg/L+ 矮壯素 2.0 ~4.0mg/L+IAA0.2 ~0.8mg/L+NAA0.2 ~
0.8mg/L的瓊脂固體培養(yǎng)基。
[0053]米用上述培養(yǎng)基配方，而且在所述配方范圍內(nèi)，其它基本操作方法同實(shí)施例1 一致。
【權(quán)利要求】
1.藥用盾葉薯蕷組培一步成苗批量化生產(chǎn)的方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)基礎(chǔ)苗獲得:選擇優(yōu)良藥用盾葉薯蕷植株的莖段和頂芽為外植體，外植體消毒后在MS大量+B5微量+MS有機(jī)+2 XMS鐵鹽+6-BA2.0~4.0mg/L+KT0.2~0.8mg/L+多效唑2.0 ~8.0mg/L+ 矮壯素 2.0 ~5.0mg/L+IAA0.2 ~0.8mg/L+NAA0.2 ~0.8mg/L 瓊脂固體培養(yǎng)基上，同步誘導(dǎo)出帶芽的愈傷組織； (2)—步成苗批量化生產(chǎn):將步驟(1)獲得的帶芽愈傷組織塊分成小塊，接在MS大量+B5 微量 +MS 有機(jī) +MS 鐵鹽 +6-BA0.2 ~2.0mg/L+KT0.2 ~0.8mg/L+ 多效唑 0.5 ~5.0mg/L+矮壯素2.0~4.0mg/L+IAA0.2~0.8mg/L+NAA0.2~0.8mg/L的瓊脂固體培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖和生根； (3)試管苗移栽:試管苗出瓶移栽前，將根葉俱全的叢生幼苗分成單株，出瓶的幼苗先用500~800倍的多菌靈或代森錳鋅浸泡10~15分鐘，隨后將幼苗移至有頂玻璃的移栽容器中，在溫度為20~30°C，濕度80~90%的條件下生長(zhǎng)，25~30d長(zhǎng)出新葉時(shí)，既已成活； (4)大田塊莖繁育:將移栽成活的幼苗，在自然條件煉苗3~5d后，移栽至大田進(jìn)行塊莖繁育。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥用盾葉薯蕷組培一步成苗批量化生產(chǎn)的方法，其特征在于，步驟(1)中將 外植體剪成含有I節(jié)I芽的規(guī)格，首先用洗衣粉清洗干凈，在無(wú)菌操作臺(tái)上用無(wú)菌水洗5~7次，用70 %酒精浸潤(rùn)30秒-1分鐘，再放入0.1 %的升汞溶液中滅菌12~18分鐘，無(wú)菌水沖洗5~6次，備用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥用盾葉薯蕷組培一步成苗批量化生產(chǎn)的方法，其特征在于，步驟⑴和⑵的培養(yǎng)溫度為24°C ±2，1000~20001x弱光環(huán)境中，每天10~12小時(shí)光照培養(yǎng)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥用盾葉薯蕷組培一步成苗批量化生產(chǎn)的方法，其特征在于，步驟(1)誘導(dǎo)出的芽繼代培養(yǎng)時(shí)，去老莖留新芽，新芽莖段或頂芽再分成I節(jié)I芽轉(zhuǎn)入相同的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，每隔25~30d繼代一次。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥用盾葉薯蕷組培一步成苗批量化生產(chǎn)的方法，其特征在于，步驟(2)是將愈傷組織塊按0.5~IcmX0.5~Icm的規(guī)格分成小塊。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥用盾葉薯蕷組培一步成苗批量化生產(chǎn)的方法，其特征在于，步驟(2)培養(yǎng)時(shí)每隔25~30d繼代一次。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥用盾葉薯蕷組培一步成苗批量化生產(chǎn)的方法，其特征在于，步驟(1)使用的培養(yǎng)基=MS大量+B5微量+MS有機(jī)+2 XMS鐵鹽+6-BA2.0mg/L+KT0.4mg/L+ 多效唑 4.0mg/L+ 矮壯素 2.0mg/L+IAA0.2mg/L+NAA0.4mg/L。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥用盾葉薯蕷組培一步成苗批量化生產(chǎn)的方法，其特征在于，步驟⑴使用的培養(yǎng)基=MS大量+B5微量+MS有機(jī)+2 XMS鐵鹽+6-BA3.0mg/L+KT0.4mg/L+ 多效唑 4.0mg/L+ 矮壯素 2.0mg/L+IAA0.4mg/L+NAA0.4mg/L ；
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥用盾葉薯蕷組培一步成苗批量化生產(chǎn)的方法，其特征在于，步驟⑵使用的培養(yǎng)基:MS大量+B5微量+MS有機(jī)+MS鐵鹽+6-BA0.5mg/L+KT0.2mg/L+多效唑 2.0mg/L+ 矮壯素 2.0mg/L+IAA0.2mg/L+NAA0.2mg/L。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥用盾葉薯蕷組培一步成苗批量化生產(chǎn)的方法，其特征在于，步驟(2)使用的培養(yǎng)基:MS大量+B5微量+MS有機(jī)+MS鐵鹽+6-BA0.8mg/L+KT0.5mg/L+多效唑 2.0mg/L+ 矮壯 素 3.0mg/L+IAA0.2mg/L+NAA0.2mg/L。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK104067938SQ201410288573
【公開(kāi)日】2014年10月1日 申請(qǐng)日期:2014年6月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月24日
【發(fā)明者】黃麗芳, 夏新界, 劉永源, 彭光花, 冉軍, 楊平輝, 李偉麗 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所, 重慶華方武陵山制藥有限公司