蝴蝶蘭無菌花梗再生擴(kuò)繁的方法
【專利摘要】本發(fā)明為一種蝴蝶蘭無菌花梗再生擴(kuò)繁的方法，涉及種苗培養(yǎng)【技術(shù)領(lǐng)域】，主要涉蝴蝶蘭植株快速繁殖技術(shù)，具體涉及一種蝴蝶蘭品種的植株再生方法。本發(fā)明是從健壯的蝴蝶蘭母株上切取一定長(zhǎng)度的花梗腋芽莖段為外植體材料，無菌花梗經(jīng)過初代培養(yǎng)，腋芽張開且葉片翠綠有光澤，切下腋芽后對(duì)花梗在繼代培養(yǎng)基上培養(yǎng)，之后從花梗腋芽切口處不斷長(zhǎng)出芽點(diǎn)逐漸形成腋芽，待腋芽張開繼續(xù)切下，再次將花梗接種在繼代培養(yǎng)基上培養(yǎng)，這樣培養(yǎng)可以在一株花梗上獲得大量的叢生芽，得到的叢生芽可以一部分以芽繁芽的方法繼續(xù)繼代培養(yǎng)。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是后代可保持母系穩(wěn)定的遺傳性狀，便于花期控制和產(chǎn)業(yè)化統(tǒng)一管理，成活率可達(dá)90%。
【專利說明】
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及種苗培養(yǎng)【技術(shù)領(lǐng)域】，主要涉蝴蝶蘭植株快速繁殖技術(shù)，具體涉及一種 蝴蝶蘭品種的植株再生方法。 蝴蝶蘭無菌花梗再生擴(kuò)繁的方法

【背景技術(shù)】
[0002] 蝴蝶蘭又稱蝶蘭，屬熱帶氣生蘭，蘭科蝴蝶蘭屬多年生草本植物。原產(chǎn)地在阿薩 姆、緬甸、菲律賓、臺(tái)灣等亞洲熱帶地區(qū)，其繁殖慢，生長(zhǎng)周期長(zhǎng)，株型美觀、花大色艷、花形 別致、花期持久，深受各國(guó)人民的喜愛，是具有商業(yè)價(jià)值的四大觀賞熱帶蘭之一。全世界原 生種約有70多種，經(jīng)雜交選育的品種有530多個(gè)，但原生種的觀賞性較差，商業(yè)上用于大規(guī) 模生產(chǎn)的品種多為雜交種。蝴蝶蘭的學(xué)名按希臘文的原意為"好像蝴蝶般的蘭花"。它能 吸收空氣中的養(yǎng)分而生存，歸入氣生蘭范疇，每棵只長(zhǎng)出數(shù)張活象湯匙般肥厚的闊葉，交互 疊列在基部之上。白色粗大的氣根則露在葉片周圍，有的攀附在花盆的外壁，極富天然野 趣。到了新春時(shí)節(jié)，一枝長(zhǎng)達(dá)盈尺的花梗就從葉腋抽出，然后一朵接一朵地開放。每花均有 5瓣，中間嵌鑲唇瓣。其性喜高溫、高濕、半陰環(huán)境，生長(zhǎng)適溫為20 °C，冬季10°C以下就會(huì)停 止生長(zhǎng)，低于5°C容易死亡。在嶺南各地如要進(jìn)行批量生產(chǎn)，必須要有防寒設(shè)施，實(shí)行保護(hù) 性栽培。如果家庭小量種植，在遇冷時(shí)立即移入室內(nèi)便可以安全過冬。對(duì)它的繁殖大多采 用細(xì)胞組織培養(yǎng)，經(jīng)試管育成幼苗移栽，大約經(jīng)過兩年左右便可開花。有些母株當(dāng)花期結(jié)束 后，有時(shí)花梗上的腋芽也會(huì)生長(zhǎng)發(fā)育成為子株，當(dāng)它長(zhǎng)出根時(shí)可從花梗上切下進(jìn)行分株繁 殖。其盆栽的植料不一宜用泥土，而要采用水苔、浮石、秒鑼屑、木炭碎等，或者直接把幼苗 固定在渺楞板上，讓它自行附著生長(zhǎng)。這種栽培方法乃系仿照它在原始時(shí)的生態(tài)環(huán)境。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明目的是根據(jù)以上所述現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，本發(fā)明提供一種蝴蝶蘭無菌花 梗再生擴(kuò)繁方法，通過該方法極大提高繁殖速度，可實(shí)現(xiàn)蝴蝶蘭的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
[0004] 本發(fā)明目的實(shí)現(xiàn)由以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)： 本發(fā)明的生產(chǎn)步驟如下： (1) 將帶有側(cè)芽的無病蟲害的蝴蝶蘭花梗剪成2?3cm的節(jié)段，將芽點(diǎn)外層的苞葉用 鑷子等工具剔除，加入4?6ml吐溫20充分?jǐn)嚢韬笤谧詠硭聸_洗30min以上，轉(zhuǎn)移至超 凈工作臺(tái)內(nèi)用70%?75%的酒精消毒30s左右，再用無菌水處理2?3次，加入2%NaC10溶 液處理5?6min后用無菌水沖洗4?5次，用消毒濾紙吸干表面水分，切去花梗上下兩端 與消毒液接觸的表面，接種至初代培養(yǎng)基中培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)基為：1/2MS或/和MS +2. 0? 5. 5mg/L6_BA+0. 2 ?0· 5mg/LNAA+25 ?30g/L 鹿糖 +5 ?6. 5g/L 瓊脂 +350 ?450mg/L 朽1 樣 酸或/和維生素 C或/和pvp或/和活性炭+30?40g/L香蕉泥或/和馬鈴薯汁或/和椰 子汁，pH值為5. 4?5. 9,培養(yǎng)條件為：溫度25±2°C，培養(yǎng)初期的7?10d進(jìn)行暗培養(yǎng)，以 后光照時(shí)間為11?13h/d，光照強(qiáng)度2000?30001ux ; (2) 將被切腋芽花梗以初代培養(yǎng)基作為繼代培養(yǎng)基繼代培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)基為：1/2MS 或 / 和 MS +2. 0 ?5. 5mg/L6-BA+0. 2 ?0· 5mg/LNAA+25 ?30g/L 蔗糖 +5 ?6. 5g/L 瓊 脂+350?450mg/L檸檬酸+30?40g/L香蕉泥，pH值為5· 4?5· 9 ;培養(yǎng)條件為：溫度 25±2°C，光照時(shí)間11?13h/d，光照強(qiáng)度2000?30001ux ; (3) 當(dāng)叢生芽被誘導(dǎo)長(zhǎng)至2cm左右高時(shí)，將芽切割分開成單枝，轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基中培 養(yǎng)，生根培養(yǎng)基為：l/2MS+0. 5?1. 5mg/L NAA +25?30g/L蔗糖+6 g/L瓊脂+1?3g/L 活性炭或/和檸檬酸或/和維生素C或/和pvp +40g/L香蕉泥或/和馬鈴薯汁或/和椰 子汁；培養(yǎng)條件為：溫度25±2°C，光照時(shí)間11?13h/d，光照強(qiáng)度2000?30001UX ; (4) 試管苗煉苗及移栽：當(dāng)誘導(dǎo)出根系的培養(yǎng)苗長(zhǎng)至3?4cm高，有2?3條根，3?4 片葉片，葉長(zhǎng)度2?3cm時(shí)，就可進(jìn)行煉苗，將培育苗取出培養(yǎng)箱，帶瓶培養(yǎng)苗在苗木培養(yǎng)室 自然光下初煉苗放置4?6d，后在培養(yǎng)室自然光下打開培養(yǎng)瓶蓋煉苗2?4d，期間用噴壺 噴灑蒸餾水至葉片，保證葉片不失水以增強(qiáng)試管苗對(duì)室外環(huán)境的適應(yīng)能力；然后從培養(yǎng)瓶 中取出小苗，洗凈根部培養(yǎng)基，對(duì)根用0. 1%高錳酸鉀浸泡3?5min后取出用濾紙吸干或自 然干燥，用滅菌的水苔包裹根部種植于穴盤中，保持空氣濕度在80%以上； 所述的步驟（1)中的初代培養(yǎng)基為：1/2MS +5. 0mg/L6-BA+0. 5mg/LNAA+20g/L蔗糖+6 /L瓊脂+400mg/L檸檬酸+40g/L香蕉泥，pH值為5. 8 ;所述的步驟（3)中的生根培養(yǎng)基進(jìn)一 步優(yōu)化為：l/2MS+1.0mg/L NAA +30g/L蔗糖+6 g/L瓊脂+2g/L活性炭+40g/L香蕉泥， pH值為5. 8 ;所述的步驟（1)的培養(yǎng)條件進(jìn)一步優(yōu)化為：溫度25±2°C，光照時(shí)間12h/d，光 照強(qiáng)度2000?30001ux，pH值為5. 8 ;;所述的步驟（3)中的生根培養(yǎng)條件進(jìn)一步優(yōu)化為： 溫度25±2°C，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度2000?30001UX，所述的香蕉泥是把新鮮香蕉用榨 汁機(jī)打碎。
[0005] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是由于提出的外植體選取的是花梗，后代可保持母系穩(wěn)定的遺傳性 狀，特別是在不同階段采用特別優(yōu)選的培養(yǎng)基，成活率(誘導(dǎo)率）可達(dá)90%，本發(fā)明便于花期 控制和產(chǎn)業(yè)化統(tǒng)一管理，為降低企業(yè)生產(chǎn)成本（降低）和提供品質(zhì)優(yōu)良產(chǎn)品，能站穩(wěn)市場(chǎng)一 定銷售量并帶來巨大的經(jīng)濟(jì)效益。

【具體實(shí)施方式】
[0006] 本實(shí)施例技術(shù)方案如下 實(shí)施例1 : (1) 將帶有側(cè)芽的無病蟲害的蝴蝶蘭花梗剪成2?3cm的節(jié)段，將芽點(diǎn)外層的苞葉用鑷 子等工具剔除，加入4?6ml吐溫20充分?jǐn)嚢韬笤谧詠硭聸_洗30min以上，轉(zhuǎn)移至超凈 工作臺(tái)內(nèi)用70%?75%的酒精消毒30s，再用無菌水處理2?3次，加入2%NaC10溶液處理 5?6min后用無菌水沖洗4?5次，用消毒濾紙吸干表面水分，切去花梗上下兩端與消毒液 接觸的表面，接種至初代培養(yǎng)基中培養(yǎng)，所述的初代培養(yǎng)基為：所述的步驟（1)中的初代培 養(yǎng)基為：1/2MS +5.0mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+20g/L 蔗糖+6 /L 瓊脂+400mg/L 檸檬酸+40g/L 香蕉泥，pH值為5. 8,培養(yǎng)條件為：溫度25±2°C，培養(yǎng)初期的7?10d進(jìn)行暗培養(yǎng)，以后光 照時(shí)間為11?13h/d，光照強(qiáng)度2000?30001ux ; (2) 將被切腋芽花梗以初代培養(yǎng)基作為繼代培養(yǎng)基繼代培養(yǎng)，所述的繼代培養(yǎng)基為： 1/2MS +2. 0 ?5. 5mg/L6-BA+0. 2 ?0· 5mg/LNAA+25 ?30g/L 蔗糖 +5 ?6. 5g/L 瓊脂 +350 ? 450mg/L維生素 C+30?40g/L香蕉泥，pH值為5. 4?5. 9 ;培養(yǎng)條件為：溫度25 ± 2 °C，光
【權(quán)利要求】
1. 一種蝴蝶蘭無菌花梗再生擴(kuò)繁的方法，其特征在于，包括如下步驟： (1) 將帶有側(cè)芽的無病蟲害的蝴蝶蘭花梗剪成2?3cm的節(jié)段，將芽點(diǎn)外層的苞葉用 鑷子等工具剔除，加入4?6ml吐溫20充分?jǐn)嚢韬笤谧詠硭聸_洗30min以上，轉(zhuǎn)移至超 凈工作臺(tái)內(nèi)用70%?75%的酒精消毒30s左右，再用無菌水處理2?3次，加入2%NaC10溶 液處理5?6min后用無菌水沖洗4?5次，用消毒濾紙吸干表面水分，切去花梗上下兩端 與消毒液接觸的表面，接種至初代培養(yǎng)基中培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)基為：1/2MS或/和MS +2. 0? 5. 5mg/L6_BA+0. 2 ?0· 5mg/LNAA+25 ?30g/L 鹿糖 +5 ?6. 5g/L 瓊脂 +350 ?450mg/L 朽1 樣 酸或/和維生素 C或/和pvp或/和活性炭+30?40g/L香蕉泥或/和馬鈴薯汁或/和椰 子汁，pH值為5. 4?5. 9,培養(yǎng)條件為：溫度25±2°C，培養(yǎng)初期的7?10d進(jìn)行暗培養(yǎng)，以 后光照時(shí)間為11?13h/d，光照強(qiáng)度2000?30001ux ; (2) 將被切腋芽花梗以初代培養(yǎng)基作為繼代培養(yǎng)基繼代培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)基為：1/2MS 或 / 和 MS +2. 0 ?5. 5mg/L6-BA+0. 2 ?0· 5mg/LNAA+25 ?30g/L 蔗糖 +5 ?6. 5g/L 瓊 脂+350?450mg/L檸檬酸+30?40g/L香蕉泥，pH值為5. 4?5. 9 ;培養(yǎng)條件為：溫度 25±2°C，光照時(shí)間11?13h/d，光照強(qiáng)度2000?30001ux ; (3) 當(dāng)叢生芽被誘導(dǎo)長(zhǎng)至2cm左右高時(shí)，將芽切割分開成單枝，轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基中 培養(yǎng)，生根培養(yǎng)基為：1/2MS或/和MS+0. 5?1. 5mg/L NAA +25?30g/L蔗糖+6 g/L瓊 月旨+1?3g/L活性炭或/和檸檬酸或/和維生素 C或/和pvp +40g/L香蕉泥或/和馬 鈴薯汁或/和椰子汁；培養(yǎng)條件為：溫度25±2°C，光照時(shí)間11?13h/d，光照強(qiáng)度2000? 30001ux ； (4) 試管苗煉苗及移栽：當(dāng)誘導(dǎo)出根系的培養(yǎng)苗長(zhǎng)至3?4cm高，有2?3條根，3?4 片葉片，葉長(zhǎng)度2?3cm時(shí)，就可進(jìn)行煉苗，將培育苗取出培養(yǎng)箱，帶瓶培養(yǎng)苗在苗木培養(yǎng)室 自然光下初煉苗放置4?6d，后在培養(yǎng)室自然光下打開培養(yǎng)瓶蓋煉苗2?4d，期間用噴壺 噴灑蒸餾水至葉片，保證葉片不失水以增強(qiáng)試管苗對(duì)室外環(huán)境的適應(yīng)能力；然后從培養(yǎng)瓶 中取出小苗，洗凈根部培養(yǎng)基，對(duì)根用0. 1%高錳酸鉀浸泡3?5min后取出用濾紙吸干或自 然干燥，用滅菌的水苔包裹根部種植于穴盤中，保持空氣濕度在80%以上。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的蝴蝶蘭無菌花梗再生擴(kuò)繁的方法，其特征在于，所述的步驟 (1)中的初代培養(yǎng)基為：1/2MS +5. 0mg/L6-BA+0. 5mg/LNAA+20g/L 蔗糖 +6 /L 瓊脂 +400mg/ L朽1檬酸+40g/L香蕉泥，pH值為5. 8。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的蝴蝶蘭無菌花梗再生擴(kuò)繁的方法，其特征在于，所述的步驟 (3)中的生根培養(yǎng)基進(jìn)一步優(yōu)化為：l/2MS+1.0mg/L NAA +30g/L蔗糖+6 g/L瓊脂+2g/L 活性炭+40g/L香蕉泥，pH值為5. 8。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的蝴蝶蘭無菌花梗再生擴(kuò)繁的方法，其特征在于，所述的步驟 (1)的培養(yǎng)條件進(jìn)一步優(yōu)化為：溫度25±2°C，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度2000?30001UX。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的蝴蝶蘭無菌花梗再生擴(kuò)繁的方法，其特征在于，所述的步驟 (3)中的生根培養(yǎng)條件進(jìn)一步優(yōu)化為：溫度25±2°C，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度2000? 30001ux。
6. 根據(jù)權(quán)利要求2、3、4所述的蝴蝶蘭無菌花梗再生擴(kuò)繁的方法，其特征在于，所述的 香蕉泥是把新鮮香蕉用榨汁機(jī)打碎。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK104082148SQ201410341416
【公開日】2014年10月8日 申請(qǐng)日期:2014年7月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月18日
【發(fā)明者】何炎紅, 白玉娥, 葉冬梅 申請(qǐng)人:內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)