一種無柄紫靈芝子實體的人工栽培方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種無柄紫靈芝子實體的人工栽培方法。本發(fā)明實現(xiàn)了的無柄紫靈芝子實體人工栽培，其平均生物效率達(dá)到40％，即每100g生產(chǎn)用培養(yǎng)料可得40g新鮮的無柄紫靈芝子實體，可作原料或作研究材料使用。能夠緩解目前市場上對野生靈芝過渡采摘帶來的生態(tài)破壞，滿足人們對靈芝的需求。
【專利說明】一種無柄紫靈芝子實體的人工栽培方法

【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明屬于微生物領(lǐng)域，具體涉及一種無柄紫靈芝子實體的人工栽培方法。

【背景技術(shù)】：
[0002] 無柄紫靈芝[Ganoderma mastoporum(L6v)Pat.]分布于中國的廣東、廣西、海南、 云南、貴州。野生無柄紫靈芝的主要特征是：擔(dān)子果一年生，無柄或有柄基，木栓質(zhì)。菌蓋扇 形、近圓形或貝殼狀，直徑4-5X6-7. 5cm，厚3-10mm，表面紫暗褐色到紫黑色，具有稠密同 心環(huán)紋，有縱皺，光滑，有似漆樣光澤；邊緣完整，銳；菌肉呈均勻的褐色，厚3-5. 5mm，間有 黑色殼質(zhì)層；菌管長3-7_，暗褐色；孔面初期淡白色、淡褐色至深褐色；管口近圓形，每毫 米5-6個。無柄或有柄基。擔(dān)孢子卵圓形或長卵圓形，雙層壁，外壁無色透明，平滑，內(nèi)壁具 不清楚的小刺，無色到稍帶褐色，8-10X4-6 μ m。民間用于作為靈芝的替代品使用，但至今 還沒有栽培成功。


【發(fā)明內(nèi)容】
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[0003] 本發(fā)明的目的是提供一種無柄紫靈芝子實體的人工栽培方法，利用該方法能夠?qū)?現(xiàn)無柄紫靈芝子實體的人工栽培，其生物效率平均達(dá)到了 40 %，能夠緩解目前市場上對野 生靈芝過渡采摘帶來的生態(tài)破壞，滿足人們對無柄紫靈芝的需求。
[0004] 本發(fā)明的無柄紫靈芝子實體的人工栽培方法，其特征在于，包括以下步驟：
[0005] a、將無柄紫靈芝Ganoderma mastoporum(L6v)Pat.子實體組織分離或孢子分 離，將分離后的子實體組織或孢子接種到斜面PDA培養(yǎng)基上，于22?35°C、相對濕度 50 % -75 %下培養(yǎng)至菌絲長滿斜面，再選擇長勢旺盛、粗壯均一的菌塊接種至斜面綜合PDA 培養(yǎng)基上，22?35°C、相對濕度50% -75%下培養(yǎng)直至菌絲長滿斜面，得到長勢旺盛、粗壯 均一的無柄紫靈芝母種；所述的斜面PDA培養(yǎng)基的配方為普通的PDA培養(yǎng)基；所述的斜面 綜合PDA培養(yǎng)基配方為，每升含有馬鈴薯80g，葡萄糖10g，瓊脂10g，磷酸二氫鉀3g，硫酸鎂 2g和VB10-20mg，余量為水，pH6?8,配制方法如下：按其組份和含量分別稱重，先將馬鈴薯 切成小塊放入鍋中，加水煮沸20?30分鐘至馬鈴薯軟而不爛時，用紗布過濾，取濾汁，加入 瓊脂熔化，再加入葡萄糖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂和VB1攪拌均勻，定容至1000ml，pH6?8 ;
[0006] b、取步驟a的無柄紫靈芝母種接種至原種木屑培養(yǎng)基中，于22?35°C、相對濕度 50% -75%下培養(yǎng)直至菌絲長滿原種木屑培養(yǎng)基瓶，得到無柄紫靈芝原種；所述的原種木 屑培養(yǎng)基為：干料按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100 %計，包括玉米芯32-50 %、木屑22-40 %、麩皮20 %、葡 萄糖1-5%和石膏粉1-3%，將上述干料按其組份和含量混合均勻后形成干料，再在干料中 加水，混合均勻使其水分含量為60%，pH6. 5-7,由此得到原種木屑培養(yǎng)基；
[0007] c、將步驟b得到的無柄紫靈芝原種接種至生產(chǎn)種木屑培養(yǎng)基中，于22?35°C、 相對濕度50% -75%下培養(yǎng)直至菌絲長滿生產(chǎn)種培養(yǎng)基，則得到無柄紫靈芝生產(chǎn)種；所述 的生產(chǎn)種木屑培養(yǎng)基的配方為：栽培基料，按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計，包括雜木屑78%、麩皮 20%、黃豆粉1 %和石膏粉1 %，或者麥粒99%和石膏1 % ;再在栽培基料中加入水，使其含 水量為65%，即得到生產(chǎn)種木屑培養(yǎng)基；
[0008] d、將步驟c得到的無柄紫靈芝生產(chǎn)種接種于栽培袋木屑培養(yǎng)基內(nèi)，于溫度22? 35 °C，相對濕度50 %?85 %的培養(yǎng)房內(nèi)，暗光培養(yǎng)至菌絲充滿培養(yǎng)袋，得到長滿菌絲的 栽培料，所述的栽培袋木屑培養(yǎng)基配方為：栽培基料，按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計，包括雜木屑 60%、玉米芯18%、麩皮20%、碳酸鈣1%和石膏粉1%，將栽培基料和水按質(zhì)量比1:1. 3混 合均勻后形成栽培袋木屑培養(yǎng)基；
[0009] e、長滿菌絲的栽培料移入栽培房，去掉培養(yǎng)袋蓋，置于10?15°C下培養(yǎng)直至出 現(xiàn)白色的原基，原基培養(yǎng)溫度20?35 °C，相對濕度75 %?90%，散射光光照強(qiáng)度100? ΙΟΟΟΙχ，每天通風(fēng)1?2次，每次0. 5?1小時的條件下培育至長出菌柄，然后保持相對濕 度85%?98%、每天通風(fēng)2?3次，每次0. 5-1小時的條件下培養(yǎng)至菌蓋逐漸分化，然后室 內(nèi)光照強(qiáng)度增強(qiáng)到1000?20001x，溫度20?35°C，全天通風(fēng)，使菌蓋和菌柄顏色加深，菌 蓋邊緣淺色生長線消失，開始釋放孢子，再加大室內(nèi)光照強(qiáng)度到2000?50001χ，繼續(xù)培養(yǎng) 5?10天，菌蓋顏色進(jìn)一步加深，此時則可采收得到無柄紫靈芝子實體。
[0010] 對步驟e生長的子實體用鋒利刀片或剪刀從菌柄基部處割下或剪下，注意不要掰 傷菌皮，以利再出第二茬菇。采下的靈芝于陽光下曬干脫水，則得到成熟、干燥的無柄紫靈 芝子實體，可包裝或于室溫保藏或用于研究等用途。
[0011] 優(yōu)選，所述的步驟a的在斜面PDA培養(yǎng)基和斜面綜合PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)，其培養(yǎng)溫 度都為25?28°C，相對濕度為65 %?75%。
[0012] 優(yōu)選，所述的步驟b中的培養(yǎng)溫度為25?28°C，相對濕度為65% -75%。
[0013] 優(yōu)選，所述的步驟c中的培養(yǎng)溫度為25?29°C，相對濕度為65% -75% ;
[0014] 優(yōu)選，所述的步驟d中的培養(yǎng)溫度為24_28°C，相對濕度為70% -80% ;
[0015] 本發(fā)明實現(xiàn)了的無柄紫靈芝子實體人工栽培，其平均生物效率達(dá)到40%，即每 l〇〇g生產(chǎn)用培養(yǎng)料可得40g新鮮的無柄紫靈芝子實體，可作原料或作研究材料使用。能夠 緩解目前市場上對野生靈芝過渡采摘帶來的生態(tài)破壞，滿足人們對靈芝的需求。

【具體實施方式】：
[0016] 以下實施例是對本發(fā)明的進(jìn)一步說明，而不是對本發(fā)明的限制。
[0017] 實施例1 :
[0018] (1):將無柄紫靈芝Ganoderma mastoporum(L6v)Pat的野外新鮮子實體或栽培獲 得的子實體組織分離或孢子分離，然后取2mmX 2mm大小的無菌組織塊接種到斜面PDA培養(yǎng) 基上，于25?28°C、相對濕度65 % -75 %時培養(yǎng)25-35d，至菌絲長滿斜面，再選擇長勢旺 盛、粗壯均一的菌塊（黃豆大小或2mmX2mm體積的接種量）接種至斜面綜合PDA培養(yǎng)基中， 25?28°C、相對濕度65% -75%時培養(yǎng)10-30d，直至菌絲長滿斜面，得到長勢旺盛、粗壯均 一的能用于生產(chǎn)的無柄紫靈芝母種，可直接用于生產(chǎn)或在4°C下保藏備用；所述的斜面PDA 培養(yǎng)基的配方為，每升培養(yǎng)基是通過以下方法配制的：先將200g去皮的馬鈴薯切成小塊， 加入蒸餾水l〇〇〇ml，煮沸20?30分鐘至馬鈴薯軟而不爛時，紗布過濾，取濾汁，加入15g瓊 脂熔化，再加入20g葡萄糖攪拌均勻，加入蒸餾水定容至1000ml，pH6?8,滅菌備用；所述 的斜面綜合PDA培養(yǎng)基配方為，每升培養(yǎng)基是通過以下方法配制的：先將80g去皮的馬鈴薯 切成小塊放入鍋中，加入1000ml水，煮沸20?30分鐘至馬鈴薯軟而不爛時，用紗布過濾， 取濾汁，加入log瓊脂熔化，再加入log葡萄糖、3g磷酸二氫鉀、2g硫酸鎂和20mg VB1攪拌 均勻，定容至1000ml，pH6?8,滅菌備用；
[0019] (2):將步驟⑴得到的無柄紫靈芝母種取2mmX2mm大小的菌種塊5±夬，接種至 原種木屑培養(yǎng)基中，于25?28°C下、相對濕度65% -75 %時，培養(yǎng)23-40d，直至菌絲長滿原 種木培養(yǎng)基，則得到可用于生產(chǎn)的無柄紫靈芝原種；原種木屑培養(yǎng)配方為：干料按總質(zhì)量 分?jǐn)?shù)100 %計，包括玉米芯50 %、木屑22 %、麩皮20 %、葡萄糖5 %和石膏粉3 %，將上述干 料按其組份和含量混合均勻后形成干料，再在干料中加水，混合均勻使其水分含量為60%， pH6. 5-7,得到原種木屑培養(yǎng)；裝入750ml玻璃菌種瓶內(nèi)，裝料要求下松上緊。袋口塞緊棉 花，再用牛皮紙包住瓶頸與棉塞。然后高壓滅菌30min，冷卻后備用。
[0020] (3):將步驟（2)得到的無柄紫靈芝原種接種至生產(chǎn)種木屑培養(yǎng)基中，每一瓶無柄 紫靈芝原種可接種40-50瓶生產(chǎn)種木屑培養(yǎng)基，于25?29°C下、相對濕度65% -75%時，培 養(yǎng)30-45d，直至菌絲長滿生產(chǎn)種木屑培養(yǎng)基，則得到可用于生產(chǎn)的無柄紫靈芝生產(chǎn)種；所 述的生產(chǎn)種木屑培養(yǎng)基的配方為：栽培基料，按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計，包括雜木屑78%、麩 皮20%、黃豆粉1 %和石膏粉1 %，再在栽培基料中加入水，使其含水量為65%，即得到生產(chǎn) 種木屑培養(yǎng)基；裝入750ml玻璃菌種瓶內(nèi)，然后高壓滅菌30min，冷卻后備用。
[0021] (4):將步驟（3)得到的無柄紫靈芝生產(chǎn)種接種于栽培袋木屑培養(yǎng)基中，一瓶生 產(chǎn)種可接栽培袋50袋，于培菌房里溫度24?28°C，相對濕度70 %?80 %，黑培養(yǎng)40? 45d，至菌絲充滿培養(yǎng)袋，得到長滿菌絲的栽培料，則移入栽培房，所述的栽培袋木屑培養(yǎng)基 配方為：栽培基料，按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計，包括雜木屑60%、玉米芯18%、麩皮20%、碳酸 鈣1 %和石膏粉1 %，將上述栽培基料按其組份和含量混合均勻后得到栽培基料，再將栽培 基料和水按質(zhì)量比1:1. 3混合均勻后形成栽培袋木屑培養(yǎng)基，裝入17cmX33cmX0. 05cm 的聚丙烯菌種袋，袋口套上套圈，塞上棉花，用報紙封口，在常壓滅菌灶滅菌，l〇〇°C下維持 15-18h，自然悶灶4-6h后，冷卻備用。
[0022] (5):對移入栽培房的步驟（4)長滿菌絲的栽培料，去掉袋口的報紙后，在10? 15°〇培養(yǎng)3-5(1直至出現(xiàn)白色狀高1〇11的原基，原基在溫度25?291：，相對濕度75%? 90%，散射光光照強(qiáng)度100?ΙΟΟΟΙχ，每天通風(fēng)1?2次，每次0. 5-1小時的條件下培育至 長出菌柄，然后保持相對濕度85%?98%、每天通風(fēng)2?3次，每次0. 5-1小時的條件下 菌蓋逐漸分化，室內(nèi)光照強(qiáng)度增強(qiáng)到1000?20001x，溫度26?29°C，全天通風(fēng)，使菌蓋 和菌柄顏色加深，菌蓋邊緣淺色生長線消失，開始釋放孢子，加大室內(nèi)光照強(qiáng)度到2000? 50001x，繼續(xù)培養(yǎng)5?10天，菌蓋顏色進(jìn)一步加深，此時則可采收。
[0023] (6):步驟（5)獲得的子實體用鋒利刀片或剪刀從菌柄基部處割下或剪下，注意不 要掰傷菌皮，以利再出第二茬菇。采下的靈芝于陽光下曬干脫水，則得到成熟、干燥的無柄 紫靈芝子實體，可包裝或于室溫保藏或用于研究等用途。
[0024] 本實施例成功獲取了無柄紫靈芝子實體，無柄紫靈芝子實體平均生物效率達(dá)到 40%，即每100g生產(chǎn)用培養(yǎng)料可得40g新鮮的無柄紫靈芝子實體，可作原料或作研究材料 使用。
[0025] 實施例2 :
[0026] 本實施例與實施例1基本相同，只是有以下不同：
[0027] 1、斜面綜合PDA培養(yǎng)基配方為，每升含有馬鈴薯80g，葡萄糖10g，瓊脂10g，磷酸二 氫鉀3g，硫酸鎂2g和VBlOmg，余量為水，pH6?8,配制方法如下：按其組份和含量分別稱 重，先將馬鈴薯切成小塊放入鍋中，加水煮沸20?30分鐘至馬鈴薯軟而不爛時，用紗布過 濾，取濾汁，加入瓊脂熔化，再加入葡萄糖、磷酸二氫鉀和硫酸鎂攪拌均勻，定容至l〇〇〇ml， pH6?8,滅菌；
[0028] 2、原種木屑培養(yǎng)基為：干料按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計，包括玉米芯38%、木屑40%、 麩皮20%、葡萄糖1 %和石膏粉1 %，將上述干料按其組份和含量混合均勻后形成干料，再 在干料中加水，混合均勻使其水分含量為60%，pH6. 5-7,得到原種木屑培養(yǎng)基；
[0029] 3、所述的生產(chǎn)種木屑培養(yǎng)基的配方為：栽培基料，按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計，包括麥 粒99%和石膏1% ;再在栽培基料中加入水，使其含水量為65%，即得到生產(chǎn)種木屑培養(yǎng) 基；
[0030] 本實施例成功獲取了無柄紫靈芝子實體，可作原料或作研究材料使用。
[0031] 實施例3:
[0032] 本實施例與實施例1基本相同，只是有以下區(qū)別：
[0033] 原種木屑培養(yǎng)基為：干料按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計，包括玉米芯32%、木屑40%、麩 皮20%、葡萄糖5%和石膏粉3%，將上述干料按其組份和含量混合均勻后形成干料，再在 干料中加水，混合均勻使其水分含量為60%，pH6. 5-7,得到原種木屑培養(yǎng)基。
[0034] 本實施例成功獲取了無柄紫靈芝子實體，可作原料或作研究材料使用。
【權(quán)利要求】
1. 一種無柄紫靈芝子實體的人工栽培方法，其特征在于，包括以下步驟： a、 將無柄紫靈芝Ganoderma mastoporum(L6v)Pat.子實體組織分離或孢子分離，將分 離后的子實體組織或孢子接種到斜面PDA培養(yǎng)基上，于22?35°C、相對濕度50% -75% 下培養(yǎng)至菌絲長滿斜面，再選擇長勢旺盛、粗壯均一的菌塊接種至斜面綜合PDA培養(yǎng)基上， 22?35°C、相對濕度50% -75%下培養(yǎng)直至菌絲長滿斜面，得到長勢旺盛、粗壯均一的無 柄紫靈芝母種；所述的斜面PDA培養(yǎng)基的配方為普通的PDA培養(yǎng)基；所述的斜面綜合PDA 培養(yǎng)基配方為，每升含有馬鈴薯80g，葡萄糖10g，瓊脂10g，磷酸二氫鉀3g，硫酸鎂2g和 VB10-20mg，余量為水，pH6?8,配制方法如下：按其組份和含量分別稱重，先將馬鈴薯切成 小塊放入鍋中，加水煮沸20?30分鐘至馬鈴薯軟而不爛時，用紗布過濾，取濾汁，加入瓊脂 熔化，再加入葡萄糖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂和VB1攪拌均勻，定容至1000ml，pH6?8 ; b、 取步驟a的無柄紫靈芝母種接種至原種木屑培養(yǎng)基中，于22?35°C、相對濕度 50% -75%下培養(yǎng)直至菌絲長滿原種木屑培養(yǎng)基瓶，得到無柄紫靈芝原種；所述的原種木 屑培養(yǎng)基為：干料按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100 %計，包括玉米芯32-50 %、木屑22-40 %、麩皮20 %、葡 萄糖1-5%和石膏粉1-3%，將上述干料按其組份和含量混合均勻后形成干料，再在干料中 加水，混合均勻使其水分含量為60%，pH6. 5-7,由此得到原種木屑培養(yǎng)基； c、 將步驟b得到的無柄紫靈芝原種接種至生產(chǎn)種木屑培養(yǎng)基中，于22?35°C、相對濕 度50% -75%下培養(yǎng)直至菌絲長滿生產(chǎn)種培養(yǎng)基，則得到無柄紫靈芝生產(chǎn)種；所述的生產(chǎn) 種木屑培養(yǎng)基的配方為：栽培基料，按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計，包括雜木屑78%、麩皮20%、黃 豆粉1 %和石膏粉1 %，或者麥粒99 %和石膏1% ;再在栽培基料中加入水，使其含水量為 65%，即得到生產(chǎn)種木屑培養(yǎng)基； d、 將步驟c得到的無柄紫靈芝生產(chǎn)種接種于栽培袋木屑培養(yǎng)基內(nèi)，于溫度22?35°C， 相對濕度50 %?85 %的培養(yǎng)房內(nèi)，暗光培養(yǎng)至菌絲充滿培養(yǎng)袋，得到長滿菌絲的栽培料， 所述的栽培袋木屑培養(yǎng)基配方為：栽培基料，按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計，包括雜木屑60%、玉 米芯18%、麩皮20%、碳酸鈣1 %和石膏粉1 %，將栽培基料和水按質(zhì)量比1:1. 3混合均勻 后形成栽培袋木屑培養(yǎng)基； e、 長滿菌絲的栽培料移入栽培房，去掉培養(yǎng)袋蓋，置于10?15°C下培養(yǎng)直至出現(xiàn)白色 的原基，原基培養(yǎng)溫度20?35°C，相對濕度75 %?90 %，散射光光照強(qiáng)度100?ΙΟΟΟΙχ， 每天通風(fēng)1?2次，每次0. 5?1小時的條件下培育至長出菌柄，然后保持相對濕度85%? 98%、每天通風(fēng)2?3次，每次0. 5-1小時的條件下培養(yǎng)至菌蓋逐漸分化，然后室內(nèi)光照強(qiáng) 度增強(qiáng)到1000?20001χ，溫度20?35°C，全天通風(fēng)，使菌蓋和菌柄顏色加深，菌蓋邊緣淺 色生長線消失，開始釋放孢子，再加大室內(nèi)光照強(qiáng)度到2000?50001x，繼續(xù)培養(yǎng)5?10天， 菌蓋顏色進(jìn)一步加深，此時則可采收得到無柄紫靈芝子實體。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1的人工栽培方法，其特征在于，所述的步驟a的在斜面PDA培養(yǎng)基和 斜面綜合PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)，其培養(yǎng)溫度都為25?28°C，相對濕度為65%?75%。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1的人工栽培方法，其特征在于，所述的步驟b中的培養(yǎng)溫度為25? 28°C，相對濕度為65% -75%。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1的人工栽培方法，其特征在于，所述的步驟c中的培養(yǎng)溫度為25? 29°C，相對濕度為65% -75% ;
5. 根據(jù)權(quán)利要求1的人工栽培方法，其特征在于，所述的步驟d中的培養(yǎng)溫度為
【文檔編號】A01G1/04GK104186199SQ201410372805
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年7月31日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月31日
【發(fā)明者】鄧春英 申請人:貴州科學(xué)院