一種非洲菊種質(zhì)資源的保存方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種非洲菊種質(zhì)資源的保存方法，該方法包括選擇舌狀花剛開放至管狀花已吐粉的非洲菊花朵，留花梗長5cm～6cm，經(jīng)處理后的外植體通過誘導(dǎo)培養(yǎng)，兩個不同配方的繼代培養(yǎng)基連續(xù)繼代培養(yǎng)，大棚內(nèi)生根培養(yǎng)后，育苗袋培養(yǎng)及棚內(nèi)栽種1年。一個保存周期可保存非洲菊種質(zhì)資源達3～4年，種質(zhì)資源材料的田間成活率達90％以上。該方法通過兩種不同的繼代培養(yǎng)基的依次繼代培養(yǎng)和棚內(nèi)復(fù)壯兩個環(huán)節(jié)保存非洲菊種源，降低了激素因素、栽培環(huán)境等原因造成的種苗變異和品質(zhì)退化問題，穩(wěn)定地保存了非洲菊品質(zhì)資源的優(yōu)良性狀，是一種新的、有效的非洲菊種質(zhì)資源保存方法。
【專利說明】一種非洲菊種質(zhì)資源的保存方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種非洲菊種質(zhì)資源的保存方法，屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 非洲菊（Gerbera jamesonil Bolus)又名扶郎花，菊科大丁草屬多年生宿根常綠 草本花卉。因其花朵碩大，花色豐富，姿態(tài)各異，裝飾性強，耐長途運輸，深受廣大消費 者青睞。在適宜條件下可周年生產(chǎn)，周年開花，全年可為市場供應(yīng)鮮切花，為世界五大切花 之一。我國自上世紀90年代以來曾大量從荷蘭引種栽培，經(jīng)多年試驗，由于氣候條件、栽 培技術(shù)的限制，普遍出現(xiàn)品質(zhì)退化現(xiàn)象，優(yōu)良種性嚴重退化甚至喪失，失去了栽培利用價 值，不得不從生產(chǎn)中逐步淘汰。非洲菊品種退化通常表現(xiàn)為花朵變小、過渡色多、花型紊 舌U雙桿現(xiàn)象、株高參差不齊、生活力下降、抗性和產(chǎn)量降低等。
[0003] 造成非洲菊品種退化的原因主要是：栽培環(huán)境如光照、水分、溫度、營養(yǎng)不適宜非 洲菊生長發(fā)育，土壤板結(jié)和鹽漬化、連作土地的病原菌大量積累并復(fù)合浸染等，導(dǎo)致品種失 去原有的典型性；在非洲菊組織培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)溫度、增殖芽的繼代代數(shù)以及激素濃度 等因素造成非洲菊種苗發(fā)生無性變異。所謂種質(zhì)，是指決定生物體遺傳性狀并將遺傳信息 從親代傳給后代的遺傳物質(zhì)，種質(zhì)資源的調(diào)查、收集、保存和評價是科學(xué)開發(fā)利用植物的基 礎(chǔ)，對最大限度地發(fā)揮種質(zhì)資源利用潛力具有決定性的作用。
[0004] 目前，非洲菊種質(zhì)資源的保存大多以室內(nèi)組培和田間栽培保存，組培方法主要以 幼蕾花托作為非洲菊組織培養(yǎng)的外植體，但幼蕾花托作為外植體存在表面消毒較難，消耗 試材量大，且花蕾的大小要求嚴格，過小容易死亡，過大易染率，材料選擇受時間限制，在田 間同一時間取材，達到要求的花蕾較少的問題；目前非洲菊組織培養(yǎng)保存的不足表現(xiàn)在繼 代培養(yǎng)周期較短，保種花費相對較大；棚內(nèi)栽培保存的不足表現(xiàn)在占地面積多，光、溫、水及 病蟲害控制較難，多年栽培形成土壤板結(jié)、鹽漬化、病原菌大量積累，連作障礙導(dǎo)致品種失 去原有的典型性。因此一種適宜的非洲菊種質(zhì)資源保存方法對非洲菊的產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有重要 意義。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 針對目前非洲菊種質(zhì)資源的保存方面存在的缺陷或不足，本發(fā)明的提供一種非洲 菊種質(zhì)資源保存方法，目的在于使其外植體取材方便、繼代周期加長、保存成本降低、變異 降低，能較好地穩(wěn)定品種種性，滿足科學(xué)開發(fā)利用非洲菊種質(zhì)資源的需要。
[0006] 本發(fā)明所提供的一種非洲菊種質(zhì)資源的保存方法，其特征在于步驟如下：
[0007] (1)外植體材料的選擇和預(yù)處理
[0008] ①選擇無病蟲危害、種質(zhì)與親本一致的非洲菊健壯植株，摘取舌狀花剛開放至管 狀花已吐粉的非洲菊花朵，留花梗長5cm?6cm，插入裝有5?15mg/L 6-BA水溶液中，放入 4°C的冰箱中低溫處理3?7天；
[0009] ②將步驟（1)①處理的材料先用洗衣粉水清洗，再用清水沖洗干凈后，在超凈 環(huán)境下，用刀片切除花梗與舌狀花邊緣，先放入質(zhì)量百分濃度為0. 1 %的氯化汞溶液消毒 15min，再放入在質(zhì)量百分濃度為2 %的次氯酸鈉溶液中加2滴吐溫20的混合液中消毒 lOmin，之后用無菌水沖洗3?4次，再用鑷子拔去花托上的所有舌狀花，用解剖刀切除花萼 邊緣及花托底部〇. 2?0. 3cm的厚度即為所需的非洲菊外植體；
[0010] ⑵誘導(dǎo)培養(yǎng)
[0011] 將（1)②所述的非洲菊外植體放入下列培養(yǎng)基中：
[0012] MS基本培養(yǎng)液
[0013]

【權(quán)利要求】
1. 一種非洲菊種質(zhì)資源的保存方法，其特征在于步驟如下： (1) 外植體材料的選擇和預(yù)處理 ① 選擇無病蟲危害、種質(zhì)與親本一致的非洲菊健壯植株，摘取舌狀花剛開放至管狀花 已吐粉的非洲菊花朵，留花梗長5cm?6cm，插入裝有5?15mg/L 6-BA水溶液中，放入4°C 的冰箱中低溫處理3?7天； ② 將步驟（1)①處理的材料先用洗衣粉水清洗，再用清水沖洗干凈后，在超凈環(huán)境下， 用刀片切除花梗與舌狀花邊緣，先放入質(zhì)量百分濃度為〇. 1 %的氯化汞溶液消毒15min，再 放入在質(zhì)量百分濃度為2%的次氯酸鈉溶液中加2滴吐溫20的混合液中消毒lOmin，之后 用無菌水沖洗3?4次，再用鑷子拔去花托上的所有舌狀花，用解剖刀切除花萼邊緣及花托 底部0. 2?0. 3cm的厚度即為所需的非洲菊外植體； (2) 誘導(dǎo)培養(yǎng) 將⑴②所述的非洲菊外植體放入下列培養(yǎng)基中： MS基本培養(yǎng)液
在光照強度為1500?20001x，溫度為25±2°C，光照時間為10?12h/d的條件下，誘 導(dǎo)培養(yǎng)25?35d至外植體萌發(fā)分化出1?2cm高的幼芽，切下幼芽； (3) 第一次繼代培養(yǎng) 將步驟（2)切下的幼芽切成單株轉(zhuǎn)接到下列繼代培養(yǎng)基I中： MS改良培養(yǎng)液
所述MS改良培養(yǎng)液是：常規(guī)MS培養(yǎng)液中大量元素的濃度減半，鹽酸硫胺素濃度為 2mg/L，鹽酸吡哆醇濃度為lmg/L的培養(yǎng)液； 在光照強度為1500?20001x，溫度為18±2°C，光照時間為10?12h/d的條件下培養(yǎng) 45 ?55d ; (4) 第二次繼代培養(yǎng) 將步驟（3)第一次繼代培養(yǎng)的幼芽切成單株轉(zhuǎn)接到下列繼代培養(yǎng)基II中： MS改良培養(yǎng)液
所述MS改良培養(yǎng)液與步驟（3)第一次繼代培養(yǎng)繼代培養(yǎng)基I中的MS改良培養(yǎng)液相 同； 在光照強度為1500?20001x，溫度為18±2°C，光照時間為10?12h/d的條件下培養(yǎng) 60 ?70d ; (5) 將步驟（4)第二次繼代培養(yǎng)的幼芽切成單株再重復(fù)依次用（3)第一次繼代培養(yǎng)和 步驟（4)第二次繼代培養(yǎng)至2?3年； (6) 將步驟（5)的叢生芽2cm以上的健壯植株切成單株接種到下列生根培養(yǎng)基中進行 生根培養(yǎng)： 1/2MS基本培養(yǎng)液
所述的1/2MS基本培養(yǎng)液是：常規(guī)MS培養(yǎng)液中全量元素的濃度減半的培養(yǎng)液； 在組培瓶的瓶口包裹封口膜，移至蓋有遮光率為70 %遮陽網(wǎng)的大棚苗床上培養(yǎng)至植株 基部長出3?5條根，大棚的溫度控制為18°C -28°C ; (7) 將步驟￠)的生根植株取出，按常規(guī)洗凈苗上的培養(yǎng)基，放入質(zhì)量百分濃度為 0. 1 %的多菌靈溶液中消毒1?2min后，移栽至裝有混合基質(zhì)的育苗袋中，按常規(guī)進行澆 水、施肥管理，生長45d后，即得非洲菊移栽苗；所述混合基質(zhì)為按腐植土：紅土：珍珠巖 的體積比為2 : 1 : 0.5配制而成； (8) 將步驟（7)獲得的移栽苗在棚內(nèi)栽種1年。
【文檔編號】A01H4/00GK104145818SQ201410372883
【公開日】2014年11月19日 申請日期:2014年7月31日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月31日
【發(fā)明者】單芹麗, 楊春梅, 李紳崇, 王繼華, 吳麗芳, 汪國鮮, 黎霞, 趙培飛, 吳旻 申請人:玉溪云星生物科技有限公司, 云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院花卉研究所