一種幼苗期鑒定煙草青枯病抗性的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種幼苗期鑒定煙草青枯病抗性的方法，將保水劑與珍珠巖按2∶1的比例混均，消毒后裝入6孔細(xì)胞培養(yǎng)板，將煙草種子播種在細(xì)胞培養(yǎng)板上，每個(gè)品種各播種到一個(gè)孔中，10～20粒/孔，放在無(wú)菌培養(yǎng)室中培養(yǎng)，溫度環(huán)境25℃、每天光照16小時(shí)、光照強(qiáng)度4000lux、相對(duì)溫度70～80%，出苗后，每個(gè)孔中均勻的留苗5株，用煙草育苗專(zhuān)用肥配制營(yíng)養(yǎng)液，使其中氮肥濃度達(dá)到100ppm，追施到培養(yǎng)板中，待小苗長(zhǎng)至兩片真葉時(shí)，將青枯菌懸浮液用移液槍接種到細(xì)胞培養(yǎng)板的每個(gè)孔中，每孔接種1ml，15天后調(diào)查記錄。本發(fā)明鑒定周期更短，25天小苗即可用于鑒定，不受季節(jié)限制，試驗(yàn)穩(wěn)定性強(qiáng)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種幼苗期鑒定煙草青枯病抗性的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物抗病性鑒定【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及幼苗期鑒定煙草青枯病抗性的方 法。

【背景技術(shù)】
[0002] 由細(xì)菌引起的一種煙草病害，在我國(guó)多個(gè)煙區(qū)都有發(fā)生，危害嚴(yán)重。對(duì)青枯病缺乏 特效防治藥劑，一旦發(fā)生很難防治。在青枯病易發(fā)地區(qū)，最主要的方法就是選用抗青枯病煙 草品種。對(duì)煙草品種的青枯病抗病性鑒定，目前主要依靠田間病圃鑒定，但是田間病圃鑒 定有鑒定時(shí)間長(zhǎng)、成本高，受地力、季節(jié)的影響較大，抗性鑒定不穩(wěn)定等缺點(diǎn)。中國(guó)專(zhuān)利CN 200910094174 "一種煙草青枯病抗性的苗期鑒定方法"采用漂浮池恒溫水培接種鑒定方法， 具有發(fā)病迅速、結(jié)果重復(fù)性好、結(jié)果可靠性高等優(yōu)點(diǎn)，但是這個(gè)方法操作復(fù)雜，時(shí)間周期相 對(duì)還是較長(zhǎng)，需要一個(gè)月的時(shí)間。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題：針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的抗性鑒定不穩(wěn)定、鑒定周期長(zhǎng)、 受地力、季節(jié)的影響較大等問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種幼苗期鑒定煙草青枯病抗性的方法，具 有鑒定周期短、不受季節(jié)限和鑒定結(jié)果穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)。
[0004] 本發(fā)明采用的技術(shù)方案：幼苗期鑒定煙草青枯病抗性的方法，包括以下步驟： (1) 育苗：將保水劑與珍珠巖按2 :1的比例混均，消毒后裝入6孔細(xì)胞培養(yǎng)板，將煙草 種子播種在細(xì)胞培養(yǎng)板上，每個(gè)品種各播種到一個(gè)孔中，10?20粒/孔，放在無(wú)菌培養(yǎng)室中 培養(yǎng)，溫度環(huán)境25°C、每天光照16小時(shí)、光照強(qiáng)度4000勒克斯、相對(duì)溫度70?80%，出苗后， 每個(gè)孔中均勻的留苗5株，用煙草育苗專(zhuān)用肥配制營(yíng)養(yǎng)液，使其中氮肥濃度達(dá)到lOOppm，追 施到培養(yǎng)板中； (2) 青枯菌懸浮液的制備：將20°C下保存于無(wú)菌水中的青枯菌，在肉汁培養(yǎng)基平板上 劃線，培養(yǎng)于28?30°C下，24h后挑取典型菌落移置于肉汁斜面，28°C 24h后，再移至肉汁斜 面，在28°C培養(yǎng)24h后用無(wú)菌水稀釋成108cfu/ml，即成所需要的接菌濃度； (3) 接種：小苗長(zhǎng)至兩片真葉時(shí)，將青枯菌懸浮液用移液槍接種到細(xì)胞培養(yǎng)板的每個(gè)孔 中，每孔接種lml，15天后調(diào)查記錄。
[0005] 記載方法執(zhí)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)"煙草病蟲(chóng)害分級(jí)及調(diào)查方法（GB/T 23222-2008)"。病情 指數(shù)（D)計(jì)算公式： D= Σ (各級(jí)病株數(shù)X該病級(jí)數(shù)）X 100/ (調(diào)查總株數(shù)X最高級(jí)數(shù)） 病害嚴(yán)重度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 23224-2008執(zhí)行，抗性劃分為6個(gè)級(jí)別：高抗 或免疫（I):病指為〇 ;抗?。≧):抗?。≧)沖抗（MR):病指為20. 1?40沖感（MS):病指為 40. 1?60 ;感（S):病指為60. 1?80 ;高感（HS):病指為80. 1?100。
[0006] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相對(duì)具有以下有益效果： (1)鑒定周期更短，25天小苗即可用于鑒定，相比其它現(xiàn)有技術(shù)的鑒定周期短； (2)以細(xì)胞培養(yǎng)板為載體，在室內(nèi)恒定環(huán)境下育苗鑒定，不受季節(jié)限制，試驗(yàn)穩(wěn)定性 強(qiáng)； (3 )使用無(wú)菌苗，不受其它微生物影響，鑒定結(jié)果穩(wěn)定。

【具體實(shí)施方式】 [0007] 實(shí)施例1 1.材料與方法 1. 1試驗(yàn)材料 對(duì)12個(gè)煙草品種進(jìn)行青枯病抗性鑒定。D101、長(zhǎng)脖黃、大虎耳、--448Α、紅花大金元、 1(326、南江3號(hào)、云煙85、巖煙97、1(346、1?17、中煙100 1. 2試驗(yàn)方法 將保水劑與珍珠巖按2 :1的比例混均，消毒后裝入6孔細(xì)胞培養(yǎng)板，將煙草種子播種在 細(xì)胞培養(yǎng)板上。將試驗(yàn)的12個(gè)品種分別播種到一個(gè)孔中，10?20粒/孔。試驗(yàn)設(shè)4個(gè)重 復(fù)。將播種后的細(xì)胞培養(yǎng)板放在無(wú)菌培養(yǎng)室中培養(yǎng)，溫度環(huán)境25°C、每天光照16小時(shí)、光照 強(qiáng)度4000勒克斯（lux)、相對(duì)溫度70?80%。出苗后，每個(gè)孔中均勻的留苗5株。小苗長(zhǎng) 至兩片真葉時(shí)（25?30天)，將青枯菌懸浮液用移液槍接種到細(xì)胞培養(yǎng)板的每個(gè)孔中，每孔 接種lml。15天后調(diào)查記錄。
[0008] 青枯菌懸浮液的制作： 將20°C下保存于無(wú)菌水中的青枯菌，在肉汁培養(yǎng)基平板上劃線，培養(yǎng)于28~30°C下， 24h后挑取典型菌落移置于肉汁斜面，28°C 24h后，再移至肉汁斜面，在28°C培養(yǎng)24h后用 無(wú)菌水稀釋成l〇8cfu/ml，即成所需要的接菌濃度。
[0009] 記載方法執(zhí)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)"煙草病蟲(chóng)害分級(jí)及調(diào)查方法（GB/T 23222-2008)"。病情 指數(shù)（D)計(jì)算公式： D= Σ (各級(jí)病株數(shù)X該病級(jí)數(shù)）X 100/ (調(diào)查總株數(shù)X最高級(jí)數(shù)） 病害嚴(yán)重度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 23224-2008執(zhí)行，抗性劃分為6個(gè)級(jí)別： 表1 :國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)抗性劃分表

【權(quán)利要求】
1. 一種幼苗期鑒定煙草青枯病抗性的方法，其特征在于：包括以下步驟： (1) 育苗：將保水劑與珍珠巖按2 :1的比例混均，消毒后裝入6孔細(xì)胞培養(yǎng)板，將煙草 種子播種在細(xì)胞培養(yǎng)板上，每個(gè)品種各播種到一個(gè)孔中，10?20粒/孔，放在無(wú)菌培養(yǎng)室中 培養(yǎng)，出苗后，每個(gè)孔中均勻的留苗5株，用煙草育苗專(zhuān)用肥配制營(yíng)養(yǎng)液，使其中氮肥濃度 達(dá)到lOOppm，追施到培養(yǎng)板中； (2) 青枯菌懸浮液的制備：將20°C下保存于無(wú)菌水中的青枯菌，在肉汁培養(yǎng)基平板上 劃線，培養(yǎng)于28?30°C下，24h后挑取典型菌落移置于肉汁斜面，28°C，24h后，再移至肉汁斜 面，在28°C培養(yǎng)24h后用無(wú)菌水稀釋成10 8 cfu/ml，即成所需要的接菌濃度； (3) 接種：小苗長(zhǎng)至兩片真葉時(shí)，將青枯菌懸浮液用移液槍接種到細(xì)胞培養(yǎng)板的每個(gè)孔 中，每孔接種lml，15天后調(diào)查記錄； (4) 記載方法執(zhí)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)：GB/T 23222-2008,煙草病蟲(chóng)害分級(jí)及調(diào)查方法。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的幼苗期鑒定煙草青枯病抗性的方法，其特征在于：無(wú)菌培養(yǎng) 室的培養(yǎng)條件為溫度環(huán)境25°C、每天光照16小時(shí)、光照強(qiáng)度40001UX、相對(duì)溫度70?80%。
【文檔編號(hào)】A01G7/00GK104152532SQ201410385968
【公開(kāi)日】2014年11月19日 申請(qǐng)日期:2014年8月7日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月7日
【發(fā)明者】王仁剛, 任學(xué)良, 林世鋒, 謝升東, 王軼 申請(qǐng)人:貴州省煙草科學(xué)研究院