一種金針菇菌種的生產(chǎn)方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種金針菇菌種的生產(chǎn)方法，其技術(shù)方案的要點(diǎn)是包括以下步驟：選取母體菇種、制備斜面培養(yǎng)基、制備一次性培養(yǎng)基、制備搖瓶培養(yǎng)基、培養(yǎng)液體初培養(yǎng)菌種、菌種培養(yǎng)桶培養(yǎng)菌種。以金針菇為接種菌株，采用無(wú)菌培養(yǎng)技術(shù)，所得菌種發(fā)芽率高，出產(chǎn)的金針菇桿部更直外觀顏色更白，口感更好。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種金針菇菌種的生產(chǎn)方法
【【技術(shù)領(lǐng)域】】
[0001]本發(fā)明涉及一種金針菇菌種的生產(chǎn)方法。
【【背景技術(shù)】】
[0002]金針菇學(xué)名毛柄金錢(qián)菌，又稱(chēng)毛柄小火菇、樸菇、冬菇、凍菌、金菇、智力菇等。因其菌柄細(xì)長(zhǎng)，似金針菜，故稱(chēng)金針菇，屬傘菌目白蘑科金針菇屬，是一種菌藻地衣類(lèi)。金針菇具有很高的藥用食療價(jià)值。金針菇是秋冬與早春栽培的食用菌，以其菌蓋滑嫩、柄脆、營(yíng)養(yǎng)豐富、味美適口而著稱(chēng)于世，特別是涼拌菜和火鍋的上好食材，其營(yíng)養(yǎng)豐富，清香撲鼻而且味道鮮美，深受大眾的喜愛(ài)。據(jù)測(cè)定，金針菇氨基酸的含量非常豐富，高于一般菇類(lèi)，尤其是賴(lài)氨酸的含量特別高，賴(lài)氨酸具有促進(jìn)兒童智力發(fā)育的功能。金針菇干品中含蛋白質(zhì)8.87%,碳水化合物60.2%，粗纖維達(dá)7.4%，經(jīng)常食用可防治潰瘍病。有研究又表明，金針菇內(nèi)所含的一種物質(zhì)具有很好的抗癌作用。
[0003]金針菇大量生產(chǎn)，常出現(xiàn)雜菌污染等導(dǎo)致減產(chǎn)，特別是大量培養(yǎng)菌種過(guò)程中，存在發(fā)芽率低的情況，嚴(yán)重影響經(jīng)濟(jì)效益。
【
【發(fā)明內(nèi)容】
】
[0004]本發(fā)明目的是提供一種金針菇菌種的生產(chǎn)方法，以金針菇為接種菌株，采用無(wú)菌培養(yǎng)技術(shù)，所得菌種發(fā)芽率高，出產(chǎn)的金針菇桿部更直外觀顏色更白，口感更好。
[0005]本發(fā)明為了實(shí)現(xiàn)上述目的，采用以下技術(shù)方案:
[0006]一種金針菇菌種的生產(chǎn)方法，其特征在于包括以下步驟:選取母體菇種、制備斜面培養(yǎng)基、制備一次性培養(yǎng)基、制備搖瓶培養(yǎng)基、培養(yǎng)液體初培養(yǎng)菌種、菌種培養(yǎng)桶培養(yǎng)菌種。
[0007]所述具體步驟如下:
[0008]A:選取母體菇種
[0009]選擇六?八成熟的金針菇，于2?4°C條件存放2天，水分減至40?50%，分離出桿部得母體菇種；
[0010]B:制備斜面培養(yǎng)基
[0011]按照質(zhì)量百分比將PDA培養(yǎng)基3.5?4 %、磷酸二氫鉀0.05?0.08 %、MgSO4.5Η200.05?0.08%、蛋白胨0.1?0.15%、ΡΗ6.5?7的蒸餾水余量的混合物加入試管中，混勻后于122?123 °C條件，滅菌20?25min，滅菌后降溫至96?98 °C取出試管，擺成斜面，制得斜面培養(yǎng)基；
[0012]C:制備一次性培養(yǎng)基
[0013]按照質(zhì)量百分比將PDA培養(yǎng)基3.5?4%，PH6.5?7的蒸餾水余量的混合物混合加入三角瓶中混勻，混勻后于122?123°C條件，滅菌30?35min，滅菌后降溫至96?98°C取出三角瓶，將三角瓶放入超凈工作臺(tái)中，冷卻至60°C以下，將三角瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基，再倒入一次性培養(yǎng)皿中，待降至室溫，制得一次性培養(yǎng)基；
[0014]D:制備搖瓶培養(yǎng)基
[0015]按照質(zhì)量百分比將白糖2?2.3%、磷酸二氫鉀0.2?0.23%,MgSO4.5Η200.02?0.023%、蛋白胨0.02?0.023%、PH為6.5?7的蒸餾水余量的混合物配置加入三角瓶中，混勻后用錫紙將瓶口塞住，于122?123°C條件，滅菌40?45min，滅菌后將三角瓶降溫至96?98°C取出，再放入超凈工作臺(tái)中冷卻至60°C以下，制備得搖瓶培養(yǎng)基；
[0016]E:培養(yǎng)液體初培養(yǎng)菌種
[0017](I)選取的制備好的母體菇種，接種到制備好的斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)，條件:20?22°C，5?6天，待斜面菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)，即得到母種A ；
[0018](2)取用母種A，接種到制備好的一次性培養(yǎng)基培養(yǎng)，條件:20?22°C，6?7天，待菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)培養(yǎng)皿，即得到母種B ；
[0019](3)取用母種B，將母種B外表面的菌絲皮割掉，將下方的接種培養(yǎng)基再次接種到制備好的一次性培養(yǎng)基中培養(yǎng)，條件:20?22°C，6?7天，待菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)培養(yǎng)皿后，即得到母種C ；
[0020](4)取用母種C，將母種C菌塊去掉表皮，接種到搖瓶培養(yǎng)基中，之后將搖瓶培養(yǎng)基連同三角瓶一同移到搖床中，18?20°C條件，轉(zhuǎn)速為110-120r/min，培養(yǎng)8?10天，即得液體初培養(yǎng)菌種；
[0021]F:菌種培養(yǎng)桶培養(yǎng)菌種
[0022](I)菌種培養(yǎng)桶的配置，按照質(zhì)量百分比將白糖3?3.5 %、磷酸二氫鉀0.3?0.35%、MgSO4.5Η200.05 ?0.06%、消泡劑 0.02 ?0.025%、PH 為 6.5 ?7 的軟化過(guò)濾水余量的混合物加入菌種培養(yǎng)桶，混勻后將菌種培養(yǎng)桶密封并移入菌包滅菌柜中滅菌，100C保溫60min，123°C滅菌120min，再密閉放置30min，冷卻至96?98 °C打開(kāi)滅菌柜門(mén)，將菌種培養(yǎng)桶移至冷卻室冷卻，冷卻時(shí)菌種培養(yǎng)桶內(nèi)通入0.075?0.08mpa無(wú)菌的空氣，菌種培養(yǎng)桶的桶壁用循環(huán)水冷卻，直至菌種培養(yǎng)桶冷卻到18?20°C ；
[0023](2)將三角瓶?jī)?nèi)的液體初培養(yǎng)菌種，用自動(dòng)攪拌器攪拌，攪拌器轉(zhuǎn)速4000?5000r/min，攪拌停止后，在火焰保護(hù)下，由菌種培養(yǎng)桶專(zhuān)用接種口倒入并培養(yǎng)，通入0.075?0.08mpa的無(wú)菌空氣，16?18°C，培養(yǎng)5?6天，得金針菇菌種。
[0024]所述培養(yǎng)基自動(dòng)攪拌器的攪拌棒為不銹鋼圓柱狀的可拆卸式結(jié)構(gòu)，在攪拌使用前需在滅菌鍋中滅菌處理，滅菌條件為122?123°C，50min，后放入超凈工作臺(tái)冷卻到18?20°C，滅菌期間需用錫紙包裹攪拌棒，待滅菌完成后裝入攪拌器前拆下錫紙包裝，攪拌作業(yè)時(shí)將攪拌棒直接插入三角瓶中進(jìn)行攪拌，攪拌的過(guò)程時(shí)間控制為:a、攪拌:4S，b、停止:2S，
C、攪拌:15S, d、停止:2S, e、攪拌:2S后停止。
[0025]所述培養(yǎng)液體初培養(yǎng)菌種時(shí)取用母種C，一次取用母種C的菌塊4?6塊，大小為4?6mm2的圓柱形。
[0026]所述制備一次性培養(yǎng)基時(shí)，所使用的一次性培養(yǎng)皿降至室溫步驟:將一次性培養(yǎng)皿上蓋掀開(kāi)，經(jīng)超凈工作臺(tái)的上吹風(fēng)冷卻，待上蓋完全無(wú)水霧時(shí)，將上蓋蓋上，從培養(yǎng)皿的正反兩面觀察目視為透明的，無(wú)任何其他的雜物存在即可。
[0027]所述搖瓶培養(yǎng)基接種到菌種培養(yǎng)桶后，在培養(yǎng)過(guò)程中的第三天與第五天，分別需用LB培養(yǎng)基檢查培養(yǎng)測(cè)試其發(fā)育狀況。
[0028]所述LB培養(yǎng)基的配置，是按照質(zhì)量百分比將LB瓊脂培養(yǎng)基3.5?4%，PH為
6.5?7的蒸懼水余量混合加入三角瓶,于122?123°C,滅菌30?35min,滅菌降溫至96?98°C取出三角瓶，再放入超凈工作臺(tái)中冷卻至60°C以下，后將三角瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基，倒入一次性培養(yǎng)皿中，待一次性培養(yǎng)皿降至室溫，即得LB培養(yǎng)基。
[0029]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，有如下優(yōu)點(diǎn):
[0030]本發(fā)明提供一種金針菇菌種的生產(chǎn)方法，采用獨(dú)特的培養(yǎng)基配比組合，且菌種培養(yǎng)過(guò)程中經(jīng)過(guò)斜面培養(yǎng)基，一次性培養(yǎng)基和搖瓶培養(yǎng)基的多次無(wú)菌培養(yǎng)，所得菌種無(wú)污染，發(fā)芽率高。
[0031]所用的培養(yǎng)基自動(dòng)攪拌器，采用可拆卸式攪拌棒，短時(shí)高速攪拌，攪拌混合效果好，且因時(shí)間短菌種不易污染。
[0032]采用大容量的菌種培養(yǎng)桶進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，效率更高，提高了發(fā)芽率的同時(shí)，提高了產(chǎn)能，有效控制成本。使用本菌種，一般條件下發(fā)芽率保證在90%以上，所培育出的金針菇產(chǎn)品，單瓶(IlOOml)單產(chǎn)高出同類(lèi)菌種單產(chǎn)30?50克，產(chǎn)能效率極大提高。
【【具體實(shí)施方式】】
[0033]以下實(shí)施例中的金針菇，是選用本公司自產(chǎn)菌種發(fā)芽得的金針菇。
[0034]實(shí)施例1:
[0035]A:選取母體菇種
[0036]選擇八成熟的金針菇，于2°C條件存放2天，水分減至40%，抽真空后分離出桿部得母體菇種；(抽真空后更易分離)；
[0037]B:制備斜面培養(yǎng)基
[0038]按照質(zhì)量百分比將PDA培養(yǎng)基3.5 %、磷酸二氫鉀0.05 %、MgSO4.5H200.05 %、蛋白胨0.1%、PH6.5的蒸餾水余量的混合物加入試管中，保持混合物PH為6.1，混勻后于122°C條件，滅菌20min，滅菌后降溫至96°C取出試管，擺成斜面，制得斜面培養(yǎng)基；制得的培養(yǎng)基需做無(wú)菌檢驗(yàn)，將制得的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至30°C的培養(yǎng)箱中10h，無(wú)菌落長(zhǎng)出可備用；
[0039]C:制備一次性培養(yǎng)基
[0040]按照質(zhì)量百分比將PDA培養(yǎng)基3.5%，PH6.5的蒸餾水余量的混合物混合加入三角瓶中混勻，保持混合物PH為6.1，混勻后于122°C條件，滅菌30min，滅菌后降溫至96°C取出三角瓶，將三角瓶放入超凈工作臺(tái)中，冷卻至60°C以下，將三角瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基，再倒入一次性培養(yǎng)皿中，每個(gè)倒入15ml，所使用的一次性培養(yǎng)皿降至室溫步驟:將一次性培養(yǎng)皿上蓋掀開(kāi)，經(jīng)超凈工作臺(tái)的上吹風(fēng)冷卻，待上蓋完全無(wú)水霧時(shí)，將上蓋蓋上，從培養(yǎng)皿的正反兩面觀察目視為透明的，無(wú)任何其他的雜物存在即可，制得一次性培養(yǎng)基；制得的培養(yǎng)基需做無(wú)菌檢驗(yàn)，將制得的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至30°C的培養(yǎng)箱中10h，無(wú)菌落長(zhǎng)出可備用；
[0041]D:制備搖瓶培養(yǎng)基
[0042]按照質(zhì)量百分比將白糖2 %、磷酸二氫鉀0.2 %、MgSO4.5H200.02 %、蛋白胨0.02%、PH為6.5的蒸餾水余量的混合物配置加入三角瓶中，保持混合物PH為5.8，混勻后用錫紙將瓶口塞住，于122°C條件，滅菌40min，滅菌后將三角瓶降溫至96°C取出，再放入超凈工作臺(tái)中冷卻至60°C以下，制備得搖瓶培養(yǎng)基；制得的培養(yǎng)基需做無(wú)菌檢驗(yàn)，將制得的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至30°C的培養(yǎng)箱中10h，無(wú)菌落長(zhǎng)出可備用；
[0043]E:培養(yǎng)液體初培養(yǎng)菌種
[0044](I)將選取的母體菇種0.3克，接種到制備好的斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)，條件:20°C，5天，待斜面菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)，即得到母種A ；
[0045](2)取用母種A，接種到制備好的一次性培養(yǎng)基培養(yǎng)，條件:20°C，6天，待菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)培養(yǎng)皿，即得到母種B;
[0046](3)取用母種B，將母種B外表面的菌絲皮割掉，將下方的接種培養(yǎng)基再次接種到制備好的一次性培養(yǎng)基中培養(yǎng)，條件:20°C，6天，待菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)培養(yǎng)皿后，即得到母種C ；
[0047](4) 一次取用母種C大小為4_2的圓柱形的菌塊6塊，去掉表皮，接種到搖瓶培養(yǎng)基中，之后將搖瓶培養(yǎng)基連同三角瓶一同移到搖床中，18°C條件，轉(zhuǎn)速為110r/min，培養(yǎng)8天，即得液體初培養(yǎng)菌種；
[0048]F:菌種培養(yǎng)桶培養(yǎng)菌種
[0049](I)菌種培養(yǎng)桶的配置，按照質(zhì)量百分比將白糖3 %、磷酸二氫鉀0.3 %、MgSO4.5H200.05%、消泡劑0.02%、PH為6.5的軟化過(guò)濾水余量的混合物加入菌種培養(yǎng)桶，保持混合物PH為6.5，混勻后將菌種培養(yǎng)桶密封并移入菌包滅菌柜中滅菌，100°C保溫60min，123°C滅菌120min，再密閉放置30min，冷卻至96°C打開(kāi)滅菌柜門(mén)，將菌種培養(yǎng)桶移至冷卻室冷卻，冷卻時(shí)菌種培養(yǎng)桶內(nèi)通入0.075mpa無(wú)菌的空氣，菌種培養(yǎng)桶的桶壁用循環(huán)水冷卻，直至菌種培養(yǎng)桶冷卻到18°C ；
[0050](2)將三角瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)好的液體初培養(yǎng)菌種，用自動(dòng)攪拌器攪拌，攪拌器轉(zhuǎn)速4000r/min，攪拌的過(guò)程時(shí)間控制為:a、攪拌:4S，b、停止:2S，c、攪拌:15S，d、停止:2S，e、攪拌:2S，攪拌停止后，在火焰保護(hù)下，由菌種培養(yǎng)桶專(zhuān)用接種口倒入并培養(yǎng)，通入0.075mpa的無(wú)菌空氣，16°C，培養(yǎng)5天，在培養(yǎng)過(guò)程中的第三天與第五天，分別需用LB培養(yǎng)基檢查培養(yǎng)測(cè)試其發(fā)育狀況，得金針菇菌種。
[0051 ] LB培養(yǎng)基的配置，是按照質(zhì)量百分比將LB瓊脂培養(yǎng)基3.5%，PH為6.5的蒸餾水余量混合加入三角瓶，保持混合物PH為6.5，于122°C，滅菌30min，滅菌降溫至96°C取出三角瓶，再放入超凈工作臺(tái)中冷卻至60°C以下，后將三角瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基，倒入一次性培養(yǎng)皿中，每個(gè)倒入10ml，待一次性培養(yǎng)皿降至室溫，即得LB培養(yǎng)基。
[0052]實(shí)施例2:
[0053]A:選取母體菇種
[0054]選擇七成熟的金針菇，于3°C條件存放2天，水分減至45%，抽真空后分離出桿部得母體菇種；(抽真空后更易分離)；
[0055]B:制備斜面培養(yǎng)基
[0056]按照質(zhì)量百分比將PDA培養(yǎng)基3.8%、磷酸二氫鉀0.06 %、MgSO4.5H200.06 %、蛋白胨0.13%、PH6.8的蒸餾水余量的混合物加入試管中，保持混合物PH為6.2，混勻后于122°C條件，滅菌22min，滅菌后降溫至97°C取出試管，擺成斜面，制得斜面培養(yǎng)基；制得的培養(yǎng)基需做無(wú)菌檢驗(yàn)，將制得的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至32°C的培養(yǎng)箱中l(wèi)lh，無(wú)菌落長(zhǎng)出可備用；
[0057]C:制備一次性培養(yǎng)基
[0058]按照質(zhì)量百分比將PDA培養(yǎng)基3.8%，PH6.7的蒸餾水余量的混合物混合加入三角瓶中混勻，保持混合物PH為6.2，混勻后于122 °C條件，滅菌33min，滅菌后降溫至97°C取出三角瓶，將三角瓶放入超凈工作臺(tái)中，冷卻至60°C以下，將三角瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基，再倒入一次性培養(yǎng)皿中，每個(gè)倒入18ml，所使用的一次性培養(yǎng)皿降至室溫步驟:將一次性培養(yǎng)皿上蓋掀開(kāi)，經(jīng)超凈工作臺(tái)的上吹風(fēng)冷卻，待上蓋完全無(wú)水霧時(shí)，將上蓋蓋上，從培養(yǎng)皿的正反兩面觀察目視為透明的，無(wú)任何其他的雜物存在即可，制得一次性培養(yǎng)基；制得的培養(yǎng)基需做無(wú)菌檢驗(yàn)，將制得的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至32°C的培養(yǎng)箱中l(wèi)lh，無(wú)菌落長(zhǎng)出可備用；
[0059]D:制備搖瓶培養(yǎng)基
[0060]按照質(zhì)量百分比將白糖2.2%、磷酸二氫鉀0.21%, MgSO4.5H200.021 %、蛋白胨
0.021 %、PH為6.7的蒸餾水余量的混合物配置加入三角瓶中，保持混合物PH為5.9，混勻后用錫紙將瓶口塞住，于122°C條件，滅菌40min，滅菌后將三角瓶降溫至96°C取出，再放入超凈工作臺(tái)中冷卻至60°C以下，制備得搖瓶培養(yǎng)基；制得的培養(yǎng)基需做無(wú)菌檢驗(yàn)，將制得的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至32°C的培養(yǎng)箱中l(wèi)lh，無(wú)菌落長(zhǎng)出可備用；
[0061]E:培養(yǎng)液體初培養(yǎng)菌種
[0062](I)將選取的母體菇0.5克，接種到制備好的斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)，條件:21°C，5天，待斜面菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)，即得到母種A ;
[0063](2)取用母種A，接種到制備好的一次性培養(yǎng)基培養(yǎng)，條件:21°C，6天，待菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)培養(yǎng)皿，即得到母種B;
[0064](3)取用母種B，將母種B外表面的菌絲皮割掉，將下方的接種培養(yǎng)基再次接種到制備好的一次性培養(yǎng)基中培養(yǎng)，條件:21°C，7天，待菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)培養(yǎng)皿后，即得到母種C ；
[0065](4) 一次取用母種C大小為5mm2的圓柱形的菌塊5塊,去掉表皮,接種到搖瓶培養(yǎng)基中，之后將搖瓶培養(yǎng)基連同三角瓶一同移到搖床中，19°C條件，轉(zhuǎn)速為115r/min，培養(yǎng)9天，即得液體初培養(yǎng)菌種；
[0066]F:菌種培養(yǎng)桶培養(yǎng)菌種
[0067](I)菌種培養(yǎng)桶的配置，按照質(zhì)量百分比將白糖3.3 %、磷酸二氫鉀0.33%、MgSO4.5H200.05%、消泡劑0.023%, PH為6.7的軟化過(guò)濾水余量的混合物加入菌種培養(yǎng)桶，保持混合物PH為6.7，混勻后將菌種培養(yǎng)桶密封并移入菌包滅菌柜中滅菌，100°C保溫60min, 123°C滅菌120min，再密閉放置30min，冷卻至97°C打開(kāi)滅菌柜門(mén)，將菌種培養(yǎng)桶移至冷卻室冷卻，冷卻時(shí)菌種培養(yǎng)桶內(nèi)通入0.078mpa無(wú)菌的空氣，菌種培養(yǎng)桶的桶壁用循環(huán)水冷卻，直至菌種培養(yǎng)桶冷卻到19°C ；
[0068](2)將三角瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)好的液體初培養(yǎng)菌種，用自動(dòng)攪拌器攪拌，攪拌器轉(zhuǎn)速4500r/min，攪拌的過(guò)程時(shí)間控制為:a、攪拌:4S，b、停止:2S，c、攪拌:15S，d、停止:2S，e、攪拌:2S，攪拌停止后，在火焰保護(hù)下，由菌種培養(yǎng)桶專(zhuān)用接種口倒入并培養(yǎng)，通入0.078mpa的無(wú)菌空氣，16°C，培養(yǎng)5天，在培養(yǎng)過(guò)程中的第三天與第五天，分別需用LB培養(yǎng)基檢查培養(yǎng)測(cè)試其發(fā)育狀況，得金針菇菌種。
[0069]LB培養(yǎng)基的配置，是按照質(zhì)量百分比將LB瓊脂培養(yǎng)基3.7%，PH為6.7的蒸餾水余量混合加入三角瓶，保持混合物PH為6.7，于123°C，滅菌33min，滅菌降溫至97°C取出三角瓶，再放入超凈工作臺(tái)中冷卻至60°C以下，后將三角瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基，倒入一次性培養(yǎng)皿中，每個(gè)倒入13ml，待一次性培養(yǎng)皿降至室溫，即得LB培養(yǎng)基。
[0070]實(shí)施例3:
[0071]A:選取母體菇種
[0072]選擇六成熟的金針菇，于4°C條件存放2天，水分減至50%，抽真空后分離出桿部得母體菇種；(抽真空后更易分離)；
[0073]B:制備斜面培養(yǎng)基
[0074]按照質(zhì)量百分比將PDA培養(yǎng)基4%、磷酸二氫鉀0.08%、MgSO4.5H200.08%、蛋白胨0.15%、PH7的蒸餾水余量的混合物加入試管中，保持混合物PH為6.3，混勻后于123°C條件，滅菌25min，滅菌后降溫至98°C取出試管，擺成斜面，制得斜面培養(yǎng)基；制得的培養(yǎng)基需做無(wú)菌檢驗(yàn)，將制得的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至35°C的培養(yǎng)箱中12h，無(wú)菌落長(zhǎng)出可備用；
[0075]C:制備一次性培養(yǎng)基
[0076]按照質(zhì)量百分比將PDA培養(yǎng)基4%，PH7的蒸餾水余量的混合物混合加入三角瓶中混勻，保持混合物PH為6.3，混勻后于123°C條件，滅菌35min，滅菌后降溫至98°C取出三角瓶，將三角瓶放入超凈工作臺(tái)中，冷卻至60°C以下，將三角瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基，再倒入一次性培養(yǎng)皿中，每個(gè)倒入20ml，所使用的一次性培養(yǎng)皿降至室溫步驟:將一次性培養(yǎng)皿上蓋掀開(kāi)，經(jīng)超凈工作臺(tái)的上吹風(fēng)冷卻，待上蓋完全無(wú)水霧時(shí)，將上蓋蓋上，從培養(yǎng)皿的正反兩面觀察目視為透明的，無(wú)任何其他的雜物存在即可，制得一次性培養(yǎng)基；制得的培養(yǎng)基需做無(wú)菌檢驗(yàn)，將制得的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至35°C的培養(yǎng)箱中12h，無(wú)菌落長(zhǎng)出可備用；
[0077]D:制備搖瓶培養(yǎng)基
[0078]按照質(zhì)量百分比將白糖2.3%、磷酸二氫鉀0.23%、MgSO4.5Η200.023%、蛋白胨
0.023%、PH為7的蒸餾水余量的混合物配置加入三角瓶中，保持混合物PH為6.0，混勻后用錫紙將瓶口塞住，于123°C條件，滅菌45min，滅菌后將三角瓶降溫至98°C取出，再放入超凈工作臺(tái)中冷卻至60°C以下，制備得搖瓶培養(yǎng)基；制得的培養(yǎng)基需做無(wú)菌檢驗(yàn)，將制得的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至35°C的培養(yǎng)箱中12h,無(wú)菌落長(zhǎng)出可備用；
[0079]E:培養(yǎng)液體初培養(yǎng)菌種
[0080](I)將選取的母體菇種截取0.6克，接種到制備好的斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)，條件:22°C，6天，待斜面菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)，即得到母種A ；
[0081](2)取用母種A，接種到制備好的一次性培養(yǎng)基培養(yǎng)，條件:22°C，7天，待菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)培養(yǎng)皿，即得到母種B;
[0082](3)取用母種B，將母種B外表面的菌絲皮割掉，將下方的接種培養(yǎng)基再次接種到制備好的一次性培養(yǎng)基中培養(yǎng)，條件:22°C，7天，待菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)培養(yǎng)皿后，即得到母種C ；
[0083](4) 一次取用母種C大小為6_2的圓柱形的菌塊4塊，去掉表皮，接種到搖瓶培養(yǎng)基中，之后將搖瓶培養(yǎng)基連同三角瓶一同移到搖床中，20°C條件，轉(zhuǎn)速為120r/min，培養(yǎng)10天，即得液體初培養(yǎng)菌種；
[0084]F:菌種培養(yǎng)桶培養(yǎng)菌種
[0085](I)菌種培養(yǎng)桶的配置，按照質(zhì)量百分比將白糖3.5 %、磷酸二氫鉀0.35%、MgSO4.5H200.06%、消泡劑0.025%, PH為7的軟化過(guò)濾水余量的混合物加入菌種培養(yǎng)桶，保持混合物PH為7，混勻后將菌種培養(yǎng)桶密封并移入菌包滅菌柜中滅菌，100°C保溫60min，123°C滅菌120min，再密閉放置30min，冷卻至98°C打開(kāi)滅菌柜門(mén)，將菌種培養(yǎng)桶移至冷卻室冷卻，冷卻時(shí)菌種培養(yǎng)桶內(nèi)通入0.08mpa無(wú)菌的空氣，菌種培養(yǎng)桶的桶壁用循環(huán)水冷卻，直至菌種培養(yǎng)桶冷卻到20°C ；
[0086](2)將三角瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)好的液體初培養(yǎng)菌種，用自動(dòng)攪拌器攪拌，攪拌器轉(zhuǎn)速5000r/min，攪拌的過(guò)程時(shí)間控制為:a、攪拌:4S，b、停止:2S，c、攪拌:15S，d、停止:2S，e、攪拌:2S，攪拌停止后，在火焰保護(hù)下，由菌種培養(yǎng)桶專(zhuān)用接種口倒入并培養(yǎng)，通入0.0Smpa的無(wú)菌空氣，18 °C，培養(yǎng)6天，在培養(yǎng)過(guò)程中的第三天與第五天，分別需用LB培養(yǎng)基檢查培養(yǎng)測(cè)試其發(fā)育狀況，得金針菇菌種。
[0087]LB培養(yǎng)基的配置，是按照質(zhì)量百分比將LB瓊脂培養(yǎng)基4%，PH為7的蒸餾水余量混合加入三角瓶，保持混合物PH為7，于123°C，滅菌35min，滅菌降溫至98°C取出三角瓶，再放入超凈工作臺(tái)中冷卻至60°C以下，后將三角瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基，倒入一次性培養(yǎng)皿中，每個(gè)倒入15ml，待一次性培養(yǎng)皿降至室溫，即得LB培養(yǎng)基。
[0088]以上所述僅為本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施例，并不限于本發(fā)明，凡在本發(fā)明的范圍內(nèi)，所做的修改，替換等，均應(yīng)包含在本發(fā)明保護(hù)范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種金針菇菌種的生產(chǎn)方法，其特征在于包括以下步驟:選取母體菇種、制備斜面培養(yǎng)基、制備一次性培養(yǎng)基、制備搖瓶培養(yǎng)基、培養(yǎng)液體初培養(yǎng)菌種、菌種培養(yǎng)桶培養(yǎng)菌種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的一種金針菇菌種的生產(chǎn)方法，其特征在于所述具體步驟如下: A:選取母體燕種 選擇六?八成熟的金針菇，于2?4°C條件存放2天，水分減至40?50%，分離出桿部得母體菇種； B:制備斜面培養(yǎng)基 按照質(zhì)量百分比將PDA培養(yǎng)基3.5?4 %、磷酸二氫鉀0.05?0.08 %、MgSO4.5Η200.05?0.08%、蛋白胨0.1?0.15%、ΡΗ6.5?7的蒸餾水余量的混合物加入試管中，混勻后于122?123 °C條件，滅菌20?25min，滅菌后降溫至96?98 °C取出試管，擺成斜面，制得斜面培養(yǎng)基； C:制備一次性培養(yǎng)基 按照質(zhì)量百分比將PDA培養(yǎng)基3.5?4%，PH6.5?7的蒸餾水余量的混合物混合加入三角瓶中混勻，混勻后于122?123 °C條件，滅菌30?35min，滅菌后降溫至96?98 °C取出三角瓶，將三角瓶放入超凈工作臺(tái)中，冷卻至60°C以下，將三角瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基，再倒入一次性培養(yǎng)皿中，待降至室溫，制得一次性培養(yǎng)基； D:制備搖瓶培養(yǎng)基 按照質(zhì)量百分比將白糖2?2.3 %、磷酸二氫鉀0.2?0.23 %, MgSO4.5H200.02?0.023%、蛋白胨0.02?0.023%、PH為6.5?7的蒸餾水余量的混合物配置加入三角瓶中，混勻后用錫紙將瓶口塞住，于122?123°C條件，滅菌40?45min，滅菌后將三角瓶降溫至96?98°C取出，再放入超凈工作臺(tái)中冷卻至60°C以下，制備得搖瓶培養(yǎng)基； E:培養(yǎng)液體初培養(yǎng)菌種 (1)選取的制備好的母體菇種，接種到制備好的斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)，條件:20?22°C，5?6天，待斜面菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)，即得到母種A ； (2)取用母種A，接種到制備好的一次性培養(yǎng)基培養(yǎng)，條件:20?22°C，6?7天，待菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)培養(yǎng)皿，即得到母種B; (3)取用母種B，將母種B外表面的菌絲皮割掉，將下方的接種培養(yǎng)基再次接種到制備好的一次性培養(yǎng)基中培養(yǎng)，條件:20?22°C，6?7天，待菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)培養(yǎng)皿后，即得到母種C ; (4)取用母種C，將母種C菌塊去掉表皮，接種到搖瓶培養(yǎng)基中，之后將搖瓶培養(yǎng)基連同三角瓶一同移到搖床中，18?20°C條件，轉(zhuǎn)速為110-120r/min，培養(yǎng)8?10天，即得液體初培養(yǎng)菌種； F:菌種培養(yǎng)桶培養(yǎng)菌種 (1)菌種培養(yǎng)桶的配置，按照質(zhì)量百分比將白糖3?3.5%、磷酸二氫鉀0.3?0.35%、MgSO4.5Η200.05?0.06%、消泡劑0.02?0.025%、ΡΗ為6.5?7的軟化過(guò)濾水余量的混合物加入菌種培養(yǎng)桶，混勻后將菌種培養(yǎng)桶密封并移入菌包滅菌柜中滅菌，100°C保溫60min，123°C滅菌120min，再密閉放置30min，冷卻至96?98°C打開(kāi)滅菌柜門(mén)，將菌種培養(yǎng)桶移至冷卻室冷卻，冷卻時(shí)菌種培養(yǎng)桶內(nèi)通入0.075?0.08mpa無(wú)菌的空氣，菌種培養(yǎng)桶的桶壁用循環(huán)水冷卻，直至菌種培養(yǎng)桶冷卻到18?20°C ； (2)將三角瓶?jī)?nèi)的液體初培養(yǎng)菌種，用自動(dòng)攪拌器攪拌，攪拌器轉(zhuǎn)速4000?5000r/min,攪拌停止后，在火焰保護(hù)下，由菌種培養(yǎng)桶專(zhuān)用接種口倒入并培養(yǎng)，通入0.075?0.08mpa的無(wú)菌空氣，16?18°C，培養(yǎng)5?6天，得金針菇菌種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金針菇菌種的生產(chǎn)方法，其特征在于所述培養(yǎng)基自動(dòng)攪拌器的攪拌棒為不銹鋼圓柱狀的可拆卸式結(jié)構(gòu)，在攪拌使用前需在滅菌鍋中滅菌處理，滅菌條件為122?123°C，50min，后放入超凈工作臺(tái)冷卻到18?20°C，滅菌期間需用錫紙包裹攪拌棒，待滅菌完成后裝入攪拌器前拆下錫紙包裝，攪拌作業(yè)時(shí)將攪拌棒直接插入三角瓶中進(jìn)行攪拌，攪拌的過(guò)程時(shí)間控制為:a、攪拌:4S，b、停止:2S，c、攪拌:15S，d、停止:2S，e、攪拌:2S后停止。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金針燕菌種的生產(chǎn)方法，其特征在于所述培養(yǎng)液體初培養(yǎng)菌種時(shí)取用母種C, 一次取用母種C的菌塊4?6塊,大小為4?6mm2的圓柱形。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金針菇菌種的生產(chǎn)方法，其特征在于所述制備一次性培養(yǎng)基時(shí)，所使用的一次性培養(yǎng)皿降至室溫步驟:將一次性培養(yǎng)皿上蓋掀開(kāi)，經(jīng)超凈工作臺(tái)的上吹風(fēng)冷卻，待上蓋完全無(wú)水霧時(shí)，將上蓋蓋上，從培養(yǎng)皿的正反兩面觀察目視為透明的，無(wú)任何其他的雜物存在即可。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金針菇菌種的生產(chǎn)方法，其特征在于所述搖瓶培養(yǎng)基接種到菌種培養(yǎng)桶后，在培養(yǎng)過(guò)程中的第三天與第五天，分別需用LB培養(yǎng)基檢查培養(yǎng)測(cè)試其發(fā)育狀況。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種金針燕菌種的生產(chǎn)方法，其特征在于所述LB培養(yǎng)基的配置，是按照質(zhì)量百分比將LB瓊脂培養(yǎng)基3.5?4%，PH為6.5?7的蒸餾水余量混合加入三角瓶，于122?123°C，滅菌30?35min，滅菌降溫至96?98°C取出三角瓶，再放入超凈工作臺(tái)中冷卻至60°C以下，后將三角瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基，倒入一次性培養(yǎng)皿中，待一次性培養(yǎng)皿降至室溫，即得LB培養(yǎng)基。
【文檔編號(hào)】A01G1/04GK104221709SQ201410436538
【公開(kāi)日】2014年12月24日 申請(qǐng)日期:2014年8月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月30日
【發(fā)明者】劉太平 申請(qǐng)人:永州市祥瑞生物科技有限公司