一種柳樹(shù)花粉超低溫保存方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種柳樹(shù)花粉超低溫保存的條件，包括以下步驟：（1)干燥處理；（2)預(yù)凍處理；(3)選擇解凍方法。本發(fā)明所述的柳樹(shù)花粉超低溫保存方法能有效阻止花粉衰老，降低花粉呼吸強(qiáng)度和酶活性，保證花粉生活力，克服柳樹(shù)花粉因雌雄異株花期不遇而造成的雜交困難，柳樹(shù)花粉在液氮超低溫中保存至300d時(shí)，生活力可高達(dá)43%。本發(fā)明所述的柳樹(shù)花粉超低溫保存方法，干燥方法為快速干燥法，且干燥時(shí)間短，也保證了花粉的生活力，有利于保存。且干燥投入成本、預(yù)凍、解凍成本投入也較低。本發(fā)明所述的柳樹(shù)花粉超低溫保存方法簡(jiǎn)單易操作，能有效保證柳樹(shù)花粉進(jìn)行雜交的生活力，在柳樹(shù)繁殖生產(chǎn)上具有重要的實(shí)踐與推廣意義。
【專利說(shuō)明】一種柳樹(shù)花粉超低溫保存方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種植物花粉保存方法，具體是涉及一種柳樹(shù)花粉在超低溫保存的方 法。

【背景技術(shù)】
[0002] 柳樹(shù)屬于楊柳科（Salicaceae)，是柳屬和鉆天柳屬（CXioseflia)的通稱。 平常所說(shuō)的柳樹(shù)(fehj L.)主要指柳屬所包括的所有樹(shù)種。柳樹(shù)屬落葉喬木，種類多，生長(zhǎng) 快，根系發(fā)達(dá)，易繁殖，適應(yīng)性強(qiáng)，是防護(hù)林、水土保持林、風(fēng)景林及用材林的重要組成樹(shù)種， 具有較高的生態(tài)和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
[0003] 花粉作為柳樹(shù)種質(zhì)的形式之一，包含了柳樹(shù)的所有基因類型，具有豐富的遺傳多 樣性，是柳樹(shù)種質(zhì)保存以及雜交育種的重要材料。但柳樹(shù)雌雄異株，花期不遇，且柳樹(shù)花粉 自然條件下壽命短，這給柳樹(shù)種質(zhì)研究及其雜交育種工作帶來(lái)極大的不便，同時(shí)也不利于 柳樹(shù)的遺傳性狀研究。因此，有必要對(duì)柳樹(shù)花粉開(kāi)展相關(guān)研究。雖然柳樹(shù)花粉采集和貯藏 在歐洲柳樹(shù)繁殖中已有應(yīng)用，但對(duì)其提取和貯藏得方法沒(méi)有具體描述。花粉保存研究的目 的在于在不破壞種質(zhì)資源的前提下保持花粉生活力，延長(zhǎng)其受精能力，并以此來(lái)克服雜交 育種中的時(shí)間和空間的限制，提高育種效率，為地區(qū)間乃至國(guó)際間的種質(zhì)交換提供方便；同 時(shí)可以避免病蟲(chóng)害的傳播。例如柳樹(shù)雌雄異株，且雌雄開(kāi)花時(shí)間不相同，自然育種造成花期 不遇，為了克服這一難題，其花粉的保存便具有現(xiàn)實(shí)的必要性。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種柳樹(shù)花粉超低溫度保存方 法。
[0005] 本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的：一種柳樹(shù)花粉超低溫保存方法，包括如下 步驟： (1)干燥：將柳樹(shù)花粉與干燥劑放入干燥器中干燥2 ~ 4h; (2 )冷凍：柳樹(shù)花粉經(jīng)步驟（1)處理后，投入液氮中保存； (3)解凍：柳樹(shù)花粉經(jīng)步驟（2)液氮保存后，于4?37°C解凍。
[0006] 進(jìn)一步，步驟（1)中所述干燥劑為變色硅膠，干燥劑與柳樹(shù)花粉質(zhì)量比為500 :1 ; 干燥時(shí)間為2?4h。
[0007] 步驟（2)將經(jīng)干燥處理的柳樹(shù)花粉于4°C冷藏lh后，再轉(zhuǎn)入_25°C冷凍2h后，置 于-70°C冷凍24h后，再投入液氮中保存。
[0008] 有益效果： 1、采用本發(fā)明所述的柳樹(shù)花粉超低溫保存方法能有效阻止花粉衰老，降低花粉呼吸強(qiáng) 度和酶活性，保證花粉生活力，克服柳樹(shù)花粉因雌雄異株花期不遇而造成的雜交困難，柳樹(shù) 花粉在液氮超低溫中保存至300d時(shí)，生活力可高達(dá)43%。
[0009] 2、采用本發(fā)明所述的柳樹(shù)花粉超低溫保存方法，操作簡(jiǎn)單，易進(jìn)行。
[0010] 3、采用本發(fā)明所述的柳樹(shù)花粉超低溫保存方法，干燥方法為快速干燥法，干燥時(shí) 間短，也保證了花粉的生活力，有利于保存。且干燥、預(yù)凍、解凍成本投入也較低。
[0011] 綜上所述：本發(fā)明所述的柳樹(shù)花粉超低溫保存方法簡(jiǎn)單易操作，能有效保證柳樹(shù) 花粉進(jìn)行雜交的生活力，在柳樹(shù)繁殖生產(chǎn)上具有重要的實(shí)踐與推廣意義。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0012] 圖1為解凍方式對(duì)柳樹(shù)花粉萌發(fā)率的影響圖；圖中，橫坐標(biāo)中CK代表不解凍，1 代表自來(lái)水沖洗解凍、2代表4°C過(guò)渡解凍、3代表25 °C恒溫解凍、4代表37 °C水浴解凍。
[0013] P63表示簸箕柳；P102表示銀柳；2333表示蒿柳X毛枝柳；2383表示簸箕柳X 蒿柳。
[0014] 圖2為柳樹(shù)花粉超低溫保存；圖中，P63表示簸箕柳；P102表示銀柳；2333表示蒿 柳X毛枝柳；2383表示簸箕柳X蒿柳。

【具體實(shí)施方式】
[0015] 下面結(jié)合具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。
[0016] 實(shí)施例1 : 一種柳樹(shù)花粉超低溫保存方法，包括如下步驟： 步驟（1)干燥處理：將500g變色硅膠放于干燥器中，離變色硅膠2cm處放一隔板，再將 收集的lg銀柳新鮮花粉花粉置于隔板上，干燥4h ; 步驟（2)冷凍處理：將干燥的銀柳花粉，經(jīng)4°C (lh) - -25°C (2h) - -70°C (24h)預(yù) 凍后，投入液氣中保存； 步驟（3)解凍處理：銀柳花粉液氮保存300天后，分別以自來(lái)水沖洗解凍、4°C恒溫解 凍、25°C恒溫解凍、37°C水浴解凍各解凍15min，測(cè)花粉生活力，確定銀柳的最佳解凍方法為 25°C恒溫解凍15min。
[0017] 表1銀柳保存300天后不同解凍方式解凍后萌發(fā)率

【權(quán)利要求】
1. 一種柳樹(shù)花粉超低溫保存方法，其特征是，包括如下步驟： (1) 干燥：將柳樹(shù)花粉與干燥劑放入干燥器中干燥2 ~4h ; (2) 冷凍：柳樹(shù)花粉經(jīng)步驟（1)處理后，投入液氮中保存； (3) 解凍：柳樹(shù)花粉經(jīng)步驟（2)液氮保存后，于4?37°C解凍。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的柳樹(shù)花粉超低溫保存方法，其特征在于：步驟（1)中所述干燥 劑為變色硅膠，干燥劑與柳樹(shù)花粉質(zhì)量比為500 :1。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述柳樹(shù)花粉超低溫保存方法，其特征在于：步驟（1)中所述干燥時(shí) 間為2?4h。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述柳樹(shù)花粉超低溫保存方法，其特征在于：步驟（2)將經(jīng)干燥處理 的柳樹(shù)花粉于4°C冷藏lh后，再轉(zhuǎn)入-25°C冷凍2h后，置于-70°C冷凍24h后，再投入液氮 中保存。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述柳樹(shù)花粉超低溫保存方法，其特征在于：所述步驟（3)中的解凍 方法為用自來(lái)水沖洗解凍15min，4°C恒溫解凍15min，25°C恒溫解凍15min，37°C水浴解凍 15min這四種方法中的一種或幾種。
【文檔編號(hào)】A01N3/00GK104206378SQ201410489958
【公開(kāi)日】2014年12月17日 申請(qǐng)日期:2014年9月23日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月23日
【發(fā)明者】何旭東, 姚伶, 何開(kāi)躍, 王保松, 周潔, 張玨, 施士爭(zhēng) 申請(qǐng)人:江蘇省林業(yè)科學(xué)研究院