從山核桃外果皮中超臨界分離純化4,8-dht的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了從山核桃外果皮中超臨界分離純化4,8-DHT的方法，通過超臨界萃取釜萃取，得到萃取物，萃取物用甲醇吸收，硅膠柱層析，用石油醚和乙酸乙酯混合溶劑梯度洗脫，每柱體積收集一瓶流份，共收集10瓶流份，第4瓶流份減壓濃縮，用乙酸乙酯結(jié)晶，得4,8-二羥基-1-四氫萘酮結(jié)晶化合物，該4,8-DHT為1:1外消旋體，雜質(zhì)少，純度為99.82%，提取率達(dá)到60%以上，該4,8-DHT外消旋體具有抑制植物種子萌發(fā)和幼苗生長的作用。
【專利說明】從山核桃外果皮中超臨界分離純化4, 8-DHT的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及4，8-二羥基-1-四氫萘酮提取，具體涉及從山核桃外果皮中超臨界分離純化4，8- 二羥基-1-四氫萘酮的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]4，8_ 二輕基-1-四氫萘酮(4，8-DHT),化學(xué)名 4，8-dihydroxy-l-tetralone,無色細(xì)簇針狀結(jié)晶，其中4位與羥基相連的碳為一個手性碳。4，8-DHT的左旋對映體(-)被稱為reg1lone,右旋對映體(+)被稱為isosclerone。Reg1lone最早是從青核桃中鑒定出的，可用于治療皮膚瘙癢及痛等病癥。Isosclerone最早是從sclerotium中分離鑒定出，后來從一些真菌中也分離出了該化合物，它能引起葡萄灰色斑點(diǎn)病。山核桃外果皮中也含有4，8-DHT，是一個1:1外消旋體，熔點(diǎn)366-368K，溶于水、乙醇、丙酮及氯仿，[a]2°D=±0° (cl.3, CH2C12)。目前公開了對山核桃外果皮中含有的4，8-DHT的鑒定，如用高效液相色譜法鑒定，一般用甲醇浸泡、回流提取山核桃外果皮提取物，再用色譜柱鑒定，4，8-DHT含量約0.036%左右。但未見從山核桃外果皮中分離純化4，8- 二羥基-1-四氫萘酮報道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種從山核桃外果皮中超臨界分離純化4，8-DHT的方法，該方法雜質(zhì)少，純度高，提取效率較高。
[0004]本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為:從山核桃外果皮中超臨界分離純化4，8-DHT的方法，步驟如下:
(1)將風(fēng)干的山核桃外果皮粉碎，過45-60目篩，得到山核桃外果皮粉末；
(2)將山核桃外果皮粉末置于超臨界萃取釜中，在萃取溫度為25-35°C，C02流體壓力為20-40MPa，夾帶劑乙醇流速0.15-0.25 ml/min，萃取時間2 h，得到萃取物；
(3)萃取物用溶解量甲醇吸收為吸收液，吸收液用200-300目硅膠柱層析，依次用體積比2:1，1:1的石油醚與乙酸乙酯混合溶劑梯度洗脫，體積比2:1，1:1的石油醚與乙酸乙酯混合溶劑的用量都為5柱體積，流速5mL/min，每柱體積收集一瓶流份，共收集10瓶流份，將第4瓶流份減壓濃縮，用乙酸乙酯結(jié)晶，得到4，8- 二羥基-1-四氫萘酮無色晶體。
[0005]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于從山核桃外果皮中超臨界分離純化4，8-DHT的方法，通過超臨界萃取釜萃取，得到萃取物，萃取物用甲醇吸收，硅膠柱層析，用石油醚和乙酸乙酯混合溶劑梯度洗脫，每柱體積收集一瓶流份，共收集10瓶流份，第4瓶流份減壓濃縮，用乙酸乙酯結(jié)晶，得4，8-二羥基-1-四氫萘酮結(jié)晶化合物，該4，8-DHT為1:1外消旋體，雜質(zhì)少，純度為99.82%，提取率達(dá)到60%以上，該4，8-DHT外消旋體具有抑制植物種子萌發(fā)和幼苗生長的作用。

【具體實(shí)施方式】
[0006]以下結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。
[0007]實(shí)施例1
一種從山核桃外果皮中提取4，8-二羥基-1-四氫萘酮的方法，先將風(fēng)干的山核桃外果皮，粉碎，過45目篩為原料,稱重100g,裝入超臨界萃取爸中；萃取溫度為25°C, C02流體壓力為30MPa，夾帶劑乙醇流速0.15 ml/min，萃取時間2 h ;萃取物用約25_ml甲醇吸收為吸收液，吸收液用200-300目硅膠柱層析，石油醚與乙酸乙酯混合溶劑(2:1，1:1)梯度洗脫，2:1石油醚和乙酸乙酯混合溶劑、1:1石油醚和乙酸乙酯混合溶劑用量都為5柱床體積，流速5mL/min，每柱體積收集一瓶，共收集10個流份，第4流份減壓濃縮，殘留物乙酸乙酯重結(jié)晶，得一無色小塊狀晶體22.5mg，測定為4，8-二羥基-1-四氫萘酮晶體，采用高效液相色譜法測定，得到純度達(dá)到99.82%。
[0008]實(shí)施例2
與實(shí)施例1基本相同，所不同的只是萃取溫度為30°C，C02流體壓力為20MPa，夾帶劑乙醇流速0.20 ml/min,，無色小塊狀晶體23.7mg。
[0009]實(shí)施例3
與實(shí)施例1基本相同，所不同的只是萃取溫度為35°C，C02流體壓力為40MPa，夾帶劑乙醇流速0.25 ml/min,無色小塊狀晶體24.9mg。
[0010]實(shí)施例4
將實(shí)施例1的4，8- 二羥基-1-四氫萘酮配置成0.lmM、0.5mM的處理液作對萵苣、蘿卜、黃瓜、洋蔥、小麥種子萌發(fā)抑制實(shí)驗，取測試物種種子各100粒，均勻擺放在鋪有兩層濾紙、大小15X20 cm發(fā)芽盒，加10 ml不同濃度處理液(對照組為去離子水)，每個處理設(shè)置3個重復(fù)。培養(yǎng)條件為光周期25°C，12h ;暗周期15°C，12h。種子萌發(fā)以胚根突破種皮為標(biāo)準(zhǔn)，第四天和第七天記錄萵苣種子發(fā)芽數(shù)，第四天和第十天記錄蘿卜種子發(fā)芽數(shù)，第四天和第八天記錄黃瓜種子和小麥種子發(fā)芽數(shù)，第六天和第十二天記錄洋蔥種子發(fā)芽數(shù)。最后結(jié)果:0.1mM 4，8-DHT處理可以降低萵苣種子發(fā)芽數(shù)50%左右、小麥種子發(fā)芽數(shù)10%以上，對其它植物種有降低作用但效應(yīng)不顯著(p〈0.05) ；0.5mM 4，8-DHT處理都可以顯著降低測試上述植物種子發(fā)芽數(shù)，其中萵苣發(fā)芽數(shù)降低90%以上，蘿卜發(fā)芽數(shù)降低60%左右，黃瓜發(fā)芽數(shù)降低10%以上，洋蔥發(fā)芽數(shù)降低80%左右，小麥發(fā)芽數(shù)降低65%左右(p〈0.05)。
[0011]實(shí)施例5
將實(shí)施例1的4，8- 二羥基-1-四氫萘酮配置成0.lmM、0.5mM的處理液作對萵苣、蘿卜、黃瓜、洋蔥、小麥幼苗生長的抑制實(shí)驗，取胚根突破種皮種子各100粒，均勻擺放在鋪有兩層濾紙、大小15 X 20cm發(fā)芽盒，加入10 ml不同濃度處理液(對照組為去離子水)，每個處理設(shè)置3個重復(fù)。培養(yǎng)條件為光周期25°C，12h ;暗周期15°C，12h。每隔一天從發(fā)芽盒中隨機(jī)取5粒種子測其胚根、胚芽長度及鮮重，共測6次。0.1mM和0.5 mM 4，8-DHT處理可以顯著降低測試種胚根生長(p〈0.05)。0.1mM 4，8-DHT處理可以抑制萵苣胚芽生長45%左右，蘿卜胚芽生長15%左右，黃瓜胚芽生長16%左右，洋蔥胚芽生長30%左右，小麥胚芽生長10%左右(p〈0.05) ；0.5 mM 4，8-DHT處理可以抑制萵苣胚芽生長85%左右，蘿卜胚芽生長80%左右，黃瓜胚芽生長90%左右，洋蔥胚芽生長70%左右，小麥胚芽生長70%左右(p〈0.05)。
【權(quán)利要求】
1.從山核桃外果皮中超臨界分離純化4，8-DHT的方法，其特征在于步驟如下: (1)將風(fēng)干的山核桃外果皮粉碎，過45-60目篩，得到山核桃外果皮粉末； (2)將山核桃外果皮粉末置于超臨界萃取釜中，在萃取溫度為25-35°C，C02流體壓力為20-40MPa，夾帶劑乙醇流速0.15-0.25 ml/min，萃取時間2 h，得到萃取物； (3)萃取物用溶解量甲醇吸收為吸收液，吸收液用200-300目硅膠柱層析，依次用體積比2:1，1:1的石油醚與乙酸乙酯混合溶劑梯度洗脫，體積比2:1，1:1的石油醚與乙酸乙酯混合溶劑的用量都為5柱體積，流速5mL/min，每柱體積收集一瓶流份，共收集10瓶流份，將第4瓶流份減壓濃縮，用乙酸乙酯結(jié)晶，得到4，8- 二羥基-1-四氫萘酮無色晶體。
【文檔編號】A01P21/00GK104292093SQ201410499254
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2014年9月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月26日
【發(fā)明者】王強(qiáng) 申請人:浙江大學(xué)寧波理工學(xué)院