一種雞用飼料添加劑產(chǎn)品的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種雞用飼料添加劑產(chǎn)品,屬于飼料領(lǐng)域,尤其涉及飼料添加劑,其重量份數(shù)組成如下:水蘇糖1-2,生姜1-3,女貞子提取物1-4,枯草芽孢桿菌菌粉10-15,植物乳桿菌菌粉15-25,靈芝菌固體發(fā)酵培養(yǎng)物5-10,所述飼料添加劑產(chǎn)品制備方法為:將上述各原料粉碎混合后通過造粒機(jī)制為顆粒,本發(fā)明產(chǎn)品可以有效降低抗生素類藥物在飼養(yǎng)動物中的使用量,提高動物肉制品的安全性,提高動物的飼料利用效率,增強(qiáng)動物的免疫力,提高飼養(yǎng)效益。CGMCC NO940520140702CGMCC No601220120416
【專利說明】-種雞用飼料添加劑產(chǎn)品
【技術(shù)領(lǐng)域】:
[0001] 本發(fā)明屬于飼料領(lǐng)域,尤其涉及飼料添加劑。
【背景技術(shù)】:
[0002] 源自自然界的一些天然物質(zhì)不僅具有良好的營養(yǎng)特性,同時還具有抗病毒、消炎、 抗氧化、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能等作用,具有廣闊的應(yīng)用前景。
[0003] 生姜的主要成分是黃酮類化合物、酚類、內(nèi)酯、香豆精類、醛酮,少量的鐵、鈣、硅、 錳、鉛、鎳、鋁、銅、鋅等微量元素及維生素B族、維生素A,以及多種氨基酸、酶、多糖類及豐 富的阿散酸等。生姜還是國內(nèi)外專家公認(rèn)的"天然抗生物質(zhì)",因為它不僅具有防御外來的 入侵者及感染病原菌擴(kuò)散的作用,還具有抗病毒、消炎、抗氧化、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能等作用。
[0004] 女貞子又稱女貞實、冬青子、白蠟樹子、鼠梓子。外果皮薄,中果皮較松軟,易剝離, 內(nèi)果皮木質(zhì),黃棕色,具縱棱,破開后種子通常為1粒,腎形,紫黑色,油性。無臭,味甘、微苦 澀。女貞子果實含齊墩果酸(OleanoliC acid)、甘露醇、葡萄糖、棕櫚酸、硬脂酸、油酸及亞 麻酸。果皮含熊果酸(Ursolic acid)、齊墩果酸、乙酰齊墩果酸(Acetyloleanolic acid)。 種子含脂肪油14. 9%,油中棕櫚酸與硬脂酸為19. 5%、油酸及亞麻酸等為80. 5%。女貞子 中尚含銅、鋅、鐵、猛等微量元素。
[0005] 女貞子補(bǔ)肝腎陰,烏須明目,現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究認(rèn)為女貞子可以抑制幽門螺桿菌的作 用可以治療胃病,還具有抑制嘌呤異常代謝用于痛風(fēng)和高尿酸血癥的治療。用于肝腎陰虛, 腰酸耳鳴,須發(fā)早白;眼目昏暗,視物昏暗;陰虛發(fā)熱,胃病及痛風(fēng)和和高尿酸血癥。女貞子 是一味臨床常用中草藥,近幾年已經(jīng)開始研究其作為飼料添加劑在畜禽生產(chǎn)中的作用。
[0006] 靈芝[Ganoderema lucidum (Leyss ex Fr. ) karst],又稱靈芝草,屬擔(dān)子菌亞門、 多孔菌目、靈芝科、靈芝屬。歷代的醫(yī)典把靈芝歸位于"上上藥",其排位在人參之前。《神農(nóng) 本草經(jīng)》、《本草綱目》記載,靈芝可明目、補(bǔ)肝氣、安神、益精、益心氣、益脾氣、益肺氣、益腎 氣、通九竅、耳聰、目明、利關(guān)節(jié)、利尿、養(yǎng)顏美容,是上好的滋補(bǔ)佳品。靈芝多糖能促進(jìn)蛋白 質(zhì)、核酸的合成,對血清、肝臟及骨髓細(xì)胞蛋白質(zhì)或核酸的更新、合成有促進(jìn)作用,它是靈 芝扶正固本的主要有效成分之一。靈芝多糖主要存在于靈芝真菌子實體、菌核、菌絲體或發(fā) 酵液中;存在于靈芝中的靈芝酸有止痛、鎮(zhèn)靜、抑制組織胺釋放、解毒、保肝、毒殺腫瘤細(xì)胞 的功用,是靈芝的主要有效成分之一。
[0007] -種復(fù)合飼料添加劑產(chǎn)品,申請?zhí)枮?01210182772. 2,該專利公開了一種復(fù)合飼 料添加劑產(chǎn)品,組成如下:低聚果糖10-15%,大豆多肽10-20%,女貞子萃取物10-25%, 枯草芽孢桿菌凍干菌粉,靈芝菌固體發(fā)酵培養(yǎng)物;枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)為 CGMCC 6012,上述比例為質(zhì)量百分比;本發(fā)明產(chǎn)品可以有效降低抗生素類藥物在飼養(yǎng)動物 中的使用量,提高動物肉制品的安全性,提高動物的飼料利用效率,增強(qiáng)動物的免疫力,提 1?詞養(yǎng)效益。
[0008] 如何有效開發(fā)以天然植物或真菌獲得綠色飼料添加劑產(chǎn)品對飼料添加劑行業(yè)發(fā) 展具有重要意義。
【發(fā)明內(nèi)容】
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[0009] 本發(fā)明提供一種雞用飼料添加劑產(chǎn)品;重量份數(shù)組成如下:
[0010] 水蘇糖1-2,生姜1-3,女貞子提取物1-4,枯草芽孢桿菌菌粉10-15,植物乳桿菌菌 粉15-25,靈芝菌固體發(fā)酵培養(yǎng)物5-10。
[0011] 所述飼料添加劑產(chǎn)品制備方法為:將上述各原料粉碎混合后通過造粒機(jī)制為顆 粒。
[0012] 枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)為CGMCC6012。植物乳桿菌為CGMCC No.9405。
[0013] 本發(fā)明中植物乳桿菌CGMCC No. 9405菌株特點如下:在顯微鏡下觀察,該菌株為 短桿狀,革蘭氏染色呈陽性,無鞭毛,不產(chǎn)芽孢;在固體培養(yǎng)基上,該菌菌落為白色,表面光 滑,致密,形態(tài)為圓形,邊緣較整齊。
[0014] 理化特征為:過氧化氫酶(-),明膠液化(-),吲哚實驗(+),運(yùn)動性(-),發(fā)酵產(chǎn)氣 (-),亞硝酸鹽還原(-),發(fā)酵產(chǎn)氣(-),產(chǎn)硫化氫氣體(-),pH4. OMRS培養(yǎng)基中生長(+)。
[0015] 本發(fā)明植物乳桿菌采用下述流程進(jìn)行選育:
[0016] 原始出發(fā)菌種一試管活化一硫酸二乙酯(DES)誘變一亞硝基胍(NTG)誘變一等離 子體誘變一平板初篩一搖瓶復(fù)篩一傳代穩(wěn)定性試驗。
[0017] 本發(fā)明所采用的出發(fā)菌株在MRS葡萄糖培養(yǎng)基中,其乳酸的生產(chǎn)速率為1.5g/L/ d,當(dāng)培養(yǎng)基pH為3. 5時幾乎停止生長,對亞硝酸鈉的分解速率為0. 34mg/h/kg白菜。出發(fā) 菌株為李政采集于寧夏鹽池縣育肥羊場的青儲飼料,采集時間2013年9月15日。
[0018] 為了提高其乳酸生產(chǎn)速率、耐酸能力和亞硝酸鹽的分解速率,依次采用DES和NTG 技術(shù)對該菌種進(jìn)行誘變,誘變后菌株采用MRS碳酸鈣平板進(jìn)行初篩,然后采用500mL搖瓶發(fā) 酵,生物傳感器分析儀對高產(chǎn)菌進(jìn)行復(fù)篩,選育優(yōu)良的植物乳桿菌菌株,然后做傳代實驗, 評價其遺傳穩(wěn)定性。
[0019] 植物乳桿菌tlj-2014遺傳穩(wěn)定性結(jié)果表明:經(jīng)過連續(xù)傳代十次,各項性能指標(biāo)都 比較穩(wěn)定,遺傳性較好,性狀沒有回復(fù),因此把植物乳桿菌tlj-2014作為選育得到的目的 菌株。
[0020] 經(jīng)驗證發(fā)現(xiàn):該誘變菌株的乳酸生產(chǎn)速率可以達(dá)到35g/L/d,該菌株經(jīng)過71小時 發(fā)酵后乳酸濃度達(dá)到95g/L;能夠在pH為1.80的條件下存活。降解亞硝酸鹽速度快,分解 能力達(dá)到9. 8mg/h/kg(自然發(fā)酵過程亞硝酸鹽積累的速率大約為I. lmg/h/kg),能夠耐1% 膽鹽。
[0021] 因此采用該菌種生產(chǎn)泡菜,整個發(fā)酵過程中亞硝酸鹽濃度在5mg/kg以下,遠(yuǎn)低于 國家標(biāo)準(zhǔn)GB2714-2003中規(guī)定的含量(20mg/kg)。
[0022] 植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum) tl j-2014,該菌株已于 2014 年 7 月 2 日 保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC,地址為:中國北京市 朝陽區(qū)北辰西路1號院3號,郵編:100101),保藏號為CGMCC NO. 9405。
[0023] I. DES誘變選育
[0024] 1)在超凈臺上取試管斜面上的植物乳桿菌L 一環(huán),接入裝有50mL培養(yǎng)基MRS (無 瓊脂,葡萄糖20g/L)培養(yǎng)基的250mL三角瓶中,200rpm,37°C培養(yǎng)12h左右,使菌體處于對 數(shù)生長前期。
[0025] 2)取5mL菌液,5000rpm離心IOmin收集菌體,用生理鹽水洗滌2次。
[0026] 3)用pH7. 0磷酸緩沖液稀釋成IO7個/mL菌懸液。
[0027] 4)取32mL pH7. 0的磷酸鉀緩沖液、8mL菌懸液、0. 4mL DES在預(yù)先放入轉(zhuǎn)子的 150mL三角瓶中充分混合,使DES最終濃度為1 % (v/v)。
[0028] 5)在 37°C搖床中 150rpm 反應(yīng) 30min,取 ImL 混合液,加入 0? 5mL 25% Na2S2O3 溶 液中止反應(yīng)。
[0029] 6)適當(dāng)稀釋,取最后稀釋度的菌液0.2mL,涂布于碳酸鈣篩選培養(yǎng)基(含100g/L 葡萄糖的碳酸鈣MRS培養(yǎng)基)平皿中。在37°C培養(yǎng)2?3天后,采用影印法將該篩選平板 的菌株轉(zhuǎn)印到PH為1. 5、1. 8和2. 0的LPHMRS培養(yǎng)基(低pH值改性MRS培養(yǎng)基)上和亞 硝酸鈉篩選培養(yǎng)基(單一氮源為2g/L亞硝酸鈉的改性MRS篩選培養(yǎng)基)上。
[0030] 7)在37°C培養(yǎng)2?3天后,挑選菌落較大,分別能在LPHMRS培養(yǎng)基、亞硝酸鈉篩 選培養(yǎng)基上生長并且在碳酸鈣篩選培養(yǎng)基上。經(jīng)初步篩選,挑取出的菌落命名為植物乳桿 菌L1。
[0031] 2.亞硝基胍誘變
[0032] 1)在超凈臺上取試管斜面上的植物乳桿菌Ll 一環(huán),接入裝有50mL培養(yǎng)基MRS (無 瓊脂)培養(yǎng)基(葡萄糖濃度為60g/L)的250mL三角瓶中,200rpm,37°C培養(yǎng)ia左右,使菌 體處于對數(shù)生長前期。
[0033] 2)取5mL菌液5000rpm離心IOmin收集菌體,用生理鹽水洗滌2次。
[0034] 3)用pH6. 0磷酸緩沖液稀釋成IO7個/mL菌懸液。
[0035] 4)取IOmL菌懸液轉(zhuǎn)移至IOOmL三角瓶中,加入IOmg的NTG,配制成終濃度為IOmg/ mL的NTG溶液,并加入4-5滴丙酮,以利于NTG溶解。
[0036] 5)在37°C下200rpm振蕩反應(yīng)30min,5000rpm離心IOmin收集菌體,用無菌生理 鹽水洗滌數(shù)次,中止反應(yīng)。
[0037] 6)適當(dāng)稀釋,取最后稀釋度的菌液0.2mL,涂布于碳酸鈣篩選培養(yǎng)基(含100g/L 葡萄糖的碳酸鈣MRS培養(yǎng)基)平皿中。在37°C培養(yǎng)2?3天后,采用影印法將該篩選平板 的菌株轉(zhuǎn)印到PH為1. 5、1. 8和2. 0的LPHMRS培養(yǎng)基(低pH值改性MRS培養(yǎng)基)上和亞 硝酸鈉篩選培養(yǎng)基(單一氮源為2g/L亞硝酸鈉的改性MRS篩選培養(yǎng)基)上。
[0038] 7)挑選菌株方法:挑選菌落較大,分別能在LPHMRS培養(yǎng)基、亞硝酸鈉篩選培養(yǎng)基 上生長并且在碳酸鈣篩選培養(yǎng)基上。經(jīng)初步篩選,挑取100支符合以上條件的菌落。
[0039] 3?搖瓶復(fù)篩
[0040] 1)在超凈臺上分別取各試管斜面上的植物乳桿菌一環(huán),接入裝有50mL培養(yǎng)基 MRS (無瓊脂)培養(yǎng)基(葡萄糖濃度為100g/L)的250mL三角瓶中,200rpm,37°C培養(yǎng)15h左 右,使菌體處于對數(shù)生長中期。
[0041] 2)分別取5mL菌液,接入裝有50mL碳酸鈣篩選液體培養(yǎng)基(含250g/L葡萄糖的 碳酸鈣MRS培養(yǎng)基)平皿中、pH為L 5、L 8和2. 0的LPHMRS液體培養(yǎng)基(低pH值改性MRS 培養(yǎng)基)和亞硝酸鈉液體篩選培養(yǎng)基(單一氮源為2g/L亞硝酸鈉的改性MRS篩選培養(yǎng)基) 上(注:采用250mL三角瓶)。200rpm,37°C培養(yǎng)3-4天,每天分別檢測碳酸鈣篩選液體培 養(yǎng)基中L-乳酸產(chǎn)生速率、LPHMRS液體培養(yǎng)基中的生物量和亞硝酸鈉液體篩選培養(yǎng)基中亞 硝酸鹽的消耗速率。發(fā)酵結(jié)束后,比較100株菌種的碳酸鈣篩選液體培養(yǎng)基中L-乳酸產(chǎn)生 速率、LPHMRS液體培養(yǎng)基中的生物量和亞硝酸鈉液體篩選培養(yǎng)基中亞硝酸鹽的消耗速率。
[0042] 3)選擇兼具高L-乳酸產(chǎn)生速率、耐受低pH (該菌種僅能在最低為pHl. 8的培養(yǎng)基 中生長)和亞硝酸鹽的消耗速率高的菌株,將其命名為L2菌。
[0043] 4?遺傳穩(wěn)定性試驗
[0044] 將L2菌在斜面上連續(xù)十次傳代,并用搖瓶復(fù)篩的方法檢測每次傳代后的發(fā)酵 情況。實驗發(fā)現(xiàn),在斜面上連續(xù)十次傳代,該菌種性狀沒有明顯變化,各項性能指標(biāo)都正 常,說明該菌種的遺傳穩(wěn)定性較強(qiáng)。菌株命名為植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum) tlj-2014。
[0045] 5. 5L發(fā)酵罐試驗
[0046] 1)取斜面上的植物乳桿菌L2 -環(huán),接入裝有50mL培養(yǎng)基MRS (無瓊脂)(葡萄糖 濃度為150g/L)培養(yǎng)基的250mL三角瓶中,200rpm,37°C培養(yǎng)12h左右,使菌體處于對數(shù)生 長中期。
[0047] 2)將對數(shù)期的菌種接入裝有3L MRS液體培養(yǎng)基(初始葡萄糖為150g/L)的5L發(fā) 酵罐中。接種量為10%,37°C下IOOrpm培養(yǎng)8小時,對數(shù)前期溶氧控制10% (通氣0.5L/ min),后期厭氧培養(yǎng)63小時。發(fā)酵結(jié)束后,植物乳桿菌L2的乳酸產(chǎn)量達(dá)到95g/L。這樣的 產(chǎn)乳酸速率利于泡菜的快速發(fā)酵。
[0048] 3)將對數(shù)期的菌種接入裝有3L pH為1. 8的LPHMRS液體培養(yǎng)基(初始葡萄糖為 5(^/1)的51發(fā)酵罐中。接種量為10%,371:下100印111培養(yǎng)8小時,對數(shù)前期溶氧控制10% (通氣0. 5L/min),后期厭氧,整個過程用0. 5mol/L的氫氧化鈉將發(fā)酵液pH控制在1. 8,總 培養(yǎng)時間為48小時。發(fā)酵結(jié)束后,檢測植物乳桿菌L2的生物量為2. 5g/L,說明植物乳桿菌 L2能夠在pHl. 8的環(huán)境中生存。
[0049] 4)將對數(shù)期的菌種接入裝有3L亞硝酸鈉液體篩選培養(yǎng)基(單一氮源為2g/L亞 硝酸鈉的改性MRS篩選培養(yǎng)基)的5L發(fā)酵罐中。接種量為10%,37°C下IOOrpm培養(yǎng)8小 時,對數(shù)前期溶氧控制10% (通氣〇.5L/min),后期厭氧,發(fā)酵過程根據(jù)亞硝酸鹽的消耗速 率流加20g/L的亞硝酸鈉溶液,培養(yǎng)2-3天。發(fā)酵結(jié)束后,計算發(fā)酵過程植物乳桿菌L2對 亞硝酸鈉的降解速率。結(jié)果發(fā)現(xiàn):在該條件下,L2對亞硝酸鈉的降解速率可以達(dá)到563mg/ h/L〇
[0050] 5)將對數(shù)期的菌種IOmL接入裝有2kg預(yù)處理過的白菜中,按照傳統(tǒng)泡菜方法進(jìn)行 加工,每12小時測定泡菜中的亞硝酸鹽含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn),在整個發(fā)酵過程中,L2菌對亞硝 酸鈉的分解速率為9. 8mg/h/kg白菜。泡菜中的亞硝酸鈉含量始終低于5mg/kg,遠(yuǎn)低于國家 標(biāo)準(zhǔn)GB2714-2003中規(guī)定的含量(20mg/kg)。
[0051] 靈芝菌固體發(fā)酵培養(yǎng)物制備方法如下:
[0052] 斜面菌種活化培養(yǎng):將保藏的靈芝斜面菌種轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基上,22_28°C培養(yǎng) 96-120小時左右,至菌絲長滿斜面即可;最佳培養(yǎng)溫度25°C。
[0053] 1.液體一級種子培養(yǎng):將上述靈芝斜面菌種挑取一塊接入裝有100毫升培養(yǎng)基 的500毫升搖瓶中進(jìn)行一級種子培養(yǎng),培養(yǎng)條件:旋轉(zhuǎn)式搖床80-180轉(zhuǎn)/分,22-28°C培養(yǎng) 96-130小時左右;旋轉(zhuǎn)式搖床150轉(zhuǎn)/分為宜,培養(yǎng)溫度以25°C為宜。
[0054] 2.液體二級種子培養(yǎng):將一級搖瓶種子以5-20 %接種量接入裝有100毫升培養(yǎng)基 的500毫升搖瓶中進(jìn)行二級種子培養(yǎng),培養(yǎng)條件:旋轉(zhuǎn)式搖床80-180轉(zhuǎn)/分,22-28°C培養(yǎng) 96-130小時左右;合適接種量為10%,旋轉(zhuǎn)式搖床150轉(zhuǎn)/分為宜,培養(yǎng)溫度以25°C為宜。
[0055] 3.固體發(fā)酵培養(yǎng):將二級搖瓶種子以5-10%接種量接入裝有滅菌后固體發(fā)酵培 養(yǎng)基的500L固體發(fā)酵罐中,培養(yǎng)條件:裝料量50 %,培養(yǎng)溫度20-27 °C,濕度75-90 %,通風(fēng) 量0. 3-1. 0 (V/V),培養(yǎng)時間15-40天。每隔3-10天開啟攪拌10分鐘。采用SGF固體發(fā)酵 罐。
[0056] 4.發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束,選擇流化床等多種干燥方法,將物料干燥到水分含量在7 %以 下。對固體發(fā)酵物料進(jìn)行粉碎。
[0057] 本發(fā)明固體發(fā)酵培養(yǎng)基的碳源主要選擇麩皮、葡萄糖、蔗糖、淀粉、玉米粉、玉米芯 (粉碎后)等常用原料,氮源可以選擇花生餅粉、蛋白胨、脫脂大豆蛋白粉、豆餅粉、酵母粉 等;需要添加的無機(jī)鹽有磷酸二氫鉀,硫酸鎂。
[0058] 所述女貞子提取物制備方法如下:
[0059] 女貞子粉碎,過40-50目篩后,添加女貞子3-6倍重量無水乙醇浸漬提取,控制溫 度為60_65°C 3-4小時,提取液濃縮、干燥得到乙醇提取物;乙醇提取后的女貞子殘渣中添 加75-85°C熱水,熱水添加量為女貞子殘渣重量的2-4倍,處理時間30-50分鐘,連續(xù)提取 2-3次,將提取液真空濃縮后噴霧干燥,得到熱水提取物;將上述乙醇提取物和熱水提取物 合并粉碎,過60目篩,即得女貞子提取物。
[0060] 所述枯草芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌CGMCC6012,凍干菌粉中活菌數(shù)量為4-8X IO8個/g。所述復(fù)合飼料添加劑由以下方法制得:
[0061] 粉碎后靈芝菌培養(yǎng)物、低聚果糖、生姜、女貞子提取物、植物乳桿菌和枯草芽孢桿 菌凍干菌粉按照比例粉碎混合造粒得到飼料添加劑。
[0062] 本發(fā)明提供一種飼料生產(chǎn)用枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)菌種,該菌株已 經(jīng)于2012年4月16日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心,保藏地址 位于北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號,(郵編100101),保藏編號為CGMCC No. 6012。
[0063] 有益效果:
[0064] 枯草芽孢桿菌:具有如下功能:1.耗氧產(chǎn)酸,調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡,達(dá)到預(yù)防腹 瀉、下痢等疾?。?.分泌多種酶類,提高飼料消化利用率;3.產(chǎn)生多種營養(yǎng)素,參與機(jī)體新 陳代謝;4.提高動物免疫力。本發(fā)明女貞子進(jìn)行粉碎破壁處理,使女貞子中功能因子實現(xiàn) 全價溶出和高效提取利用,分別采用有機(jī)溶劑和熱水實現(xiàn)其中不同功效成分的有效提取, 特別是控制溫度分段提取更是有效提高了女貞子提取物的提取效率和質(zhì)量。水蘇糖能明顯 改善腸道內(nèi)微生物種群比例,它是腸內(nèi)雙歧桿菌的活化增殖因子,可減少和抑制腸內(nèi)腐敗 物質(zhì)的產(chǎn)生,抑制有害細(xì)菌的生長,調(diào)節(jié)腸道內(nèi)平衡;本發(fā)明通過科學(xué)復(fù)配,將枯草芽孢桿 菌、植物乳桿菌、靈芝菌、生姜實現(xiàn)了有機(jī)組合,高耐酸性植物乳桿菌的添加可以有效通過 胃部,提高植物乳桿菌的效力發(fā)揮。本發(fā)明產(chǎn)品可以有效降低抗生素類藥物在飼養(yǎng)動物中 的使用量,提高動物肉制品的安全性,提高動物的飼料利用效率,增強(qiáng)動物的免疫力,提高 飼養(yǎng)效益。
[0065] 具體實施方法:
[0066] 本發(fā)明中靈芝菌培養(yǎng)物生產(chǎn)過程如下:
[0067] (1)斜面菌種活化培養(yǎng):
[0068] (2)液體一級種子培養(yǎng):
[0069] (3)液體二級種子培養(yǎng):
[0070] ⑷固體發(fā)酵培養(yǎng):
[0071] (5)發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束,選擇流化床等多種干燥方法,將物料干燥到水分含量在7%以 下。對固體發(fā)酵物料進(jìn)行粉碎。
[0072] 本發(fā)明所用靈芝菌種購于中國工業(yè)微生物菌種保藏中心,菌號CICC14080。
[0073] 本發(fā)明中斜面培養(yǎng)基組成可以為PDA斜面培養(yǎng)基或其他合適培養(yǎng)基。
[0074] 本發(fā)明固體發(fā)酵培養(yǎng)基的碳源主要選擇麩皮、葡萄糖、蔗糖、淀粉、玉米粉、玉米芯 (粉碎后)等常用原料,氮源可以選擇花生餅粉、蛋白胨、脫脂大豆蛋白粉、豆餅粉、酵母粉 等;需要添加的無機(jī)鹽有磷酸二氫鉀,硫酸鎂。
[0075] 本發(fā)明中液體發(fā)酵發(fā)酵培養(yǎng)基組成:淀粉2-3 %,蔗糖3-5 %,生姜1 %,葡萄糖 1-3%,蛋白胨0. 5%,脫脂大豆蛋白粉2-3%,磷酸二氫鉀0. 13-0. 2%,硫酸鎂0. 1-0. 15%, 維生素 BjPPm,PH6-7。
[0076] 本發(fā)明中靈芝培養(yǎng)方法適合同屬其它菌種通過發(fā)酵法進(jìn)行大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)。
[0077] 菌種誘變
[0078] 采取紫外誘變方法:以CICC10023為出發(fā)菌株,制成菌懸液,涂布于培養(yǎng)基平皿 上,紫外照射90s后37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
[0079] 菌種篩選
[0080] 從90s平皿上挑30個長得強(qiáng)壯的單菌落,接種于斜面上,37°C培養(yǎng)箱中,培養(yǎng)24 小時,0--4°C冷藏保存;以原始菌種作為對照,采用常規(guī)選育條件,羧甲基纖維素鈉作為碳 源和蛋白水解圈方法篩選產(chǎn)纖維素酶和蛋白酶強(qiáng)的菌株,篩選獲得產(chǎn)纖維素酶和蛋白酶強(qiáng) 的菌株枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)Ll,此菌株產(chǎn)纖維素酶能力比原始菌株提高了 25%,產(chǎn)蛋白酶能力比原始菌株提高了 52%。將該菌種在中國普通微生物菌種保藏管理委 員會普通微生物中心保藏,保藏編號為CGMCC No 6012。
[0081] 本產(chǎn)品所用枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)菌種,該菌株已經(jīng)于2012年4月 16日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心,保藏地址位于北京市朝陽區(qū) 北辰西路1號院3號,(郵編100101),保藏編號為CGMCC N〇6012。
[0082] 通過實驗研究表明:本發(fā)明產(chǎn)品具有良好的抑制大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、等致 病菌的特性。采用杯碟法對靈芝飼料添加劑產(chǎn)品的抑菌效果進(jìn)行了研究,試驗采用飼料添 加劑的10倍水浸提液進(jìn)行研究。實驗結(jié)果見表1,結(jié)果表明本發(fā)明產(chǎn)品具有抑制致病菌生 長的良好特性。
[0083] 表1飼料添加劑產(chǎn)品的抑菌效果
[0084]
【權(quán)利要求】
1. 一種雞用飼料添加劑產(chǎn)品;重量份數(shù)組成如下:水蘇糖1-2,生姜1-3,女貞子提取物 1-4,枯草芽孢桿菌菌粉10-15,植物乳桿菌菌粉15-25,靈芝菌固體發(fā)酵培養(yǎng)物5-10。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述雞用飼料添加劑產(chǎn)品,其特征在于:所述枯草芽孢桿菌為 CGMCC6012,植物乳桿菌為 CGMCC No. 9405。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1-2所述雞用飼料添加劑產(chǎn)品,其特征在于:所述雞用飼料添加劑產(chǎn) 品重量份數(shù)組成如下:水蘇糖1,生姜2,女貞子提取物3,枯草芽孢桿菌菌粉10-152,植物乳 桿菌菌粉20,靈芝菌固體發(fā)酵培養(yǎng)物8。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3所述雞用飼料添加劑產(chǎn)品,其特征在于:所述雞用飼料添加劑產(chǎn) 品重量份數(shù)組成如下: 水蘇糖1,生姜3,女貞子提取物1,枯草芽孢桿菌菌粉15,植物乳桿菌菌粉15,靈芝菌固 體發(fā)酵培養(yǎng)物5。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4所述雞用飼料添加劑產(chǎn)品,其特征在于:所述雞用飼料添加劑產(chǎn) 品重量份數(shù)組成如下: 水蘇糖1,生姜1女貞子提取物4,枯草芽孢桿菌菌粉15,植物乳桿菌菌粉25,靈芝菌固 體發(fā)酵培養(yǎng)物10。
【文檔編號】A23K1/18GK104381596SQ201410510457
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年9月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月28日
【發(fā)明者】李建樹, 劉洪亮, 李政 申請人:邵素英