一種鐵包金的離體培養(yǎng)方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種鐵包金的離體培養(yǎng)方法，包括如下步驟：選取鐵包金植株上當(dāng)年抽生的新梢，進(jìn)行消毒處理后，接入腋芽萌動(dòng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)；待腋芽伸長(zhǎng)至3-5cm時(shí)，將萌出的嫩梢切下，轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)；取根系生長(zhǎng)良好的試管苗進(jìn)行煉苗。本發(fā)明方法簡(jiǎn)單，快速高效，有效提高了鐵包金種苗的繁殖效率，保證了種苗質(zhì)量。采用本發(fā)明方法，1顆當(dāng)年生鐵包金小苗1年后能變成約8000顆整齊的種苗，即能快速大量繁殖優(yōu)質(zhì)種苗，以滿足藥材市場(chǎng)及涼茶生產(chǎn)等企業(yè)對(duì)鐵包金種苗的需求。此外，本發(fā)明還具有大田栽培后存活率高，種苗生長(zhǎng)快速、根系（藥用部分）粗壯的特點(diǎn)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種鐵包金的罔體培養(yǎng)方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物組培【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及鐵包金離體培養(yǎng)方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 鐵包金為鼠李科Rhamnaceae麥族Trib. Zizipheae Brongn.勾兒茶屬植物鐵包金 及?(L. ) DC.的干燥根，別名小葉鐵包金、烏龍根、烏口仔、鼠乳根，原植物 鐵包金為藤狀或矮灌木，又名老鼠耳、米拉藤、小葉黃鱔藤，生于丘陵和山地灌木叢中或林 緣，分布于廣東省及廣西、福建、湖南、臺(tái)灣等省區(qū)，越南、巴基斯坦、印度、錫金、日本亦有分 布。其性味甘、淡、平，有理肺止咳、祛瘀止痛、舒肝退黃、健胃消積之功，主要用于勞傷咳血、 跌打瘀痛、風(fēng)濕痹痛、偏正頭痛、胸脅疼痛、小兒胃納呆滯、疳積，近有用于肝炎、肺結(jié)核咳血 等。在廣東地區(qū)，還是涼茶配方中的一味常用中草藥。
[0003] 研究人員在廣西實(shí)地調(diào)查發(fā)現(xiàn)，鐵包金的分布和資源正日漸減少，藥材市場(chǎng) 中銷(xiāo)售的鐵包金藥材實(shí)際還包括同屬植物光枝勾兒茶漢/70心Wall, ex Laws, var. Ieioclada Hand.-Mazz.、多葉勾兒茶漢 Wall, ex Laws.、多花勾兒茶漢 /7ori/w/?￡/a(Wall.)Brongn.的根莖或全株。而鐵包金種子萌發(fā)困難，有空?，F(xiàn)象；扦插繁 殖生根不易，致使鐵包金自然更新能力低。隨著市場(chǎng)上鐵包金需求量的日益增加，擴(kuò)大鐵包 金資源已是目前亟待解決的問(wèn)題。通過(guò)植物組織培養(yǎng)技術(shù)手段，對(duì)鐵包金進(jìn)行研究以得到 大量種苗是快速解決鐵包金資源短缺的重要手段。目前鼠李科植物通過(guò)組織培養(yǎng)手段成功 得到組培苗的不多，關(guān)于鐵包金的組織培養(yǎng)尚未見(jiàn)報(bào)道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種鐵包金的腋芽萌動(dòng)培養(yǎng)基。
[0005] 本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種鐵包金的生根培養(yǎng)基。
[0006] 本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供鐵包金的離體培養(yǎng)方法。
[0007] 本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是： 一種鐵包金腋芽萌動(dòng)培養(yǎng)基，其組成包括：IBA 0. 01?0. 2 mg/L，6-BA 0. 05?0. 5 mg/L，水解乳蛋白0?550mg/L，鹿糖20?40g/L，WPM培養(yǎng)基補(bǔ)足至1L，pH值調(diào)至5. 5? 6. 0,加入凝固劑制備成固體培養(yǎng)基。
[0008] 作為優(yōu)選的，所述的鐵包金腋芽萌動(dòng)培養(yǎng)基的組成為：IBA 0. I mg/L，6_BA 0.05 mg/L，水解乳蛋白500mg/L，30g/L的蔗糖，7g/L的瓊脂粉，WPM培養(yǎng)基補(bǔ)足至lL，pH值調(diào)至 5. 8〇
[0009] 一種鐵包金的生根培養(yǎng)基，其組成包括：IBA 0. 05?0. 15 mg/L，6-BA 0. 05?0. 5 mg/L，葡萄糖30?75 g/L，WPM培養(yǎng)基補(bǔ)足至1L，pH值調(diào)至5. 5?6. 0,加入凝固劑制備 成固體培養(yǎng)基。
[0010] 作為優(yōu)選的，所述的鐵包金的生根培養(yǎng)基的組成為：IBA 0. I mg/L，6-BA 0. 05mg/ L，葡萄糖60g/L，瓊脂粉7g/L，WPM培養(yǎng)基補(bǔ)足至1L，pH值調(diào)至5. 8。
[0011] 一種鐵包金的離體培養(yǎng)方法，包括如下步驟： (1) 選取鐵包金植株上當(dāng)年抽生的新梢，進(jìn)行消毒處理后，接入上述的腋芽萌動(dòng)培養(yǎng)基 中培養(yǎng)； (2) 待腋芽伸長(zhǎng)至3-5cm時(shí)，將萌出的嫩梢切下，轉(zhuǎn)移至上述的生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根 培養(yǎng)； (3) 取根系生長(zhǎng)良好的試管苗進(jìn)行煉苗。
[0012] 步驟（1)所述消毒處理的具體步驟為：用自來(lái)水浸泡沖洗后，先放入75%酒精中 浸泡10?20s，后轉(zhuǎn)入0. 1%氯化萊溶液表面消毒7?8min，用無(wú)菌水沖洗5?6次。
[0013] 步驟（2)和（3)的培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)室光照度保持在1500?2000Lx，光照時(shí)間為 12?14h/d，組培快繁時(shí)控制溫度為25±3°C，種質(zhì)離體保存時(shí)控制溫度為15?20°C。
[0014] 本發(fā)明的有益效果是： 本發(fā)明方法簡(jiǎn)單，快速高效，有效提高了鐵包金種苗的繁殖效率，保證了種苗質(zhì)量。采 用本發(fā)明方法，1顆當(dāng)年生鐵包金小苗1年后能變成約8000顆整齊的種苗，即能快速大量繁 殖優(yōu)質(zhì)種苗，以滿足藥材市場(chǎng)及涼茶生產(chǎn)等企業(yè)對(duì)鐵包金種苗的需求。此外，本發(fā)明還具有 大田栽培后存活率高，種苗生長(zhǎng)快速、根系(藥用部分）粗壯的特點(diǎn)。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0015] 圖1為腋芽萌出； 圖2為小苗生根； 圖3為煉苗2周后的小苗； 圖4為移栽3個(gè)月后的小苗。

【具體實(shí)施方式】
[0016] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明，但并不局限于此。
[0017] 實(shí)施例1本發(fā)明的基礎(chǔ)研究 一、腋芽萌動(dòng) (1)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑NAA和6-BA對(duì)帶節(jié)莖段腋芽萌動(dòng)的影響 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑NAA和6-BA對(duì)帶節(jié)莖段腋芽萌動(dòng)的影響見(jiàn)表1，以1/2MS為基本培養(yǎng) 基，培養(yǎng)基中添加蔗糖30g/L，瓊脂7g/L，pH調(diào)節(jié)為5. 8,培養(yǎng)溫度為（25±1) °C，連續(xù)光照 14 h/d，光照強(qiáng)度1500-2000LX。（若無(wú)特別說(shuō)明，下同）培養(yǎng)40天后記錄苗生長(zhǎng)質(zhì)量、統(tǒng)計(jì) 腋芽萌動(dòng)率和落葉率。
[0018] 由表1可知，腋芽苗生長(zhǎng)情況均不理想，生長(zhǎng)1個(gè)月后苗均出現(xiàn)不同程度落葉現(xiàn) 象，可見(jiàn)NAA和6-BA組合不適合鐵包金腋芽萌動(dòng)培養(yǎng)。從總體生長(zhǎng)情況看，當(dāng)NAA和6-BA 濃度均為〇. 05 mg/L時(shí)，腋芽萌動(dòng)率為76. 67%，苗生長(zhǎng)質(zhì)量較好。
[0019] 表I NAA和6-BA的不同濃度配比的腋芽萌動(dòng)效果

【權(quán)利要求】
1. 一種鐵包金腋芽萌動(dòng)培養(yǎng)基，其組成包括：IBA 0. Ol?0. 2 mg/L，6-BA 0. 05?0. 5 mg/L，水解乳蛋白0?550mg/L，鹿糖20?40g/L，WPM培養(yǎng)基補(bǔ)足至1L，pH值調(diào)至5. 5? 6. 0,加入凝固劑制備成固體培養(yǎng)基。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的鐵包金腋芽萌動(dòng)培養(yǎng)基，其組成為：IBA 0. I mg/L，6-BA 0. 05 mg/L，水解乳蛋白500mg/L，30g/L的蔗糖，WPM培養(yǎng)基補(bǔ)足至lL，pH值調(diào)至5. 8,加入 凝固劑制備成固體培養(yǎng)基。
3. -種鐵包金的生根培養(yǎng)基，其組成包括：IBA 0. 05?0. 15 mg/L，6-BA 0. 05?0. 5 mg/L，葡萄糖30?75 g/L，WPM培養(yǎng)基補(bǔ)足至1L，pH值調(diào)至5. 5?6. 0,加入凝固劑制備 成固體培養(yǎng)基。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的鐵包金的生根培養(yǎng)基，其組成為：IBA 0. I mg/L，6-BA 0. 05mg/L，葡萄糖60g/L，WPM培養(yǎng)基補(bǔ)足至1L，pH值調(diào)至5. 8,加入凝固劑制備成固體培 養(yǎng)基。
5. -種鐵包金的離體培養(yǎng)方法，包括如下步驟： (1) 選取鐵包金植株上當(dāng)年抽生的新梢，進(jìn)行消毒處理后，接入權(quán)利要求1或2所述的 腋芽萌動(dòng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)； (2) 待腋芽伸長(zhǎng)至3-5cm時(shí)，將萌出的嫩梢切下，轉(zhuǎn)移至權(quán)利要求3或4所述的生根培 養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)； (3) 取根系生長(zhǎng)良好的試管苗進(jìn)行煉苗。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟（1)所述消毒處理的具體步驟 為：用自來(lái)水浸泡沖洗后，先放入75%酒精中浸泡10?20s，后轉(zhuǎn)入0. 1%氯化汞溶液表面 消毒7?8min，用無(wú)菌水沖洗5?6次。
7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟（2)和（3)的培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)室光照度保持在1500?2000Lx，光照時(shí)間為12?14h/d，組培快繁時(shí)控制溫度為 25±3°C，種質(zhì)離體保存時(shí)控制溫度為15?20°C。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK104304007SQ201410524188
【公開(kāi)日】2015年1月28日 申請(qǐng)日期:2014年10月8日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月8日
【發(fā)明者】嚴(yán)寒靜, 何夢(mèng)玲, 葉燕瑩, 吳碧燕 申請(qǐng)人:廣東藥學(xué)院