垂穗披堿草幼穗離體培養(yǎng)再生植株方法
【專利摘要】本發(fā)明主要涉及一種垂穗披堿草組織培養(yǎng)再生技術(shù)，屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】。一種垂穗披堿草幼穗離體培養(yǎng)再生植株方法，其主要特點在于包括以下步驟：1)外植體的獲??；2)愈傷組織誘導(dǎo)；3)將誘導(dǎo)的愈傷組織接種于繼代培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)；4)將步驟3)的垂穗披堿草愈傷組織轉(zhuǎn)移至分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)；5)待愈傷組織有綠芽長出，將其轉(zhuǎn)移至生根成苗培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)；6)待有5條以上健壯根長出，將三角瓶上的封口膜去掉，同時加入5mL的蒸餾水，煉苗3d，然后將小植株從三角瓶中取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，最后移栽于混有草炭土和蛭石比例為1:1的花盆中。本發(fā)明克服了現(xiàn)有的禾本科牧草組織培養(yǎng)技術(shù)過程中常見到的污染率高、愈傷誘導(dǎo)率低和再生性差等問題。
【專利說明】垂穗披堿草幼穗離體培養(yǎng)再生植株方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種以垂穗披堿草幼穗為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)，獲得再生植株的方法，屬于農(nóng)業(yè)栽培中通過組織培養(yǎng)技術(shù)的植物再生領(lǐng)域。

【背景技術(shù)】
[0002]垂穗披堿草(Elymus nutans)又名鉤頭草、彎穗草，是禾本科披堿草屬多年生草本疏叢型植物，在我國的東北、華北、西北和西南等地廣泛分布，在青藏高原濕潤地區(qū)常作為優(yōu)勢種和建群種(劉新亮，2011)。因其抗寒和抗旱能力強，對土壤要求不嚴(yán)格(陳智華，2009)，經(jīng)栽培馴化后，可以建立打草、放牧兼用的人工草場。垂穗披堿草的種植既可以滿足生態(tài)環(huán)境建設(shè)的需要，更是促進(jìn)畜牧業(yè)可持續(xù)發(fā)展的重要措施。
[0003]組織培養(yǎng)是指在無菌條件下利用人工培養(yǎng)基對植物組織進(jìn)行培養(yǎng)，是生物工程研究的基礎(chǔ)，是進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化和植物改良研究的基本環(huán)節(jié)。與禾谷類作物如小麥(Triticumaestivum)、高梁(Sorghum bicolor)、玉米(Zea mays)和水稻(Oryza sativa)等相比，禾本科牧草的組織培養(yǎng)技術(shù)起步較晚。相比利用莖、葉和下胚軸等為外植體的組織培養(yǎng)方法，以幼穗為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)具有污染率低、取材方便，而且其組織內(nèi)含有較高激素含量，利于愈傷形成和分化等優(yōu)點，所以非常適合用于禾本科牧草再生體系的建立。目前，以垂穗披堿草幼穗為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)的研究還鮮有報道，因此建立以垂穗披堿草幼穗為外植體的組織培養(yǎng)再生體系很有必要，同時也為今后的轉(zhuǎn)基因研究奠定了基礎(chǔ)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題和提供一種垂穗披堿草幼穗離體培養(yǎng)植株再生方法。提出的技術(shù)任務(wù)是克服現(xiàn)有垂穗披堿草離體培養(yǎng)技術(shù)產(chǎn)生的污染率高、愈傷誘導(dǎo)率低和再生性差等缺陷，以通過選用垂穗披堿草的幼穗作為外植體材料，調(diào)控外源植物激素和培養(yǎng)基的滲透壓，獲得高比例的顆粒狀胚性愈傷組織，建立植株再生的技術(shù)體系，為進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化和性狀改良提供研究平臺。
[0005]本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:一種垂穗披堿草幼穗離體培養(yǎng)再生植株方法，其主要特點在于包括以下步驟:
[0006]I)外植體的獲取:取處于雌雄蕊分化期、長度約為3.0-1Ocm的幼穗，剪取垂穗披堿草植株上半部，去掉外層的葉片后在無菌條件下用棉球蘸取70%乙醇擦拭其莖桿和葉鞘，用消過毒的鑷子小心剝?nèi)∮姿?，將其切?-3mm的小段；
[0007]2)愈傷組織誘導(dǎo):將外植體接種于愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，每皿接種幼穗小段，放入培養(yǎng)室培養(yǎng)，培養(yǎng)室溫度為24-26°C，光照時間16h/d，黑暗時間8h/d，培養(yǎng)時間為1_2個月；
[0008]3)將誘導(dǎo)的愈傷組織接種于繼代培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)室溫度為24_26°C，光照時間16h/d，黑暗時間8h/d，在繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)20-30d ；
[0009]4)將步驟3)的垂穗披堿草愈傷組織轉(zhuǎn)移至分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)室溫度為24-26°C，光照時間16h/d，黑暗時間8h/d，在分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)的時間為20_30d ；
[0010]5)待愈傷組織有綠芽長出，將其轉(zhuǎn)移至生根成苗培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)室溫度為24-26°C，光照時間16h/d，黑暗時間8h/d ；
[0011]6)待有5條以上健壯根長出，將三角瓶上的封口膜去掉，同時加入5mL的蒸餾水，煉苗3d，然后將小植株從三角瓶中取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，最后移栽于混有草炭土和蛭石比例為1:1的花盆中，最初3d給幼苗遮上塑料薄膜以保持濕度。
[0012]所述的垂穗披堿草幼穗離體培養(yǎng)再生植株方法，所述的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:硝酸鉀1900mg/L,硝酸銨1650mg/L,七水合硫酸鎂370mg/L, 二水合氯化|丐440mg/L,磷酸二氫鉀170mg/L，四水合硫酸錳22.3mg/L,七水合硫酸鋅8.6mg/L,硼酸6.2mg/L,碘化鉀0.83mg/L, 二水合鑰酸鈉0.25mg/L,五水合硫酸銅0.025mg/L,六水合氯化鈷0.025mg/L,肌醇100mg/L,甘氨酸2.0mg/L,鹽酸批卩多醇0.5mg/L,鹽酸硫胺素0.lmg/L,煙酸0.5mg/L,乙二胺四乙酸二鈉37.3mg/L,七水合硫酸亞鐵27.8mg/L,鹿糖30g/L,瓊脂7g/L,2, 4- 二氯苯氧乙酸 3.0mg/L ο
[0013]所述的垂穗披堿草幼穗離體培養(yǎng)再生植株方法，所述的繼代培養(yǎng)基為:硝酸鉀1900mg/L,硝酸銨1650mg/L，七水合硫酸鎂370mg/L，二水合氯化鈣440mg/L，磷酸二氫鉀170mg/L，四水合硫酸錳22.3mg/L,七水合硫酸鋅8.6mg/L,硼酸6.2mg/L,碘化鉀0.83mg/L,二水合鑰酸鈉0.25mg/L,五水合硫酸銅0.025mg/L,六水合氯化鈷0.025mg/L,肌醇10mg/L,甘氨酸2.0mg/L,鹽酸卩比卩多醇0.5mg/L,鹽酸硫胺素0.lmg/L,煙酸0.5mg/L,乙二胺四乙酸二鈉37.3mg/L,七水合硫酸亞鐵27.8mg/L,鹿糖30g/L,瓊脂7.0g/L, 2, 4- 二氯苯氧乙酸
2.0mg/Lο
[0014]所述的垂穗披堿草幼穗離體培養(yǎng)再生植株方法，所述的分化培養(yǎng)基為:硝酸鉀1900 mg/L，硝酸銨1650mg/L，七水合硫酸鎂370mg/L，二水合氯化鈣440mg/L，磷酸二氫鉀170mg/L，四水合硫酸錳22.3mg/L,七水合硫酸鋅8.6mg/L,硼酸6.2mg/L,碘化鉀0.83mg/L,二水合鑰酸鈉0.25mg/L，五水合硫酸銅0.025mg/L，六水合氯化鈷0.025mg/L，肌醇10mg/L,甘氨酸2.0mg/L,鹽酸卩比卩多醇0.5mg/L,鹽酸硫胺素0.lmg/L,煙酸0.5mg/L,乙二胺四乙酸二鈉37.3mg/L,七水合硫酸亞鐵27.8mg/L,蔗糖30g/L，瓊脂7.0g/L,激動素1.0mg/L和6-氨芐基腺嘌呤1.0mg/L。
[0015]所述的垂穗披堿草幼穗離體培養(yǎng)再生植株方法，所述的生根成苗培養(yǎng)基配方:所述的生根成苗培養(yǎng)基為:1/2MS培養(yǎng)基為硝酸鉀950mg/L，硝酸銨825mg/L，磷酸二氫鉀85mg/L，七水合硫酸鎂185mg/L，二水合氯化鈣220mg/L，四水合硫酸錳22.3mg/L,七水合硫酸鋅8.6mg/L,硼酸6.2mg/L,碘化鉀0.83mg/L, 二水合鑰酸鈉0.25mg/L,五水合硫酸銅0.025mg/L,六水合氯化鈷0.025mg/L,肌醇100mg/L,甘氨酸2.0mg/L,鹽酸卩比卩多醇0.5mg/L,鹽酸硫胺素0.lmg/L,煙酸0.5mg/L,乙二胺四乙酸二鈉37.3mg/L,七水合硫酸亞鐵27.8mg/L,鹿糖 30g/L,瓊脂 7.0g/L。
[0016]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點和積極效果:
[0017]選用處于雌雄蕊分化時期、長度約為3.0-1Ocm的幼穗為外植體，進(jìn)行離體組織再生培養(yǎng)。調(diào)控愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中外源激素的配比，提高了垂穗披堿草胚性愈傷組織的誘導(dǎo)率。降低愈傷組織繼代培養(yǎng)基中激素2，4- 二氯苯氧乙酸的濃度至2.0mg/L,以提高愈傷組織的質(zhì)量和胚性細(xì)胞發(fā)生率。本發(fā)明建立的垂穗披堿草幼穗離體培養(yǎng)植株再生方法體系，為進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化和性狀改良提供研究平臺。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0018]圖1:幼穗誘導(dǎo)愈傷組織；
[0019]圖2:愈傷組織分化綠苗；
[0020]圖3:生根的幼苗；
[0021]圖4:移栽至花盆中的再生植株。

【具體實施方式】
[0022]以下結(jié)合實施例對本發(fā)明的原理和特征進(jìn)行描述，所舉實例只用于解釋本發(fā)明，并非用于限定本發(fā)明的范圍。
[0023]實施例1:一種垂穗披堿草幼穗離體培養(yǎng)再生植株方法，其主要特點在于包括以下步驟:
[0024]I)外植體的獲取:取處于雌雄蕊分化期、長度約為3.0-1Ocm的幼穗，剪取垂穗披堿草植株上半部，去掉外層的葉片后在無菌條件下用棉球蘸取70%乙醇擦拭其莖桿和葉鞘，用消過毒的鑷子小心剝?nèi)∮姿耄瑢⑵淝谐?-3mm的小段；
[0025]2)愈傷組織誘導(dǎo):將外植體接種于愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，每皿接種幼穗小段，放入培養(yǎng)室培養(yǎng)，培養(yǎng)室溫度為24-26°C，光照時間16h/d，黑暗時間8h/d，培養(yǎng)時間為1_2個月；
[0026]3)將誘導(dǎo)的愈傷組織接種于繼代培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)室溫度為24_26°C，光照時間16h/d，黑暗時間8h/d，在繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)20-30d ；
[0027]4)將步驟3)的垂穗披堿草愈傷組織轉(zhuǎn)移至分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)室溫度為24-26°C，光照時間16h/d，黑暗時間8h/d，在分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)的時間為20_30d ；
[0028]5)待愈傷組織有綠芽長出，將其轉(zhuǎn)移至生根成苗培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)室溫度為24-26°C，光照時間16h/d，黑暗時間8h/d ；
[0029]6)待有5條以上健壯根長出，將三角瓶上的封口膜去掉，同時加入5mL的蒸餾水，煉苗3d，然后將小植株從三角瓶中取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，最后移栽于混有草炭土和蛭石比例為1:1的花盆中，最初3d給幼苗遮上塑料薄膜以保持濕度。
[0030]所述的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:硝酸鉀1900mg/L，硝酸銨1650mg/L，七水合硫酸鎂370mg/L，二水合氯化鈣440mg/L，磷酸二氫鉀170mg/L，四水合硫酸錳22.3mg/L,七水合硫酸鋅8.6mg/L,硼酸6.2mg/L,碘化鉀0.83mg/L, 二水合鑰酸鈉0.25mg/L,五水合硫酸銅
0.025mg/L,六水合氯化鈷0.025mg/L,肌醇100mg/L,甘氨酸2.0mg/L,鹽酸卩比卩多醇0.5mg/L,鹽酸硫胺素0.lmg/L,煙酸0.5mg/L,乙二胺四乙酸二鈉37.3mg/L,七水合硫酸亞鐵27.8mg/L,鹿糖30g/L,瓊脂7g/L,2, 4- 二氯苯氧乙酸3.0mg/L。
[0031]所述的繼代培養(yǎng)基為:硝酸鉀1900mg/L，硝酸銨1650mg/L，七水合硫酸鎂370mg/L，二水合氯化鈣440mg/L，磷酸二氫鉀170mg/L，四水合硫酸錳22.3mg/L,七水合硫酸鋅8.6mg/L,硼酸6.2mg/L,碘化鉀0.83mg/L, 二水合鑰酸鈉0.25mg/L,五水合硫酸銅0.025mg/L,六水合氯化鈷0.025mg/L,肌醇100mg/L,甘氨酸2.0mg/L,鹽酸卩比卩多醇0.5mg/L,鹽酸硫胺素0.lmg/L,煙酸0.5mg/L,乙二胺四乙酸二鈉37.3mg/L,七水合硫酸亞鐵27.8mg/L,鹿糖30g/L，瓊脂 7.0g/L, 2，4- 二氯苯氧乙酸 2.0mg/L。
[0032]所述的分化培養(yǎng)基為:硝酸鉀1900mg/L，硝酸銨1650mg/L，七水合硫酸鎂370mg/L，二水合氯化鈣440mg/L，磷酸二氫鉀170mg/L，四水合硫酸錳22.3mg/L,七水合硫酸鋅
8.6mg/L，硼酸6.2mg/L,碘化鉀0.83mg/L, 二水合鑰酸鈉0.25mg/L,五水合硫酸銅0.025mg/L,六水合氯化鈷0.025mg/L,肌醇100mg/L,甘氨酸2.0mg/L,鹽酸卩比卩多醇0.5mg/L,鹽酸硫胺素0.lmg/L,煙酸0.5mg/L,乙二胺四乙酸二鈉37.3mg/L,七水合硫酸亞鐵27.8mg/L,鹿糖30g/L，瓊脂7.0g/L,激動素1.0mg/L和6-氨芐基腺嘌呤1.0mg/L。
[0033]所述的生根成苗培養(yǎng)基為:所述的生根成苗培養(yǎng)基為:1/2MS培養(yǎng)基為硝酸鉀950mg/L，硝酸銨825mg/L，磷酸二氫鉀85mg/L，七水合硫酸鎂185mg/L，二水合氯化鈣220mg/L,四水合硫酸錳22.3mg/L,七水合硫酸鋅8.6mg/L,硼酸6.2mg/L,碘化鉀0.83mg/L,二水合鑰酸鈉0.25mg/L,五水合硫酸銅0.025mg/L,六水合氯化鈷0.025mg/L,肌醇10mg/L，甘氨酸2.0mg/L,鹽酸卩比卩多醇0.5mg/L,鹽酸硫胺素0.lmg/L,煙酸0.5mg/L,乙二胺四乙酸二鈉37.3mg/L,七水合硫酸亞鐵27.8mg/L,鹿糖30g/L,瓊脂?.0g/L。
[0034]試驗驗證例，垂穗披堿草采自甘肅省瑪曲縣野生種質(zhì)，其組織培養(yǎng)過程為:
[0035]I)外植體的獲取:取處于雌雄蕊分化期、長度約為3.0-1Ocm的幼穗，剪取垂穗披堿草植株上半部，去掉外層的葉片后在無菌條件下用棉球蘸取70%乙醇擦拭其莖桿和葉鞘，用消過毒的鑷子小心剝?nèi)∮姿?，將其切?-3mm的小段。
[0036]2)愈傷組織誘導(dǎo):將外植體接種于愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基上,每皿接種10個幼穗小段，放入培養(yǎng)室培養(yǎng)。
[0037]3)愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方:MS基本培養(yǎng)基加入2，4- 二氯苯氧乙酸3.0mg/L,培養(yǎng)室溫度為24-26°C，光照時間16h/d，黑暗時間8h/d。
[0038]4)將誘導(dǎo)的愈傷組織接種于繼代培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。
[0039]5)繼代培養(yǎng)基配方:MS基本培養(yǎng)基加入2，4- 二氯苯氧乙酸2.0mg/L,蔗糖30g/L，瓊脂7.0g/L，培養(yǎng)室溫度為24-26°C，光照時間16h/d，黑暗時間8h/d。
[0040]6)在繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)20-30d，將垂穗披堿草愈傷組織轉(zhuǎn)移至分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
[0041]7)分化培養(yǎng)基配方:MS基本培養(yǎng)基加入激動素1.0mg/L和6-氨芐基腺嘌呤
1.0mg/L，蔗糖30g/L，瓊脂7.0g/L，培養(yǎng)室溫度為24_26°C，光照時間16h/d，黑暗時間8h/d。
[0042]8)在分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)的時間為20-30d。
[0043]9)待愈傷組織有綠芽長出，將其轉(zhuǎn)移至生根成苗培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。
[0044]10)生根成苗培養(yǎng)基配方:1/2MS(MS培養(yǎng)基大量元素減半，其它不變)，培養(yǎng)室溫度為24-26°C，光照時間16h/d，黑暗時間8h/d。
[0045]11)待有5條以上健壯根長出，將三角瓶上的封口膜去掉，同時加入5mL的蒸餾水，煉苗3d，然后將小植株從三角瓶中取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，最后移栽于混有草炭土和蛭石比例為1:1的花盆中，最初3d給幼苗遮上塑料薄膜以保持濕度。
【權(quán)利要求】
1.一種垂穗披堿草幼穗離體培養(yǎng)再生植株方法，其特征在于包括以下步驟: . 1)外植體的獲取:取處于雌雄蕊分化期、長度約為3.0-100.11的幼穗，剪取垂穗披堿草植株上半部，去掉外層的葉片后在無菌條件下用棉球蘸取70%乙醇擦拭其莖桿和葉鞘，用消過毒的鑷子小心剝?nèi)∮姿?，將其切?-3！^的小段； . 2)愈傷組織誘導(dǎo):將外植體接種于愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，每皿接種幼穗小段，放入培養(yǎng)室培養(yǎng)，培養(yǎng)室溫度為24-261，光照時間1611/山黑暗時間811/山培養(yǎng)時間為1-2個月； .3)將誘導(dǎo)的愈傷組織接種于繼代培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)室溫度為24-261，光照時間1611/山黑暗時間811/山在繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)20-30(1 ； .4)將步驟3)的垂穗披堿草愈傷組織轉(zhuǎn)移至分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)室溫度為.24-261，光照時間1611/山黑暗時間811/山在分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)的時間為20-30(1 ； .5)待愈傷組織有綠芽長出，將其轉(zhuǎn)移至生根成苗培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)室溫度為.24-261，光照時間比卜/山黑暗時間； . 6)待有5條以上健壯根長出，將三角瓶上的封口膜去掉，同時加入5此的蒸餾水，煉苗.3山然后將小植株從三角瓶中取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，最后移栽于混有草炭土和蛭石比例為1:1的花盆中，最初3(1給幼苗遮上塑料薄膜以保持濕度。
2.如權(quán)利要求1所述的垂穗披堿草幼穗離體培養(yǎng)再生植株方法，其特征在于所述的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:硝酸鉀1900呢/1，硝酸銨1650呢/1，七水合硫酸鎂370呢/1，二水合氯化I丐440呢凡，磷酸二氫鉀170呢凡，四水合硫酸猛22.3^/1,七水合硫酸鋅8.6^/1,硼酸6.2^/1,碘化鉀0.83呢/1，二水合鑰酸鈉0.25呢/1，五水合硫酸銅0.025呢/1，六水合氯化鈷0.025呢凡，肌醇100呢凡，甘氨酸2.0呢凡，鹽酸卩比卩多醇0.5呢凡，鹽酸硫胺素0.1^/.1,煙酸0.5呢/1，乙二胺四乙酸二鈉37.3^/1,七水合硫酸亞鐵27.8^/1,蔗糖308/1，瓊脂7邑凡，2，4- 二氯苯氧乙酸3.0呢凡。
3.如權(quán)利要求1所述的垂穗披堿草幼穗離體培養(yǎng)再生植株方法，其特征在于所述的繼代培養(yǎng)基為:硝酸鉀1900呢/1，硝酸銨1650呢/1，七水合硫酸鎂370呢/1，二水合氯化隹丐440呢凡，磷酸二氫鉀170呢凡，四水合硫酸猛22.3^/1,七水合硫酸鋅8.6^/1,硼酸.6.2^/1,碘化鉀0.83呢/1，二水合鑰酸鈉0.25呢/1，五水合硫酸銅0.025呢/1，六水合氯化鈷0.025呢凡，肌醇100呢凡，甘氨酸2.0呢凡，鹽酸卩比卩多醇0.5呢凡，鹽酸硫胺素0.1呢凡，煙酸0.5呢/1，乙二胺四乙酸二鈉37.3^/1,七水合硫酸亞鐵27.8^/1,蔗糖308/1，瓊脂.7.0^/1, 2，4- 二氯苯氧乙酸2.0呢凡。
4.如權(quán)利要求1所述的垂穗披堿草幼穗離體培養(yǎng)再生植株方法，其特征在于所述的分化培養(yǎng)基為:硝酸鉀1900呢/1，硝酸銨1650呢/1，七水合硫酸鎂370呢/1，二水合氯化隹丐440呢凡，磷酸二氫鉀170呢凡，四水合硫酸猛22.3^/1,七水合硫酸鋅8.6^/1,硼酸.6.2^/1,碘化鉀0.83呢/1，二水合鑰酸鈉0.25呢/1，五水合硫酸銅0.025呢/1，六水合氯化鈷0.025呢凡，肌醇100呢凡，甘氨酸2.0呢凡，鹽酸卩比卩多醇0.5呢凡，鹽酸硫胺素0.1呢凡，煙酸0.5呢/1，乙二胺四乙酸二鈉37.3^/1,七水合硫酸亞鐵27.8^/1,蔗糖308/1，瓊脂.7.08/1，激動素1.0111^/1和6-氨芐基腺嘌呤1.0呢/1。
5.如權(quán)利要求1所述的垂穗披堿草幼穗離體培養(yǎng)再生植株方法，其特征在于所述的生根成苗培養(yǎng)基配方:所述的生根成苗培養(yǎng)基為:1/213培養(yǎng)基為硝酸鉀950呢/1，硝酸銨825呢/1，磷酸二氫鉀85呢/1，七水合硫酸鎂185呢/1，二水合氯化鈣220呢/1，四水合硫酸錳22.3呢/1，七水合硫酸鋅8.6呢/1，硼酸6.2^/1,碘化鉀0.83呢/1，二水合鑰酸鈉0.25^/1,五水合硫酸銅0.025呢凡，六水合氯化鈷0.025^/1,肌醇100呢凡，甘氨酸2.0呢凡，鹽酸卩比卩多醇0.5呢凡，鹽酸硫胺素0.1呢凡，煙酸0.5呢凡，乙二胺四乙酸二鈉.37.3^/1,七水合硫酸亞鐵27.8^/1,鹿糖308/1，瓊脂7.08/1。
【文檔編號】A01H4/00GK104335899SQ201410527976
【公開日】2015年2月11日 申請日期:2014年10月8日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月8日
【發(fā)明者】劉志鵬, 王宇, 馬利超, 王彥榮 申請人:蘭州大學(xué)