一種瘤毛獐牙菜懸浮細胞培養(yǎng)的快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明研究了一種瘤毛獐牙菜懸浮細胞培養(yǎng)的快速繁殖方法，包括無菌苗的獲得、愈傷組織的誘導(dǎo)、愈傷組織的增殖、懸浮細胞的培養(yǎng)等步驟，本發(fā)明方法所制備的瘤毛獐牙菜出愈率高，生長周期短，產(chǎn)量大，為其工廠化生產(chǎn)提供研究基礎(chǔ)。
【專利說明】一種瘤毛獐牙菜懸浮細胞培養(yǎng)的快速繁殖方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及瘤毛獐牙菜懸浮細胞培養(yǎng)的快繁方法，屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002]瘤毛猜牙菜,龍膽科,//ara,又名:當藥、紫花。當藥為一年生草本植物，主產(chǎn)于中國、朝鮮、俄羅斯，國內(nèi)廣泛見于北方各省，全草均可入藥。生于山坡草甸、溝谷溪邊草甸，分布于我國河北、甘肅、四川、遼寧、吉林、山東、山西、河南、北京、燕山北部、鄂爾多斯。全草含生物堿、龍膽堿、黃酮類化合物、當藥黃酮、異牡荊素、咕噸酮類、維菊葉龍膽酮、當藥咕噸酮、甲基當藥咕噸酮、甲基雛菊葉龍膽酮、對葉當藥咕噸酮及微量去甲基當藥咕噸酮。另外，尚含黃色龍膽根素、黃色龍膽根素葡萄糖甙及龍膽苦甙、龍膽蒽醌和齊墩果酸。主治黃疸型肝炎，痢疾，胃痛，消化不良，牙痛，目赤，頭痛，口瘡；外用治瘡腫，目前關(guān)于其栽培方法尚無研究。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是瘤毛獐牙菜懸浮細胞培養(yǎng)的繁殖方法，本發(fā)明方法所制備的瘤毛獐牙菜出愈率高，生長周期短，產(chǎn)量大，為其工廠化生產(chǎn)提供研究基礎(chǔ)。
[0004]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用下列技術(shù)方案:
取瘤毛獐牙菜種子，清洗干凈，在洗衣粉中浸泡25min，流水沖洗2.5h，超凈工作臺上75%酒精處理lOmin，0.2%氯化汞處理23min，無菌水沖洗5遍，消毒處理過的種子放置與光照培養(yǎng)箱中接入H+NAA0.0lmg/L+6-BA0.3mg/L+ZT0.8mg/L培養(yǎng)基中進行愈傷組織誘導(dǎo)，附加7g/L瓊脂，30g/L蔗糖，溫度25°C，誘導(dǎo)出來的愈傷組織接入培養(yǎng)基H+ZT0.5mg/L+KT0.5mg/L中進行愈傷組織增殖培養(yǎng)，附加7g/L瓊脂，30g/L蔗糖，光照35001x，光照時間12h/d，溫度25 °C，增殖后的顏色翠綠，結(jié)構(gòu)均一的愈傷組織，接入H+ZT0.3-0.5mg/L+KT0.3-0.5mg/L培養(yǎng)基中進行懸浮震蕩培養(yǎng)，附加30g/L蔗糖，溫度25°C，光照35001x，光照時間12h/d,振幅3cm,震動頻率100r/min。
[0005]本發(fā)明具有細胞增殖率高等特點，生產(chǎn)出來的瘤毛獐牙菜周期短，產(chǎn)量大，污染小，利于大規(guī)模種植。
[0006]下面將結(jié)合【具體實施方式】對本發(fā)明作進一步闡述，但本發(fā)明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。

【具體實施方式】
[0007]實施例1
取瘤毛獐牙菜種子，清洗干凈，在洗衣粉中浸泡25min，流水沖洗2.5h，超凈工作臺上75%酒精處理lOmin，0.2%氯化汞處理23min，無菌水沖洗5遍，消毒處理過的種子放置與光照培養(yǎng)箱中接入H+NAA0.0lmg/L+6-BA0.3mg/L+ZT0.8mg/L培養(yǎng)基中進行愈傷組織誘導(dǎo)，附加7g/L瓊脂，30g/L蔗糖，溫度25°C，誘導(dǎo)出來的愈傷組織接入培養(yǎng)基H+ZT0.5mg/L+KT0.5mg/L中進行愈傷組織增殖培養(yǎng)，附加7g/L瓊脂，30g/L蔗糖，光照35001x，光照時間12h/d，溫度25°C，增殖后的顏色翠綠，結(jié)構(gòu)均一的愈傷組織，接入H+ZT0.3mg/L+KT0.3mg/L培養(yǎng)基中進行懸浮震蕩培養(yǎng)，附加30g/L蔗糖，溫度25°C，光照35001x，光照時間12h/d，振幅3cm，震動頻率100r/min，懸浮細胞增長率65%。
[0008]實施例2
取瘤毛獐牙菜種子，清洗干凈，在洗衣粉中浸泡25min，流水沖洗2.5h，超凈工作臺上75%酒精處理lOmin，0.2%氯化汞處理23min，無菌水沖洗5遍，消毒處理過的種子放置與光照培養(yǎng)箱中接入H+NAA0.0lmg/L+6-BA0.3mg/L+ZT0.8mg/L培養(yǎng)基中進行愈傷組織誘導(dǎo)，附加7g/L瓊脂，30g/L蔗糖，溫度25°C，誘導(dǎo)出來的愈傷組織接入培養(yǎng)基H+ZT0.5mg/L+KT0.5mg/L中進行愈傷組織增殖培養(yǎng)，附加7g/L瓊脂，30g/L蔗糖，光照35001x，光照時間12h/d，溫度25°C，增殖后的顏色翠綠，結(jié)構(gòu)均一的愈傷組織，接入H+ZT0.5mg/L+KT0.5mg/L培養(yǎng)基中進行懸浮震蕩培養(yǎng)，附加30g/L蔗糖，溫度25°C，光照35001x，光照時間12h/d，振幅3cm，震動頻率100r/min，懸浮細胞增長率60%。
[0009]實施例3
取瘤毛獐牙菜種子，清洗干凈，在洗衣粉中浸泡25min，流水沖洗2.5h，超凈工作臺上75%酒精處理lOmin，0.2%氯化汞處理23min，無菌水沖洗5遍，消毒處理過的種子放置與光照培養(yǎng)箱中接入H+NAA0.0lmg/L+6-BA0.3mg/L+ZT0.8mg/L培養(yǎng)基中進行愈傷組織誘導(dǎo)，附加7g/L瓊脂，30g/L蔗糖，溫度25°C，誘導(dǎo)出來的愈傷組織接入培養(yǎng)基H+ZT0.5mg/L+KT0.5mg/L中進行愈傷組織增殖培養(yǎng)，附加7g/L瓊脂，30g/L蔗糖，光照35001x，光照時間12h/d，溫度25°C，增殖后的顏色翠綠，結(jié)構(gòu)均一的愈傷組織，接入H+ZT0.3mg/L+KT0.5mg/L培養(yǎng)基中進行懸浮震蕩培養(yǎng)，附加30g/L蔗糖，溫度25°C，光照35001x，光照時間12h/d，振幅3cm，震動頻率100r/min，懸浮細胞增長率65%。
【權(quán)利要求】
1.一種瘤毛獐牙菜懸浮細胞培養(yǎng)的快速繁殖方法，包括無菌苗的獲得、愈傷組織的誘導(dǎo)、愈傷組織的增殖、懸浮細胞的培養(yǎng)，其主要步驟如下: (1)取瘤毛獐牙菜的種子，進行消毒處理； (2)取步驟(I)消毒處理過的種子放置與光照培養(yǎng)箱中接入H+NAA0.0lmg/L+6-BA0.3mg/L+ZT0.8mg/L培養(yǎng)基中進行愈傷組織誘導(dǎo)，附加7g/L瓊脂，30g/L蔗糖，溫度25 0C ； (3)取步驟(2)誘導(dǎo)出來的愈傷組織接入培養(yǎng)基H+ZT0.5mg/L+KT0.5mg/L中進行愈傷組織增殖培養(yǎng)，附加7g/L瓊脂，30g/L蔗糖，光照35001x，光照時間12h/d，溫度25°C ； (4)取步驟(3)誘導(dǎo)出來的顏色翠綠，結(jié)構(gòu)均一的愈傷組織，接入H+ZT0.3-0.5mg/L+KT0.3-0.5mg/L培養(yǎng)基中進行懸浮震蕩培養(yǎng)，附加30g/L蔗糖，溫度25°C，光照35001x，光照時間12h/d,振幅3cm,震動頻率100r/min。
2.按照權(quán)利要求1所述的一種瘤毛獐牙菜懸浮細胞培養(yǎng)的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(I)中所述瘤毛獐牙菜無菌種子的獲得為，取瘤毛獐牙菜種子，清洗干凈，在洗衣粉中浸泡25min，流水沖洗2.5h，超凈工作臺上75%酒精處理10min，0.2%氯化汞處理23min,無菌水沖洗5遍。
【文檔編號】A01H4/00GK104304015SQ201410540625
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2014年10月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月14日
【發(fā)明者】劉東鋒, 楊成東 申請人:南京帝道農(nóng)業(yè)科技有限公司