一種通脫木組織培養(yǎng)的快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明研究了一種通脫木組織培養(yǎng)的快速繁殖方法，包括莖段的消毒、腋芽的誘導、叢生芽的增殖、生根誘導、煉苗移栽等步驟。本發(fā)明方法采用植物組織培養(yǎng)技術，作為植物生物技術中重要組成的部分，該方法可克服傳統(tǒng)繁殖方法的不足，在短期內(nèi)大量擴繁優(yōu)良品種，并能夠為利用遺傳轉(zhuǎn)化技術在短期內(nèi)定向改良培育新品種提供再體系，為通脫木商品化、產(chǎn)業(yè)化、規(guī)?；a(chǎn)奠定基礎。
【專利說明】一種通脫木組織培養(yǎng)的快速繁殖方法

【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及通脫木的組織培養(yǎng)，屬于生物【技術領域】。
[0002]

【背景技術】
通脫木，rice-paper Wafli,又稱木通樹、通草、天麻子,五加科,常綠灌木或小喬木，高1-3.5m，葉大，互生，聚生于莖頂，葉片紙質(zhì)或薄革質(zhì)，掌狀5-11裂，裂片通常為葉片全長的1/3-1/2，稀至2/3，倒卵狀長圓形卵狀長圓形，每一裂片常又有2-3個小裂片，全緣或有粗齒，上面深綠色，無毛，下面密被白色星狀絨毛，傘形花序聚生成頂生或近頂生大型復圓錐花序，長達50cm以上；花瓣4，稀5，三角狀卵形，長2mm，雄蕊5，與花瓣同數(shù)；子房下位，2室，花柱2，離生，果球形，熟時紫黑色，花期10-12月，果期翌年1-2月。喜光，喜溫暖，在濕潤、肥沃的土壤上生長良好，根的橫向生長力強，并能形成大量根蘗。通脫木分布于長江以南各省區(qū)，陜西也有。中藥用通草作利尿劑，并有清涼散熱功效。通脫木常規(guī)的栽植方法為播種繁殖，或挖取根蘗移植，但成活率低，極少栽培。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術問題是通脫木組織培養(yǎng)的繁殖方法，本發(fā)明采用作為植物生物技術重要組成部分的植物組織培養(yǎng)技術可克服傳統(tǒng)繁殖方法的不足，在短期內(nèi)大量擴繁優(yōu)良品種，并能夠為利用遺傳轉(zhuǎn)化技術在短期內(nèi)定向改良培育新品種提供再體系，為通脫木商品化、產(chǎn)業(yè)化、規(guī)?；a(chǎn)奠定基礎。
[0004]為解決上述技術問題，本發(fā)明采用下列技術方案:
取通脫木新抽嫩枝上的莖段，切取長度4cm，附帶1-2腋芽，流水沖洗45min，在超凈工作臺上，切成2cm的小段，70%酒精處理20s，1%高錳酸鉀處理16min，無菌水沖洗干凈，消毒處理過的無菌莖段接種到改良DKW+IBA 0.lmg/L+GA3 lmg/L的培養(yǎng)基中進行腋芽的誘導，添加0.04%的DTT，且采用過濾滅菌，附加葡萄糖20g/L，瓊脂7g/L，培養(yǎng)溫度24土 1°C，自然光照射，誘導出來的芽接入改良 DKW+2，4，5-T 0.lmg/L+KT 0.2mg/L+CaCl2 5-1OmoI/L+整形素0.5-lmg/L培養(yǎng)基中進行叢生芽的增殖，附加葡萄糖20g/L，瓊脂7g/L，pH5.8，光照25001x，光期14h/d，溫度24±1°C，培養(yǎng)出來的叢生芽接入2/3MS+丁酰肼0.5-1.5mg/L培養(yǎng)基中進行生根誘導，附加葡萄糖35g/L，瓊脂5g/L，pH5.9，先將培養(yǎng)出來的叢生芽進行暗處理3天，溫度3°C，3天后光照2000lx，溫度26±1°C，待生根60d的無菌苗，平均根長2cm左右，打開瓶苗的封口膜，將其在日光溫室內(nèi)煉苗7d，之后用鑷子取出幼苗，再用蒸餾水洗凈根上所帶的培養(yǎng)基，然后用0.1%高錳酸鉀浸泡5min，移栽入珍珠巖:水苔=2:1的基質(zhì)中，移栽后應置于陰涼通風處，保持環(huán)境溫度28°C，防陽光直射，保持濕度85%，移栽大約I周后，新葉開始生長，新根開始伸長，施加少量氮肥，30天后調(diào)查幼苗的成活率。
[0005]采用本發(fā)明制備的通脫木成活率高，生長周期短，生產(chǎn)過程中污染少，能耗低，利于大規(guī)模種植。
[0006]下面將結(jié)合【具體實施方式】對本發(fā)明作進一步闡述，但本發(fā)明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。

【具體實施方式】
[0007]實施例1
取通脫木新抽嫩枝上的莖段，切取長度4cm，附帶1-2腋芽，流水沖洗45min，在超凈工作臺上，切成2cm的小段，70%酒精處理20s，1%高錳酸鉀處理16min，無菌水沖洗干凈，消毒處理過的無菌莖段接種到改良DKW+IBA 0.lmg/L+GA3 lmg/L的培養(yǎng)基中進行腋芽的誘導，添加0.04%的DTT，且采用過濾滅菌，附加葡萄糖20g/L，瓊脂7g/L，培養(yǎng)溫度24土 1°C，自然光照射，誘導出來的芽接入改良DKW+2，4，5-T 0.lmg/L+KT 0.2mg/L+CaCl2 5mol/L+整形素0.5mg/L培養(yǎng)基中進行叢生芽的增殖，附加葡萄糖20g/L，瓊脂7g/L，pH5.8，光照25001x，光期14h/d，溫度24±1°C，培養(yǎng)出來的叢生芽接入2/3MS+丁酰肼0.5mg/L培養(yǎng)基中進行生根誘導，附加葡萄糖35g/L，瓊脂5g/L，pH5.9，先將培養(yǎng)出來的叢生芽進行暗處理3天，溫度3°C，3天后光照2000lx，溫度26 ± I °C，待生根60d的無菌苗，平均根長2cm左右，打開瓶苗的封口膜，將其在日光溫室內(nèi)煉苗7d，之后用鑷子取出幼苗，再用蒸餾水洗凈根上所帶的培養(yǎng)基，然后用0.1%高錳酸鉀浸泡5min，移栽入珍珠巖:水苔=2:1的基質(zhì)中，移栽后應置于陰涼通風處，保持環(huán)境溫度28°C，防陽光直射，保持濕度85%，移栽大約I周后，新葉開始生長，新根開始伸長，施加少量氮肥，30天后調(diào)查幼苗的成活率，成活率90%。
[0008]實施例2
取通脫木新抽嫩枝上的莖段，切取長度4cm，附帶1-2腋芽，流水沖洗45min，在超凈工作臺上，切成2cm的小段，70%酒精處理20s，1%高錳酸鉀處理16min，無菌水沖洗干凈，消毒處理過的無菌莖段接種到改良DKW+IBA 0.lmg/L+GA3 lmg/L的培養(yǎng)基中進行腋芽的誘導，添加0.04%的DTT，且采用過濾滅菌，附加葡萄糖20g/L，瓊脂7g/L，培養(yǎng)溫度24土 1°C，自然光照射，誘導出來的芽接入改良DKW+2, 4，5-T 0.lmg/L+KT 0.2mg/L+CaCl2 1mol/L+整形素lmg/L培養(yǎng)基中進行叢生芽的增殖，附加葡萄糖20g/L，瓊脂7g/L，pH5.8，光照25001x，光期14h/d，溫度24±1°C，培養(yǎng)出來的叢生芽接入2/3MS+丁酰肼1.5mg/L培養(yǎng)基中進行生根誘導，附加葡萄糖35g/L，瓊脂5g/L，pH5.9，先將培養(yǎng)出來的叢生芽進行暗處理3天，溫度3°C，3天后光照2000lx，溫度26 ± I °C，待生根60d的無菌苗，平均根長2cm左右，打開瓶苗的封口膜，將其在日光溫室內(nèi)煉苗7d，之后用鑷子取出幼苗，再用蒸餾水洗凈根上所帶的培養(yǎng)基，然后用0.1%高錳酸鉀浸泡5min，移栽入珍珠巖:水苔=2:1的基質(zhì)中，移栽后應置于陰涼通風處，保持環(huán)境溫度28°C，防陽光直射，保持濕度85%，移栽大約I周后，新葉開始生長，新根開始伸長，施加少量氮肥，30天后調(diào)查幼苗的成活率，成活率89%。
[0009]實施例3
取通脫木新抽嫩枝上的莖段，切取長度4cm，附帶1-2腋芽，流水沖洗45min，在超凈工作臺上，切成2cm的小段，70%酒精處理20s，1%高錳酸鉀處理16min，無菌水沖洗干凈，消毒處理過的無菌莖段接種到改良DKW+IBA 0.lmg/L+GA3 lmg/L的培養(yǎng)基中進行腋芽的誘導，添加0.04%的DTT，且采用過濾滅菌，附加葡萄糖20g/L，瓊脂7g/L，培養(yǎng)溫度24土 1°C，自然光照射，誘導出來的芽接入改良DKW+2, 4，5-T 0.lmg/L+KT 0.2mg/L+CaCl2 1mol/L+整形素lmg/L培養(yǎng)基中進行叢生芽的增殖，附加葡萄糖20g/L，瓊脂7g/L，pH5.8，光照25001x，光期14h/d，溫度24土 1°C，培養(yǎng)出來的叢生芽接入2/3MS+丁酰肼lmg/L培養(yǎng)基中進行生根誘導，附加葡萄糖35g/L，瓊脂5g/L，pH5.9，先將培養(yǎng)出來的叢生芽進行暗處理3天，溫度3°C，3天后光照20001x，溫度26土 1°C，待生根60d的無菌苗，平均根長2cm左右，打開瓶苗的封口膜，將其在日光溫室內(nèi)煉苗7d，之后用鑷子取出幼苗，再用蒸餾水洗凈根上所帶的培養(yǎng)基，然后用0.1%高錳酸鉀浸泡5min，移栽入珍珠巖:水苔=2:1的基質(zhì)中，移栽后應置于陰涼通風處，保持環(huán)境溫度28°C，防陽光直射，保持濕度85%，移栽大約I周后，新葉開始生長，新根開始伸長，施加少量氮肥，30天后調(diào)查幼苗的成活率，成活率93%。
【權利要求】
1.一種通脫木組織培養(yǎng)的快速繁殖方法，包括莖段的消毒、腋芽的誘導、叢生芽的增殖、生根誘導、煉苗移栽，其主要步驟如下: (1)取通脫木的莖段，進行消毒處理； (2)將步驟(I)消毒處理過的無菌莖段接種到改良DKW+IBA0.1 mg/L+GA3lmg/L的培養(yǎng)基中進行腋芽的誘導，附加葡萄糖20g/L，瓊脂7g/L，培養(yǎng)溫度24±1°C，自然光照射； (3)取步驟(2)誘導出來的芽接入改良DKW+2, 4，5-T 0.lmg/L+KT 0.2mg/L+CaCl25-10mol/L+整形素0.5-lmg/L培養(yǎng)基中進行叢生芽的增殖，附加葡萄糖20g/L，瓊脂7g/L，PH5.8，光照 25001x，光期 14h/d，溫度 24±1°C ； (4)將步驟(3)培養(yǎng)出來的叢生芽接入2/3MS+丁酰肼0.5-1.5mg/L培養(yǎng)基中進行生根誘導，附加葡萄糖35g/L，瓊脂5g/L，ρΗ5.9 ； (5)將步驟(4)培養(yǎng)出來的叢生芽分株進行煉苗移栽。
2.按照權利要求1所述的一種通脫木組織培養(yǎng)的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(I)中所述通脫木無菌莖段的獲得為取通脫木新抽嫩枝上的莖段，切取長度4cm，附帶1-2腋芽，流水沖洗45min，在超凈工作臺上，切成2cm的小段，70%酒精處理20s，1%高錳酸鉀處理16min,無菌水沖洗干凈。
3.按照權利要求1所述的一種通脫木組織培養(yǎng)的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(2)腋芽的誘導培養(yǎng)基中添加0.04%的DTT，且采用過濾滅菌，對防止褐化具有明顯的效果。
4.按照權利要求1所述的一種通脫木組織培養(yǎng)的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(4)中生根誘導的條件為先將培養(yǎng)出來的叢生芽進行暗處理3天，溫度3°C，3天后光照20001x，溫度 26±1°C。
5.按照權利要求1所述的一種通脫木組織培養(yǎng)的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(5)通脫木煉苗移栽的方法為:生根60d的無菌苗，平均根長2cm左右，打開瓶苗的封口膜，將其在日光溫室內(nèi)煉苗7d，之后用鑷子取出幼苗，再用蒸餾水洗凈根上所帶的培養(yǎng)基，然后用0.1%高錳酸鉀浸泡5min，移栽入珍珠巖:水苔=2:1的基質(zhì)中，移栽后應置于陰涼通風處，保持環(huán)境溫度28°C，防陽光直射，保持濕度85%，移栽大約I周后，新葉開始生長，新根開始伸長，施加少量氮肥，30天后調(diào)查幼苗的成活率。
【文檔編號】A01H4/00GK104247664SQ201410550344
【公開日】2014年12月31日 申請日期:2014年10月17日 優(yōu)先權日:2014年10月17日
【發(fā)明者】劉東鋒, 楊成東 申請人:南京帝道農(nóng)業(yè)科技有限公司