一種朵花椒植株再生的快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明研究了一種朵花椒植株再生的快速繁殖方法，包括無菌葉片的獲得，愈傷組織的誘導(dǎo)，愈傷組織的分化，生根誘導(dǎo)等步驟。本研究通過建立朵花椒離體再生體系，在朵花椒資源的有效利用，品種繁育以及新品質(zhì)創(chuàng)造等方面具有重要意義，為朵花椒產(chǎn)業(yè)化的健康發(fā)展提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。
【專利說明】一種朵花椒植株再生的快速繁殖方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)的快繁方法，屬于植物【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002]朵花椒，Zanthoxyluni n1lle Rehd.,蕓香科，又稱鼓釘皮，朵椒、刺風(fēng)樹，花椒屬唯一高大喬木，是陜西省稀有的重點(diǎn)保護(hù)植物之一。樹皮褐黑色，嫩枝暗紫紅色，莖干有鼓釘狀銳刺，花序軸及枝頂部散生較多的短直刺，嫩枝的髓部大且中空，葉軸渾圓，常被短毛。見于海拔100-700米丘陵地較千燥的疏林或灌木叢中，產(chǎn)安徽、浙江、江西、湖南、貴州等地。朵椒的果、枝、葉均有香味，是提供香料、油料及用材的樹種。目前尚未發(fā)現(xiàn)朵花椒的人工栽植研究，其利用均采自野生，數(shù)量日益減少，利用現(xiàn)有技術(shù)研究朵花椒人工繁殖的方法不僅有利于其資源的保護(hù)，亦可以使其得到充分的開發(fā)利用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供朵花椒植株再生的快速繁殖方法，本研究通過建立朵花椒離體再生體系，在朵花椒資源的有效利用，品種繁育以及新品質(zhì)創(chuàng)造等方面的發(fā)展，具有重要意義，為朵花椒產(chǎn)業(yè)化的健康發(fā)展提供了理論依據(jù)和技術(shù)支持。
[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下方案來實(shí)現(xiàn)的:
取朵花椒近基部側(cè)枝的幼嫩葉片，洗潔精中浸泡2min，流水沖洗lOmin，超凈工作臺上100mg/L的8-HQS (8-羥基喹啉硫酸鹽)消毒處理lOmin，無菌水沖洗5次，消毒處理過的朵花椒，接入培養(yǎng)基為6，7-V+NOA0.lmg/L+氯苯甲酸0.8mg/L進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，附加葡萄糖35g/L，瓊脂7.5g/L，誘導(dǎo)出來的愈傷組織放入分化培養(yǎng)基6，7-V+IAA0.lmg/L+TDZ0.2mg/L+CPPU0.3-0.5mg/L,附加葡萄糖35g/L，瓊脂7.5g/L，培養(yǎng)條件為pH5.95，光照15001x，光照時間13h/d，溫度25°C，分化培養(yǎng)出來的朵花椒芽苗放入培養(yǎng)基1/3MS+三甲基氯化銨1.0-2.0mg/L培養(yǎng)基中進(jìn)行生根誘導(dǎo)，附加葡萄糖35g/L，瓊脂7.5g/L，pH5.95，黑暗低溫4°C，溫度25°C，生根后的朵花椒進(jìn)行煉苗移栽，移栽前要先打丌瓶蓋，在培養(yǎng)架上鍛煉小苗3?5天，并適當(dāng)增加光照至60001x，以提高小植株的木質(zhì)化程度，將生根的再生小植株從培養(yǎng)基中取出來，用流水洗凈培養(yǎng)基，然后移入裝有園土:馬糞=2:1的育苗盤中煉苗一周待移栽，其中泥炭土在烘箱中以150°C干熱滅菌2小時，隔兩天補(bǔ)一次水，向育苗盤中噴施
0.2%多菌靈消毒，每天早晚噴施水霧，栽培溫度為25°C，利用自然散射光。
[0005]本發(fā)明方法用材少，制備出來的朵花椒繁殖系數(shù)大，占用空間小，便于人工管理，控制與運(yùn)輸。
[0006]下面將結(jié)合【具體實(shí)施方式】對本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。

【具體實(shí)施方式】
[0007]實(shí)施例1 取朵花椒近基部側(cè)枝的幼嫩葉片，洗潔精中浸泡2min，流水沖洗lOmin，超凈工作臺上100mg/L的8-HQS (8-羥基喹啉硫酸鹽)消毒處理lOmin，無菌水沖洗5次，消毒處理過的朵花椒，接入培養(yǎng)基為6，7-V+NOA0.lmg/L+氯苯甲酸0.8mg/L進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，附加葡萄糖35g/L，瓊脂7.5g/L，誘導(dǎo)出來的愈傷組織放入分化培養(yǎng)基6，7-V+IAA0.lmg/L+TDZ0.2mg/L+CPPU0.3mg/L,附加葡萄糖35g/L，瓊脂7.5g/L，培養(yǎng)條件為pH5.95，光照15001x，光照時間13h/d，溫度25°C，分化培養(yǎng)出來的朵花椒芽苗放入培養(yǎng)基1/3MS+三甲基氯化銨1.0mg/L培養(yǎng)基中進(jìn)行生根誘導(dǎo)，附加葡萄糖35g/L，瓊脂7.5g/L，pH5.95，黑暗低溫4°C，溫度25°C，生根后的朵花椒進(jìn)行煉苗移栽，移栽前要先打丌瓶蓋，在培養(yǎng)架上鍛煉小苗3?5天，并適當(dāng)增加光照至60001x，以提高小植株的木質(zhì)化程度，將生根的再生小植株從培養(yǎng)基中取出來，用流水洗凈培養(yǎng)基，然后移入裝有園土:馬糞=2:1的育苗盤中煉苗一周待移栽，其中泥炭土在烘箱中以150°C干熱滅菌2小時，隔兩天補(bǔ)一次水，向育苗盤中噴施0.2%多菌靈消毒，每天早晚噴施水霧，栽培溫度為25°C，利用自然散射光，成活率87%。
[0008]實(shí)施例2
取朵花椒近基部側(cè)枝的幼嫩葉片，洗潔精中浸泡2min，流水沖洗lOmin，超凈工作臺上100mg/L的8-HQS (8-羥基喹啉硫酸鹽)消毒處理lOmin，無菌水沖洗5次，消毒處理過的朵花椒，接入培養(yǎng)基為6，7-V+NOA0.lmg/L+氯苯甲酸0.8mg/L進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，附加葡萄糖35g/L，瓊脂7.5g/L，誘導(dǎo)出來的愈傷組織放入分化培養(yǎng)基6，7-V+IAA0.lmg/L+TDZ0.2mg/L+CPPU0.5mg/L,附加葡萄糖35g/L，瓊脂7.5g/L，培養(yǎng)條件為pH5.95，光照15001x，光照時間13h/d，溫度25°C，分化培養(yǎng)出來的朵花椒芽苗放入培養(yǎng)基1/3MS+三甲基氯化銨2.0mg/L培養(yǎng)基中進(jìn)行生根誘導(dǎo)，附加葡萄糖35g/L，瓊脂7.5g/L，pH5.95，黑暗低溫4°C，溫度25°C，生根后的朵花椒進(jìn)行煉苗移栽，移栽前要先打丌瓶蓋，在培養(yǎng)架上鍛煉小苗3?5天，并適當(dāng)增加光照至60001x，以提高小植株的木質(zhì)化程度，將生根的再生小植株從培養(yǎng)基中取出來，用流水洗凈培養(yǎng)基，然后移入裝有園土:馬糞=2:1的育苗盤中煉苗一周待移栽，其中泥炭土在烘箱中以150°C干熱滅菌2小時，隔兩天補(bǔ)一次水，向育苗盤中噴施0.2%多菌靈消毒，每天早晚噴施水霧，栽培溫度為25°C，利用自然散射光，成活率89%。
[0009]實(shí)施例3
取朵花椒近基部側(cè)枝的幼嫩葉片，洗潔精中浸泡2min，流水沖洗lOmin，超凈工作臺上100mg/L的8-HQS (8-羥基喹啉硫酸鹽)消毒處理lOmin，無菌水沖洗5次，消毒處理過的朵花椒，接入培養(yǎng)基為6，7-V+NOA0.lmg/L+氯苯甲酸0.8mg/L進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，附加葡萄糖35g/L，瓊脂7.5g/L，誘導(dǎo)出來的愈傷組織放入分化培養(yǎng)基6，7-V+IAA0.lmg/L+TDZ0.2mg/L+CPPU0.4mg/L,附加葡萄糖35g/L，瓊脂7.5g/L，培養(yǎng)條件為pH5.95，光照15001x，光照時間13h/d，溫度25°C，分化培養(yǎng)出來的朵花椒芽苗放入培養(yǎng)基1/3MS+三甲基氯化銨2.0mg/L培養(yǎng)基中進(jìn)行生根誘導(dǎo)，附加葡萄糖35g/L，瓊脂7.5g/L，pH5.95，黑暗低溫4°C，溫度25°C，生根后的朵花椒進(jìn)行煉苗移栽，移栽前要先打丌瓶蓋，在培養(yǎng)架上鍛煉小苗3?5天，并適當(dāng)增加光照至60001x，以提高小植株的木質(zhì)化程度，將生根的再生小植株從培養(yǎng)基中取出來，用流水洗凈培養(yǎng)基，然后移入裝有園土:馬糞=2:1的育苗盤中煉苗一周待移栽，其中泥炭土在烘箱中以150°C干熱滅菌2小時，隔兩天補(bǔ)一次水，向育苗盤中噴施0.2%多菌靈消毒，每天早晚噴施水霧，栽培溫度為25°C，利用自然散射光，成活率90%。
【權(quán)利要求】
1.本發(fā)明研究了一種朵花椒植株再生的快速繁殖方法，包括無菌葉片的獲得，愈傷組織的誘導(dǎo)，愈傷組織的分化，生根誘導(dǎo)等，其主要步驟如下: (1)取朵花椒近基部側(cè)枝的葉片進(jìn)行消毒處理；(2)將步驟(1)消毒處理過的朵花椒，接入培養(yǎng)基為6，7-V+NOA0.lmg/L+氯苯甲酸0.8mg/L進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，附加葡萄糖35g/L，瓊脂7.5g/L ； (3)取步驟(2)誘導(dǎo)出來的愈傷組織放入分化培養(yǎng)基6，7-V+IAA0.lmg/L+TDZ0.2mg/L+CPPU0.3-0.5mg/L，附加葡萄糖 35g/L，瓊脂 7.5g/L ； (4)取步驟(3)分化培養(yǎng)出來的朵花椒芽苗放入培養(yǎng)基1/3MS+三甲基氯化銨1.0-2.0mg/L培養(yǎng)基中進(jìn)行生根誘導(dǎo)，附加葡萄糖35g/L，瓊脂7.5g/L ； (5)取步驟(4)生根后的朵花椒進(jìn)行煉苗移栽。
2.按照權(quán)利要求1所述的一種朵花椒植株再生的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(1)中所述朵花椒葉片的消毒處理為，取朵花椒近基部側(cè)枝的幼嫩葉片，洗潔精中浸泡2min,流水沖洗lOmin，超凈工作臺上100mg/L的8-HQS (8-羥基喹啉硫酸鹽)消毒處理lOmin，無菌水沖洗5次。
3.按照權(quán)利要求1所述的一種朵花椒植株再生的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(2)和步驟(3)中培養(yǎng)條件為ρΗ5.95，光照15001χ，光照時間13h/d，溫度25。。。
4.按照權(quán)利要求1所述的一種朵花椒植株再生的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(4)中生根誘導(dǎo)的培養(yǎng)條件為pH5.95，黑暗低溫4°C，溫度25°C。
5.按照權(quán)利要求1所述的一種朵花椒植株再生的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(5)中朵花椒煉苗移栽的方法為移栽前要先打開瓶蓋，在培養(yǎng)架上鍛煉小苗3?5天，并適當(dāng)增加光照至60001x，以提高小植株的木質(zhì)化程度，將生根的再生小植株從培養(yǎng)基中取出來，用流水洗凈培養(yǎng)基，然后移入裝有園土:馬糞=2:1的育苗盤中煉苗一周待移栽，其中泥炭土在烘箱中以150°C干熱滅菌2小時，隔兩天補(bǔ)一次水，向育苗盤中噴施0.2%多菌靈消毒，每天早晚噴施水霧，栽培溫度為25°C,利用自然散射光。
【文檔編號】A01H4/00GK104255527SQ201410550360
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2014年10月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月17日
【發(fā)明者】劉東鋒, 楊成東 申請人:南京帝道農(nóng)業(yè)科技有限公司