一種指葉毛蘭植株再生的快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明研究了一種指葉毛蘭植株再生的快速繁殖方法，包括無菌外植體的獲得，愈傷組織的誘導(dǎo)，愈傷組織的分化，生根誘導(dǎo)等步驟。本發(fā)明利用組織培養(yǎng)技術(shù)是快速繁殖指葉毛蘭的一種新途徑，在短期內(nèi)可生產(chǎn)出大量具有優(yōu)良遺傳性狀的種苗，滿足市場的各種需求，對指葉毛蘭的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展具有積極意義。
【專利說明】一種指葉毛蘭植株再生的快速繁殖方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)的快繁方法，屬于植物【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002]指葉毛蘭，Eria pa/wea,蘭科,多年生附生草本,高約20厘米,根莖橫走,有節(jié)，節(jié)下具叢生的黃褐色細(xì)須根，葉密集基出，扁圓線形，肥厚，肉質(zhì)，中空，多汁，深綠色，先端鈍尖，葉長15-20厘米，寬0.5-0.8厘米，厚0.3厘米，葉基部有鞘抱莖，總狀花序長約5厘米，頂生或生于葉腋之間，有1-4朵花，花小，長12毫米，橙黃色，蒴果小，具棱，內(nèi)有多數(shù)種子，花期夏季。常附生于巖石上和樹干上，生于海拔800-2200米的林中樹上或林下巖石上,產(chǎn)海南東南部、廣西、貴州西南部、云南西南部和西藏東南部。全草主治跌撲損傷，骨折，癰瘡市毒，解烏頭毒和磷化鋅中毒。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供指葉毛蘭植株再生的快速繁殖方法，本發(fā)明利用組織培養(yǎng)技術(shù)是快速繁殖指葉毛蘭的一種新途徑，在短期內(nèi)可生產(chǎn)出大量具有優(yōu)良遺傳性狀的種苗，滿足市場的各種需求，對指葉毛蘭的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展具有積極意義。
[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下方案來實現(xiàn)的:
挑選指葉毛蘭飽滿成熟種子剝殼后，用自來水沖洗種子，并用洗潔精清洗，再次用自來水沖洗干凈，在超凈工作臺上用70%乙醇浸泡30s, 0.1%的升萊消毒8min,無菌水沖洗5次，在無菌條件下，吸干種仁表面的水，用刀片沿縱軸小心的切開種仁，剔除種皮、胚及子葉，將胚乳切成約5mm的小塊，消毒處理過的指葉毛蘭胚乳接入培養(yǎng)基為CC+NAA0.5mg/L+6-BA6.0mg/1+半胱氨酸0.lg/L進行愈傷組織的誘導(dǎo)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，暗光照，溫度28±1°C，誘導(dǎo)出來的愈傷組織放入分化培養(yǎng)基CC+KT3.0-4.0mg/L+卡拉膠10-15g/L，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照20001x，溫度28±1°C，分化培養(yǎng)出來的指葉毛蘭芽苗放入生根培養(yǎng)基l/2CC+NAA2mg/L+卡拉膠10_15g/L，附加蔗糖20g/L，瓊脂 6.5g/L，ρΗ5.8，光照 65001χ，溫度 28± 1°C。
[0005]采用本發(fā)明制備的指葉毛蘭成活率高，周期短，利于大規(guī)模種植。
[0006]下面將結(jié)合【具體實施方式】對本發(fā)明作進一步闡述，但本發(fā)明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。

【具體實施方式】
[0007]實施例1
挑選指葉毛蘭飽滿成熟種子剝殼后，用自來水沖洗種子，并用洗潔精清洗，再次用自來水沖洗干凈，在超凈工作臺上用70%乙醇浸泡30s, 0.1%的升萊消毒8min,無菌水沖洗5次，在無菌條件下，吸干種仁表面的水，用刀片沿縱軸小心的切開種仁，剔除種皮、胚及子葉，將胚乳切成約5mm的小塊，消毒處理過的指葉毛蘭胚乳接入培養(yǎng)基為CC+NAA0.5mg/L+6-BA6.0mg/1+半胱氨酸0.lg/L進行愈傷組織的誘導(dǎo)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，暗光照，溫度28±1°C，誘導(dǎo)出來的愈傷組織放入分化培養(yǎng)基CC+KT3.0mg/L+卡拉膠10g/L，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照20001x，溫度28± 1°C，分化培養(yǎng)出來的指葉毛蘭芽苗放入生根培養(yǎng)基l/2CC+NAA2mg/L+卡拉膠10g/L，附加蔗糖20g/L，瓊脂6.5g/L，ρΗ5.8，光照 65001χ，溫度 28±1°C，生根率 93%。
[0008]實施例2
挑選指葉毛蘭飽滿成熟種子剝殼后，用自來水沖洗種子，并用洗潔精清洗，再次用自來水沖洗干凈，在超凈工作臺上用70%乙醇浸泡30s, 0.1%的升萊消毒8min,無菌水沖洗5次，在無菌條件下，吸干種仁表面的水，用刀片沿縱軸小心的切開種仁，剔除種皮、胚及子葉，將胚乳切成約5mm的小塊，消毒處理過的指葉毛蘭胚乳接入培養(yǎng)基為CC+NAA0.5mg/L+6-BA6.0mg/1+半胱氨酸0.lg/L進行愈傷組織的誘導(dǎo)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，暗光照，溫度28 ± I °C，誘導(dǎo)出來的愈傷組織放入分化培養(yǎng)基CC+KT4.0mg/L+卡拉膠15g/L,附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照20001x，溫度28 ± I °C，分化培養(yǎng)出來的指葉毛蘭芽苗放入生根培養(yǎng)基l/2CC+NAA2mg/L+卡拉膠15g/L，附加蔗糖20g/L，瓊脂6.5g/L，ρΗ5.8，光照 65001χ，溫度 28± 1°C，生根率 95%。
[0009]實施例3
挑選指葉毛蘭飽滿成熟種子剝殼后，用自來水沖洗種子，并用洗潔精清洗，再次用自來水沖洗干凈，在超凈工作臺上用70%乙醇浸泡30s, 0.1%的升萊消毒8min,無菌水沖洗5次，在無菌條件下，吸干種仁表面的水，用刀片沿縱軸小心的切開種仁，剔除種皮、胚及子葉，將胚乳切成約5mm的小塊，消毒處理過的指葉毛蘭胚乳接入培養(yǎng)基為CC+NAA0.5mg/L+6-BA6.0mg/1+半胱氨酸0.lg/L進行愈傷組織的誘導(dǎo)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，暗光照，溫度28 ± I °C，誘導(dǎo)出來的愈傷組織放入分化培養(yǎng)基CC+KT3.0mg/L+卡拉膠15g/L,附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照20001x，溫度28 ± I °C，分化培養(yǎng)出來的指葉毛蘭芽苗放入生根培養(yǎng)基l/2CC+NAA2mg/L+卡拉膠15g/L，附加蔗糖20g/L，瓊脂6.5g/L，ρΗ5.8，光照 65001χ，溫度 28 ± I °C，生根率 94%。
【權(quán)利要求】
1.一種指葉毛蘭植株再生的快速繁殖方法，包括無菌外植體的獲得，愈傷組織的誘導(dǎo)，愈傷組織的分化，生根誘導(dǎo)，其主要步驟如下: (1)取指葉毛蘭的幼嫩胚乳，對其進行消毒處理； (2)將步驟(1)消毒處理過的指葉毛蘭胚乳接入培養(yǎng)基為CC+NAA0.5mg/L+6-BA6.0mg/1+半胱氨酸0.lg/L進行愈傷組織的誘導(dǎo)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，暗光照，溫度 28±1°C ； (3)取步驟(2)誘導(dǎo)出來的愈傷組織放入分化培養(yǎng)基CC+KT3.0-4.0mg/L+卡拉膠10-15g/L，附加蔗糖 30g/L，瓊脂 6.5g/L，ρΗ5.8，光照 20001χ，溫度 28±1°C ; (4)取步驟(3)分化培養(yǎng)出來的指葉毛蘭芽苗放入生根培養(yǎng)基l/2CC+NAA2mg/L+卡拉膠 10-15g/L,附加蔗糖 20g/L，瓊脂 6.5g/L，ρΗ5.8，光照 65001χ，溫度 28±1°C。
2.按照權(quán)利要求1所述的一種指葉毛蘭植株再生的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(1)中所述指葉毛蘭無菌外植體的獲得為，挑選指葉毛蘭飽滿成熟種子剝殼后，用自來水沖洗種子，并用洗潔精清洗，再次用自來水沖洗干凈，在超凈工作臺上用70%乙醇浸泡30s，0.1%的升汞消毒8min，無菌水沖洗5次，在無菌條件下，吸干種仁表面的水，用刀片沿縱軸小心的切開種仁，剔除種皮、胚及子葉，將胚乳切成約5mm的小塊。
【文檔編號】A01H4/00GK104255528SQ201410550608
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2014年10月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月17日
【發(fā)明者】劉東鋒, 楊成東 申請人:南京帝道農(nóng)業(yè)科技有限公司