銀杏組織培養(yǎng)外植體消毒方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種銀杏組織培養(yǎng)外植體消毒的方法。本發(fā)明介紹了銀杏組織培養(yǎng)中不同外植體的處理和消毒方法，以降低銀杏組培的污染率，和因處理不當(dāng)造成的死亡率。本發(fā)明利用銀杏組織培養(yǎng)中常見外植體：莖段，胚，冬芽，在傳統(tǒng)的組培消毒方法上進(jìn)行了部分改良，從而提高了外植體接種的成活率，達(dá)到提高銀杏組培繁殖的效率和產(chǎn)量的目的。本方法對(duì)銀杏外植體進(jìn)行消毒處理，操作簡單、可行。
【專利說明】銀杏組織培養(yǎng)外植體消毒方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于樹木生長發(fā)育及繁殖的【技術(shù)領(lǐng)域】，特別是一種關(guān)于銀杏組織培養(yǎng)外植體消毒的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]銀杏(Ginkgo biloba L.)是第四紀(jì)冰川的孑遺植物，是葉果材兼優(yōu)的珍稀樹種。中國作為世界上銀杏第一大國，擁有世界銀杏種質(zhì)資源的90%以上，在我國可考證的栽培歷史達(dá)千年之久，具有較高的經(jīng)濟(jì)、生態(tài)和文化價(jià)值。利用植物組織培養(yǎng)快速繁殖優(yōu)良品種，是苗木生產(chǎn)中最見成效、應(yīng)用最廣的技術(shù)之一。目前，銀杏組織培養(yǎng)中常用的外植體有莖段、胚和冬芽，而這些外植體在處理消毒過程中主要存在以下突出問題:(I)外植體處理不當(dāng)，導(dǎo)致成活率低，生長不良。(2)外植體消毒不徹底，導(dǎo)致污染率高，影響了銀杏組培繁殖的效率和產(chǎn)量。
[0003]本發(fā)明利用銀杏組織培養(yǎng)中常見外植體:莖段，胚，冬芽，在傳統(tǒng)的組培消毒方法上進(jìn)行了部分改良，從而降低了銀杏組培的污染率，和因處理不當(dāng)造成的死亡率。目前還未見銀杏組織培養(yǎng)外植體消毒方法的報(bào)道，本發(fā)明是在這樣的技術(shù)背景下提出的。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明旨在降低銀杏組織培養(yǎng)中的污染率，在傳統(tǒng)的組培消毒方法上做了部分改進(jìn)，重點(diǎn)介紹了銀杏組織培養(yǎng)中常見外植體的消毒方法，操作簡便，污染率低，提高了銀杏組培繁殖的效率和產(chǎn)量。本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案:
[0005](I)消毒液的選用:使用70%酒精和0.1%氯化汞進(jìn)行消毒，0.1%氯化汞每升加入3-4滴吐溫20。
[0006](2)外植體選取時(shí)間:銀杏組培中常用的外植體有幼嫩莖段，胚，冬芽。莖段培養(yǎng)外植體最佳選取時(shí)間為4月上中旬，取當(dāng)年銀杏苗木抽生長約1cm的新枝；胚培養(yǎng)外植體最佳選取時(shí)間為10月上中旬，取當(dāng)年銀杏種核；冬芽培養(yǎng)外植體最佳選取時(shí)間為3月上旬冬芽萌發(fā)前，取當(dāng)年生枝條上未萌發(fā)的芽。
[0007](3)莖段消毒:莖段剪去葉片，用肥皂水擦洗，再在自來水下沖洗干凈，無菌操作臺(tái)下依次用70%酒精消毒30s，帶吐溫20的0.1 %氯化汞消毒8-10min，無菌水沖洗3_5次，然后用無菌的濾紙吸去莖段表面的水分，剪成l-2cm長，留1-2個(gè)腋芽或頂芽，接種。
[0008](4)胚消毒:除去果皮和種殼，剝離種皮，用肥皂水擦洗，再在自來水下沖洗干凈，無菌操作臺(tái)下依次用70%酒精消毒30s，帶吐溫20的0.1%氯化汞消毒6-8min，無菌水沖洗3-5次，然后用無菌的濾紙吸去種仁表面的水分，從胚乳中取出胚，接種。
[0009](5)冬芽消毒:從當(dāng)年生的枝條中部剪取約Icm長、帶有一個(gè)冬芽的莖段，用肥皂水擦洗，再在自來水下沖洗干凈，無菌操作臺(tái)下依次用70%酒精消毒30s，帶吐溫20的
0.1 %氯化萊消毒8-10min,無菌水沖洗3_5次,用無菌的濾紙吸去表面的水分,然后切除莖段，留一小部分莖段與冬芽連接的木質(zhì)部分，剝?nèi)ネ鈱友亏[，至第一幼葉露出時(shí)，取與小部分木質(zhì)連接的芽作為外植體，接種。
[0010]本發(fā)明的有益效果是:
[0011](1)在0.1%氯化汞的消毒液中加入吐溫20，吐溫20是一種表面活性物質(zhì)，可以使氯化汞消毒更加徹底。
[0012](2)外植體選取時(shí)間:春季銀杏苗木抽生新枝后，長約10cm，即可進(jìn)行，但最佳時(shí)間為4月上中旬，這段時(shí)間的嫩莖生長旺盛，且不易滋生內(nèi)生菌影響培養(yǎng)。胚培養(yǎng)外植體最佳選取時(shí)間為10月上中旬，此時(shí)的胚可長到0.5-lcm，萌發(fā)率高。冬芽培養(yǎng)外植體最佳選取時(shí)間為3月上旬冬芽萌發(fā)前，取一到兩年生枝條的芽，此時(shí)冬芽外植體較飽滿，易接種，取當(dāng)年生枝條的芽，這樣保證冬芽為葉芽，而不是花芽，影響實(shí)驗(yàn)。
[0013](3)莖段的消毒:莖段經(jīng)沖洗、消毒后，剪成l-2cm長，留1-2個(gè)腋芽或頂芽，莖段沖洗消毒徹底能降低培養(yǎng)的污染率。
[0014](4)胚消毒:除去果皮和種殼，剝離種皮消毒，可使種仁消毒更加徹底，再從胚乳中取出胚接種，大大降低了污染率。
[0015](5)冬芽消毒:冬芽外植體處理，切除莖段時(shí)，留一小部分莖段與冬芽連接的木質(zhì)部分，剝?nèi)ネ鈱友亏[，至第一幼葉露出時(shí)，取與小部分木質(zhì)連接的莖尖部分作為外植體，留小部分木質(zhì)是為了保護(hù)芽體，避免破壞生長點(diǎn)。
[0016]利用上述方法對(duì)銀杏組培常見外植體進(jìn)行消毒，操作簡便，污染率低，提高了銀杏組培繁殖的效率和產(chǎn)量。

【具體實(shí)施方式】
[0017]實(shí)施例1
[0018]應(yīng)用本方法在山東省泰安市山東農(nóng)業(yè)大學(xué)南校區(qū)組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，在傳統(tǒng)的組培消毒方法上做了部分改進(jìn)，重點(diǎn)介紹了銀杏組織培養(yǎng)中常見外植體的消毒方法，操作簡便，污染率低，提高了銀杏組培繁殖的效率和產(chǎn)量。銀杏組織培養(yǎng)外植體消毒方法實(shí)施步驟如下:
[0019]1.消毒液的選用
[0020]配制70%酒精和0.1%氯化汞進(jìn)行消毒，0.1%氯化汞每升加入3-4滴吐溫20。
[0021]2.外植體的選擇
[0022]4月上中旬，取當(dāng)年銀杏苗木抽生長約10cm的新枝；10月上中旬，取當(dāng)年銀杏種核；3月上旬，取當(dāng)年生枝條上未萌發(fā)的芽。
[0023]3.莖段消毒
[0024]莖段剪去葉片，用肥皂水擦洗，再在自來水下沖洗干凈，無菌操作臺(tái)下依次用70%酒精消毒30s,帶吐溫20的0.1 %氯化萊消毒8-10min,無菌水沖洗3_5次,然后用無菌的濾紙吸去莖段表面的水分，剪成l-2cm長，留1-2個(gè)腋芽或頂芽，接種。
[0025]4.胚消毒
[0026]除去果皮和種殼，剝離種皮，用肥皂水擦洗，再在自來水下沖洗干凈，無菌操作臺(tái)下依次用70%酒精消毒30s，帶吐溫20的0.1 %氯化汞消毒6-8min，無菌水沖洗3_5次，然后用無菌的濾紙吸去種仁表面的水分，從胚乳中取出胚，接種。
[0027]5.冬芽消毒
[0028]從當(dāng)年生的枝條中部剪取約Icm長、帶有一個(gè)冬芽的莖段，用肥皂水擦洗，再在自來水下沖洗干凈，無菌操作臺(tái)下依次用70%酒精消毒30s，帶吐溫20的0.1 %氯化汞消毒8-10min，無菌水沖洗3_5次，用無菌的濾紙吸去表面的水分，然后切除莖段，留一小部分莖段與冬芽連接的木質(zhì)部分，剝?nèi)ネ鈱友亏[，至第一幼葉露出時(shí)，取與小部分木質(zhì)連接的芽作為外植體，接種。
[0029]本發(fā)明不局限于以上實(shí)施方式，只要是在銀杏組織培養(yǎng)中上采取了以上消毒的方法，都將落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種銀杏組織培養(yǎng)外植體消毒的方法，該方法包括以下步驟: (1)消毒液的選用:使用70%酒精和0.1%氯化汞進(jìn)行消毒，0.1%氯化汞每升加入3-4滴吐溫20 ； (2)外植體選取時(shí)間:銀杏組培中常用的外植體有幼嫩莖段，胚，冬芽；莖段培養(yǎng)外植體最佳選取時(shí)間為4月上中旬，取當(dāng)年銀杏苗木抽生的新枝，長約1cm ;胚培養(yǎng)外植體最佳選取時(shí)間為10月上中旬，取當(dāng)年銀杏種核；冬芽培養(yǎng)外植體最佳選取時(shí)間為3月上旬冬芽萌發(fā)前，取一到兩年生枝條的芽； (3)莖段消毒:莖段剪去葉片，用肥皂水擦洗，再在自來水下沖洗干凈，無菌操作臺(tái)下依次用70%酒精消毒30s，帶吐溫20的0.1 %氯化汞消毒8-10min，無菌水沖洗3_5次，然后用無菌的濾紙吸去莖段表面的水分，剪成l-2cm長，留1-2個(gè)腋芽或頂芽，接種； (4)胚消毒:除去果皮和種殼，剝離種皮，用肥皂水擦洗，再在自來水下沖洗干凈，無菌操作臺(tái)下依次用70%酒精消毒30s，帶吐溫20的0.1 %氯化汞消毒6-8min，無菌水沖洗3_5次，然后用無菌的濾紙吸去種仁表面的水分，從胚乳中取出胚，接種； (5)冬芽消毒:從當(dāng)年生的枝條中部剪取約Icm長、帶有一個(gè)冬芽的莖段，用肥皂水擦洗，再在自來水下沖洗干凈，無菌操作臺(tái)下依次用70%酒精消毒30s，帶吐溫20的0.1%氯化汞消毒8-10min，無菌水沖洗3_5次，用無菌的濾紙吸去表面的水分，然后切除莖段，留一小部分莖段與冬芽連接的木質(zhì)部分，剝?nèi)ネ鈱友亏[，至第一幼葉露出時(shí)，取與小部分木質(zhì)連接的芽作為外植體，接種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種銀杏組織培養(yǎng)外植體消毒方法，其特征在于，步驟(I)所描述的消毒液的選用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種銀杏組織培養(yǎng)外植體消毒方法，其特征在于，步驟(2)所描述的培養(yǎng)時(shí)期的選擇。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種銀杏組織培養(yǎng)外植體消毒方法，其特征在于，步驟(3)(4)(5)所描述的外植體消毒方法。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK104221882SQ201410550994
【公開日】2014年12月24日 申請(qǐng)日期:2014年10月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月17日
【發(fā)明者】邢世巖, 王萱, 李繼紅, 吳岐奎, 劉曉靜, 孫立民 申請(qǐng)人:山東農(nóng)業(yè)大學(xué)