一種苦瓜離體快速繁殖的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種苦瓜離體快速繁殖的方法，通過對獲取的大田栽培的苦瓜苗頂芽或腋芽作為外植體，接種于MS+6-BA的培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)出芽后，切取誘導(dǎo)出的芽接種于MS+6-BA的培養(yǎng)基中，使芽增殖并伸長，取株高1.5cm左右的健壯的無根苗，轉(zhuǎn)入1/2MS+IAA的生根培養(yǎng)基中，10d左右即可出現(xiàn)不定根，在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)25d左右有大量不定根產(chǎn)生，進(jìn)行煉苗，煉苗3d后，移栽至土壤獲得再生植株。本發(fā)明技術(shù)方法使苦瓜苗的繁殖速度加快，每代苦瓜苗的繁殖只需要1～2個月時間，為加快培育苦瓜新品種提供了技術(shù)支持。
【專利說明】一種苦瓜離體快速繁殖的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)栽培【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種苦瓜離體快速繁殖的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]苦瓜又名涼瓜,學(xué)名Momordica charantia L.是葫蘆科苦瓜屬蔬菜作物，因其具有明顯的降血糖、降血脂、抗炎、抑制組織癌細(xì)胞生長、利尿活血和消炎退熱等藥理作用，越來越受到人們的喜愛。作為一種蔬菜作物和藥用植物，苦瓜有著重要的研究價值，對其進(jìn)行抗病、延遲成熟和品質(zhì)改良的研究具有重要的理論和實踐意義。然而目前苦瓜栽培依賴于種子育苗，具有繁種成本高、育苗速度慢、成苗率低等缺點，育成一個新的苦瓜品種更是需要5年以上的時間，優(yōu)良品種種子供不應(yīng)求，價格昂貴。
[0003]目前關(guān)于苦瓜的研究主要集中在大田栽培方法、遺傳多樣性、苦瓜營養(yǎng)價值和藥用價值等方面，有關(guān)組織培養(yǎng)方面國內(nèi)外曾做了一些研究工作，但進(jìn)展不顯著。關(guān)于快速繁殖研究主要停留在取無菌苗的胚軸或子葉為外植體或由外植體誘導(dǎo)出愈傷組織再誘導(dǎo)出芽進(jìn)行離體再生繁殖，總的來看，苦瓜外植體易于形成愈傷組織而再生不定芽較困難。此夕卜，不同研究者所得的結(jié)論差異較大，可重復(fù)性差。目前還缺乏對采用苦瓜大田正常植株頂芽或腋芽作為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)技術(shù)的研究，這一研究的成功再應(yīng)用于苦瓜雜交育種，將能大大縮短苦瓜雜交育種的年限，有力推動現(xiàn)代生物技術(shù)在苦瓜上的應(yīng)用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明旨在提供一種苦瓜離體快速繁殖的方法，該技術(shù)目的在于解決苦瓜雜交育種時親本需要反復(fù)純化、耗時長的問題。
[0005]本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實現(xiàn):
[0006]一種苦瓜離體快速繁殖的方法，包含以下步驟:
[0007]I)大田中選取生長健壯的苦瓜植株的頂芽或腋芽作為外植體，并進(jìn)行處理；
[0008]2)將消毒好的外植體接種于MS+6-BA的培養(yǎng)基中，溫度27± I°C，光照時間16h/d，光照強(qiáng)度15001x,十天后誘導(dǎo)出芽；
[0009]3)切取誘導(dǎo)出的芽接種于MS+6-BA的培養(yǎng)基中，使芽增殖并伸長；
[0010]4)取株高1.5cm左右的健壯的無根苗，轉(zhuǎn)入1/2MS+IAA的生根培養(yǎng)基中，15d左右出現(xiàn)不定根；
[0011]5)在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)25d后產(chǎn)生大量不定根，進(jìn)行煉苗，煉苗3d后，移栽至土壤獲得再生植株。
[0012]本發(fā)明步驟(I)對頂芽或腋芽的處理方法為:用75%的酒精消毒30s，無菌水沖洗3次，切去傷口部位，再用0.1 %的HgCl2溶液消毒7?lOmin，無菌水沖洗6?8次，切去傷口部位后用無菌紙巾吸干表面水分；
[0013]本發(fā)明步驟⑵中培養(yǎng)基中6-BA的濃度為0.5?lmg/L ；
[0014]本發(fā)明步驟(3)中培養(yǎng)基中6-BA的濃度為1.0?2.0mg/L ；
[0015]本發(fā)明步驟(4)所述的生根培養(yǎng)基中IAA的濃度為0.5?1.0mg/L。
[0016]本發(fā)明的有益效果為:1)繁殖速度快，通常育成一個苦瓜品種需要5年以上，而應(yīng)用高效的苦瓜離體快繁技術(shù)結(jié)合田間雜交技術(shù)選育苦瓜新品種只需I至2年時間；2)已建立的苦瓜組織培養(yǎng)體系多是采用消毒后的種子萌發(fā)幾天后的胚軸或子葉等作為外植體，現(xiàn)有的苦瓜組培體系無法將大田中具有優(yōu)良性狀的苦瓜品種保留下來，為苦瓜的離體繁殖提供了技術(shù)基礎(chǔ)，具有開拓創(chuàng)新的意義。

【具體實施方式】
[0017]下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的說明，以下所述，僅是對本發(fā)明的較佳實施例而已，并非對本發(fā)明做其他形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以變更為同等變化的等效實施例。凡是未脫離本發(fā)明方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實質(zhì)對以上實施例所做的任何簡單修改或等同變化，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
[0018]實施例1
[0019]一種苦瓜離體快速繁殖的方法，通過以下步驟完成:
[0020]I)大田中選取生長健壯的苦瓜植株的頂芽作為外植體，用75%的酒精消毒30s，無菌水沖洗3次，切去傷口部位，再用0.1%的HgCl2溶液消毒7-10min，無菌水沖洗6?8次,切去傷口部位后用紙巾吸干表面水分；
[0021]2)將消毒好的頂芽外植體接種于MS+6-BA0.5mg/L的培養(yǎng)基中,溫度27±1°C,光照時間16h/d，光照強(qiáng)度15001x，10d后誘導(dǎo)出芽；
[0022]3)切取誘導(dǎo)出的芽接種于MS+6-BA1.0mg/L的培養(yǎng)基中，使芽增殖并伸長；
[0023]4)取株高1.5cm左右的健壯的無根苗，轉(zhuǎn)入1/2MS+IAA0.5mg/L的生根培養(yǎng)基中，15d左右即可出現(xiàn)不定根；
[0024]5)在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)25d左右有大量不定根產(chǎn)生，進(jìn)行煉苗，煉苗3d后，移栽至土壤獲得再生植株。
[0025]實施例2
[0026]一種苦瓜離體快速繁殖的方法，通過以下步驟完成:
[0027]I)大田中選取生長健壯的苦瓜植株的腋芽作為外植體，用75%的酒精消毒30s，無菌水沖洗3次，切去傷口部位，再用0.1%的HgCl2溶液消毒7-10min，無菌水沖洗6?8次,切去傷口部位后用紙巾吸干表面水分；
[0028]2)將消毒好的腋芽外植體接種于MS+6-BA0.8mg/L的培養(yǎng)基中，溫度27±1°C，光照時間16h/d，光照強(qiáng)度15001x，10d后誘導(dǎo)出芽；
[0029]3)切取誘導(dǎo)出的芽接種于MS+6-BA1.5mg/L的培養(yǎng)基中，使芽增殖并伸長；
[0030]4)取株高1.5cm左右的健壯的無根苗，轉(zhuǎn)入1/2MS+IAA0.8mg/L的生根培養(yǎng)基中，1d左右即可出現(xiàn)不定根；
[0031]5)在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)20d左右有大量不定根產(chǎn)生，進(jìn)行煉苗，煉苗3d后，移栽至土壤獲得再生植株。
[0032]實施例3
[0033]一種苦瓜離體快速繁殖的方法，通過以下步驟完成:
[0034]I)大田中選取生長健壯的苦瓜植株的腋芽作為外植體，用75%的酒精消毒30s，無菌水沖洗3次，切去傷口部位，再用0.1%的HgCl2溶液消毒7-10min，無菌水沖洗6?8次,切去傷口部位后用紙巾吸干表面水分；
[0035]2)將消毒好的腋芽外植體接種于MS+6-BA1.0mg/L的培養(yǎng)基中，溫度27±1°C，光照時間16h/d，光照強(qiáng)度15001x，十天后誘導(dǎo)出芽；
[0036]3)切取誘導(dǎo)出的芽接種于MS+6-BA2.0mg/L的培養(yǎng)基中，使芽增殖并伸長；
[0037]4)取株高1.5cm左右的健壯的無根苗，轉(zhuǎn)入1/2MS+IAA1.0mg/L的生根培養(yǎng)基中，1d左右即可出現(xiàn)不定根；
[0038]5)在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)25d左右有大量不定根產(chǎn)生，進(jìn)行煉苗，煉苗3d后，移栽至土壤獲得再生植株。
[0039]實施例4
[0040]一種苦瓜離體快速繁殖的方法，通過以下步驟完成:
[0041]I)大田中選取生長健壯的苦瓜植株的頂芽作為外植體，用75%的酒精消毒30s，無菌水沖洗3次，切去傷口部位，再用0.1 %的HgCl2溶液消毒7min，無菌水沖洗6?8次，切去傷口部位后用紙巾吸干表面水分；
[0042]2)將消毒好的頂芽外植體接種于MS+6-BA0.5mg/L的培養(yǎng)基中，溫度27±1°C，光照時間16h/d，光照強(qiáng)度15001x，使頂芽伸長，分節(jié)；
[0043]3)切取伸長的頂芽接種于MS+6-BA0.8mg/L的培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)側(cè)芽的生長；
[0044]4)切取無菌苗上半部分伸長至1.5cm左右健壯的頂芽和側(cè)芽接種于1/2MS+IAA1.0mg/L的培養(yǎng)基中，1d左右即可出現(xiàn)不定根；
[0045]5)無菌苗的下半部分，切去傷口，繼續(xù)接種于MS+6-BA0.5mg/L培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)出芽；
[0046]6)在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)25d左右有大量不定根產(chǎn)生，進(jìn)行煉苗，煉苗3d后，移栽至土壤獲得再生植株。
【權(quán)利要求】
1.一種苦瓜離體快速繁殖的方法，其特征在于:包含以下步驟: 1)大田中選取生長健壯的苦瓜植株的頂芽或腋芽作為外植體，并進(jìn)行處理； 2)將消毒好的外植體接種于MS+6-BA的培養(yǎng)基中，溫度27±I°C，光照時間16h/d，光照強(qiáng)度15001x,十天后誘導(dǎo)出芽； 3)切取誘導(dǎo)出的芽接種于MS+6-BA的培養(yǎng)基中，使芽增殖并伸長； 4)取株高1.5cm左右的健壯的無根苗，轉(zhuǎn)入1/2MS+IAA的生根培養(yǎng)基中，1d左右出現(xiàn)不定根； 5)在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)25d后產(chǎn)生大量不定根，進(jìn)行煉苗，煉苗3d后，移栽至土壤獲得再生植株。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種苦瓜離體快速繁殖的方法，其特征在于:步驟(I)中對頂芽或腋芽的處理方法為:用75 %的酒精消毒30s，無菌水沖洗3次，切去傷口部位，再用0.1%的HgCl2溶液消毒7?lOmin，無菌水沖洗6-8次，切去傷口部位后用紙巾吸干表面水分。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種苦瓜離體快速繁殖的方法，其特征在于:步驟(2)中培養(yǎng)基中6-BA的濃度為0.5?lmg/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種苦瓜離體快速繁殖的方法，其特征在于:步驟(3)中培養(yǎng)基中6-BA的濃度為1.0?2.0mg/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種苦瓜離體快速繁殖的方法，其特征在于:步驟(4)所述的生根培養(yǎng)基中IAA的濃度為0.5?1.0mg/L。
【文檔編號】A01H4/00GK104322370SQ201410572618
【公開日】2015年2月4日 申請日期:2014年10月23日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月23日
【發(fā)明者】戴修純, 吳蓓, 鄭巖松, 譚耀文, 張華 , 劉紹欽, 鄒集文, 黃熾輝, 張木清, 秦鵬, 黃健新 申請人:廣州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院