一種提高牛肝菌菌絲體分離成活率的培養(yǎng)基的制作方法
【專利摘要】一種提高牛肝菌菌絲體分離成活率的培養(yǎng)基，它是由下列原料配比制成：干牛肝菌粉、馬鈴薯煮出液、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、葡萄糖、磷酸二氫鉀、瓊脂。本發(fā)明有益的效果是：通過干牛肝菌粉的作用，能夠降低其他真菌的侵染，有效提高牛肝菌菌絲體分離的成活率，選材方便，快捷，改變后的培養(yǎng)基針對性更強(qiáng)，配方合理，營養(yǎng)均衡，能夠充分滿足牛肝菌菌絲體生長的營養(yǎng)要求，培養(yǎng)的菌絲體健壯，生命力更強(qiáng)，可有效的減少其它真菌的侵染，有效地提高牛肝菌菌絲體分離的成活率，使用效果明顯。
【專利說明】一種提高牛肝菌菌絲體分離成活率的培養(yǎng)基

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種培養(yǎng)基，尤其涉及一種提高牛肝菌菌絲體分離成活率的培養(yǎng)基。

【背景技術(shù)】
[0002] 牛肝菌又名大腳菇，是世界珍貴的食用菌，具有很高的食用價(jià)值和藥用價(jià)值，但牛 肝菌屬于菌根菌，大部分的品種還不能人工栽培，牛肝菌野生資源的缺乏阻礙了研究的進(jìn) 一步深入。
[0003]牛肝菌的菌絲體作為研究的材料得到很多學(xué)者的親睞，但牛肝菌屬于共生菌，目 前國內(nèi)對牛肝菌的研究較少，很多牛肝菌的品種還無法確定共生的植物類型，因而給牛肝 菌菌絲體分離的成活率帶來了很大的難度。
[0004] 目前牛肝菌分離的培養(yǎng)基主要是采用常規(guī)食用菌分離的通用培養(yǎng)基或在常規(guī)培 養(yǎng)基上添加少量維生素，營養(yǎng)不全面，不能滿足牛肝菌菌絲體生長的需要，分離效果差，污 染率高，還有一些市面上報(bào)道出來的牛肝菌培養(yǎng)基，專一性強(qiáng)，只能針對單一的牛肝菌使 用，不能滿足其它牛肝菌菌絲的生長，菌絲活力差，易污染。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明要解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，提供一種提高牛肝菌菌絲體分離成活率 的培養(yǎng)基，解決目前牛肝菌菌絲體分離困難的問題，提高分離效果，避免污染，提高牛肝菌 菌絲活力。
[0006]本發(fā)明解決其技術(shù)問題采用的技術(shù)方案：這種提高牛肝菌菌絲體分離成活率的培 養(yǎng)基，它是由下列重量份數(shù)的原料配比制成：干牛肝菌粉5份?8份、馬鈴薯煮出液200份、 磷酸氫二鉀〇. 5份、硫酸鎂1. 5份、葡萄糖20份、磷酸二氫鉀1份、瓊脂15份。
[0007]上述的提高牛肝菌菌絲體分離成活率的培養(yǎng)基的制備方法，它是由下列步驟進(jìn)行 的：
[0008]第一步，干牛肝菌粉的制備，將干燥待分離的牛肝菌采用超微粉碎震動磨進(jìn)行粉 碎，粉碎時(shí)間為30分鐘?40分鐘，粉碎后過200目篩，得到干牛肝菌粉；
[0009]第二步，馬鈴薯煮出液的處理，選擇無變綠、無發(fā)芽的馬鈴薯，去皮、切碎后小火煮 沸30分鐘，三層紗布過濾，過濾后得到馬鈴薯煮出液；
[0010] 第三步，培養(yǎng)基的制備，將獲得的干牛肝菌粉、馬鈴薯煮出液、磷酸氫二鉀、硫酸 鎂、葡萄糖、磷酸二氫鉀、瓊脂進(jìn)行充分混合，攪拌均勻，然后加入純凈水補(bǔ)足到1L，即得到 提高牛肝菌菌絲體分離成活率的培養(yǎng)基。
[0011] 干牛肝菌粉的品種與待分離的牛肝菌品種相同，干牛肝菌粉的加入能夠降低其他 真菌的侵染，有效提高牛肝菌菌絲體分離的成活率，并且由于干牛肝菌粉的品種與待分離 的牛肝菌品種相同，針對任何不同品種的牛肝菌均可以使用，避免出現(xiàn)不能使用的問題。
[0012] 干牛肝菌粉內(nèi)含有牛肝菌菌絲體生長所需要的全面的營養(yǎng)物質(zhì)，牛肝菌菌絲體成 長所需要的營養(yǎng)物質(zhì)全部包含在干牛肝菌粉內(nèi)，并且輔助以馬鈴薯煮出液、磷酸氫二鉀、硫 酸鎂、葡萄糖、磷酸二氫鉀、瓊脂這些營養(yǎng)物質(zhì)，從而讓牛肝菌的菌絲出現(xiàn)萌發(fā)后就能夠得 到全面、均衡的營養(yǎng)物質(zhì)，并且這種營養(yǎng)物質(zhì)是針對該品種牛肝菌的生長而存在，營養(yǎng)物質(zhì) 在全面均衡的基礎(chǔ)上，又體現(xiàn)了專一的效果，從而讓牛肝菌的菌絲出現(xiàn)萌發(fā)后就得到全面 均衡、專一的營養(yǎng)物質(zhì)，加快了萌發(fā)速度，提高了牛肝菌菌絲生長的競爭力，從而排擠其他 真菌的生長，降低其他真菌的侵染，有效提高牛肝菌菌絲體分離的成活率。
[0013] 本發(fā)明的提高牛肝菌菌絲體分離成活率的培養(yǎng)基，馬鈴薯、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、 葡萄糖、磷酸二氫鉀、瓊脂作為培養(yǎng)基的基礎(chǔ)營養(yǎng)物質(zhì)，然后加入干牛肝菌粉，使培養(yǎng)基的 營養(yǎng)根據(jù)待分離牛肝菌種類的不同而改變，同時(shí)，也不用研究牛肝菌共生的植物類型與種 類，選材方便，快捷，改變后的培養(yǎng)基針對性更強(qiáng)，配方合理，營養(yǎng)均衡，能夠成分滿足牛肝 菌菌絲體生長的營養(yǎng)要求，培養(yǎng)的菌絲體健壯，生命力更強(qiáng)，可有效的減少其它真菌的侵 染，有效地提高牛肝菌菌絲體分離的成活率。
[0014] 本發(fā)明有益的效果是：本發(fā)明的提高牛肝菌菌絲體分離成活率的培養(yǎng)基，通過干 牛肝菌粉的作用，能夠降低其他真菌的侵染，讓牛肝菌的菌絲出現(xiàn)萌發(fā)后就得到全面均衡、 專一的營養(yǎng)物質(zhì)，加快了萌發(fā)速度，提高了牛肝菌菌絲生長的競爭力，從而排擠其他真菌的 生長，降低其他真菌的侵染，有效提高牛肝菌菌絲體分離的成活率，有效提高牛肝菌菌絲體 分離的成活率，并且能夠使培養(yǎng)基的營養(yǎng)根據(jù)待分離牛肝菌種類的不同而改變，同時(shí)，也不 用研究牛肝菌共生的植物類型與種類，選材方便，快捷，改變后的培養(yǎng)基針對性更強(qiáng)，配方 合理，營養(yǎng)均衡，能夠充分滿足牛肝菌菌絲體生長的營養(yǎng)要求，培養(yǎng)的菌絲體健壯，生命力 更強(qiáng)，可有效的減少其它真菌的侵染，有效地提高牛肝菌菌絲體分離的成活率，使用效果 好。

【具體實(shí)施方式】
[0015] 下面對本發(fā)明作進(jìn)一步說明：
[0016] 實(shí)施例一：
[0017] 這種提高牛肝菌菌絲體分離成活率的培養(yǎng)基，它是由下列重量份數(shù)的原料配比制 成：干牛肝菌粉5克、馬鈴薯煮出液200克、磷酸氫二鉀0. 5克、硫酸鎂1. 5克、葡萄糖20克、 磷酸二氫鉀1克、瓊脂15克。
[0018] 上述的提高牛肝菌菌絲體分離成活率的培養(yǎng)基的制備方法，它是由下列步驟進(jìn)行 的：
[0019] 第一步，干牛肝菌粉的制備，將干燥待分離的牛肝菌采用超微粉碎震動磨進(jìn)行粉 碎，粉碎時(shí)間為30分鐘，粉碎后過200目篩，得到干牛肝菌粉；
[0020] 第二步，馬鈴薯煮出液的處理，選擇無變綠、無發(fā)芽的馬鈴薯，去皮、切碎后小火煮 沸30分鐘，三層紗布過濾，過濾后得到馬鈴薯煮出液；
[0021] 第三步，培養(yǎng)基的制備，將獲得的干牛肝菌粉、馬鈴薯煮出液、磷酸氫二鉀、硫酸 鎂、葡萄糖、磷酸二氫鉀、瓊脂進(jìn)行充分混合，攪拌均勻，然后加入純凈水補(bǔ)足到1L，即得到 提高牛肝菌菌絲體分離成活率的培養(yǎng)基。
[0022] 采用本發(fā)明提高牛肝菌菌絲體分離成活率的培養(yǎng)基的培養(yǎng)方法是：將得到的培養(yǎng) 基分別分裝在250mL的三角瓶中，每瓶分裝150mL，在壓強(qiáng)1. 02Kg/cm2、溫度121°C，滅菌30 分鐘，待培養(yǎng)基的溫度降低到50°C時(shí)，每瓶加入150uL雙抗，雙抗指的是青霉素80萬y 加入pbs 4ml,鏈霉素100萬li加入pbs 5ml,各自混勻后，再一起混勻，混勻后，每瓶分別 加入10個(gè)90_的培養(yǎng)皿中，待冷卻凝固后備用，然后選取完整、生長中期的桃紅牛肝菌、黃 粉牛肝菌，用75%的酒精擦拭牛肝菌表面，手術(shù)刀切開，分別選取菌柄處、菌柄與菌蓋相連 接處的組織塊接種到裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，每個(gè)培養(yǎng)皿接種8塊，用封口膜封口后放于 26 °C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
[0023] 實(shí)施例一中1克為1份。
[0024] 實(shí)施例二：
[0025] 這種提高牛肝菌菌絲體分離成活率的培養(yǎng)基，它是由下列重量份數(shù)的原料配比制 成：干牛肝菌粉7克、馬鈴薯煮出液200克、磷酸氫二鉀0. 5克、硫酸鎂1. 5克、葡萄糖20克、 磷酸二氫鉀1克、瓊脂15克。
[0026]上述的提高牛肝菌菌絲體分離成活率的培養(yǎng)基的制備方法，它是由下列步驟進(jìn)行 的：
[0027] 第一步，干牛肝菌粉的制備，將干燥待分離的牛肝菌采用超微粉碎震動磨進(jìn)行粉 碎，粉碎時(shí)間為35分鐘，粉碎后過200目篩，得到干牛肝菌粉；
[0028] 第二步，馬鈴薯煮出液的處理，選擇無變綠、無發(fā)芽的馬鈴薯，去皮、切碎后小火煮 沸30分鐘，三層紗布過濾，過濾后得到馬鈴薯煮出液；
[0029] 第三步，培養(yǎng)基的制備，將獲得的干牛肝菌粉、馬鈴薯煮出液、磷酸氫二鉀、硫酸 鎂、葡萄糖、磷酸二氫鉀、瓊脂進(jìn)行充分混合，攪拌均勻，然后加入純凈水補(bǔ)足到1L，即得到 提高牛肝菌菌絲體分離成活率的培養(yǎng)基。
[0030] 采用本發(fā)明提高牛肝菌菌絲體分離成活率的培養(yǎng)基的培養(yǎng)方法是：將得到的培養(yǎng) 基分別分裝在250mL的三角瓶中，每瓶分裝150mL，在壓強(qiáng)1. 02Kg/cm2、溫度121°C，滅菌30 分鐘，待培養(yǎng)基的溫度降低到50°C時(shí)，每瓶加入150uL雙抗，雙抗指的是青霉素80萬y 加入pbs 4ml,鏈霉素100萬ii加入pbs 5ml,各自混勻后，再一起混勻，混勻后，每瓶分別 加入10個(gè)90_的培養(yǎng)皿中，待冷卻凝固后備用，然后選取完整、生長中期的桃紅牛肝菌、黃 粉牛肝菌，用75 %的酒精擦拭牛肝菌表面，手術(shù)刀切開，分別選取菌柄處、菌柄與菌蓋相連 接處的組織塊接種到裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，每個(gè)培養(yǎng)皿接種8塊，用封口膜封口后放于 26 °C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
[0031] 實(shí)施例二中1克為1份。
[0032] 實(shí)施例三：
[0033] 這種提高牛肝菌菌絲體分離成活率的培養(yǎng)基，它是由下列重量份數(shù)的原料配比制 成：干牛肝菌粉8克、馬鈴薯煮出液200克、磷酸氫二鉀0. 5克、硫酸鎂1. 5克、葡萄糖20克、 磷酸二氫鉀1克、瓊脂15克。
[0034]上述的提高牛肝菌菌絲體分離成活率的培養(yǎng)基的制備方法，它是由下列步驟進(jìn)行 的：
[0035] 第一步，干牛肝菌粉的制備，將干燥待分離的牛肝菌采用超微粉碎震動磨進(jìn)行粉 碎，粉碎時(shí)間為40分鐘，粉碎后過200目篩，得到干牛肝菌粉；
[0036] 第二步，馬鈴薯煮出液的處理，選擇無變綠、無發(fā)芽的馬鈴薯，去皮、切碎后小火煮 沸30分鐘，三層紗布過濾，過濾后得到馬鈴薯煮出液；
[0037] 第三步，培養(yǎng)基的制備，將獲得的干牛肝菌粉、馬鈴薯煮出液、磷酸氫二鉀、硫酸 鎂、葡萄糖、磷酸二氫鉀、瓊脂進(jìn)行充分混合，攪拌均勻，然后加入純凈水補(bǔ)足到1L，即得到 提高牛肝菌菌絲體分離成活率的培養(yǎng)基。
[0038]實(shí)施例三中1克為1份。
[0039]采用本發(fā)明提高牛肝菌菌絲體分離成活率的培養(yǎng)基的培養(yǎng)方法是：將得到的培養(yǎng) 基分別分裝在250mL的三角瓶中，每瓶分裝150mL，在壓強(qiáng)1. 02Kg/cm2、溫度121°C，滅菌30 分鐘，待培養(yǎng)基的溫度降低到50°C時(shí)，每瓶加入150uL雙抗，雙抗指的是青霉素80萬y 加入pbs 4ml,鏈霉素100萬ii加入pbs 5ml,各自混勻后，再一起混勻，混勻后，每瓶分別 加入10個(gè)90_的培養(yǎng)皿中，待冷卻凝固后備用，然后選取完整、生長中期的桃紅牛肝菌、黃 粉牛肝菌，用75 %的酒精擦拭牛肝菌表面，手術(shù)刀切開，分別選取菌柄處、菌柄與菌蓋相連 接處的組織塊接種到裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，每個(gè)培養(yǎng)皿接種8塊，用封口膜封口后放于 26 °C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
[0040]以浙江麗水慶元縣采集的桃紅牛肝菌、黃粉牛肝菌為例，將本發(fā)明實(shí)施例一、實(shí)施 例二、實(shí)施例三與普通牛肝菌培養(yǎng)基進(jìn)行牛肝菌菌絲體分離成活率的對比，選取100份牛 肝菌菌絲體，結(jié)果如下：
[0041]

【權(quán)利要求】
1. 一種提高牛肝菌菌絲體分離成活率的培養(yǎng)基，其特征在于它是由下列重量份數(shù)的原 料配比制成：干牛肝菌粉5份?8份、馬鈴薯煮出液200份、磷酸氫二鉀0. 5份、硫酸鎂1. 5 份、葡萄糖20份、磷酸二氫鉀1份、瓊脂15份。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高牛肝菌菌絲體分離成活率的培養(yǎng)基的制備方法，其特征 在于它是由下列步驟進(jìn)行的： (1) 干牛肝菌粉的制備，將干燥待分離的牛肝菌采用超微粉碎震動磨進(jìn)行粉碎，粉碎時(shí) 間為30分鐘?40分鐘，粉碎后過200目篩，得到干牛肝菌粉； (2) 馬鈴薯煮出液的處理，選擇無變綠、無發(fā)芽的馬鈴薯，去皮、切碎后小火煮沸30分 鐘，三層紗布過濾，過濾后得到馬鈴薯煮出液； (3) 培養(yǎng)基的制備，將獲得的干牛肝菌粉、馬鈴薯煮出液、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、葡萄糖、 磷酸二氫鉀、瓊脂進(jìn)行充分混合，攪拌均勻，然后加入純凈水補(bǔ)足到1L，即得到提高牛肝菌 菌絲體分離成活率的培養(yǎng)基。
【文檔編號】C05G3/00GK104370632SQ201410621654
【公開日】2015年2月25日 申請日期:2014年11月6日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月6日
【發(fā)明者】曾凡清, 王立新, 鄭巧平, 劉昆, 宋小亞, 吳春玲, 蔣俊, 路新彥 申請人:麗水市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院