一種淡水貝類背角無齒蚌幼蚌適口餌料藻的優(yōu)選方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種淡水貝類背角無齒蚌幼蚌適口餌料藻的優(yōu)選方法,包括以下步驟:(1)原位背角無齒蚌幼蚌消化道內(nèi)食性組成;(2)餌料藻的實(shí)驗(yàn)室無菌純種培養(yǎng);(3)標(biāo)準(zhǔn)化背角無齒蚌幼蚌的實(shí)驗(yàn)室獲取;(4)幼蚌的餌料投喂驗(yàn)證;以投喂組幼蚌成活率高、生長(zhǎng)速度快為依據(jù)優(yōu)選出背角無齒蚌幼蚌的適口餌料藻。本發(fā)明成功提取幼蚌消化道內(nèi)容物并掌握了其關(guān)鍵餌料藻;并經(jīng)過實(shí)驗(yàn)室純化培養(yǎng)獲得大量餌料藻,繼而在實(shí)驗(yàn)室對(duì)標(biāo)準(zhǔn)化繁育獲取生長(zhǎng)周期同步、規(guī)格一致的幼蚌進(jìn)行投喂驗(yàn)證,成功優(yōu)選出了幼蚌的適口餌料藻;有效建立人工繁育種群及擴(kuò)大其養(yǎng)殖規(guī)模提供科學(xué)依據(jù),為其它淡水貝類及珍稀魚類的人工繁育及增殖放流資源群體的培育提供餌料藻類方面的借鑒和參考。
【專利說明】一種淡水貝類背角無齒蚌幼蚌適口餌料藻的優(yōu)選方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種淡水貝類背角無齒蛘幼蛘適口餌料藻的優(yōu)選方法,屬于背角無齒蛘幼蛘養(yǎng)殖【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]近年來,由于生境的破壞、水體污染等原因,漁業(yè)資源衰退趨勢(shì)明顯,瀕危物種數(shù)目持續(xù)增加。2006年,農(nóng)業(yè)部會(huì)同有關(guān)部門和單位制定的《中國水生生物資源養(yǎng)護(hù)行動(dòng)綱要》明確指出:要養(yǎng)護(hù)和合理利用水生生物資源,實(shí)現(xiàn)漁業(yè)可持續(xù)發(fā)展,維護(hù)水生生物多樣性。然而太湖流域包括刀鱭、貝類在內(nèi)的許多水生生物的野外種群狀況令人堪憂,為保護(hù)太湖流域珍稀生物包括刀鱭、貝類等水生生物,對(duì)珍稀物種進(jìn)行人工增養(yǎng)殖放流已成為恢復(fù)其自然資源的重要途徑。而在人工繁育中,水生生物的幼苗個(gè)體低成活率受到合適的生物餌料的限制。然而由于水生生物的幼體(尤其是較早生活史階段的個(gè)體)采集難度大,解剖調(diào)查難度高,對(duì)幼體適口餌料的研究方法是個(gè)亟需攻克難題。
[0003]國際上,美國已經(jīng)成功研發(fā)出海洋貝類的適口餌料,并投入批量生產(chǎn)商品化。美國去年再度提供5.3億歐元資金,以便在接下來的十年內(nèi)保證美國境內(nèi)的貝類生產(chǎn)質(zhì)量。然而美國的餌料商品中主要為一些海產(chǎn)藻類,并不適合淡水貝類。淡水貝類中,背角無齒蛘于2003年被本研究室選為“淡水貝類觀察監(jiān)測(cè)體系”的實(shí)驗(yàn)生物,目前該研究也進(jìn)入建立“實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物種群”這個(gè)步驟、這同樣受到了人工繁育過程中幼蛘個(gè)體成活率低的限制。因此本研究室以背角無齒蛘為例,開創(chuàng)性的探索一種篩選出背角無齒蛘幼蛘適口餌料藻的研究方法,優(yōu)選出背角無齒蛘幼蛘的適口餌料是本發(fā)明的關(guān)鍵所在,也將會(huì)為其他水產(chǎn)品動(dòng)物適口餌料篩選技術(shù)的開發(fā)提供科學(xué)基礎(chǔ)和借鑒參考。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種淡水貝類背角無齒蛘幼蛘適口餌料藻的優(yōu)選方法,克服了傳統(tǒng)淡水貝類食性調(diào)查中野外難以獲取處于各生活史階段的蛘樣、蛘所生活水體中藻類背景復(fù)雜缺乏對(duì)比性、野外蛘樣研究連續(xù)性差、餌料藻很難進(jìn)行后續(xù)投喂驗(yàn)證等傳統(tǒng)研究方法的不足;提供了一種基于原位采集背角無齒蛘幼蛘,克服幼蛘消化道解剖難度高的技術(shù)難題,成功提取幼蛘消化道內(nèi)容物并掌握了其關(guān)鍵餌料藻;并經(jīng)過實(shí)驗(yàn)室純化培養(yǎng)獲得大量餌料藻,繼而在實(shí)驗(yàn)室利用標(biāo)準(zhǔn)化繁育所獲得同一生長(zhǎng)周期、背景值一致的幼蛘來進(jìn)行投喂驗(yàn)證,從而成功優(yōu)選出了幼蛘的適口餌料藻;一方面為提高本研究室“標(biāo)準(zhǔn)化蛘”幼蛘繁育的成活率,為有效建立人工繁育種群及擴(kuò)大其養(yǎng)殖規(guī)模提供科學(xué)依據(jù);另一方面,亦為其它淡水貝類及其他水產(chǎn)品生物的培育提供餌料藻類方面的借鑒和參考。
[0005]按照本發(fā)明提供的技術(shù)方案,一種淡水貝類背角無齒蛘幼蛘適口餌料藻的優(yōu)選方法,包括以下步驟:
1、原位背角無齒蛘幼蛘消化道內(nèi)食性組成
采集同一批繁育處于不同月齡的背角無齒蛘幼蛘,體長(zhǎng)0.5cm-lcm,帶回實(shí)驗(yàn)室處理,對(duì)消化道內(nèi)容物進(jìn)行采集,加入1-2 mL體積比為4%的甲醛,鏡檢其藻類組成,通過計(jì)算優(yōu)勢(shì)度確定背角無齒蛘幼蛘可攝食的餌料藻類為四角藻和小球藻;
2、餌料藻的實(shí)驗(yàn)室無菌純種培養(yǎng)
通過步驟(I)掌握了背角無齒蛘幼蛘消化系統(tǒng)中的餌料藻類,在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)對(duì)餌料藻類:四角藻和小球藻分別進(jìn)行無菌純化培養(yǎng),分別采用BGll培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng);小球藻的培養(yǎng):取30-40 mL細(xì)胞密度為1.0-107-2.0X 107個(gè)/L至IL BGll培養(yǎng)基中;四角藻的培養(yǎng):取30-40 mL細(xì)胞密度為L(zhǎng) 0-106-5.0X 106f/LM500mL BGll培養(yǎng)基中;培養(yǎng)溫度為:25°C,光照為2000-3000LX,培養(yǎng)2-3月,獲取到1-5L小球藻,細(xì)胞密度為3 X 109_3 X 101°個(gè)/I,1-5L四角藻,細(xì)胞密度為3X 108-3X 109個(gè)/L,為后續(xù)投喂驗(yàn)證提供餌料生物;
3、“標(biāo)準(zhǔn)化”背角無齒蛘幼蛘的實(shí)驗(yàn)室獲取
篩選健康的3-4齡,殼長(zhǎng)90-110mm的背角無齒蛘母蛘帶回實(shí)驗(yàn)室,用塑料吸管吸水把外鰓中成熟的鉤介幼蟲沖入盛有1-2L曝氣3天的自來水容器中,放入準(zhǔn)備好的黃顙魚(性成熟,規(guī)格100-200g),2-3尾,以30-40 r.mirT1的速率沿盆壁順時(shí)針方向攪動(dòng),15_20min后將黃顙魚撈出,移入培育水池網(wǎng)箱中,每隔48h換水一次,經(jīng)過3天脫落期后,將黃顙魚及網(wǎng)箱從培育水池取出,用吸管虹吸采集培育池底部的幼蛘;
4、幼蛘的餌料投喂驗(yàn)證
將培養(yǎng)皿經(jīng)泡酸、去離子水清洗干凈,每個(gè)培養(yǎng)皿中加入10mL已曝氣3天的自來水,每組設(shè)置3個(gè)培養(yǎng)皿,每個(gè)培養(yǎng)皿中放入10個(gè)幼蛘,分別設(shè)置不同投餌組作為對(duì)照,投餌組分別投喂步驟(2)中經(jīng)培養(yǎng)的四角藻和小球藻,四角藻和小球藻分別以細(xì)胞密度為
1.2 X 16個(gè)/L-6.0 X 18個(gè)/L對(duì)脫落3天的幼蛘進(jìn)行投喂;而后放入25°C光照培養(yǎng)箱,光照度600LX,每隔48h進(jìn)行一次換水、鏡檢記錄其成活率,測(cè)量規(guī)格大小;培養(yǎng)3-30天后;對(duì)照組幼蛘成活率低、生長(zhǎng)速度慢;以投喂組幼蛘成活率高、生長(zhǎng)速度快為依據(jù)優(yōu)選出背角無齒蛘的適口餌料藻。
[0006]作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn),所述步驟(I)中不同月齡的背角無齒蛘幼蛘為2月齡、5月齡、8月齡和11月齡,同月齡的背角無齒蛘幼蛘為一個(gè)組,每組5個(gè)。
[0007]作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn),所述步驟(4)中泡酸的酸液含5-10%鹽酸的溶液30L,酸液內(nèi)泡24h-48h。
[0008]作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn),所述步驟(4)中幼蛘投喂密度為:1-15天幼蛘:小球藻投喂密度:3- 6 X 17個(gè)/L ; 15-30天幼蛘:小球藻投喂密度:6X 17個(gè)/L_2.4X 18個(gè)/L0
[0009]本發(fā)明與已有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn):
本發(fā)明解決了之前傳統(tǒng)研究方法中淡水貝類食性調(diào)查中野外難以獲取幼蛘、所采蛘樣大小不一、水體中藻類背景復(fù)雜等不足。本發(fā)明創(chuàng)新性的利用一種基于原位采集發(fā)育周期同步、背景值一致的背角無齒蛘幼蛘作為實(shí)驗(yàn)生物,并克服了幼蛘消化道解剖難度高的技術(shù)難題,成功提取幼蛘消化道內(nèi)容物并掌握了其關(guān)鍵餌料藻。并經(jīng)過實(shí)驗(yàn)室純化培養(yǎng)獲得大量餌料藻,繼而在實(shí)驗(yàn)室對(duì)標(biāo)準(zhǔn)化繁育獲取生長(zhǎng)周期同步、規(guī)格一致的幼蛘進(jìn)行投喂驗(yàn)證,成功優(yōu)選出了幼蛘的適口餌料藻。上述這些探索了一種篩選出背角無齒蛘幼蛘適口餌料藻的研究方法,為有效建立人工繁育種群及擴(kuò)大其養(yǎng)殖規(guī)模提供科學(xué)依據(jù),為其它淡水貝類及珍稀魚類的人工繁育及增殖放流資源群體的培育提供餌料藻類方面的借鑒和參考, 是本發(fā)明的關(guān)鍵所在。
【具體實(shí)施方式】
[0010]下面本發(fā)明將結(jié)合實(shí)施例作進(jìn)一步描述:
實(shí)施例一:根據(jù)本發(fā)明提供的“一種淡水貝類背角無齒蛘幼蛘適口餌料藻的優(yōu)選方法”,優(yōu)選重要餌料藻類對(duì)剛脫落的幼蛘進(jìn)行投喂:
根據(jù)本發(fā)明提供的一種淡水貝類背角無齒蛘幼蛘適口餌料藻的優(yōu)選方法,研究背角無齒蛘幼蛘的適口餌料,步驟如下:
1、原位背角無齒蛘幼蛘消化道內(nèi)食性組成
采集同一批繁育處于不同月齡(2月齡、5月齡、8月齡、11月齡)的背角無齒蛘幼蛘(每組5個(gè)),體長(zhǎng)0.5cm-lcm,帶回實(shí)驗(yàn)室處理,對(duì)消化道內(nèi)容物進(jìn)行采集,加入1-2 mL體積比為4%的甲醛,鏡檢其藻類組成,通過計(jì)算優(yōu)勢(shì)度確定背角無齒蛘幼蛘可攝食的餌料藻類為四角藻和小球藻;
2、餌料藻的實(shí)驗(yàn)室無菌純種培養(yǎng)
通過步驟(I)掌握了背角無齒蛘幼蛘消化系統(tǒng)中的餌料藻類,在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)對(duì)餌料藻類:四角藻和小球藻分別進(jìn)行無菌純化培養(yǎng),分別采用BGll培養(yǎng)基(購于中國科學(xué)院淡水藻種庫FACHB-collect1n)進(jìn)行培養(yǎng);小球藻的培養(yǎng):取30-40 mL細(xì)胞密度為1.0-107-2.0X 17個(gè)/L至IL BGll培養(yǎng)基中;四角藻的培養(yǎng):取30-40 mL細(xì)胞密度為1.0_106_5.0X 16個(gè)/L至500mL BGll培養(yǎng)基中;培養(yǎng)溫度為:25°C,光照為2000-3000LX,培養(yǎng)2_3月,獲取到1-5L小球藻,細(xì)胞密度為3X109-3X101Q個(gè)/L,1-5L四角藻,細(xì)胞密度為3 X 108_3 X 19個(gè)/L,為后續(xù)投喂驗(yàn)證提供餌料生物;
3、“標(biāo)準(zhǔn)化”背角無齒蛘幼蛘的實(shí)驗(yàn)室獲取
篩選健康的3-4齡,殼長(zhǎng)90-110mm的背角無齒蛘母蛘帶回實(shí)驗(yàn)室,用塑料吸管吸水把外鰓中成熟的鉤介幼蟲沖入盛有1-2L曝氣3天的自來水容器中,放入性成熟的黃顙魚,所述黃顙魚規(guī)格100-200g,2-3尾,以30-40 r -min^1的速率沿盆壁順時(shí)針方向攪動(dòng),15_20min后將黃顙魚撈出,移入培育水池網(wǎng)箱中,每隔48h換水一次,經(jīng)過3天脫落期后,將黃顙魚及網(wǎng)箱從培育水池取出,用吸管虹吸采集培育池底部的幼蛘;
4、幼蛘的餌料投喂驗(yàn)證
將培養(yǎng)皿經(jīng)泡酸(含5-10%鹽酸的溶液30L內(nèi)24h-48h)、去離子水清洗干凈,每個(gè)培養(yǎng)皿中加入10mL已曝氣3天的自來水,每組設(shè)置3個(gè)培養(yǎng)皿,每個(gè)培養(yǎng)皿中放入10個(gè)幼蛘,分別設(shè)置不同投餌組作為對(duì)照,投餌組分別投喂步驟(2)中經(jīng)培養(yǎng)的四角藻和小球藻,四角藻以較低細(xì)胞密度為1.2X 16個(gè)/L,6.0 X 17個(gè)/L,小球藻以細(xì)胞密度為1.2X 17個(gè)/L,6.0 X 17個(gè)/L對(duì)脫落3天的幼蛘進(jìn)行投喂;而后放入25°C光照培養(yǎng)箱,光照度600LX,每隔48h進(jìn)行一次換水、鏡檢記錄其成活率,測(cè)量規(guī)格大?。慌囵B(yǎng)14天后,統(tǒng)計(jì)各組別幼蛘成活率,對(duì)照組成活率直線下降,培養(yǎng)第14天成活率為4.4%,規(guī)格為:高268 μ m,長(zhǎng)245 μ m ;投喂四角藻的幼蛘組成活率下降較平穩(wěn),培養(yǎng)第14天四角藻1.2X 16個(gè)/L組成活率為6.7%,規(guī)格為:高279 μ m,長(zhǎng)245 μ m,6.0 X 17個(gè)/L組成活率為15.6%,規(guī)格為:高299 μ m,長(zhǎng)279 μ m ;投喂小球藻1.2 X 17個(gè)/L組成活率為33.3%,規(guī)格為:高297 μ m,長(zhǎng)292 μ m,6.0 X 17個(gè)/L組成活率為24.4%,規(guī)格為:高298 μ m,長(zhǎng)292 μ m ;說明本發(fā)明方法成功優(yōu)選出了背角無齒蛘幼蛘的適口餌料,能夠明顯提高背角無齒蛘繁育中剛脫落幼蛘的成活率。
[0011]實(shí)施例二:利用“一種淡水貝類背角無齒蛘幼蛘適口餌料藻的優(yōu)選方法”優(yōu)選餌料藻類對(duì)脫落10天的幼蛘進(jìn)行投喂
根據(jù)本發(fā)明提供的一種淡水貝類背角無齒蛘幼蛘適口餌料藻的優(yōu)選方法,研究背角無齒蛘幼蛘的適口餌料,步驟如下:
1、原位背角無齒蛘幼蛘消化道內(nèi)食性組成
采集同一批繁育處于不同月齡(2月齡、5月齡、8月齡、11月齡)的背角無齒蛘幼蛘(每組5個(gè)),體長(zhǎng)0.5cm-lcm,帶回實(shí)驗(yàn)室處理,對(duì)消化道內(nèi)容物進(jìn)行采集,加入1-2 mL體積比為4%的甲醛,鏡檢其藻類組成,通過計(jì)算優(yōu)勢(shì)度確定背角無齒蛘幼蛘可攝食的餌料藻類為四角藻和小球藻;
2、餌料藻的實(shí)驗(yàn)室無菌純種培養(yǎng)
通過步驟(I)掌握了背角無齒蛘幼蛘消化系統(tǒng)中的餌料藻類,在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)對(duì)餌料藻類:四角藻和小球藻分別進(jìn)行無菌純化培養(yǎng),分別采用BGll培養(yǎng)基(購于中國科學(xué)院淡水藻種庫FACHB-collect1n)進(jìn)行培養(yǎng);小球藻的培養(yǎng):取30-40 mL細(xì)胞密度為1.0-107-2.0X 17個(gè)/L至IL BGll培養(yǎng)基中;四角藻的培養(yǎng):取30-40 mL細(xì)胞密度為1.0_106_5.0X 16個(gè)/L至500mL BGll培養(yǎng)基中;培養(yǎng)溫度為:25°C,光照為2000-3000LX,培養(yǎng)2_3月,獲取到1-5L小球藻,細(xì)胞密度為3X109-3X101Q個(gè)/L,1-5L四角藻,細(xì)胞密度為3 X 108_3 X 19個(gè)/L,為后續(xù)投喂驗(yàn)證提供餌料生物;
3、“標(biāo)準(zhǔn)化”背角無齒蛘幼蛘的實(shí)驗(yàn)室獲取
篩選健康的3-4齡,殼長(zhǎng)90-110mm的背角無齒蛘母蛘帶回實(shí)驗(yàn)室,用塑料吸管吸水把外鰓中成熟的鉤介幼蟲沖入盛有1-2L曝氣3天的自來水容器中,放入性成熟的黃顙魚,所述黃顙魚規(guī)格100-200g,2-3尾,以30-40 r -min^1的速率沿盆壁順時(shí)針方向攪動(dòng),15_20min后將黃顙魚撈出,移入培育水池網(wǎng)箱中,每隔48h換水一次,經(jīng)過3天脫落期后,將黃顙魚及網(wǎng)箱從培育水池取出,用吸管虹吸采集培育池底部的幼蛘;
4、幼蛘的餌料投喂驗(yàn)證
將培養(yǎng)皿經(jīng)泡酸(含5-10%鹽酸的溶液30L內(nèi)24h-48h)、去離子水清洗干凈,每個(gè)培養(yǎng)皿中加入10mL已曝氣3天的自來水,每組設(shè)置3個(gè)培養(yǎng)皿,每個(gè)培養(yǎng)皿中放入10個(gè)幼蛘,設(shè)置不投餌組作為對(duì)照,投餌組為投喂步驟(2)中經(jīng)培養(yǎng)的小球藻,以中高投餌密度
1.2 X 18個(gè)/L和6.0X 18個(gè)/L進(jìn)行投喂。而后放入25°C光照培養(yǎng)箱,光照度600LX,每隔48h進(jìn)行一次換水、鏡檢記錄其成活率,測(cè)量規(guī)格大小;投喂14天后,不投餌對(duì)照組幼蛘成活率為6.7%,規(guī)格為:高268 μ m,長(zhǎng)245 μ m ; 1.2 X 18個(gè)/L小球藻投餌組成活率為53.3%,規(guī)格為高288 μ m,長(zhǎng)285 μ m ;6.0XlO8個(gè)/L小球藻投餌組成活率為42.2%,規(guī)格為高301 μ m,長(zhǎng)288 μ m。證明本發(fā)明所優(yōu)選出的小球藻是背角無齒蛘幼蛘的重要適口餌料,投喂餌料藻情況下幼蛘成活率較高,生長(zhǎng)規(guī)格明顯大于不投餌組。
[0012]實(shí)施例三:利用“一種淡水貝類背角無齒蛘幼蛘適口餌料藻的優(yōu)選方法”優(yōu)選的餌料藻類對(duì)脫落10天的幼蛘進(jìn)行投喂
根據(jù)本發(fā)明提供的一種淡水貝類背角無齒蛘幼蛘適口餌料藻的優(yōu)選方法,研究背角無齒蛘幼蛘的適口餌料,步驟如下: 1、原位背角無齒蛘幼蛘消化道內(nèi)食性組成
采集同一批繁育處于不同月齡(2月齡、5月齡、8月齡、11月齡)的背角無齒蛘幼蛘(每組5個(gè)),體長(zhǎng)0.5cm-lcm,帶回實(shí)驗(yàn)室處理,對(duì)消化道內(nèi)容物進(jìn)行采集,加入1-2 mL體積比為4%的甲醛,鏡檢其藻類組成,通過計(jì)算優(yōu)勢(shì)度確定背角無齒蛘幼蛘可攝食的餌料藻類為四角藻和小球藻;
2、餌料藻的實(shí)驗(yàn)室無菌純種培養(yǎng)
通過步驟(I)掌握了背角無齒蛘幼蛘消化系統(tǒng)中的餌料藻類,在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)對(duì)餌料藻類:四角藻和小球藻分別進(jìn)行無菌純化培養(yǎng),分別采用BGll培養(yǎng)基(購于中國科學(xué)院淡水藻種庫FACHB-collect1n)進(jìn)行培養(yǎng);小球藻的培養(yǎng):取30-40 mL細(xì)胞密度為1.0-107-2.0X 17個(gè)/L至IL BGll培養(yǎng)基中;四角藻的培養(yǎng):取30-40 mL細(xì)胞密度為1.0_106_5.0X 16個(gè)/L至500mL BGll培養(yǎng)基中;培養(yǎng)溫度為:25°C,光照為2000-3000LX,培養(yǎng)2_3月,獲取到
1-5L小球藻,細(xì)胞密度為3X109-3X101Q個(gè)/L,1-5L四角藻,細(xì)胞密度為3 X 108_3 X 19個(gè)/L,為后續(xù)投喂驗(yàn)證提供餌料生物;
3、“標(biāo)準(zhǔn)化”背角無齒蛘幼蛘的實(shí)驗(yàn)室獲取
篩選健康的3-4齡,殼長(zhǎng)90-110mm的背角無齒蛘母蛘帶回實(shí)驗(yàn)室,用塑料吸管吸水把外鰓中成熟的鉤介幼蟲沖入盛有1-2L曝氣3天的自來水容器中,放入性成熟的黃顙魚,所述黃顙魚規(guī)格100-200g,2-3尾,以30-40 r -min^1的速率沿盆壁順時(shí)針方向攪動(dòng),15_20min后將黃顙魚撈出,移入培育水池網(wǎng)箱中,每隔48h換水一次,經(jīng)過3天脫落期后,將黃顙魚及網(wǎng)箱從培育水池取出,用吸管虹吸采集培育池底部的幼蛘;
4、幼蛘的餌料投喂驗(yàn)證
將培養(yǎng)皿經(jīng)泡酸(含5-10%鹽酸的溶液30L內(nèi)24h-48h)、去離子水清洗干凈,每個(gè)培養(yǎng)皿中加入10mL已曝氣3天的自來水,每組設(shè)置3個(gè)培養(yǎng)皿,每個(gè)培養(yǎng)皿中放入10個(gè)幼蛘,設(shè)置不投餌組作為對(duì)照,投餌組為投喂步驟(2)中經(jīng)培養(yǎng)的小球藻,以中等投喂密度分別投喂小球藻6X107個(gè)/L,1.2X 18個(gè)/L,2.4X 18個(gè)/L ;培養(yǎng)20天后,幼蛘成長(zhǎng)至I月齡。對(duì)照組幼蛘成活率為3.3%,規(guī)格為高348±58 Mm,長(zhǎng)362±65 Mm ;投喂6 X 17個(gè)/L小球藻組幼蛘成活率為43.3%,規(guī)格為高405±33 Mm,長(zhǎng)530±78 Mm ;投喂1.2 X 18個(gè)/L小球藻幼蛘成活率為50%規(guī)格為高508±82 Mm,長(zhǎng)694±98 Mm。不投喂藻類的組別增長(zhǎng)緩慢,幼蛘規(guī)格顯著小于投喂小球藻的幼蛘組,而投喂1.2X 18個(gè)/L小球藻組別增長(zhǎng)最快。證明本發(fā)明所優(yōu)選出的小球藻是背角無齒蛘幼蛘重要適口餌料,且餌料藻越充足幼蛘生長(zhǎng)發(fā)育越快。
[0013]綜合上述,本發(fā)明克服了傳統(tǒng)淡水貝類食性調(diào)查中野外難以獲取幼蛘、所采蛘樣水體中藻類背景復(fù)雜缺乏對(duì)比性、研究連續(xù)性差、缺乏后續(xù)投喂驗(yàn)證等傳統(tǒng)研究方法的不足。提供了一種基于原位采集發(fā)育周期同步、背景值一致的背角無齒蛘幼蛘的方法體系,并克服了幼蛘消化道解剖難度高的技術(shù)難題,成功提取幼蛘消化道內(nèi)容物并掌握了其關(guān)鍵餌料藻。并經(jīng)過實(shí)驗(yàn)室純化培養(yǎng)獲得大量餌料藻,繼而在實(shí)驗(yàn)室對(duì)標(biāo)準(zhǔn)化繁育取得生長(zhǎng)周期同步、規(guī)格一致的幼蛘進(jìn)行投喂驗(yàn)證,優(yōu)選出了背角無齒蛘幼蛘的重要適口餌料藻并成功應(yīng)用。所上這些探索了一種篩選出背角無齒蛘幼蛘適口餌料藻的研究方法,為有效建立人工繁育種群及擴(kuò)大其養(yǎng)殖規(guī)模提供科學(xué)依據(jù),為其它淡水貝類及其他水產(chǎn)品動(dòng)物的人工繁育及增殖放流資源群體的培育提供餌料藻類方面的借鑒和參考。
【權(quán)利要求】
1.一種淡水貝類背角無齒蛘幼蛘適口餌料藻的優(yōu)選方法,其特征是:包括以下步驟: (I)、原位背角無齒蛘幼蛘消化道內(nèi)食性組成 選擇同一批繁育處于不同月齡的背角無齒蛘幼蛘,所述背角無齒蛘幼蛘體長(zhǎng)為:0.5cm-lcm,帶回實(shí)驗(yàn)室處理,對(duì)消化道內(nèi)容物進(jìn)行采集,加入1-2 mL體積比為4%的甲醛,鏡檢其藻類組成,通過計(jì)算優(yōu)勢(shì)度確定背角無齒蛘幼蛘可攝食的餌料藻類為四角藻和小球藻; (2 )、餌料藻的實(shí)驗(yàn)室無菌純種培養(yǎng) 通過步驟(I)掌握了背角無齒蛘幼蛘消化系統(tǒng)中的餌料藻類,在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)對(duì)餌料藻類:四角藻和小球藻分別進(jìn)行無菌純化培養(yǎng),分別采用BGll培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng);小球藻的培養(yǎng):取30-40 mL細(xì)胞密度為1.0-107-2.0X 107個(gè)/L至IL BGll培養(yǎng)基中;四角藻的培養(yǎng):取30-40 mL細(xì)胞密度為L(zhǎng) 0-106-5.0X 106f/LM500mL BGll培養(yǎng)基中;培養(yǎng)溫度為:25°C,光照為2000-3000LX,培養(yǎng)2-3月,獲取到1-5L小球藻,細(xì)胞密度為3 X 109_3 X 101°個(gè)/I,1-5L四角藻,細(xì)胞密度為3X 108-3X 109個(gè)/L,為后續(xù)投喂驗(yàn)證提供餌料生物; (3)、標(biāo)準(zhǔn)化背角無齒蛘幼蛘的實(shí)驗(yàn)室獲取 篩選健康的3-4齡,殼長(zhǎng)90-110mm的背角無齒蛘母蛘帶回實(shí)驗(yàn)室,用塑料吸管吸水把外鰓中成熟的鉤介幼蟲沖入盛有1-2L曝氣3天的自來水容器中,放入性成熟的黃顙魚,所述黃顙魚規(guī)格100-200g,2-3尾,以30-40 r -min^1的速率沿盆壁順時(shí)針方向攪動(dòng),15_20min后將黃顙魚撈出,移入培育水池網(wǎng)箱中,每隔48h換水一次,經(jīng)過3天脫落期后,將黃顙魚及網(wǎng)箱從培育水池取出,用吸管虹吸采集培育池底部的幼蛘; (4)、幼蛘的餌料投喂驗(yàn)證 將培養(yǎng)皿經(jīng)泡酸、去離子水清洗干凈,每個(gè)培養(yǎng)皿中加入10mL已曝氣3天的自來水,每組設(shè)置3個(gè)培養(yǎng)皿,每個(gè)培養(yǎng)皿中放入10個(gè)幼蛘,分別設(shè)置不同投餌組作為對(duì)照,投餌組分別投喂步驟(2)中經(jīng)培養(yǎng)的四角藻和小球藻,四角藻和小球藻分別以細(xì)胞密度為1.2 X 16個(gè)/L-6.0 X 18個(gè)/L對(duì)脫落3天的幼蛘進(jìn)行投喂;而后放入25°C光照培養(yǎng)箱,光照度600LX,每隔48h進(jìn)行一次換水、鏡檢記錄其成活率,測(cè)量規(guī)格大??;培養(yǎng)3-30天后;對(duì)照組幼蛘成活率低、生長(zhǎng)速度慢;以投喂組幼蛘成活率高、生長(zhǎng)速度快為依據(jù)優(yōu)選出背角無齒蛘的適口餌料藻。
2.如權(quán)利要求1所述的一種淡水貝類背角無齒蛘幼蛘適口餌料藻的優(yōu)選方法,其特征是:所述步驟(I)中不同月齡的背角無齒蛘幼蛘為2月齡、5月齡、8月齡和11月齡,同月齡的背角無齒蛘幼蛘為一個(gè)組,每組5個(gè)。
3.如權(quán)利要求1所述的一種淡水貝類背角無齒蛘幼蛘適口餌料藻的優(yōu)選方法,其特征是:所述步驟(4)中泡酸的酸液含5-10%鹽酸的溶液30L,酸液內(nèi)泡24h-48h。
4.如權(quán)利要求1所述的一種淡水貝類背角無齒蛘幼蛘適口餌料藻的優(yōu)選方法,其特征是:所述步驟(4)中幼蛘投喂密度為:1-15天幼蛘:小球藻投喂密度:3- 6X107個(gè)/L;15-30天幼蛘:小球藻投喂密度:6X 17個(gè)/L-2.4X 18個(gè)/L。
【文檔編號(hào)】A23K1/14GK104322420SQ201410630233
【公開日】2015年2月4日 申請(qǐng)日期:2014年11月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月11日
【發(fā)明者】蘇彥平, 楊健, 劉洪波, 陳修報(bào) 申請(qǐng)人:中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心