一種細(xì)葉水團(tuán)花用組織培養(yǎng)基組合物及快速組培方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于植物離體組織培養(yǎng)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種細(xì)葉水團(tuán)花用組織培養(yǎng)基組合物及利用該組合物的細(xì)葉水團(tuán)花的快速組織培養(yǎng)方法。該組合物包括誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基，是在現(xiàn)有的MS培養(yǎng)基基礎(chǔ)上改良所得的。本發(fā)明同時(shí)提供了一種高效的、快速的細(xì)葉水團(tuán)花的組織培養(yǎng)方法，打破了細(xì)葉水團(tuán)花傳統(tǒng)繁殖方法的限制，可同時(shí)獲得大量的細(xì)葉水團(tuán)花再生植株，從而大幅縮短繁殖周期。經(jīng)過(guò)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，本發(fā)明所建立的細(xì)葉水團(tuán)花的快繁體系，叢生芽的誘導(dǎo)率達(dá)到80%，誘導(dǎo)系數(shù)為4~6，增殖系數(shù)為8~10，生根率達(dá)到100%，形成再生植株的周期為3~4個(gè)月，對(duì)于細(xì)葉水團(tuán)花的推廣種植具有較為重要的應(yīng)用價(jià)值。
【專利說(shuō)明】一種細(xì)葉水團(tuán)花用組織培養(yǎng)基組合物及快速組培方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物離體組織培養(yǎng)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種細(xì)葉水團(tuán)花用組織培養(yǎng)基組合物及利用該組合物的細(xì)葉水團(tuán)花的快速組織培養(yǎng)方法。

【背景技術(shù)】
[0002]細(xì)葉水團(tuán)花{Adina rubella )是茜草科(Rubiaceae)水團(tuán)花屬(Adina)的一種落葉小灌木，其枝條細(xì)長(zhǎng)披散，有赤褐色柔毛。葉對(duì)生，厚紙質(zhì)，無(wú)柄，葉片卵狀，披針形或卵狀橢圓形，表面深綠色，有光澤。頭狀花序單一或2-3個(gè)頂生或腋生；花紫紅色。蒴果長(zhǎng)卵狀楔形?；ㄆ?-7月，果期9-10月。細(xì)葉水團(tuán)花的枝條披散，俏麗婀娜。葉片狹長(zhǎng)質(zhì)厚，綠油油而閃閃泛光。花開(kāi)時(shí)紫紅球花滿吐長(zhǎng)蕊，奇麗奪目，適用于池畔、塘邊配植，亦宜作花徑綠籬，根、花可供藥用，莖皮纖維可造紙和做人造棉等。細(xì)葉水團(tuán)花的根干蒼勁古樸、葉片細(xì)小稠密、色彩靚麗，因而也是制作盆景的好材料。
[0003]我國(guó)木本觀賞植物離體培養(yǎng)工作始于20世紀(jì)70年代，但到目前為止，能通過(guò)組培快繁的樹(shù)木種類還只占木本觀賞植物總數(shù)的10%，其主要原因:一是組織培養(yǎng)過(guò)程中存在外植體褐變、試管苗玻璃化和生根難等現(xiàn)象；二是研宄對(duì)象范圍小，可借鑒和應(yīng)用的技術(shù)很有限(木本觀賞植物組織培養(yǎng)技術(shù)，李青林，鄒永田，劉廣林，黃曉光，河北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，14(6):38 — 41，51)，加之不同科屬植物生長(zhǎng)環(huán)境與生長(zhǎng)特性的差異、所需的基本培養(yǎng)基與激素配比的差異、所需植物外植體的差異等等因素，迄今為止，木本植物組培技術(shù)還難以找到可普遍遵循的規(guī)律。
[0004]木本植物組培技術(shù)在林業(yè)科研生產(chǎn)中的應(yīng)用與其它植物一樣，主要體現(xiàn)在植物的快速繁殖、植物脫毒、新品種培育和種質(zhì)資源的保存等方面，不論在科研或生產(chǎn)中的應(yīng)用，都應(yīng)建立在成熟的植物組培技術(shù)基礎(chǔ)上。組培快繁技術(shù)、組培脫毒技術(shù)已在草本植物中廣泛推廣應(yīng)用，但木本植物組培快繁技術(shù)的產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用，尤其是規(guī)?；a(chǎn)應(yīng)用還為數(shù)不多。這其中主要因素是木本植物組培技術(shù)要求高，掌握難度大(木本植物組織培養(yǎng)技術(shù)在林業(yè)科研與生產(chǎn)中的應(yīng)用與局限，吳麗君，福建林業(yè)科技，2003，30 (I):67-69，74)，脫毒困難。
[0005]細(xì)葉水團(tuán)花屬于木本植物，其現(xiàn)行的繁殖方法主要是播種和扦插，到目前為止，用于細(xì)葉水團(tuán)花的組培快繁技術(shù)與植株再生方法還未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是提供一種細(xì)葉水團(tuán)花用組織培養(yǎng)基組合物及利用該組織培養(yǎng)基的細(xì)葉水團(tuán)花組織培養(yǎng)方法。
[0007]本發(fā)明所采取的技術(shù)方案如下。
[0008]一種細(xì)葉水團(tuán)花用組織培養(yǎng)基組合物，該組合物包括誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基；
所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基用于誘導(dǎo)細(xì)葉水團(tuán)花發(fā)芽，以配制IL培養(yǎng)基為例，組分為:MS培養(yǎng)基的I號(hào)母液1mL+ MS培養(yǎng)基的2號(hào)母液1mL+ MS培養(yǎng)基的3號(hào)母液1mL+ MS培養(yǎng)基的4 號(hào)母液 1mL+ 肌醇 100.0mg+VB! 10.0 mg+VB6 1.0mg+ 煙酸 1.0 mg+ 椰汁 20 mL + 次氯酸鈉 5-15 mg +6-BA 3.0-6.0mg+NAA 1.0-3.0mg+ 瓊脂 8?IIg+ 蔗糖 10~25g+ 殺菌劑，水補(bǔ)足1L，pH 值為 5.5-5.8 ；
所述增殖培養(yǎng)基用于促進(jìn)發(fā)芽后細(xì)葉水團(tuán)花成苗，以配制IL培養(yǎng)基為例，組分為:MS培養(yǎng)基的 1~6 號(hào)母液各 10mL+6-BA 0.8-2.0mg+NAA 0.05-0.4mg+瓊脂 8~llg+蔗糖 20~40g+殺菌劑，水補(bǔ)足1L，pH值為5.5-5.8 ；
所述生根培養(yǎng)基用于促進(jìn)成苗后細(xì)葉水團(tuán)花生根，以配制IL培養(yǎng)基為例，組分為:MS培養(yǎng)基的1、3號(hào)母液各5mL+ MS培養(yǎng)基的2、4、5、6號(hào)母液各10mL+NAA 0.1-0.5mg+瓊脂8~llg+ 蔗糖 20~40g，水補(bǔ)足 1L，pH 值為 5.5-5.8。
[0009]所述細(xì)葉水團(tuán)花用組織培養(yǎng)基組合物，較為配方組分如下:
所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基組分為:MS培養(yǎng)基的I號(hào)母液1mL+ MS培養(yǎng)基的2號(hào)母液1mL+ MS培養(yǎng)基的3號(hào)母液1mL+ MS培養(yǎng)基的4號(hào)母液1mL+肌醇100.0mg+VBi 10.0 mg+VB6 1.0mg+煙酸 1.0 mg+椰汁 20 mL + 次氯酸鈉 15 mg +6-BA 6.0mg+NAA 3.0mg+瓊脂 Ilg+鹿糖 25g+殺菌劑，水補(bǔ)足1L，pH值為5.5 ；
所述增殖培養(yǎng)基組分為:MS培養(yǎng)基的1~6號(hào)母液各10mL+6-BA 2.0mg+NAA 0.4mg+瓊脂Hg+蔗糖40g+殺菌劑，水補(bǔ)足1L，pH值為5.5 ；
所述生根培養(yǎng)基組分為:MS培養(yǎng)基的1、3號(hào)母液各5mL+ MS培養(yǎng)基的2、4、5、6號(hào)母液各lOmL+NAA0.5mg+瓊脂Ilg+鹿糖40g，水補(bǔ)足1L，pH值為5.5。
[0010]所述細(xì)葉水團(tuán)花用組織培養(yǎng)基組合物中誘導(dǎo)培養(yǎng)基和增殖培養(yǎng)基中所述殺菌劑為:益培隆A劑333μ?+Β劑14.5 mg。
[0011]利用所述細(xì)葉水團(tuán)花用組織培養(yǎng)基組合物的細(xì)葉水團(tuán)花的組織培養(yǎng)方法，包括以下步驟:
(1)以細(xì)葉水團(tuán)花當(dāng)年生莖段為外植體，將外植體消毒滅菌后，用誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)形成叢生芽；培養(yǎng)條件為:溫度25±2°C，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度2000~3000Lux，培養(yǎng)時(shí)間為30~40d ；
(2)將步驟(I)中的叢生芽分株用增殖培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng)形成叢生苗；培養(yǎng)條件為:溫度25±2°C，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度2000~3000Lux，培養(yǎng)時(shí)間為25~30d ；
(3)將步驟(2)中叢生苗用生根培養(yǎng)基誘導(dǎo)形成生根苗；培養(yǎng)條件為:溫度25±2°C，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度2000~3000Lux，培養(yǎng)時(shí)間為25~30d ；
(4)將步驟(3)中生根后的再生苗進(jìn)行煉苗，25±2°C條件下生長(zhǎng)7d，然后用流水洗去再生苗根部的培養(yǎng)基，根部殺菌移栽，即可得到再生植株。
[0012]步驟(I)中所述消毒滅菌包括以下步驟:
(1)將外植體流水沖洗10~12小時(shí)；
(2)在超凈工作臺(tái)上用75%的酒精表面滅菌50s，滅菌蒸餾水沖洗1~2次；
(3)用0.1%的氯化汞處理lOmin，滅菌蒸餾水沖洗2~3次；
(4)用10%次氯酸鈉滅菌10~15min，滅菌蒸餾水沖洗4~5次，無(wú)菌濾紙吸去多余水分后用于接種。
[0013]步驟(4)所述殺菌采用1%。的高錳酸鉀溶液。
[0014]步驟(4)所述移栽采用的栽培基質(zhì)為消毒后的東北草炭和蛭石組成的栽培基質(zhì)，以質(zhì)量比計(jì)，其中東北草炭:蛭石=2: 1
[0015]通過(guò)多次試驗(yàn)、配比組合，本發(fā)明在現(xiàn)有的MS培養(yǎng)基基礎(chǔ)上，提供了一種用于細(xì)葉水團(tuán)花的組織培養(yǎng)基組合物，以此組合物為基礎(chǔ)，本發(fā)明同時(shí)提供了一種高效的、快速的細(xì)葉水團(tuán)花的組織培養(yǎng)方法，打破了細(xì)葉水團(tuán)花傳統(tǒng)繁殖方法的限制，可同時(shí)獲得大量的細(xì)葉水團(tuán)花再生植株，從而大幅縮短繁殖周期。經(jīng)過(guò)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，本發(fā)明所建立的細(xì)葉水團(tuán)花的快繁體系，叢生芽的誘導(dǎo)率達(dá)到80%，誘導(dǎo)系數(shù)為4~6，增殖系數(shù)為8~10，生根率達(dá)到100%，形成再生植株的周期為3~4個(gè)月，相較于現(xiàn)有的細(xì)葉水團(tuán)花的繁殖方式，對(duì)于細(xì)葉水團(tuán)花的推廣種植具有較為重要的應(yīng)用價(jià)值。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0016]圖1為將外植體接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基后誘導(dǎo)萌發(fā)的叢生芽；
圖2為將叢生芽用增殖培養(yǎng)基擴(kuò)增培養(yǎng)的叢生苗；
圖3為將叢生苗用生根培養(yǎng)基誘導(dǎo)形成的生根苗。

【具體實(shí)施方式】
[0017]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的解釋說(shuō)明。
[0018]介紹具體實(shí)施例前，對(duì)本發(fā)明中所用的主要儀器設(shè)備和試劑簡(jiǎn)要介紹如下，未說(shuō)明部分以本領(lǐng)域常用設(shè)備或試劑為準(zhǔn)。
[0019]主要儀器設(shè)備有:
GXZ-430D智能光照培養(yǎng)箱，寧波東南儀器有限公司制造；
HIRAYAMA高壓滅菌鍋，株式會(huì)社平山制作所；
METTLER TOLEDO PH計(jì)，上海捷辰儀器有限公司。
[0020]主要試劑有:
NAA，天津光復(fù)精細(xì)化工研宄所；
6-BA，南京金合力化工科技有限公司；
益培隆，上海宇涵生物科技有限公司；
次氯酸鈉，遼陽(yáng)市白塔日用化學(xué)有限公司；
氯化汞，瑞德凱化工科技有限公司。
[0021]本發(fā)明中所述MS培養(yǎng)基1~6號(hào)母液，以本領(lǐng)域常規(guī)方法配制，具體而言，以IL基礎(chǔ)MS培養(yǎng)基所需物質(zhì)計(jì)算，各型號(hào)母液中所包括的物質(zhì)如下:
1號(hào)母液:KN03 190g，NH4NO3 165g，MgSO4 37g ；
2號(hào)母液:CaCl2.2H20 44g ；
3號(hào)母液:KH2P04 17g ；
4號(hào)母液:Na2.EDTA 3.73g, FeSO4.7H20 2.78g;
5號(hào)母液:KI 0.083g，H3BO3 0.62g，MnSO4.H2O 1.69g，ZnSO4.7H20 0.86g，Na2MoO4
0.0025g，CuSO4.5H20 0.0025g，CoCl2.6H20 0.0025g ；
6號(hào)母液:肌醇10g，煙酸0.05g，甘氨酸0.2g，鹽酸卩比卩多辛0.05g，鹽酸噻胺0.0lg0
[0022]實(shí)施例1
本實(shí)施例所用的細(xì)葉水團(tuán)花用組織培養(yǎng)基組合物，包括誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基；
所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基用于誘導(dǎo)細(xì)葉水團(tuán)花發(fā)芽，以配制IL組織培養(yǎng)基為例，組分為:MS培養(yǎng)基的I號(hào)母液1mL+ MS培養(yǎng)基的2號(hào)母液1mL+ MS培養(yǎng)基的3號(hào)母液1mL+ MS培養(yǎng)基的 4 號(hào)母液 10mT,+ 肌醇 100.0mg+VBi 10.0 mg+VB6 1.0mg+ 煙酸 1.0 mg+ 挪汁 20 mL + 次氯酸鈉5 mg +6-BA 3.0mg+NAA 1.0mg+瓊脂8g+鹿糖1g+殺菌劑，水補(bǔ)足lL，pH值為5.8 ；殺菌劑為:益培隆A劑333μ?+Β劑14.5 mg ；
所述增殖培養(yǎng)基用于促進(jìn)發(fā)芽后細(xì)葉水團(tuán)花成苗，以配制IL組織培養(yǎng)基為例，組分為:MS培養(yǎng)基的1~6號(hào)母液各lOmL+6-BA 0.8mg+NAA 0.05mg+瓊脂8g+鹿糖20g+殺菌劑，水補(bǔ)足1L，pH值為5.8 ;殺菌劑為:益培隆A劑333μ?+Β劑14.5 mg ；
所述生根培養(yǎng)基用于促進(jìn)成苗后細(xì)葉水團(tuán)花生根，以配制IL組織培養(yǎng)基為例，組分為:MS培養(yǎng)基的1、3號(hào)母液各5mL+ MS培養(yǎng)基的2、4、5、6母液各10mL+NAA 0.1mg+瓊脂8g+蔗糖20g，水補(bǔ)足1L，pH值為5.8。
[0023]利用上述細(xì)葉水團(tuán)花用組織培養(yǎng)基組合物的細(xì)葉水團(tuán)花的組織培養(yǎng)方法，包括以下步驟:
(I)以細(xì)葉水團(tuán)花當(dāng)年生莖段為外植體，將外植體消毒滅菌后，用誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)形成叢生芽；
所述外植體消毒滅菌包括以下步驟:
A.將外植體流水沖洗10小時(shí)；
B.在超凈工作臺(tái)上用75%的酒精表面滅菌50s，滅菌蒸餾水沖洗I次；
C.用0.1%的氯化汞處理lOmin，滅菌蒸餾水沖洗2次；
D.用10%次氯酸鈉滅菌lOmin，滅菌蒸餾水沖洗4次，無(wú)菌濾紙吸去多余水分后用于接種；
培養(yǎng)條件為:溫度25±2°C，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度3000LUX，培養(yǎng)誘導(dǎo)形成叢生芽時(shí)間為40do
[0024]叢生芽誘導(dǎo)效果如圖1所示。對(duì)其中10瓶(每瓶接種6個(gè))統(tǒng)計(jì)計(jì)算，結(jié)果顯示，叢生芽的誘導(dǎo)率為70%，誘導(dǎo)系數(shù)為2~3，發(fā)芽效果較好且較為穩(wěn)定。
[0025](2)將步驟(I)中的叢生芽分株用增殖培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng)形成叢生苗；培養(yǎng)條件為:溫度25±2°C，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度3000LUX，培養(yǎng)時(shí)間為30d。
[0026]叢生苗誘導(dǎo)效果如圖2所示。對(duì)其中30瓶(每瓶接種4個(gè))統(tǒng)計(jì)計(jì)算，結(jié)果顯示，增殖系數(shù)可達(dá)5~7，增殖效果明顯。
[0027](3)將步驟(2)中叢生苗用生根培養(yǎng)基誘導(dǎo)形成生根苗；培養(yǎng)條件為:溫度25±2°C，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度3000Lux，培養(yǎng)時(shí)間為30d。
[0028]根系生長(zhǎng)效果如圖3所示。對(duì)其中30瓶(每瓶接種8個(gè))統(tǒng)計(jì)計(jì)算，結(jié)果顯示，生根率可達(dá)95%，生根效果較好。
[0029](4)將步驟(3)中生根后的再生苗進(jìn)行煉苗，25±2°C條件下生長(zhǎng)7d，然后用流水洗去再生苗根部的培養(yǎng)基，1%。的高錳酸鉀溶液根部殺菌，移栽，栽培基質(zhì)為消毒后的東北草炭和蛭石組成的栽培基質(zhì)，以質(zhì)量比計(jì)，其中東北草炭:蛭石=2: 1，即可得到再生植株。
[0030]實(shí)施例2 本實(shí)施例所用的細(xì)葉水團(tuán)花用組織培養(yǎng)基組合物，包括誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基；
所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基用于誘導(dǎo)細(xì)葉水團(tuán)花發(fā)芽，以配制IL組織培養(yǎng)基為例，組分為MS培養(yǎng)基的I號(hào)母液1mL+ MS培養(yǎng)基的2號(hào)母液1mL+ MS培養(yǎng)基的3號(hào)母液1mL+ MS培養(yǎng)基的 4 號(hào)母液 1mL+ 肌醇 100.0mg+VB! 10.0 mg+VB6 1.0mg+ 煙酸 1.0 mg+ 椰汁 20 mL + 次氯酸鈉15 mg +6-BA 6.0mg+NAA 3.0mg+瓊脂Ilg+鹿糖25g+殺菌劑，水補(bǔ)足1L，pH值為5.5 ;殺菌劑為:益培隆A劑333μ?+Β劑14.5 mg ；
所述增殖培養(yǎng)基用于促進(jìn)發(fā)芽后細(xì)葉水團(tuán)花成苗，以配制IL組織培養(yǎng)基為例，組分為:MS培養(yǎng)基的1~6號(hào)母液各lOmL+6-BA 2.0mg+NAA 0.4mg+瓊脂Ilg+鹿糖40g+殺菌劑，水補(bǔ)足1L，pH值為5.5 ;殺菌劑為:益培隆A劑333μ?+Β劑14.5 mg ；
所述生根培養(yǎng)基用于促進(jìn)成苗后細(xì)葉水團(tuán)花生根，以配制IL組織培養(yǎng)基為例，組分為:MS培養(yǎng)基的1、3號(hào)母液各5mL+ MS培養(yǎng)基的2、4、5、6號(hào)母液各1mL +ΝΑΑ0.5mg+瓊脂11〖+蔗糖4(^，水補(bǔ)足lL，pH值為5.5ο
[0031]利用上述細(xì)葉水團(tuán)花用組織培養(yǎng)基組合物的細(xì)葉水團(tuán)花的組織培養(yǎng)方法，包括以下步驟:
(I)以細(xì)葉水團(tuán)花當(dāng)年生莖段為外植體，將外植體消毒滅菌后，用誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)形成叢生芽；
所述外植體消毒滅菌包括以下步驟:
Α.將外植體流水沖洗12小時(shí)；
B.在超凈工作臺(tái)上用75%的酒精表面滅菌50s，滅菌蒸餾水沖洗2次；
C.用0.1%的氯化汞處理lOmin，滅菌蒸餾水沖洗2次；
D.用10%次氯酸鈉滅菌15min，滅菌蒸餾水沖洗5次，無(wú)菌濾紙吸去多余水分后用于接種；
培養(yǎng)條件為:溫度25±2°C，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度2000LUX，培養(yǎng)誘導(dǎo)形成叢生芽時(shí)間為30do
[0032]此次對(duì)其中10瓶(每瓶接種6個(gè))統(tǒng)計(jì)計(jì)算，結(jié)果顯示，叢生芽的誘導(dǎo)率為80%，誘導(dǎo)系數(shù)為4~6，發(fā)芽效果較好且較為穩(wěn)定。
[0033](2)將步驟(I)中的叢生芽分株用增殖培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng)形成叢生苗；培養(yǎng)條件為:溫度25±2°C，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度2000LUX，培養(yǎng)時(shí)間為25d。
[0034]對(duì)其中30瓶(每瓶接種4個(gè))統(tǒng)計(jì)計(jì)算，結(jié)果顯示，結(jié)果顯示，增殖系數(shù)可達(dá)8~10，增殖效果明顯。
[0035](3)將步驟(2)中叢生苗用生根培養(yǎng)基誘導(dǎo)形成生根苗；培養(yǎng)條件為:溫度25±2°C，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度2000Lux，培養(yǎng)時(shí)間為25d。
[0036]對(duì)其中30瓶(每瓶接種8個(gè))統(tǒng)計(jì)計(jì)算，結(jié)果顯示，生根率可達(dá)100%，生根效果較好且較為穩(wěn)定。
[0037](4)將步驟(3)中生根后的再生苗進(jìn)行煉苗，25±2°C條件下生長(zhǎng)7d，然后用流水洗去再生苗根部的培養(yǎng)基，1%。的高錳酸鉀溶液根部滅菌，移栽，栽培基質(zhì)為消毒后的東北草炭和蛭石組成的栽培基質(zhì)，以質(zhì)量比計(jì)，其中東北草炭:蛭石=2: 1，即可得到再生植株。
【權(quán)利要求】
1.一種細(xì)葉水團(tuán)花用組織培養(yǎng)基組合物，其特征在于，該組合物包括誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基； 所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基用于誘導(dǎo)外植體形成叢生芽，以配制IL培養(yǎng)基為例，組分為:MS培養(yǎng)基的 1~4 號(hào)母液各 10 ml,+ 肌醇 100.0mg+VBi 10.0 mg+VB6 1.0mg+ 煙酸 1.0 mg+ 挪汁 20 mL+ 次氯酸鈉 5~15 mg +6-BA 3.0-6.0mg+NAA 1.0~3.0mg+瓊脂 8~llg+蔗糖 10~25g+殺菌劑，水補(bǔ)足1L，pH值為5.5-5.8 ； 所述增殖培養(yǎng)基用于促進(jìn)叢生芽形成叢生苗，以配制IL培養(yǎng)基為例，組分為:MS培養(yǎng)基的 1~6 號(hào)母液各 10mL+6-BA 0.8-2.0mg+NAA 0.05-0.4mg+ 瓊脂 8~llg+ 蔗糖 20~40g+ 殺菌劑，水補(bǔ)足1L，pH值為5.5-5.8 ； 所述生根培養(yǎng)基用于促進(jìn)叢生苗生根，以配制IL培養(yǎng)基為例，組分為:MS培養(yǎng)基的1、3號(hào)母液各5mL+ MS培養(yǎng)基的2、4、5、6號(hào)母液各10mL+NAA 0.1-0.5mg+瓊脂8~llg+蔗糖20?40g，水補(bǔ)足 1L，pH 值為 5.5-5.8。
2.如權(quán)利要求1所述細(xì)葉水團(tuán)花用組織培養(yǎng)基組合物，其特征在于， 所述IL誘導(dǎo)培養(yǎng)基組分為:MS培養(yǎng)基的1~4號(hào)母液各10 mL+肌醇100.0mg+VBi 10.0mg+VB6 1.0mg+ 煙酸 1.0 mg+ 挪汁 20 mL + 次氯酸鈉 15 mg +6-BA 6.0mg+NAA 3.0mg+ 瓊脂Ilg+鹿糖25g+殺菌劑，水補(bǔ)足1L，pH值為5.5 ； 所述IL增殖培養(yǎng)基組分為:MS培養(yǎng)基的1~6號(hào)母液各10mL+6-BA 2.0mg+NAA 0.4mg+瓊脂Hg+蔗糖40g+殺菌劑，水補(bǔ)足1L，pH值為5.5 ； 所述IL生根培養(yǎng)基組分為:MS培養(yǎng)基的1、3號(hào)母液各5mL+ MS培養(yǎng)基的2、4、5、6號(hào)母液各lOmL+NAA0.5mg+瓊脂Ilg+鹿糖40g，水補(bǔ)足1L，pH值為5.5。
3.如權(quán)利要求1或2所述細(xì)葉水團(tuán)花用組織培養(yǎng)基組合物，其特征在于，誘導(dǎo)培養(yǎng)基和增殖培養(yǎng)基中所述殺菌劑為:益培隆A劑333μ?+Β劑14.5 mg。
4.利用權(quán)利要求1所述組織培養(yǎng)基組合物的細(xì)葉水團(tuán)花的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，該方法包括以下步驟: (1)以細(xì)葉水團(tuán)花當(dāng)年生莖段為外植體，將外植體消毒滅菌后，用誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)形成叢生芽；培養(yǎng)條件為:溫度25±2°C，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度2000~3000Lux，培養(yǎng)時(shí)間為30~40d ； (2)將步驟(I)中的叢生芽分株，用增殖培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng)形成叢生苗；培養(yǎng)條件為:溫度25±2°C，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度2000~3000Lux，培養(yǎng)時(shí)間為25~30d ； (3)將步驟(2)中叢生苗用生根培養(yǎng)基誘導(dǎo)形成生根苗；培養(yǎng)條件為:溫度25±2°C，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度2000~3000Lux，培養(yǎng)時(shí)間為25~30d ； (4)將步驟(3)中生根后的再生苗進(jìn)行煉苗，25±2°C條件下生長(zhǎng)7d，然后用流水洗去再生苗根部的培養(yǎng)基，根部殺菌移栽，即可得到再生植株。
5.如權(quán)利要求4所述細(xì)葉水團(tuán)花的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟(I)中所述消毒滅菌包括以下步驟: A.將外植體流水沖洗10~12小時(shí)； B.在超凈工作臺(tái)上用75%的酒精表面滅菌50s，滅菌蒸餾水沖洗1~2次； C.用0.1%的氯化汞溶液處理lOmin，滅菌蒸餾水沖洗2~3次； D.用10%次氯酸鈉溶液滅菌10~15min，滅菌蒸餾水沖洗4~5次，無(wú)菌濾紙吸去多余水分后用于接種。
6.如權(quán)利要求4所述細(xì)葉水團(tuán)花的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟(4)所述殺菌采用1%。的高錳酸鉀溶液。
7.如權(quán)利要求4所述細(xì)葉水團(tuán)花的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟(4)所述移栽采用的栽培基質(zhì)為消毒后的東北草炭和蛭石組成的栽培基質(zhì)，以質(zhì)量比計(jì)，其中東北草炭:蛭石=2:10
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK104429947SQ201410638847
【公開(kāi)日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年11月13日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月13日
【發(fā)明者】蔣素華, 田云芳, 梁芳, 王林青, 馬杰, 袁秀云, 崔波 申請(qǐng)人:鄭州師范學(xué)院