一種二歧銀蓮花的組培繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種二歧銀蓮花的組培繁殖方法，主要通過對初代培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)以及煉苗移栽的步驟，達(dá)到了增殖速度快、遺傳性狀穩(wěn)定、繁殖系數(shù)高、試管苗生長旺盛的優(yōu)良效果，二歧銀蓮花的愈傷組織的萌動率達(dá)到了99％，增殖倍數(shù)達(dá)到了8.7倍，生根率達(dá)到了100％，最終的成活率達(dá)到了97％。
【專利說明】一種二歧銀蓮花的組培繁殖方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及的是一種適用于二歧銀蓮花的組培繁殖方法。

【背景技術(shù)】
[0002]二歧銀蓮花(學(xué)名:Anemone dichotoma L.)是草本植物,植株高35-60厘米?；~1，總苞苞片2，扇形，三深裂近基部?；▎紊诨ㄐ蚍种μ?；萼片5，白色或帶粉紅色，倒卵形或橢圓形，心皮約30，子房長圓形，有向外彎的短花柱。瘦果扁平，卵形或橢圓形，有邊緣和稍彎的宿存花柱。6月開花。生丘陵或山坡濕草地或林中。分布于亞洲北部和歐洲、中國吉林和黑龍江。
[0003]目前，利用組培技術(shù)繁育二歧銀蓮花的技術(shù)尚未有人研究，組織培養(yǎng)體系尚未建立，優(yōu)良品種的推廣普及尚未完成，苗木供求矛盾日益加劇，嚴(yán)重影響了二歧銀蓮花的園林應(yīng)用和推廣。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明針對現(xiàn)有的不足提供了一種二歧銀蓮花的組培繁殖方法。
[0005]本發(fā)明通過以下方法實(shí)現(xiàn)上述目的。
[0006]一種二歧銀蓮花的組培繁殖方法，其特征在于該方法包括下列步驟:
[0007](1)外植體的選擇:于4?7月采取生長健壯的二歧銀蓮花幼嫩莖段作外植體；
[0008](2)材料處理方法:先用軟毛刷將二歧銀蓮花表面的灰塵輕輕刷去，用流水沖洗3分鐘后用紫外燈照射20min，轉(zhuǎn)入超凈工作臺，在超凈工作臺上先用70%的乙醇浸泡10秒，然后再轉(zhuǎn)入滴加了 2?3滴土溫80的0.1%的升汞溶液中浸泡2-3min，再用無菌水沖洗2?3次,最后在無菌條件下分割材料,?段切割成0.6?0.8cm長；
[0009](3)初代培養(yǎng):在無菌的條件下將步驟⑵得到的外植體接種在初代培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基是在1/2MS常規(guī)培養(yǎng)基中添加了 2.2mg/L的2，4_D、0.8mg/L的NAA、0.5mg/L的GA，PH 6.6，培養(yǎng)溫度為24°C，光照周期13h/d，光強(qiáng)度為2300_25001ux，待新芽長至2.0cm左右時(shí)，即開始下一個(gè)階段；
[0010](4)增殖培養(yǎng):將初代培養(yǎng)的外植體新芽剪下接種在繼代培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基是在 1/2MS 常規(guī)培養(yǎng)基中添加了 2.2mg/L 的 2，4_D、0.8mg/L 的 ΝΑΑ、0.5mg/L 的 GA, PH 6.6，培養(yǎng)溫度為24°C，光照周期13h/d，光強(qiáng)度為2300-25001UX，待新芽長至2.0cm時(shí)，即開始下一個(gè)階段；
[0011](5)生根培養(yǎng):將繼代培養(yǎng)的外植體新芽剪下接種在生根培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基是在MS常規(guī)培養(yǎng)基中添加了 2.4mg/L的IAA、0.5mg/L的NAA, 1.5mg/L的ΚΤ,ΡΗ 6.6，培養(yǎng)溫度為24°C，光照周期13h/d，光強(qiáng)度為19001UX，待新苗長至2.0cm時(shí)，即開始下一個(gè)階段；
[0012](6)煉苗移栽:先將培養(yǎng)瓶移至溫室，自然條件下煉苗7d，然后解開封口膜，煉苗3d，煉苗期間適當(dāng)遮光，使光照強(qiáng)度為自然光的45%，煉苗完成后取出小苗洗凈根部附著的培養(yǎng)基，移栽到經(jīng)消毒的重量比礱糠灰:珍珠巖:沙子:蛭石=2: 2: 1:1的混合基質(zhì)中，溫度控制在2:3°C，前5d濕度控制在80%左右，以后逐漸降低濕度，直至將移栽苗置于自然條件下。
[0013]有益效果:本發(fā)明對二歧銀蓮花采用組織培養(yǎng)技術(shù)，以嫩莖段為外植體，經(jīng)外植體滅菌、初代培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和煉苗移栽步驟，研究培養(yǎng)過程中試管苗的營養(yǎng)需求、激素對苗木生長分化的調(diào)控，解決二歧銀蓮花的微體快速增殖、誘導(dǎo)生根的重要技術(shù)問題，建立了完善的二歧銀蓮花組織培養(yǎng)體系，達(dá)到了高效誘導(dǎo)外植體分化增殖和高質(zhì)量保證幼苗成活的目的，并且保存了母體的全部優(yōu)良性狀，遺傳性狀穩(wěn)定。這種方法可在短期內(nèi)形成大量優(yōu)良試管苗，進(jìn)行規(guī)?；⒐S化生產(chǎn)。

【具體實(shí)施方式】
[0014]下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，下述實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，對本發(fā)明并沒有限制。
[0015]二歧銀蓮花的組培繁殖方法，該方法包括下列步驟:
[0016](1)外植體的選擇:于4?7月采取生長健壯的二歧銀蓮花幼嫩莖段作外植體；
[0017](2)材料處理方法:先用軟毛刷將二歧銀蓮花表面的灰塵輕輕刷去，用流水沖洗3分鐘后用紫外燈照射20min，轉(zhuǎn)入超凈工作臺，在超凈工作臺上先用70%的乙醇浸泡10秒，然后再轉(zhuǎn)入滴加了 2滴土溫80的0.1%的升汞溶液中浸泡2min，再用無菌水沖洗2次，最后在無菌條件下分割材料，莖段切割成0.7cm長；
[0018](3)初代培養(yǎng):在無菌的條件下將步驟⑵得到的外植體接種在初代培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基是在1/2MS常規(guī)培養(yǎng)基中添加了 2.2mg/L的2，4_D、0.8mg/L的NAA、0.5mg/L的GA，PH 6.6，培養(yǎng)溫度為24°C，光照周期13h/d，光強(qiáng)度為24001ux，待新芽長至2.0cm左右時(shí)，即開始下一個(gè)階段；
[0019](4)增殖培養(yǎng):將初代培養(yǎng)的外植體新芽剪下接種在繼代培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基是在 1/2MS 常規(guī)培養(yǎng)基中添加了 2.2mg/L 的 2，4_D、0.8mg/L 的 ΝΑΑ、0.5mg/L 的 GA, PH 6.6，培養(yǎng)溫度為24°C，光照周期13h/d，光強(qiáng)度為24001UX，待新芽長至2.0cm時(shí)，即開始下一個(gè)階段；
[0020](5)生根培養(yǎng):將繼代培養(yǎng)的外植體新芽剪下接種在生根培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基是在MS常規(guī)培養(yǎng)基中添加了 2.4mg/L的IAA、0.5mg/L的NAA, 1.5mg/L的ΚΤ,ΡΗ 6.6，培養(yǎng)溫度為24°C，光照周期13h/d，光強(qiáng)度為19001UX，待新苗長至2.0cm時(shí)，即開始下一個(gè)階段；
[0021](6)煉苗移栽:先將培養(yǎng)瓶移至溫室，自然條件下煉苗7d，然后解開封口膜，煉苗3d，煉苗期間適當(dāng)遮光，使光照強(qiáng)度為自然光的45%，煉苗完成后取出小苗洗凈根部附著的培養(yǎng)基，移栽到經(jīng)消毒的重量比礱糠灰:珍珠巖:沙子:蛭石=2:2:1:1的混合基質(zhì)中，溫度控制在2:3°C，前5d濕度控制在80%左右，以后逐漸降低濕度，直至將移栽苗置于自然條件下。
[0022]經(jīng)過上述步驟的培養(yǎng)，二歧銀蓮花的愈傷組織的萌動率達(dá)到了 99%，增殖倍數(shù)達(dá)到了 8.7倍，生根率達(dá)到了 100%，最終的成活率達(dá)到了 97%。
【權(quán)利要求】
1.一種二歧銀蓮花的組培繁殖方法，其特征在于該方法包括下列步驟: (1)外植體的選擇:于4?7月采取生長健壯的二歧銀蓮花幼嫩莖段作外植體； (2)材料處理方法:先用軟毛刷將二歧銀蓮花表面的灰塵輕輕刷去，用流水沖洗3分鐘后用紫外燈照射20min，轉(zhuǎn)入超凈工作臺，在超凈工作臺上先用70%的乙醇浸泡10秒，然后再轉(zhuǎn)入滴加了 2?3滴土溫80的0.1 %的升汞溶液中浸泡2-3min，再用無菌水沖洗2?3次，最后在無菌條件下分割材料，莖段切割成0.6?0.8cm長； (3)初代培養(yǎng):在無菌的條件下將步驟(2)得到的外植體接種在初代培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基是在1/2MS常規(guī)培養(yǎng)基中添加了 2.2mg/L的2，4_D、0.8mg/L的NAA、0.5mg/L的GA，PH.6.6，培養(yǎng)溫度為24°C，光照周期13h/d，光強(qiáng)度為2300-25001ux，待新芽長至2.0cm左右時(shí)，即開始下一個(gè)階段； (4)增殖培養(yǎng):將初代培養(yǎng)的外植體新芽剪下接種在繼代培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基是在.1/2MS 常規(guī)培養(yǎng)基中添加了 2.2mg/L 的 2，4_D、0.8mg/L 的 NAA,0.5mg/L 的 GA，PH 6.6，培養(yǎng)溫度為24°C，光照周期13h/d，光強(qiáng)度為2300-25001UX，待新芽長至2.0cm時(shí)，即開始下一個(gè)階段； (5)生根培養(yǎng):將繼代培養(yǎng)的外植體新芽剪下接種在生根培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基是在MS常規(guī)培養(yǎng)基中添加了 2.4mg/L的IAA、0.5mg/L的NAA, 1.5mg/L的KT, PH 6.6，培養(yǎng)溫度為.24V，光照周期13h/d，光強(qiáng)度為19001UX，待新苗長至2.0cm時(shí)，即開始下一個(gè)階段； (6)煉苗移栽:先將培養(yǎng)瓶移至溫室，自然條件下煉苗7d，然后解開封口膜，煉苗3d，煉苗期間適當(dāng)遮光，使光照強(qiáng)度為自然光的45%，煉苗完成后取出小苗洗凈根部附著的培養(yǎng)基，移栽到經(jīng)消毒的重量比礱糠灰:珍珠巖:沙子:蛭石=2: 2: 1:1的混合基質(zhì)中，溫度控制在23°C，前5d濕度控制在80%左右，以后逐漸降低濕度，直至將移栽苗置于自然條件下。
【文檔編號】A01H4/00GK104396748SQ201410657608
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年11月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月18日
【發(fā)明者】羅翼 申請人:羅翼