紅馬銀花的組培繁殖方法
【專利摘要】提供紅馬銀花的組培繁殖方法。包括選取紅馬銀花的種子為外植體，經(jīng)種子萌發(fā)、叢生芽誘導(dǎo)、壯苗并生根培養(yǎng)和試管苗移栽步驟。培養(yǎng)的溫度為20-23℃，濕度為30-45％，光照條件為自然光2000-2500LUX+人工輔助光1500-2000LUX。使用該方法可達(dá)到一個(gè)無菌苗誘導(dǎo)4-5或者更多的叢生芽，生根率達(dá)68％，移栽成活率達(dá)89％以上，極大地提高了紅馬銀花的繁殖能力，為紅馬銀花的保存和規(guī)?；a(chǎn)提供了技術(shù)支撐。
【專利說明】紅馬銀花的組培繁殖方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
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[0001]本發(fā)明屬于植物生物技術(shù)中植物組織培養(yǎng)方法，具體地說，涉及杜鵑花紅馬銀花的組織培養(yǎng)快速繁殖方法。

【背景技術(shù)】
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[0002]紅馬銀花Rhododendron vialii 屬于杜花科(Erieaceae)杜花屬(Rhododendron)馬銀花亞屬，常綠小灌木。紅馬銀花為杜鵑花中的早花種類，開花期為2_3月份，花鮮紅色，新葉為紅色，具有較高的觀賞價(jià)值。分布范圍狹窄，居群數(shù)目有限，由于植被不斷受到破壞，生存受到威脅，已被IUCN和《The Red List of Rhododendrons)) (2011版)列為易危VU (Vulnerable species)杜醒花種類，亟需擴(kuò)繁、保存和可持續(xù)利用。迄今，紅馬銀花沒有相關(guān)生物技術(shù)方法繁殖的研宄與報(bào)道，為了使紅馬銀花優(yōu)良的特性能夠保存和可持續(xù)利用，需要研宄該種的組織培養(yǎng)，并形成一套專門的組織培養(yǎng)繁殖技術(shù)體系。


【發(fā)明內(nèi)容】

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[0003]本發(fā)明的目的是提供紅馬銀花的組織培養(yǎng)方法，使之在種子成苗和扦插困難的的情況下能夠繁衍，使該品種的優(yōu)良性狀的保存能夠得到保障，同時(shí)縮短離體培養(yǎng)時(shí)間，提高生根率和幼苗移栽成活率，為易危杜鵑花紅馬銀花的可持續(xù)利用奠定組培種苗繁育基礎(chǔ)。
[0004]為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案:
[0005]紅馬銀花的組培繁殖方法，包括選擇外植體、消毒、叢生芽誘導(dǎo)、壯苗并生根培養(yǎng)、試管苗移栽步驟，選擇紅馬銀花的種子為外植體，進(jìn)行種子萌發(fā)，種子萌發(fā)培養(yǎng)基為改良 Anderson+0.lmg/L NAA ;叢芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為改良 Anderson+1.2mg/L ZT+0.lmg/L NAA,pH5.2-5.4 ;壯苗培養(yǎng)基為改良Anderson+0.5mg/L 2-1P+0.lmg/L NAA ;生根培養(yǎng)基為改良Anderson+0.lmg/L ZT+2mg/L NAA+0.5g/L AC，其中所述的改良 Anderson 培養(yǎng)基為 NH4NO3減半。
[0006]根據(jù)所述的組培繁殖方法，其中所述外植體消毒先用5%洗衣粉水浸泡清洗lOmin，再用無菌水沖洗至無泡沫，然后采用75%的酒精消毒30s，無菌水沖洗3遍后再用0.1 %升汞溶液進(jìn)行表面消毒5min，不斷震蕩后用無菌水清洗3_5遍。
[0007]根據(jù)所述的組培繁殖方法，其中所述叢生芽誘導(dǎo)和壯苗及生根培養(yǎng)的溫度為20-23 °C，濕度 30-45%。
[0008]根據(jù)所述的組培繁殖方法，其中所述叢生芽誘導(dǎo)和壯苗及生根培養(yǎng)的光照條件為自然光 2000-2500LUX+ 人工輔助光 1500-2000LUX。
[0009]根據(jù)所述的組培繁殖方法，其中所述試管苗移栽是生根組培苗在培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)60天以后，煉苗7天，再移栽于溫室大棚。
[0010]根據(jù)所述的組培繁殖方法，其中試管苗移栽基質(zhì)為I份珍珠巖+1份腐殖土，pH為5.2~5.4ο
[0011]根據(jù)所述的組培繁殖方法，其中試管苗移栽在早上8-11點(diǎn)，溫度為18-25°c下進(jìn)行。
[0012]本發(fā)明的紅馬銀花的組培繁殖方法可具體描述為:選取紅馬銀花種子為外植體，用5%的洗衣粉水進(jìn)行浸泡10分鐘后反復(fù)沖洗3-5遍直至無泡沫，然后用75%酒精消毒30s，后用0.1 %升汞溶液進(jìn)行消毒5min，不斷震蕩后用無菌水清洗3_5遍；將種子置于消毒后的濾紙上吸干水分，接種至誘導(dǎo)萌發(fā)培養(yǎng)基改良Anderson+0.lmg/1 NAA, pH5.4，溫度20-23°C，濕度30-45%，光照條件為自然光2000-2500LUX+人工輔助光1500-2000LUX下培養(yǎng)，無菌苗長(zhǎng)到l-2cm后轉(zhuǎn)接入?yún)惭空T導(dǎo)培養(yǎng)基改良Anderson+1.2mg/L ZT+0.lmg/L NAA中進(jìn)行增殖，待叢生芽長(zhǎng)到2_3cm轉(zhuǎn)入壯苗培養(yǎng)基改良Anderson+0.5mg/L 2-1P+0.lmg/LNAA進(jìn)行壯苗，完成壯苗周期后將苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基，生根培養(yǎng)基為改良Anderson+0.lmg/LZT+2mg/L NAA+0.5g/L AC，50天生根培養(yǎng)后進(jìn)行組培苗煉苗7天后，移栽于基質(zhì)為I份珍珠巖+1份腐殖土，PH為5.4，濕度50-60%的大棚內(nèi)，每天早晚各噴水一次；其中所述的改良Anderson培養(yǎng)基為NH4Nty咸半。
[0013]本發(fā)明技術(shù)方案的提出是基于下述的研宄基礎(chǔ):
[0014]紅馬銀花為云南野生杜鵑花中的早花種類，開花期為2-3月份，花鮮紅色，新葉為紅色，具有較高的觀賞價(jià)值。由于植被不斷受到破壞，生存受到威脅，原有生境破壞嚴(yán)重。紅馬銀花的扦插生根難度較大，且種子非常細(xì)小，千粒重僅為0.024g，種苗成活率非常低，為了解決其大量繁殖、保存和可持續(xù)利用，故此發(fā)明紅馬銀花組織培養(yǎng)的技術(shù)。組培擴(kuò)繁不僅可以在短時(shí)間內(nèi)獲得大量的再生植株，而且移栽生長(zhǎng)良好且能保持其優(yōu)良性狀不變。試管苗移栽的溫度控制在18-23?，最好在早上8-11點(diǎn)進(jìn)行移栽，組培苗雖然在生長(zhǎng)過程中很少受病蟲害的浸染，但為了預(yù)防病蟲害的發(fā)生，在生長(zhǎng)季內(nèi)噴施多菌靈2-3次為宜。夏季要注意通風(fēng)。
[0015]本發(fā)明紅馬銀花的組培繁殖方法的優(yōu)點(diǎn)在于:
[0016]1、建立了有效的紅馬銀花組培快繁方法，解決了其種苗成活率低，扦插生根困難，繁殖受阻的狀況。
[0017]2、通過組培快繁得到的幼苗，成苗容易，一致性強(qiáng)，生長(zhǎng)健壯，葉色濃綠，很少病蟲害，易于管理。
[0018]3、利用組培快繁方法繁殖的紅馬銀花不受季節(jié)限制，任何時(shí)候都可以進(jìn)行組培。
[0019]4、利用組培快繁的方法繁殖的紅馬銀花可以保持物種特性，使該種能夠延續(xù)和可持續(xù)利用。
[0020]5、通過本發(fā)明的組培快繁方法繁育的紅馬銀花在I個(gè)月內(nèi)增殖系數(shù)為4-5，生根率為68%，移栽成活率達(dá)89%以上，極大地提高了紅馬銀花的繁殖系數(shù)，為該物種的保存和可持續(xù)利用提供了非常有效的繁殖方法。

【具體實(shí)施方式】
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[0021]下面用本發(fā)明的實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此來限定本發(fā)明。
[0022]實(shí)施例1:
[0023]品種來源:
[0024]紅馬銀花(R.vialii)屬于杜 |$ 花科(Erieaceae)杜 |$ 花屬(RhododendronL.)馬銀花亞屬(Subgen.Azaleastrum Planch, ex K.Koch)馬銀花組(Sect.Azaleastrum(Planch.)Maxim.)，是一種常綠灌木樹種。紅馬銀花為杜醒花中的早花種類，開花期為2-3月份，花鮮紅色，新葉為紅色，具有較高的觀賞價(jià)值。分布范圍狹窄，居群數(shù)目有限，由于植被不斷受到破壞，生存受到威脅，已被IUCN和《The Red List ofRhododendrons)) (2011 版)列為易危 VU (Vulnerable species)杜花種類。
[0025]選取紅馬銀花Rhododendron vialii (Ericaceae)的種子(采自于云南省玉溪市洛河鄉(xiāng)，經(jīng)瑋度24° IV N, 102° 20' E，2012年12月)為外植體，用5 %的洗衣粉水浸泡和沖洗lOmin，后用70%的酒精消毒30s，無菌水沖洗3遍后，用0.1 %升汞溶液進(jìn)行消毒5min，不斷震蕩后用無菌水清洗3遍，用無菌濾紙吸干表面水分后接種至萌發(fā)培養(yǎng)基改良Anderson+0.lmg/1 NAA，pH5.2，溫度 20°C，濕度 30%，光照條件為自然光 2000-2500LUX+人工輔助光1500-2000LUX下培養(yǎng)，長(zhǎng)出無菌苗后轉(zhuǎn)接入Anderson+1.2mg/L ZT+0.lmg/LNAA中進(jìn)行增殖，再將長(zhǎng)到2cm的幼苗轉(zhuǎn)到改良Anderson+0.5mg/L 2-1P+0.lmg/L NAA中進(jìn)行壯苗，生根為改良 Anderson+0.lmg/L ZT+2mg/l NAA+0.5g/L AC，壯苗 3-4 次，周期 30 天；組培苗煉苗7天后，在早上10點(diǎn)，溫度為18°C下進(jìn)行移栽，移栽于基質(zhì)為I份珍珠巖+1份腐殖土，pH為5.2，濕度60%的大棚內(nèi)，每天早晚各噴水一次。
[0026]所述的改良Anderson培養(yǎng)基為NH4N03減半。
[0027]通過上述的組培快繁方法繁育的紅馬銀花在I個(gè)月內(nèi)增殖系數(shù)為4，生根率為65%，移栽成活率為86%，極大地提高了迷人杜鵑的繁殖系數(shù)，為該物種的保存和可持續(xù)利用提供了非常有效的繁殖方法。
[0028]實(shí)施例2:
[0029]選取紅馬銀花Rhododendron vialii (Ericaceae)的種子(采自于云南省玉溪市洛河鄉(xiāng)，經(jīng)瑋度24° IV N, 102° 20' E，2012年12月)為外植體，用5 %的洗衣粉水浸泡和沖洗lOmin，后用70%的酒精消毒30s，無菌水沖洗5遍后，用0.1 %升汞溶液進(jìn)行消毒5min，不斷震蕩后用無菌水清洗5遍，用無菌濾紙吸干表面水分后接種至萌發(fā)培養(yǎng)基改良Anderson+0.lmg/1 NAA，pH5.4，溫度 23°C，濕度 30%，光照條件為自然光 2000-2500LUX+人工輔助光1500-2000LUX下培養(yǎng)，長(zhǎng)出無菌苗后轉(zhuǎn)接入Anderson+1.2mg/L ZT+0.lmg/L NAA中進(jìn)行增殖，再將長(zhǎng)到3cm的幼苗轉(zhuǎn)到改良Anderson+0.5mg/L 2-1P+0.lmg/L NAA中進(jìn)行壯苗，生根為改良 Anderson+0.lmg/L ZT+2mg/l NAA+0.5g/L AC，壯苗 3-4 次，周期 30 天；組培苗煉苗7天后，在早上11點(diǎn)，溫度為25°C下進(jìn)行移栽，移栽于基質(zhì)為I份珍珠巖+1份腐殖土，pH為5.4，濕度60%的大棚內(nèi)，每天早晚各噴水一次。
[0030]所述的改良Anderson培養(yǎng)基為NH4Nty咸半。
[0031]通過上述的組培快繁方法繁育的紅馬銀花在I個(gè)月內(nèi)增殖系數(shù)為5，生根率為71%,移栽成活率為92%，極大地提高了迷人杜鵑的繁殖系數(shù)，為該物種的保存和可持續(xù)利用提供了非常有效的繁殖方法。
【權(quán)利要求】
1.紅馬銀花的組培繁殖方法，包括選擇外植體、消毒、叢生芽誘導(dǎo)、壯苗并生根培養(yǎng)、試管苗移栽步驟，其特征在于選擇紅馬銀花的種子為外植體，進(jìn)行種子萌發(fā)，種子萌發(fā)培養(yǎng)基為改良 Anderson+0.lmg/L NAA ;叢芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為改良 Anderson+1.2mg/L ZT+0.lmg/L NAA, pH5.2-5.4 ;壯苗培養(yǎng)基為改良 Anderson+0.5mg/L 2-1P+0.lmg/L NAA ;生根培養(yǎng)基為改良 Anderson+0.lmg/L ZT+2mg/L NAA+0.5g/L AC，其中所述的改良 Anderson 培養(yǎng)基為NH4NCV咸半。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組培繁殖方法，其特征在于所述外植體消毒先用5%洗衣粉水浸泡清洗lOmin，再用無菌水沖洗至無泡沫，然后采用75 %的酒精消毒30s，無菌水沖洗3遍后再用0.1 %升汞溶液進(jìn)行表面消毒5min，不斷震蕩后用無菌水清洗3_5遍。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組培繁殖方法，其特征在于所述叢生芽誘導(dǎo)和壯苗及生根培養(yǎng)的溫度為20-23 °C，濕度30-45%。
4.根據(jù)權(quán)利I所述的組培繁殖方法，其特征在于所述叢生芽誘導(dǎo)和壯苗及生根培養(yǎng)的光照條件為自然光2000 - 2500LUX+人工輔助光1500 - 2000LUX。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組培繁殖方法，其特征在于所述試管苗移栽是生根組培苗在培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)60天以后，煉苗7天，再移栽于溫室大棚。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組培繁殖方法，其特征在于所述試管苗移栽基質(zhì)為I份珍珠巖+1份腐殖土，pH為5.2-5.4。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組培繁殖方法，其特征在于所述試管苗移栽在早上8-11點(diǎn)，溫度為18-25 °C下進(jìn)行。
8.根據(jù)權(quán)利要求書1-7中的任意一項(xiàng)所述的組培繁殖方法，其特征在于選取紅馬銀花種子為外植體，用5%的洗衣粉水進(jìn)行浸泡10分鐘后反復(fù)沖洗3-5遍直至無泡沫，然后用75%酒精消毒30s，后用0.1 %升汞溶液進(jìn)行消毒5min，不斷震蕩后用無菌水清洗3-5遍；將種子置于消毒后的濾紙上吸干水分，接種至誘導(dǎo)萌發(fā)培養(yǎng)基改良Anderson+0.lmg/1NAA, pH5.4，溫度20-23°C，濕度30-45 %，光照條件為自然光2000 - 2500LUX+人工輔助光.1500 -2000LUX下培養(yǎng)，無菌苗長(zhǎng)到l_2cm后轉(zhuǎn)接入?yún)惭空T導(dǎo)培養(yǎng)基改良Anderson+1.2mg/LZT+0.lmg/L NAA中進(jìn)行增殖，待叢生芽長(zhǎng)到2_3cm轉(zhuǎn)入壯苗培養(yǎng)基改良Anderson+0.5mg/L 2-1P+0.lmg/L NAA進(jìn)行壯苗，完成壯苗周期后將苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基，生根培養(yǎng)基為改良Anderson+0.lmg/L ZT+2mg/L NAA+0.5g/L AC，50天生根培養(yǎng)后進(jìn)行組培苗煉苗7天后，移栽于基質(zhì)為I份珍珠巖+1份腐殖土，PH為5.4，濕度50-60%的大棚內(nèi)，每天早晚各噴水一次；其中所述的改良Anderson培養(yǎng)基為NH4Nty咸半。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK104488704SQ201410706386
【公開日】2015年4月8日 申請(qǐng)日期:2014年11月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月28日
【發(fā)明者】張敬麗, 李枝林, 張巧玲, 吳紅芝, 王有國, 鄭碩理, 劉巧 申請(qǐng)人:云南農(nóng)業(yè)大學(xué)