一種微生態(tài)制劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種微生態(tài)制劑，所述微生態(tài)制劑為β-環(huán)糊精包合物，并提供了其制備方法。本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明提供的一種微生態(tài)制劑及其制備方法，由于β-環(huán)糊精具有獨(dú)特的內(nèi)疏水外親水的結(jié)構(gòu)而與許多尺寸適宜的客體分子形成包合物，通過β-環(huán)糊精對(duì)益生菌包合可形成較為穩(wěn)定的包合物，包合物的形成能夠有效保護(hù)化合物免于氧化或水解等反應(yīng)，同時(shí)也增加藥物的穩(wěn)定性，增強(qiáng)水溶性,控制微生態(tài)制劑釋放提高生物利用率。
【專利說明】-種微生態(tài)制劑及其制備方法
[0001]

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002] 本發(fā)明涉及獸藥領(lǐng)域，具體涉及一種微生態(tài)制劑及其制備方法。

【背景技術(shù)】
[0003] 抗生素的使用對(duì)畜牧業(yè)的發(fā)展起到了極大的推動(dòng)作用，隨著科學(xué)與生活水平的 提高，人們逐漸認(rèn)識(shí)到，抗生素長(zhǎng)期添加于飼料中，使動(dòng)物病原菌產(chǎn)生抗藥性，導(dǎo)致抗生 素用量增加，引起畜禽內(nèi)源性感染和二重感染，造成動(dòng)物機(jī)體免疫力的下降、動(dòng)物胃腸道 菌群的失調(diào)等不良的后果，也通過食物鏈對(duì)人類的健康造成危害。目前，美國(guó)及西歐一些 國(guó)家相繼禁止或限制飼用抗生素，因此，開發(fā)研制抗生素的替代品已經(jīng)成為動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)中 的一個(gè)急待解決的問題。
[0004] 微生態(tài)制劑作為一種無公害、無殘留的綠色飼料添加劑并具有促進(jìn)動(dòng)物的生長(zhǎng)， 提高動(dòng)物的免疫力，降低動(dòng)物生產(chǎn)對(duì)環(huán)境的污染程度等優(yōu)點(diǎn)而成為研究和應(yīng)用的熱點(diǎn)，我 國(guó)微生態(tài)制劑的研究開始于上世紀(jì)70年代，80年代后期才開始重視微生物飼料添加劑的 研究與開發(fā)。由于環(huán)糊精具有獨(dú)特的內(nèi)疏水外親水的結(jié)構(gòu)而與許多尺寸適宜的客體分子形 成包合物，通過環(huán)糊精對(duì)頭孢噻呋包合可形成液態(tài)包合物。包合物的形成能夠有效保護(hù)化 合物免于氧化或水解等反應(yīng)，同時(shí)也增加藥物的水溶性，增強(qiáng)穩(wěn)定性，降低毒副作用，控制 藥物釋放提高生物利用率。近來，環(huán)糊精用來改善藥物的物理化學(xué)及生物學(xué)性質(zhì)方面的研 究應(yīng)用越來越受到人們的關(guān)注。特別是用來提高疏水藥物的穩(wěn)定性和生物利用度，有一些 溶液中包合作用的報(bào)道，而環(huán)糊精包合微生態(tài)制劑的制備及其性質(zhì)的研究未見報(bào)道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的就是針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，提供了一種微生態(tài)制劑及其制備 方法。
[0006] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案為：一種微生態(tài)制劑，所述微生態(tài)制劑 為β-環(huán)糊精包合物。
[0007] 進(jìn)一步的，上述的一種微生態(tài)制劑，所述環(huán)糊精包合物是將乳酸菌、芽孢桿菌 和酵母菌分別培養(yǎng)后再混合培養(yǎng)，最后加入β-環(huán)糊精包合得到的。
[0008] 本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供了上述一種微生態(tài)制劑的制備方法，包括以下步驟： 1) 首先將三種菌粉配成質(zhì)量體積百分比（W/V)為5%的液體，將0. Iml乳酸菌、0. Iml芽 孢桿菌和〇. Iml酵母菌分別接種于MRS液體培養(yǎng)基、肉湯液體培養(yǎng)基和馬鈴薯葡萄糖液體 培養(yǎng)基中，置于37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后取出，得到乳酸菌培養(yǎng)液、芽孢桿菌培養(yǎng)液和 酵母菌培養(yǎng)液； 2) 將步驟1)得到的乳酸菌培養(yǎng)液、芽孢桿菌培養(yǎng)液和酵母菌培養(yǎng)液按照體積比2 :1 : 2的比例與滅菌后的酒糟、麩皮混合均勻，再置于31. 8°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后得到微生 物培養(yǎng)劑，酒糟和麩皮的加入量均為為三種菌培養(yǎng)液總質(zhì)量的200倍量； 3)將步驟2)得到的微生物培養(yǎng)劑中加入β-環(huán)糊精進(jìn)行包合，包合溫度 為-20°C -65°C，攪拌時(shí)間為2-5小時(shí)，β -環(huán)糊精的加入比例按照重量比計(jì)微生物培養(yǎng)劑： β-環(huán)糊精為10 :(1-3)，干燥即得到微生態(tài)制劑。
[0009] 進(jìn)一步的，上述的一種微生態(tài)制劑的制備方法，所述步驟3)中，包合溫度為20°C， 攪拌時(shí)間為4小時(shí)。
[0010] 本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明提供的一種微生態(tài)制劑及其制備方法，由于β_環(huán) 糊精具有獨(dú)特的內(nèi)疏水外親水的結(jié)構(gòu)而與許多尺寸適宜的客體分子形成包合物，通過 β -環(huán)糊精對(duì)頭孢噻呋包合可形成較為穩(wěn)定的包合物，包合物的形成能夠有效保護(hù)化合物 免于氧化或水解等反應(yīng)，同時(shí)也增加藥物的穩(wěn)定性，增強(qiáng)水溶性，降低毒副作用，控制微生 態(tài)制劑釋放提1?生物利用率。

【具體實(shí)施方式】
[0011] 本發(fā)明技術(shù)方案中所用到的試劑來源： 乳酸菌：滄州旺發(fā)生物技術(shù)研究所有限公司（RS20140122-3); 芽孢桿菌(解淀芽孢桿菌）：保定瑞谷生物科技有限公司（20140308YB); 酵母菌：滄州旺發(fā)生物技術(shù)研究所有限公司（XM20140220-7); MRS液體培養(yǎng)基：上海瀘峰化工有限公司（60541609-2216e); 肉湯液體培養(yǎng)基：上海瀘峰化工有限公司（60541609-2200a); 馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基：上海鼓臣生物技術(shù)有限公司（P0185); β -環(huán)糊精：河南省孟州市鴻基生物有限公司（20131222)。
[0012] 實(shí)施例1 : 一種微生態(tài)制劑的制備方法，包括以下步驟： 1) 首先將三種菌粉配成5% (W/V)的液體，將0. Iml乳酸菌、0. Iml芽孢桿菌和0. Iml 酵母菌分別接種于MRS液體培養(yǎng)基、肉湯液體培養(yǎng)基和馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基中，置于 37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后取出，得到乳酸菌培養(yǎng)液、芽孢桿菌培養(yǎng)液和酵母菌培養(yǎng)液； 2) 將步驟1)得到的乳酸菌培養(yǎng)液、芽孢桿菌培養(yǎng)液和酵母菌培養(yǎng)液按照體積比2 :1 : 2的比例與滅菌后的酒糟、麩皮混合均勻，再置于31. 8°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后得到微生 物培養(yǎng)劑，酒糟和麩皮的加入量均為為三種菌培養(yǎng)液總質(zhì)量的200倍量； 3) 將步驟2)得到的微生物培養(yǎng)劑中加入β -環(huán)糊精進(jìn)行包合，包合溫度為-20°C°C， 攪拌時(shí)間為2小時(shí)，β -環(huán)糊精的加入比例按照重量比計(jì)微生物培養(yǎng)劑：β -環(huán)糊精為10 : 1，干燥即得到微生態(tài)制劑。
[0013] 實(shí)施例2: 一種微生態(tài)制劑的制備方法，包括以下步驟： 1) 首先將三種菌粉配成5% (W/V)的液體，將0. Iml乳酸菌、0. Iml芽孢桿菌和0. Iml 酵母菌分別接種于MRS液體培養(yǎng)基、肉湯液體培養(yǎng)基和馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基中，置于 37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后取出，得到乳酸菌培養(yǎng)液、芽孢桿菌培養(yǎng)液和酵母菌培養(yǎng)液； 2) 將步驟1)得到的乳酸菌培養(yǎng)液、芽孢桿菌培養(yǎng)液和酵母菌培養(yǎng)液按照體積比2 :1 : 2的比例與滅菌后的酒糟、麩皮混合均勻，再置于31. 8°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后得到微生 物培養(yǎng)劑，酒糟和麩皮的加入量均為為三種菌培養(yǎng)液總質(zhì)量的200倍量； 3)將步驟2)得到的微生物培養(yǎng)劑中加入β -環(huán)糊精進(jìn)行包合，包合溫度為65°C，攪拌 時(shí)間為5小時(shí)，β -環(huán)糊精的加入比例按照重量比計(jì)微生物培養(yǎng)劑：β -環(huán)糊精為10 :3,干 燥即得到微生態(tài)制劑。
[0014] 實(shí)施例3 : 一種微生態(tài)制劑的制備方法，包括以下步驟： 1) 首先將三種菌粉配成5% (W/V)的液體，將0. Iml乳酸菌、0. Iml芽孢桿菌和0. Iml 酵母菌分別接種于MRS液體培養(yǎng)基、肉湯液體培養(yǎng)基和馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基中，置于 37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后取出，得到乳酸菌培養(yǎng)液、芽孢桿菌培養(yǎng)液和酵母菌培養(yǎng)液； 2) 將步驟1)得到的乳酸菌培養(yǎng)液、芽孢桿菌培養(yǎng)液和酵母菌培養(yǎng)液按照體積比2 :1 : 2的比例與滅菌后的酒糟、麩皮混合均勻，再置于31. 8°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后得到微生 物培養(yǎng)劑，酒糟和麩皮的加入量均為為三種菌培養(yǎng)液總質(zhì)量的200倍量； 3) 將步驟2)得到的微生物培養(yǎng)劑中加入β -環(huán)糊精進(jìn)行包合，包合溫度為20°C，攪拌 時(shí)間為4小時(shí)，β -環(huán)糊精的加入比例按照重量比計(jì)微生物培養(yǎng)劑：β -環(huán)糊精為10 :2,干 燥即得到微生態(tài)制劑。
[0015] 實(shí)施例4: 一、微生態(tài)制劑中活菌數(shù)量的測(cè)定： 1、材料準(zhǔn)備：首先將三種菌粉配成5% (W/V)的液體，用微量取液器吸取KT6-KT8倍液 體各0. Iml涂布接種于MRS固體培養(yǎng)基平皿中（各稀釋度設(shè)兩個(gè)重復(fù)），置于37°C培養(yǎng)箱 中培養(yǎng)24h后取出，進(jìn)行乳酸菌菌落計(jì)數(shù)，用微量取液器吸取KT 6-KT8倍液體各0. Iml涂 布接種于馬鈴薯葡萄糖固體培養(yǎng)基平皿中（各稀釋度設(shè)兩個(gè)重復(fù)），置于37°C培養(yǎng)箱中培 養(yǎng)24h后取出，進(jìn)行酵母菌菌落計(jì)數(shù)，用微量取液器吸取KT 6-KT8倍液體各0. Iml涂布接 種于肉湯固體培養(yǎng)基平皿中（各稀釋度設(shè)兩個(gè)重復(fù)），置于37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后取出， 進(jìn)行芽胞桿菌菌落計(jì)數(shù)。
[0016] 2、微生態(tài)制劑的干燥：先通過預(yù)備試驗(yàn)測(cè)得微生態(tài)制劑在冷凍干燥、陰涼處風(fēng)干、 25°C烘箱烘干、45°C烘箱烘干，65°C烘箱烘干干燥后水分含量在12%-13%之間所用的時(shí)間 分別為811、1211、1011、811和611，將微生態(tài)制劑分為五個(gè)處理組，每組三個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù) 5〇〇g分別采用冷凍干燥、陰涼處風(fēng)干、25°C烘干、45°C烘干和65°C烘干五種不同的干燥方 式，對(duì)五個(gè)組的微生態(tài)制劑進(jìn)行干燥、檢測(cè)干燥后各組中的乳酸菌、酵母菌和芽胞桿菌的 含量。
[0017] 3、結(jié)果： 不同干燥方式對(duì)微生態(tài)制劑中活菌數(shù)量的影響（lgeFU/g)，結(jié)果如表1所示。
[0018] 表 1

【權(quán)利要求】
1. 一種微生態(tài)制劑，其特征在于，所述微生態(tài)制劑為3 -環(huán)糊精包合物。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種微生態(tài)制劑，其特征在于，所述3 -環(huán)糊精包合物是將乳 酸菌、芽孢桿菌和酵母菌分別培養(yǎng)后再混合培養(yǎng)，最后加入3 -環(huán)糊精包合得到的。
3. 如權(quán)利要求1或2所述的一種微生態(tài)制劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： 1) 將三種菌粉配成質(zhì)量體積百分比為5%的液體，再將0. lml乳酸菌、0. lml芽孢桿菌 和0. lml酵母菌分別接種于MRS液體培養(yǎng)基、肉湯液體培養(yǎng)基和馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基 中，置于37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后取出，得到乳酸菌培養(yǎng)液、芽孢桿菌培養(yǎng)液和酵母菌 培養(yǎng)液； 2) 將步驟1)得到的乳酸菌培養(yǎng)液、芽孢桿菌培養(yǎng)液和酵母菌培養(yǎng)液按照體積比2 :1 :2的比例與滅菌后的酒糟、麩皮混合均勻，再置于31. 8°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后得到微生 物培養(yǎng)劑，酒糟和麩皮的加入量均為為三種菌培養(yǎng)液總質(zhì)量的200倍量； 3) 將步驟2)得到的微生物培養(yǎng)劑中加入￠-環(huán)糊精進(jìn)行包合，包合溫度 為-20°C -65°C，攪拌時(shí)間為2-5小時(shí)，0 -環(huán)糊精的加入比例按照重量比計(jì)微生物培養(yǎng)劑： 環(huán)糊精為10 :(1-3)，干燥即得到微生態(tài)制劑。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種微生態(tài)制劑的制備方法，其特征在于，所述步驟3)中，包 合溫度為20°C，攪拌時(shí)間為4小時(shí)。
【文檔編號(hào)】A23K1/16GK104489268SQ201410744122
【公開日】2015年4月8日 申請(qǐng)日期:2014年12月9日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月9日
【發(fā)明者】梁劍平, 陶蕾, 劉宇, 趙鳳舞, 王學(xué)紅, 尚若鋒, 郝寶成, 楊珍, 郭志廷, 郭文柱, 賈忠 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所