高蟲草素富硒蟲草培植方法
【專利摘要】本發(fā)明一種高蟲草素富硒蟲草培植方法，包括如下步驟：1)蟲草菌一級(jí)固體培養(yǎng)；2)蟲草菌二級(jí)擴(kuò)種液體培養(yǎng)；3)蟲草固體生產(chǎn)性培養(yǎng)。本發(fā)明適用于冬蟲夏草和北蟲草的人工培養(yǎng)，所獲得的蟲草含蟲草素高，可達(dá)到野生蟲草的100-200倍以上；硒含量高，可達(dá)到野生蟲草的水平，極大地提高了人工培植蟲草的有效成分和功效，并且用該法培植蟲草菌的抗雜菌力強(qiáng)，產(chǎn)量高，能縮短人工培植時(shí)間，有很好的經(jīng)濟(jì)效益。
【專利說(shuō)明】高蟲草素富砸蟲草培植方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物領(lǐng)域，涉及一種高蟲草素富硒蟲草培植方法。

【背景技術(shù)】
[0002]蟲草分冬蟲夏草和北蟲草兩種，兩者是同科不同種。冬蟲夏草是麥角科蟲草菌寄生于蝙蝠蛾幼蟲體上的子座與幼蟲體的復(fù)合物。北蟲草是北冬蟲草的簡(jiǎn)稱，也叫蛹蟲草或踴蟲草、蛹草，俗名不老草，是蟲，菌結(jié)合的藥用真菌，現(xiàn)代珍稀中草藥，北冬蟲夏草屬于真菌門，子囊菌綱，肉座菌目，麥角菌科，蟲草屬，主要生長(zhǎng)在我國(guó)的北方地區(qū)。蟲草有野生和人工培植兩種。對(duì)人體發(fā)揮作用的有效成分是蟲草素、蟲草酸、蟲草多糖、超氧化物歧化酶。有補(bǔ)腎益肺，止血化痰，抗癌，提高免疫力，抗疲勞，保護(hù)肺、腎、肝等多種功能。深受廣大人群歡迎，稱為保健品中的軟黃金。
[0003]冬蟲夏草和北蟲草的有效成份和功效基本相似，蟲草素是其重要成份，現(xiàn)在市場(chǎng)上人工培植的大多為北蟲草。人工培植雖然提高了實(shí)體產(chǎn)量，但是忽視了提高蟲草素的含量。野生蟲草的硒含量是中藥黃芪的三倍，達(dá)到了 0.44mg/kg，符合衛(wèi)生部規(guī)定的富硒食品要求?，F(xiàn)在還沒(méi)有蟲草的人工培植方法能夠使蟲草的硒含量達(dá)到野生蟲草的硒含量水平。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種蟲草素和硒含量高、抗性強(qiáng)的蟲草培植方法。
[0005]本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的:一種高蟲草素富硒蟲草培植方法，包括如下步驟:
[0006]I)蟲草菌一級(jí)固體培養(yǎng):
[0007]①制備斜面固體培養(yǎng)基:培養(yǎng)基成分配比為:土豆100_140g、葡萄糖10_14g、牛肉膏 4-6g、KH2P04 0.4-0.6g、MgS04 0.2-0.3g、蛋氨酸硒 0.008-0.012g、瓊脂 8_12g ;先將土豆煮熟，搗爛，加入前述其余成分，加熱煮沸讓瓊脂完全融化，加蒸餾水至500ml，攪拌均勻裝制斜面，滅菌，冷至室溫準(zhǔn)備接種；
[0008]②接種、培養(yǎng):用步驟I制備的斜面固體培養(yǎng)基在無(wú)菌條件下接種蟲草的菌絲體，避光24°C培養(yǎng)3-4天，再在20°C培養(yǎng)4-5天，然后在18?22°C自然光照24小時(shí)，待用；
[0009]2)蟲草菌二級(jí)擴(kuò)種液體培養(yǎng):
[0010]①制備二級(jí)液體培養(yǎng)基:用蒸餾水配制液體培養(yǎng)基，各組分含量為:蛋白胨13-17g/L、葡萄糖 18-22g/L、KH2PO4 0.8-1.2g/L，7H20.MgSO4 0.4-0.6g/L、VB1 8_12mg/L，蛋氨酸硒0.04-0.06g/L,滅菌待用；
[0011]②接種、培養(yǎng):用步驟I制備的液體培養(yǎng)基在無(wú)菌條件下接種前述一級(jí)固體培養(yǎng)得到的菌絲體，避光20?24°C，搖床培養(yǎng)，出現(xiàn)小米粒樣菌絲球時(shí)即完成二級(jí)擴(kuò)種液體培養(yǎng);
[0012]3)蟲草固體生產(chǎn)性培養(yǎng):
[0013]①制備固體生產(chǎn)性培養(yǎng)基:培養(yǎng)基成分配比為:大米800_1200g、蒸餾水1100-1300g、蛋白胨 10-14g、葡萄糖 16_20g、KH2PO4 1.5-2.5g、7H20.MgSO4 0.8-1.2g、蛋氨酸硒0.4-0.6g、VB1 1.5-2.5mg ;先將除大米以外的各成分用蒸餾水溶解配制成為營(yíng)養(yǎng)液，再將大米和營(yíng)養(yǎng)液按比例裝入培養(yǎng)瓶中，封口，蒸至大米熟，冷卻至室溫待用；
[0014]②接種、培養(yǎng):用步驟I制備的固體培養(yǎng)基在無(wú)菌條件下接種前述二級(jí)擴(kuò)種液體培養(yǎng)得到的培養(yǎng)液；放入培養(yǎng)暗室18?23°C避光培養(yǎng)；培養(yǎng)基表面長(zhǎng)出白色菌絲時(shí)放入自然光或人工光照，18?23°C環(huán)境生長(zhǎng)，當(dāng)子座長(zhǎng)齊、尖端膨大、孢子形成時(shí)即可采收。
[0015]所述步驟2蟲草菌二級(jí)擴(kuò)種液體培養(yǎng)中，接種后搖床培養(yǎng)為130?150轉(zhuǎn)/min搖床培養(yǎng)48小時(shí)。
[0016]所述步驟2中的蟲草菌二級(jí)擴(kuò)種液體培養(yǎng)步驟中，每200ml液體培養(yǎng)基接種一級(jí)固體培養(yǎng)得到的菌絲體3-3.5g。
[0017]所述步驟3中蟲草固體生產(chǎn)性培養(yǎng)，大米和營(yíng)養(yǎng)液按重量比1:1.2的比例裝入培養(yǎng)瓶中，封口，95-100°C蒸30-40分鐘，冷卻至室溫待用。
[0018]所述步驟3中蟲草固體生產(chǎn)性培養(yǎng)，用固體培養(yǎng)基接種二級(jí)擴(kuò)種液體培養(yǎng)得到的培養(yǎng)液，接種量為每10g大米接種0.5ml培養(yǎng)液。
[0019]所述步驟3中蟲草固體生產(chǎn)性培養(yǎng)，接種后放入培養(yǎng)暗室18?23°C避光培養(yǎng)8-10 天。
[0020]本發(fā)明的有益效果是:提供了一種低成本、高產(chǎn)出、能夠培養(yǎng)出蟲草素含量高、富硒的蟲草的培植方法。本發(fā)明適用于冬蟲夏草和北蟲草的人工培養(yǎng)，所獲得的蟲草含蟲草素高，可達(dá)到野生蟲草的100-200倍以上；硒含量高，可達(dá)到野生蟲草的水平，極大地提高了人工培植蟲草的有效成分和功效，并且用該法培植蟲草菌的抗雜菌力強(qiáng)，產(chǎn)量高，能縮短人工培植時(shí)間，有很好的經(jīng)濟(jì)效益。

【具體實(shí)施方式】
[0021]實(shí)施例1高蟲草素富硒冬蟲夏草的培植方法
[0022]培植高蟲草素富硒冬蟲夏草的方法，按照如下步驟操作:
[0023]I)蟲草菌一級(jí)固體培養(yǎng):
[0024]①制備斜面固體培養(yǎng)基:培養(yǎng)基成分配比為:土豆120g、葡萄糖12g、牛肉膏5g、KH2PO4 0.5g、MgSO4 0.25g、蛋氨酸硒0.0lg、瓊脂1g ;土豆先煮熟，搗爛，加入前述其余成分，加熱煮沸讓瓊脂完全融化，加蒸懼水至500ml,攪拌均勻,取40ml的試管,每管裝入培養(yǎng)基7ml，制成斜面，高壓蒸汽滅菌，冷卻至室溫準(zhǔn)備接種；
[0025]②接種、培養(yǎng):用步驟I制備的斜面固體培養(yǎng)基在無(wú)菌條件下接種冬蟲夏草的菌絲體3mm2，避光24°C培養(yǎng)3天，再在20°C培養(yǎng)4天，然后在18?22°C自然光照24小時(shí)，完成激活。
[0026]2)蟲草菌二級(jí)擴(kuò)種液體培養(yǎng):
[0027]①制備二級(jí)液體培養(yǎng)基:用蒸餾水配制液體培養(yǎng)基，各組分含量為:蛋白胨15g/L、葡萄糖 20g/L、KH2PO4 lg/L,7H20 -MgSO4 0.5g/L、VBi 10mg/L，蛋氨酸硒 0.05g/L，測(cè)得 pH值為7.0，滅菌待用；
[0028]②接種、培養(yǎng):用步驟I制備的液體培養(yǎng)基在無(wú)菌條件下接種前述一級(jí)固體培養(yǎng)得到的菌絲體，每200ml液體培養(yǎng)基接種菌絲體3g，避光20?24°C，130?150轉(zhuǎn)/min搖床培養(yǎng)48小時(shí)，出現(xiàn)小米粒樣菌絲球時(shí)即完成二級(jí)擴(kuò)種液體培養(yǎng)；
[0029]3)蟲草固體生產(chǎn)性培養(yǎng):
[0030]①制備固體生產(chǎn)性培養(yǎng)基:培養(yǎng)基成分配比為:大米1000g、蒸餾水1200g、蛋白胨12g、葡萄糖 18g、KH2PO4 2g、7H20.MgSO4 lg、蛋氨酸硒 0.5g、VB1 2mg，測(cè)得 pH 值為 6.5 ;先將除大米以外的各成分用蒸餾水溶解成為營(yíng)養(yǎng)液，再將大米和營(yíng)養(yǎng)液按重量比1:1.2的比例裝入培養(yǎng)瓶，每個(gè)500ml的培養(yǎng)瓶中裝入50克大米、60克營(yíng)養(yǎng)液，封口，95_100°C蒸30分鐘，冷卻至室溫待用；
[0031]②接種、培養(yǎng):用步驟I制備的固體培養(yǎng)基在無(wú)菌條件下接種前述二級(jí)擴(kuò)種液體培養(yǎng)得到的培養(yǎng)液，每10g大米接種0.5ml培養(yǎng)液；放入培養(yǎng)暗室18?23°C避光培養(yǎng)8_10天；培養(yǎng)基表面長(zhǎng)出白色菌絲時(shí)放入自然光或人工光照，18?23°C環(huán)境生長(zhǎng)40-55天，當(dāng)子座長(zhǎng)齊、尖端膨大、孢子形成時(shí)即可采收。
[0032]利用中國(guó)藥典中的方法測(cè)得培植出的冬蟲夏草中每10g中蟲草素含量為217.63mg ;測(cè)得硒含量為0.327mg/kg，達(dá)到了野生蟲草的硒含量水平。
[0033]實(shí)施例2高蟲草素富硒北蟲草的培植方法
[0034]培植高蟲草素富硒北蟲草的方法，按照如下步驟操作:
[0035]I)蟲草菌一級(jí)固體培養(yǎng):
[0036]①制備斜面固體培養(yǎng)基:培養(yǎng)基成分配比為:土豆110g、葡萄糖llg、牛肉膏4.5g、KH2PO4 0.4g、MgSO4 0.2g、蛋氨酸硒0.009g、瓊脂9g;土豆先煮熟，搗爛，加入前述其余成分，加熱煮沸讓瓊脂完全融化，加蒸懼水至500ml,攪拌均勻,取40ml的試管,每管裝入培養(yǎng)基8ml，制成斜面，高壓蒸汽滅菌，冷卻至室溫準(zhǔn)備接種；
[0037]②接種、培養(yǎng):用步驟I制備的斜面固體培養(yǎng)基在無(wú)菌條件下接種北蟲草的菌絲體3mm2，避光24°C培養(yǎng)3天，再在20°C培養(yǎng)4天，然后在18?22°C自然光照24小時(shí)，完成激活。
[0038]2)蟲草菌二級(jí)擴(kuò)種液體培養(yǎng):
[0039]①制備二級(jí)液體培養(yǎng)基:用蒸餾水配制液體培養(yǎng)基，各組分含量為:蛋白胨Hg/L、葡萄糖 18g/L、KH2PO4 0.9g/L，7H20.MgSO4 0.4g/L、VB1 9mg/L,蛋氨酸硒 0.04g/L,測(cè)得pH值為7.1，滅菌待用；
[0040]②接種、培養(yǎng):用步驟I制備的液體培養(yǎng)基在無(wú)菌條件下接種前述一級(jí)固體培養(yǎng)得到的菌絲體，每200ml液體培養(yǎng)基接種菌絲體3.5g，避光20?24°C，130?150轉(zhuǎn)/min搖床培養(yǎng)48小時(shí)，出現(xiàn)小米粒樣菌絲球時(shí)即完成二級(jí)擴(kuò)種液體培養(yǎng)；
[0041]3)蟲草固體生產(chǎn)性培養(yǎng):
[0042]①制備固體生產(chǎn)性培養(yǎng)基:培養(yǎng)基成分配比為:大米llOOg、蒸懼水1300g、蛋白胨 13g、葡萄糖 19g、KH2PO4 2.5g,7H20 -MgSO4 1.2g、蛋氨酸硒 0.eg.VB^.5mg，測(cè)得 pH 值為6.8 ;先將除大米以外的各成分用蒸餾水溶解，再將大米和營(yíng)養(yǎng)液按重量比1:1.2的比例裝入培養(yǎng)瓶中，封口，95-100°C蒸35分鐘，冷卻至室溫待用；
[0043]②接種、培養(yǎng):用步驟I制備的固體培養(yǎng)基在無(wú)菌條件下接種前述二級(jí)擴(kuò)種液體培養(yǎng)得到的培養(yǎng)液，每10g大米接種0.5ml培養(yǎng)液；放入培養(yǎng)暗室18?23°C避光培養(yǎng)8_10天；培養(yǎng)基表面長(zhǎng)出白色菌絲時(shí)放入自然光或人工光照，18?23°C環(huán)境生長(zhǎng)40-55天，當(dāng)子座長(zhǎng)齊、尖端膨大、孢子形成時(shí)即可采收。
[0044]利用中國(guó)藥典中的方法測(cè)得培植出的北蟲草中每10g中蟲草素含量為210.5mg ；測(cè)得硒含量為0.31mg/kg，達(dá)到了野生蟲草的硒含量水平。
【權(quán)利要求】
1.一種高蟲草素富硒蟲草培植方法，其特征在于，包括如下步驟: 1)蟲草菌一級(jí)固體培養(yǎng): ①制備斜面固體培養(yǎng)基:培養(yǎng)基成分配比為:土豆100-140g、葡萄糖10-14g、牛肉膏4-6g、KH2PO40.4-0.6g、MgSO40.2-0.3g、蛋氨酸硒 0.008-0.012g、瓊脂 8_12g ;先將土豆煮熟，搗爛，加入前述其余成分，加熱煮沸讓瓊脂完全融化，加蒸懼水至500ml,攪拌均勻裝制斜面，滅菌，冷至室溫準(zhǔn)備接種； ②接種、培養(yǎng):用步驟I制備的斜面固體培養(yǎng)基在無(wú)菌條件下接種蟲草的菌絲體，避光24°C培養(yǎng)3-4天，再在20°C培養(yǎng)4-5天，然后在18?22°C自然光照24小時(shí)，待用； 2)蟲草菌二級(jí)擴(kuò)種液體培養(yǎng): ①制備二級(jí)液體培養(yǎng)基:用蒸餾水配制液體培養(yǎng)基，各組分含量為:蛋白胨13_17g/L、葡萄糖 18-22g/L、KH2PO40.8-1.2g/L，7H20.MgSO40.4-0.6g/L、VB^-^mg/L,蛋氨酸硒0.04-0.06g/L,滅菌待用； ②接種、培養(yǎng):用步驟I制備的液體培養(yǎng)基在無(wú)菌條件下接種前述一級(jí)固體培養(yǎng)得到的菌絲體，避光20?24°C，搖床培養(yǎng)，出現(xiàn)小米粒樣菌絲球時(shí)即完成二級(jí)擴(kuò)種液體培養(yǎng)； 3)蟲草固體生產(chǎn)性培養(yǎng): ①制備固體生產(chǎn)性培養(yǎng)基:培養(yǎng)基成分配比為:大米800-1200g、蒸餾水1100-1300g、蛋白胨 10-14g、葡萄糖 16-20g、KH2PO4L 5-2.5g、7H20.MgSO40.8-1.2g、蛋氨酸硒 0.4-0.6g、VB1L 5-2.5mg ;先將除大米以外的各成分用蒸餾水溶解配制成為營(yíng)養(yǎng)液，再將大米和營(yíng)養(yǎng)液按比例裝入培養(yǎng)瓶中，封口，蒸至大米熟，冷卻至室溫待用； ②接種、培養(yǎng):用步驟I制備的固體培養(yǎng)基在無(wú)菌條件下接種前述二級(jí)擴(kuò)種液體培養(yǎng)得到的培養(yǎng)液；放入培養(yǎng)暗室18?23°C避光培養(yǎng)；培養(yǎng)基表面長(zhǎng)出白色菌絲時(shí)放入自然光或人工光照，18?23°C環(huán)境生長(zhǎng)，當(dāng)子座長(zhǎng)齊、尖端膨大、孢子形成時(shí)即可采收。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高蟲草素富硒蟲草培植方法，其特征在于，所述步驟2蟲草菌二級(jí)擴(kuò)種液體培養(yǎng)中，接種后搖床培養(yǎng)為130?150轉(zhuǎn)/min搖床培養(yǎng)48小時(shí)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高蟲草素富硒蟲草培植方法，其特征在于，所述步驟2中的蟲草菌二級(jí)擴(kuò)種液體培養(yǎng)步驟中，每200ml液體培養(yǎng)基接種一級(jí)固體培養(yǎng)得到的菌絲體3-3.5g。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高蟲草素富硒蟲草培植方法，其特征在于，所述步驟3中蟲草固體生產(chǎn)性培養(yǎng)，大米和營(yíng)養(yǎng)液按重量比1:1.2的比例裝入培養(yǎng)瓶中，封口，95-100°C蒸30-40分鐘，冷卻至室溫待用。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高蟲草素富硒蟲草培植方法，其特征在于，所述步驟3中蟲草固體生產(chǎn)性培養(yǎng)，用固體培養(yǎng)基接種二級(jí)擴(kuò)種液體培養(yǎng)得到的培養(yǎng)液，接種量為每10g大米接種0.5ml培養(yǎng)液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高蟲草素富硒蟲草培植方法，其特征在于，所述步驟3中蟲草固體生產(chǎn)性培養(yǎng)，接種后放入培養(yǎng)暗室18?23°C避光培養(yǎng)8-10天。
【文檔編號(hào)】A01G1/04GK104396571SQ201410775786
【公開日】2015年3月11日 申請(qǐng)日期:2014年12月15日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月15日
【發(fā)明者】梁金權(quán) 申請(qǐng)人:重慶綜藝制藥有限公司