一種微生物功能菌劑及其制備方法
【專利摘要】一種微生物功能菌劑及其制備方法，是以種子罐(6)、發(fā)酵罐(5)、儲(chǔ)存罐(9)、計(jì)量灌裝罐(10)為主要設(shè)備，以蒸汽機(jī)(2)、蒸汽過濾器（16）為加熱消毒設(shè)備，以空壓機(jī)（8）、儲(chǔ)氣罐（7）、冷凍干燥器（12）、油水分離器（11）、空氣粗濾器(13)、減壓閥(14)、空氣精濾器(15)為無菌空氣供氣設(shè)備，以純凈水箱(1)、循環(huán)水箱(4)、水泵(B)為循環(huán)恒溫設(shè)備，通過密封管道連接構(gòu)成生產(chǎn)線，經(jīng)過空消工序、加液實(shí)消工序的工藝過程后，向種子罐(6) 內(nèi)的培養(yǎng)液中加入菌種（A），再經(jīng)過接種擴(kuò)繁工序、儲(chǔ)存灌裝工序的工藝過程，制成微生物功能菌劑成品。本發(fā)明具有肥效高、能夠促進(jìn)植株防病蟲害、改良土壤結(jié)構(gòu)、無毒無害、利于環(huán)保的特點(diǎn)，可促進(jìn)農(nóng)田持續(xù)長效發(fā)展，促進(jìn)農(nóng)作物增產(chǎn)增收。
【專利說明】一種微生物功能菌劑及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物用菌劑，尤其涉及促進(jìn)農(nóng)作物生長的微生物菌劑的制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002]我國是一個(gè)十三億人口的農(nóng)業(yè)大國，用僅占世界耕地面積7%的耕地，養(yǎng)活了世界上20%的人口。雖然成績顯著，但是卻付出了沉重的代價(jià)。我國的農(nóng)業(yè)高產(chǎn)是建立在大量使用農(nóng)藥化肥的基礎(chǔ)上獲得的，7%的耕地面積耗費(fèi)了世界上30%的化肥，使我國的農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境面臨前所未有的傷害。大量使用化肥導(dǎo)致土壤養(yǎng)分結(jié)構(gòu)失調(diào)、土壤板結(jié)、地力下降；農(nóng)作物的品質(zhì)下降、生產(chǎn)成本高、效益下降；地下水污染導(dǎo)致水體富營養(yǎng)化，水環(huán)境惡化，大氣污染等一系列問題。農(nóng)藥的大量使用，導(dǎo)致廣大農(nóng)村農(nóng)田環(huán)境污染，加上農(nóng)藥使用比例不合理和一些經(jīng)濟(jì)作物農(nóng)藥使用頻繁、超量，對(duì)土壤、地表水、地下水造成嚴(yán)重污染，并進(jìn)一步進(jìn)入食物鏈，對(duì)環(huán)境生物和人類健康造成威脅。長期使用農(nóng)藥會(huì)引起環(huán)境的適應(yīng)性演變。許多害蟲產(chǎn)生抗藥性基因，進(jìn)而導(dǎo)致農(nóng)藥的使用量進(jìn)一步增大，對(duì)環(huán)境和人類的危害進(jìn)一步增加，從而形成惡性循環(huán)。隨著國際社會(huì)對(duì)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量要求的提高，致使我國面臨農(nóng)產(chǎn)品出口困難，要改善農(nóng)業(yè)的生態(tài)環(huán)境，必須盡量減少農(nóng)藥化肥的使用量，因此研宄施用微生物功能菌劑成為重大課題，以菌治菌成為農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的必由之路。目前菌劑應(yīng)用發(fā)展較快，良莠不齊，有些雖然含菌量多，但雜菌率高，質(zhì)量不夠穩(wěn)定，效果不太理想，在實(shí)際使用過程中達(dá)不到預(yù)期效果。為了滿足日益增長的需求，進(jìn)一步提高微生物菌劑的性能質(zhì)量，全面推廣生態(tài)農(nóng)業(yè)，成為未來主要發(fā)展方向。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的，就是提供一種肥效高，功能多，適用范圍廣，效益好，無毒無害的微生物菌劑，具有防治病蟲害、改良土壤的功能，起到利于環(huán)?？沙掷m(xù)發(fā)展的作用，促進(jìn)農(nóng)作物增產(chǎn)增收。
[0004]本發(fā)明的任務(wù)是這樣完成的:研宄培養(yǎng)一種微生物功能菌劑及其制備方法，以種子罐、發(fā)酵罐、儲(chǔ)存罐、計(jì)量灌裝罐為主要設(shè)備，以蒸汽機(jī)、蒸汽過濾器為加熱消毒設(shè)備，以空壓機(jī)、儲(chǔ)氣罐、冷凍干燥器、油水分離器、空氣粗濾器、減壓閥、空氣精濾器為無菌空氣供氣設(shè)備，以純凈水箱、循環(huán)水箱、水泵為循環(huán)恒溫設(shè)備，通過密封管道連接構(gòu)成生產(chǎn)線，經(jīng)過空消工序、加液實(shí)消工序的工藝過程后，向種子罐內(nèi)的培養(yǎng)液中加入菌種，再經(jīng)過接種擴(kuò)繁工序、儲(chǔ)存灌裝工序的工藝過程，制成微生物功能菌劑成品?？障ば虻墓に囘^程是:將種子罐和發(fā)酵罐的空氣閥門關(guān)閉、打開空氣精濾器的下排污閥，排盡冷水，打開蒸汽閥門，將空氣精濾器的壓力調(diào)至0.11?0.12MPa，保持30?40min進(jìn)行蒸汽消毒，再關(guān)閉蒸汽閥門，打開空氣閥門，通氣量調(diào)至30L/min，壓力為0.05MPa，通風(fēng)15?20min，然后關(guān)閉空氣閥門，保持無菌空氣管連通的管路內(nèi)氣壓為正壓，將種子罐(6)和發(fā)酵罐排氣口閥門打開，并打開夾套排污閥，向夾套內(nèi)通蒸汽5min-10min，排凈夾套內(nèi)的冷水后，關(guān)閉夾套蒸汽閥，然后向種子罐(6)和發(fā)酵罐內(nèi)通蒸汽，罐內(nèi)溫度升至120?121°C，調(diào)小排汽閥，使壓力上升至0.1?0.12MPa，再調(diào)小蒸汽閥，壓力穩(wěn)定在0.11?0.12MPa，保持30?40min，溫度下降，繼續(xù)關(guān)閉各路蒸汽閥門，開大排氣閥，壓力降至0.03MPa，打開空氣閥門通入無菌空氣，罐內(nèi)壓力上升至0.05?0.1MPa，保持穩(wěn)定；溫度降至40°C時(shí)，關(guān)閉空氣閥門，打開排氣閥門放氣，罐內(nèi)壓力降為0，向罐內(nèi)插入pH電極和Do電極。加液實(shí)消工序的工藝過程是:將培養(yǎng)槽中配制好的培養(yǎng)液通過培養(yǎng)液管分別加入種子罐和發(fā)酵罐內(nèi)至各自60%的空間，再向種子罐內(nèi)加入消泡劑30 ml、向發(fā)酵罐內(nèi)加入消泡劑200?300ml，然后向夾套內(nèi)通蒸汽進(jìn)行預(yù)熱，開動(dòng)攪拌器，攪拌25?40min，溫度升至80°C以上，停止攪拌和預(yù)熱，向罐內(nèi)通蒸汽至壓力0.1?0.llMPa，溫度120?121°C，保持30?40min，停止通蒸汽，壓力降至0.03MPa ;打開空氣閥門，通入無菌空氣，壓力升至0.1?0.1IMPa，打開排氣閥保持壓力穩(wěn)定；關(guān)閉夾套排污閥，向夾套內(nèi)通恒溫冷卻水，溫度降為40 0C，進(jìn)入接種擴(kuò)繁工序。培養(yǎng)槽中配制好的培養(yǎng)液是:按照重量計(jì)豆芽I份:水5份的比例向培養(yǎng)槽內(nèi)加水、加入豆芽，通電加熱至沸騰，沸騰煮40分鐘后關(guān)閉電源，濾出豆芽，培養(yǎng)槽內(nèi)留下豆芽水，向豆芽水中加入豆芽重量10%的紅糖，混合均勻，自然降溫至60?70°C，制成培養(yǎng)液。接種擴(kuò)繁工序的工藝過程是:調(diào)節(jié)種子罐的進(jìn)氣閥，減少進(jìn)氣量，將種子罐的壓力降至0.0lMPa以下，取下進(jìn)料口蓋子，浸泡于濃度為75%的酒精中，無菌操作向種子罐內(nèi)迅速導(dǎo)入菌種，擰上蓋子，通入無菌空氣，空氣流量種子罐中為30L/min，壓力升至0.05MPa，設(shè)置罐內(nèi)溫度為39.5?40.5°C、攪拌器轉(zhuǎn)速180?200r/min ；16h后每2h抽檢一次，至16?24h檢驗(yàn)菌體進(jìn)入對(duì)數(shù)末期后，種子罐內(nèi)的菌液通過移液管導(dǎo)入發(fā)酵罐中繼續(xù)進(jìn)行擴(kuò)繁培養(yǎng)；種子罐內(nèi)的菌液導(dǎo)出后，關(guān)上空氣閥門，泄壓；向種子罐內(nèi)加水至80%，通空氣，開攪拌器20min，排出存水，同時(shí)清理出料管，重復(fù)前述空消步驟。菌種為地衣芽孢桿菌(AaciTrAz1S Iicheniformis),其制備過程是取自然腐熟的秸桿和玉米芯，按照秸桿4份、玉米芯I份的比例合成的復(fù)合物100g，置入250ml錐形瓶中，瓶口加棉塞封堵，置于40° C培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)一周，形成復(fù)合物培養(yǎng)樣品；然后將富集的復(fù)合物培養(yǎng)樣品采用系列稀釋法進(jìn)行涂布，系列稀釋法過程是:取復(fù)合物培養(yǎng)樣品1g加入到盛裝90ml無菌水的錐形瓶中，振蕩混合均勻，融合到無菌水中，稀釋為ΙΟ—1，得到一次稀釋液；再從一次稀釋液中取1ml，移入到盛裝9ml無菌水的試管中，振蕩混合均勻，稀釋為10_2，形成二次稀釋液；再從二次稀釋液中取1ml，移入到盛裝9ml無菌水的試管中，振蕩混合均勻，稀釋為10_3，形成三次稀釋液……如此逐次類推，重復(fù)以上稀釋過程，直至稀釋到10_6，形成六次稀釋液；制得含有原液10_6菌量的菌懸液；然后取原液、含量10 _4的四次稀釋液、10_5的五次稀釋液、10 _6的菌懸液，各取0.1ml，分別涂到覆蓋培養(yǎng)基的平板上，在高溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h ;然后取出平板，挑取形態(tài)各異的單菌落6個(gè)，分別進(jìn)行劃線純化，再置入高溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h;然后再取樣檢驗(yàn)，選擇其中生長最快的菌株作為菌種，裝入錐形瓶。培養(yǎng)基是將復(fù)合物培養(yǎng)樣品200g置入加熱容器中，加水煮沸，混合均勻，取濾液300ml，按照質(zhì)量比加2%瓊脂，高溫高壓滅菌后制備而成。發(fā)酵罐的擴(kuò)繁培養(yǎng)過程為:種子罐內(nèi)的菌液通過移液管導(dǎo)入發(fā)酵罐中，發(fā)酵罐設(shè)置攪拌器轉(zhuǎn)速180?200r/min，罐內(nèi)溫度為39.5?40.5°C，發(fā)酵罐中空氣流量為15-18m3/h，壓力保持在0.05Mpa，20h后轉(zhuǎn)速調(diào)低至150r/min，Do值保持50以上，24h以后，每2?4h抽樣檢驗(yàn)一次，至24?48h檢驗(yàn)芽孢率達(dá)到80?90%時(shí)，停止攪拌、停止供氣，保壓狀態(tài)下，發(fā)酵罐中形成的菌液通過成液管打入儲(chǔ)存罐內(nèi)，進(jìn)入儲(chǔ)存灌裝工序。儲(chǔ)存灌裝工序的工藝過程是:通過成液管將發(fā)酵罐中的菌液打入經(jīng)過消毒滅菌的儲(chǔ)存罐內(nèi)，常溫儲(chǔ)存；再將菌液通過菌液管打入計(jì)量灌裝罐(內(nèi)，充分?jǐn)嚢杈鶆?，即制成微生物功能菌劑成品；最后進(jìn)行計(jì)量灌裝輸入容器，用封口機(jī)封口，檢驗(yàn)合格后，封箱、入庫。微生物功能菌劑成品為液體狀態(tài)，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)指標(biāo)為:液體顏色呈黃褐色，無異味:PH值為pH值為6.6?7.2，芽孢率達(dá)到80?90%，含菌量為14?17億/ml。
本發(fā)明制成的菌劑中形成的芽孢，耐酸耐堿、耐高低溫，存活能力強(qiáng)，施入土壤后處于休眼狀態(tài)的菌群會(huì)迅速系列擴(kuò)張，增加土壤有益菌群的數(shù)量，可有效調(diào)節(jié)植物根際土壤微生物生態(tài)平衡，促進(jìn)其它生物產(chǎn)生抗菌活性物質(zhì)，殺滅植物病原菌，能分泌生長素物質(zhì)和赤霉素物質(zhì)等促生長物質(zhì)，增根壯苗，增強(qiáng)植株抗旱能力，能促進(jìn)土壤團(tuán)粒結(jié)構(gòu)形成，防止土壤板結(jié)，防止土壤中的水分蒸發(fā)。能夠增加農(nóng)作物的產(chǎn)量，有效地防治病蟲害。
[0005]按照上述技術(shù)方案進(jìn)行實(shí)施、試驗(yàn)，證明本發(fā)明具有肥效高，能夠促進(jìn)植株防病蟲害，改良土壤結(jié)構(gòu)，無毒無害，利于環(huán)保的特點(diǎn)，可促進(jìn)農(nóng)田持續(xù)長效發(fā)展，促進(jìn)農(nóng)作物增產(chǎn)增收，功能多、成本低，具有良好的社會(huì)經(jīng)濟(jì)效益，較好地達(dá)到了預(yù)定目的。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0006]附圖為本發(fā)明的生產(chǎn)線設(shè)備連接示意圖。
[0007]圖中，I一純凈水罐，2—蒸汽機(jī)。3—培養(yǎng)槽，4一循環(huán)水箱，5—發(fā)酵罐，6—種子罐，7—儲(chǔ)氣罐，8—空壓機(jī)，9 一儲(chǔ)存罐，10—計(jì)量灌裝罐，11 一油水分離器，12—冷凍干燥器，13—空氣粗濾器，14—減壓閥，15—空氣精濾器，16—蒸汽過濾器；A—菌種，B—水栗，C —出料管，D—豆芽，G—純凈水管，H—回水管，J一流量計(jì)，L一移液管，M—培養(yǎng)液管，P—排氣管，Q—無菌空氣管，R—蒸汽管，S—取樣口，T一紅糖，W—成液管，X—恒溫水管，Y—菌液管，Z-容器。

【具體實(shí)施方式】
[0008]下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】進(jìn)行說明。
[0009]參閱附圖，本發(fā)明是以種子罐6、發(fā)酵罐5、儲(chǔ)存罐9、計(jì)量灌裝罐10為主要設(shè)備，以蒸汽機(jī)2、蒸汽過濾器16為加熱消毒設(shè)備，以空壓機(jī)8、儲(chǔ)氣罐7、冷凍干燥器12、油水分離器11、空氣粗濾器13、減壓閥14、空氣精濾器15為無菌空氣供氣設(shè)備，以純凈水箱1、循環(huán)水箱4、水泵B為循環(huán)恒溫設(shè)備，通過密封管道連接構(gòu)成生產(chǎn)線，經(jīng)過空消工序、加液實(shí)消工序的工藝過程后，向種子罐6內(nèi)的培養(yǎng)液中加入菌種A，再經(jīng)過接種擴(kuò)繁工序、儲(chǔ)存灌裝工序的工藝過程，制成微生物功能菌劑成品。
空消工序的工藝過程是:將種子罐6和發(fā)酵罐5的空氣閥門關(guān)閉、打開空氣精濾器15的下排污閥，排盡冷水，打開蒸汽閥門，將空氣精濾器15的壓力調(diào)至0.11?0.12MPa，保持30?40min進(jìn)行蒸汽消毒，再關(guān)閉蒸汽閥門，打開空氣閥門，通氣量調(diào)至30L/min，壓力為0.05MPa，通風(fēng)15?20min，然后關(guān)閉空氣閥門，保持無菌空氣管Q連通的管路內(nèi)氣壓為正壓，將種子罐6和發(fā)酵罐5排氣口閥門打開，并打開夾套排污閥，向夾套內(nèi)通蒸汽5min-10min，排凈夾套內(nèi)的冷水后，關(guān)閉夾套蒸汽閥，然后向種子罐6和發(fā)酵罐5內(nèi)通蒸汽，罐內(nèi)溫度升至120?121°C，調(diào)小排汽閥，使壓力上升至0.1?0.12MPa，再調(diào)小蒸汽閥，壓力穩(wěn)定在0.11?0.12MPa，保持30?40min，溫度下降，繼續(xù)關(guān)閉各路蒸汽閥門，開大排氣閥，壓力降至0.03MPa，打開空氣閥門通入無菌空氣，罐內(nèi)壓力上升至0.05?0.1MPa，保持穩(wěn)定；溫度降至40°C時(shí)，關(guān)閉空氣閥門，打開排氣閥門放氣，罐內(nèi)壓力降為O，向罐內(nèi)插入pH電極和Do電極。
[0010]加液實(shí)消工序的工藝過程是:將培養(yǎng)槽3中配制好的培養(yǎng)液通過培養(yǎng)液管M分別加入種子罐6和發(fā)酵罐5內(nèi)至各自60%的空間，再向種子罐6內(nèi)加入消泡劑30 ml、向發(fā)酵罐5內(nèi)加入消泡劑200?300ml，然后向夾套內(nèi)通蒸汽進(jìn)行預(yù)熱，開動(dòng)攪拌器，攪拌25?40min，溫度升至80°C以上，停止攪拌和預(yù)熱，向罐內(nèi)通蒸汽至壓力0.1?0.llMPa，溫度120?121°C，保持30?40min，停止通蒸汽，壓力降至0.03MPa ;打開空氣閥門，通入無菌空氣，壓力升至0.1?0.1IMPa，打開排氣閥保持壓力穩(wěn)定；關(guān)閉夾套排污閥，向夾套內(nèi)通恒溫冷卻水，溫度降為40°C，進(jìn)入接種擴(kuò)繁工序。
[0011]所述培養(yǎng)槽3中配制好的培養(yǎng)液是:按照重量計(jì)豆芽Dl份:水5份的比例向培養(yǎng)槽3內(nèi)加水、加入豆芽D，通電加熱至沸騰，沸騰煮40分鐘后關(guān)閉電源，濾出豆芽D，培養(yǎng)槽3內(nèi)留下豆芽水，向騰煮40分鐘后關(guān)閉電源，濾出豆芽D，培養(yǎng)槽3內(nèi)留下豆芽水，向豆芽水中加入豆芽D重量10%的紅糖T，混合均勻，自然降溫至60?70°C，制成培養(yǎng)液。
[0012]接種擴(kuò)繁工序的工藝過程是:調(diào)節(jié)種子罐6的進(jìn)氣閥，減少進(jìn)氣量，將種子罐6的壓力降至0.0lMPa以下，取下進(jìn)料口蓋子，浸泡于濃度為75%的酒精中，無菌操作向種子罐6內(nèi)迅速導(dǎo)入菌種A，擰上蓋子，通入無菌空氣，空氣流量種子罐6中為30L/min，壓力升至
0.05MPa，設(shè)置罐內(nèi)溫度為39.5?40.5°C、攪拌器轉(zhuǎn)速180?200r/min ；16h后每2h抽檢一次，至16?24h檢驗(yàn)菌體進(jìn)入對(duì)數(shù)末期后，種子罐6內(nèi)的菌液通過移液管L導(dǎo)入發(fā)酵罐5中繼續(xù)進(jìn)行擴(kuò)繁培養(yǎng)；種子罐6內(nèi)的菌液導(dǎo)出后，關(guān)上空氣閥門，泄壓；向種子罐6內(nèi)加水至80%，通空氣，開攪拌器20min，排出存水，同時(shí)清理出料管C，重復(fù)前述空消步驟。
[0013]前述接種擴(kuò)繁工序中，所述導(dǎo)入種子罐6的菌種A為地衣芽孢桿菌Iicheniformis'),其制備過程是:選取自然腐熟的稻桿和玉米芯，按照稻桿4份、玉米芯I份的比例合成的復(fù)合物100g，置入250ml錐形瓶中，瓶口加棉塞封堵，置于40° C培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)一周，形成復(fù)合物培養(yǎng)樣品；然后將富集的復(fù)合物培養(yǎng)樣品采用系列稀釋法進(jìn)行涂布，系列稀釋法過程是:取復(fù)合物培養(yǎng)樣品1g加入到盛裝90ml無菌水的錐形瓶中，振蕩混合均勻，融合到無菌水中，稀釋為ΚΓ1，得到一次稀釋液；再從一次稀釋液中取1ml，移入到盛裝9ml無菌水的試管中，振蕩混合均勻，稀釋為10_2，形成二次稀釋液；再從二次稀釋液中取lml，移入到盛裝9ml無菌水的試管中，振蕩混合均勻，稀釋為10_3，形成三次稀釋液……如此逐次類推，重復(fù)以上稀釋過程，直至稀釋到10_6，形成六次稀釋液；制得含有原液10_6菌量的菌懸液；然后選取:原液、含量10_4的四次稀釋液、10 _5的五次稀釋液、10 _6的菌懸液，每樣各取0.1ml，分別涂到覆蓋培養(yǎng)基的平板上，在高溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h ;然后取出平板，挑取形態(tài)各異的單菌落6個(gè)，高倍顯微鏡下觀察，菌落特征:形態(tài)不規(guī)則，邊緣不整齊，中間稍隆起，邊緣粗糙，中間稍光滑。將選取的形態(tài)各異的6個(gè)單菌落分別進(jìn)行劃線純化，再置入高溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h ;然后再取樣檢驗(yàn)，制片觀察菌體形態(tài)為長桿狀，有芽孢。選擇其中生長最快的菌株作為菌種A，裝入錐形瓶中備用。
[0014]上述工藝過程中所述的平板上覆蓋的培養(yǎng)基是專門加工制備的，是將復(fù)合物培養(yǎng)樣品200g置入加熱容器中，加水煮沸，混合均勻，取濾液300 ml，按照質(zhì)量比加2%瓊脂，高溫高壓滅菌后制備而成。
[0015]所述接種擴(kuò)繁工序中，種子罐6內(nèi)的菌液通過移液管L導(dǎo)入發(fā)酵罐5中，繼續(xù)進(jìn)行接種擴(kuò)繁工序后期的擴(kuò)繁培養(yǎng)工藝過程。發(fā)酵罐5的擴(kuò)繁培養(yǎng)過程為:菌液導(dǎo)入發(fā)酵罐5中，發(fā)酵罐5設(shè)置攪拌器轉(zhuǎn)速180?200r/min，罐內(nèi)溫度為39.5?40.5°C，發(fā)酵罐5中空氣流量為15-18m3/h，壓力保持在0.05Mpa，20h后轉(zhuǎn)速調(diào)低至150r/min，Do值保持50以上，24h以后，每2?4h抽樣檢驗(yàn)一次，至24?48h檢驗(yàn)芽孢率達(dá)到80?90%時(shí)，停止攪拌、停止供氣，保壓狀態(tài)下，發(fā)酵罐5中形成的菌液通過成液管W打入儲(chǔ)存罐9內(nèi)。接種擴(kuò)繁工序完成，進(jìn)入儲(chǔ)存灌裝工序。
[0016]儲(chǔ)存灌裝工序的工藝過程是:通過成液管W將發(fā)酵罐5中的菌液打入經(jīng)過消毒滅菌的儲(chǔ)存罐9內(nèi)，常溫儲(chǔ)存；再將菌液通過菌液管Y打入計(jì)量灌裝罐10內(nèi)，充分?jǐn)嚢杈鶆?，即制成微生物功能菌劑成品；最后進(jìn)行計(jì)量灌裝輸入容器Z，用封口機(jī)封口，檢驗(yàn)合格后，封箱、入庫。
本發(fā)明制成的微生物功能菌劑成品為液體狀態(tài)，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)指標(biāo)為:顏色呈黃褐色，無異味；pH值為6.6?7.2，芽孢率達(dá)到80?90%，含菌量為14?17億/ml。制片觀察菌體形態(tài)，菌落特征為:形態(tài)不規(guī)則，邊緣不整齊，中間稍隆起，邊緣粗糙，中間稍光滑；菌體形態(tài)為長桿狀，有芽孢。
[0017]采用本發(fā)明菌劑對(duì)農(nóng)作物進(jìn)行沖施時(shí)，按照每畝2L菌劑用量，進(jìn)行灌溉時(shí)，加水稀釋50倍，將稀釋后的菌液隨水漫灌；灌根時(shí)，按每畝I?2L菌劑用量，加水稀釋500倍，將稀釋后的菌液澆灌于農(nóng)作物根部，根據(jù)不同密度確定每株植物的稀釋菌液用量；蘸根時(shí)，按照每畝I?2L菌劑用量，加水稀釋200倍，在幼苗移栽前將根部浸入稀釋菌液中，浸泡10?20min ;拌種或浸種時(shí)，將50 ml菌劑與1kg種子混拌均勾。
[0018]本發(fā)明制成的菌劑中形成的芽孢，耐酸耐堿、耐高低溫，存活能力強(qiáng)，施入土壤后處于休眼狀態(tài)的菌群會(huì)迅速系列擴(kuò)張，增加土壤有益菌群的數(shù)量，可有效調(diào)節(jié)植物根際土壤微生物生態(tài)平衡，促進(jìn)其它生物產(chǎn)生抗菌活性物質(zhì)，殺滅植物病原菌，能分泌生長素物質(zhì)和赤霉素物質(zhì)等促生長物質(zhì)，增根壯苗，增強(qiáng)植株抗旱能力，能促進(jìn)土壤團(tuán)粒結(jié)構(gòu)形成，防止土壤板結(jié)，防止土壤中的水分蒸發(fā)。用于治理瓜果蔬菜生長過程中常見的根腐病、立枯病、紅根病、枯萎病、莖基腐病、猝倒病等土傳病害，效果很好。
[0019]本發(fā)明具有肥效高、能夠促進(jìn)植株防病蟲害、改良土壤結(jié)構(gòu)、無毒無害、利于環(huán)保的特點(diǎn)，可促進(jìn)農(nóng)田持續(xù)長效發(fā)展，促進(jìn)農(nóng)作物增產(chǎn)增收，功能多、成本低，具有良好的社會(huì)經(jīng)濟(jì)效益和推廣應(yīng)用價(jià)值。
【權(quán)利要求】
1.一種微生物功能菌劑及其制備方法，其特征在于以種子罐￠)、發(fā)酵罐(5)、儲(chǔ)存罐(9)、計(jì)量灌裝罐(10)為主要設(shè)備，以蒸汽機(jī)(2)、蒸汽過濾器(16)為加熱消毒設(shè)備，以空壓機(jī)(8)、儲(chǔ)氣罐(7)、冷凍干燥器(12)、油水分離器(11)、空氣粗濾器(13)、減壓閥(14)、空氣精濾器(15)為無菌空氣供氣設(shè)備，以純凈水箱(I)、循環(huán)水箱(4)、水泵(B)為循環(huán)恒溫設(shè)備，通過密封管道連接構(gòu)成生產(chǎn)線，經(jīng)過空消工序、加液實(shí)消工序的工藝過程后，向種子罐(6)內(nèi)的培養(yǎng)液中加入菌種(A)，再經(jīng)過接種擴(kuò)繁工序、儲(chǔ)存灌裝工序的工藝過程，制成微生物功能菌劑成品。
2.按照權(quán)利要求1所述的微生物功能菌劑及其制備方法，其特征在于所述空消工序的工藝過程是:將種子罐(6)和發(fā)酵罐(5)的空氣閥門關(guān)閉、打開空氣精濾器(15)的下排污閥，排盡冷水，打開蒸汽閥門，將空氣精濾器(15)的壓力調(diào)至0.11?0.12MPa，保持30?40min進(jìn)行蒸汽消毒，再關(guān)閉蒸汽閥門，打開空氣閥門，通氣量調(diào)至30L/min，壓力為0.05MPa，通風(fēng)15?20min，然后關(guān)閉空氣閥門，保持無菌空氣管(Q)連通的管路內(nèi)氣壓為正壓，將種子罐(6)和發(fā)酵罐(5)排氣口閥門打開，并打開夾套排污閥，向夾套內(nèi)通蒸汽5min-10min，排凈夾套內(nèi)的冷水后，關(guān)閉夾套蒸汽閥，然后向種子罐(6)和發(fā)酵罐(5)內(nèi)通蒸汽，罐內(nèi)溫度升至120?121°C，調(diào)小排汽閥，使壓力上升至0.1?0.12MPa，再調(diào)小蒸汽閥，壓力穩(wěn)定在0.11?0.12MPa，保持30?40min，溫度下降，繼續(xù)關(guān)閉各路蒸汽閥門，開大排氣閥，壓力降至0.03MPa，打開空氣閥門通入無菌空氣，罐內(nèi)壓力上升至0.05?0.1MPa,保持穩(wěn)定；溫度降至40°C時(shí)，關(guān)閉空氣閥門，打開排氣閥門放氣，罐內(nèi)壓力降為O，向罐內(nèi)插ApH電極和Do電極。
3.按照權(quán)利要求1所述的微生物功能菌劑及其制備方法，其特征在于所述加液實(shí)消工序的工藝過程是:將培養(yǎng)槽(3)中配制好的培養(yǎng)液通過培養(yǎng)液管(M)分別加入種子罐(6)和發(fā)酵罐(5)內(nèi)至各自60%的空間，再向種子罐(6)內(nèi)加入消泡劑30 ml、向發(fā)酵罐(5)內(nèi)加入消泡劑200?300ml，然后向夾套內(nèi)通蒸汽進(jìn)行預(yù)熱，開動(dòng)攪拌器，攪拌25?40min，溫度升至80°C以上，停止攪拌和預(yù)熱，向罐內(nèi)通蒸汽至壓力0.1?0.llMPa，溫度120?121 °C，保持30?40min，停止通蒸汽，壓力降至0.03MPa ;打開空氣閥門，通入無菌空氣，壓力升至0.1?0.1IMPa，打開排氣閥保持壓力穩(wěn)定；關(guān)閉夾套排污閥，向夾套內(nèi)通恒溫冷卻水，溫度降為40°C，進(jìn)入接種擴(kuò)繁工序。
4.按照權(quán)利要求3所述的微生物功能菌劑及其制備方法，其特征在于所述培養(yǎng)槽(3)中配制好的培養(yǎng)液是:按照重量計(jì)豆芽(D)I份:水5份的比例向培養(yǎng)槽(3)內(nèi)加水、加入豆芽(D)，通電加熱至沸騰，沸騰煮40分鐘后關(guān)閉電源，濾出豆芽(D)，培養(yǎng)槽(3)內(nèi)留下豆芽水，向豆芽水中加入豆芽(D)重量10%的紅糖(T)，混合均勻，自然降溫至60?70°C，制成培養(yǎng)液。
5.按照權(quán)利要求1所述的微生物功能菌劑及其制備方法，其特征在于所述接種擴(kuò)繁工序的工藝過程是:調(diào)節(jié)種子罐￠)的進(jìn)氣閥，減少進(jìn)氣量，將種子罐￠)的壓力降至0.0lMPa以下，取下進(jìn)料口蓋子，浸泡于濃度為75%的酒精中，無菌操作向種子罐(6)內(nèi)迅速導(dǎo)入菌種(A)，擰上蓋子，通入無菌空氣，空氣流量種子罐(6)中為30L/min，壓力升至0.05MPa，設(shè)置罐內(nèi)溫度為39.5?40.5°C、攪拌器轉(zhuǎn)速180?200r/min ；16h后每2h抽檢一次，至16?24h檢驗(yàn)菌體進(jìn)入對(duì)數(shù)末期后，種子罐￠)內(nèi)的菌液通過移液管(L)導(dǎo)入發(fā)酵罐(5)中繼續(xù)進(jìn)行擴(kuò)繁培養(yǎng)；種子罐(6)內(nèi)的菌液導(dǎo)出后，關(guān)上空氣閥門，泄壓；向種子罐(6)內(nèi)加水至80%，通空氣，開攪拌器20min，排出存水，同時(shí)清理出料管(C)，重復(fù)前述空消步驟。
6.按照權(quán)利要求5所述的微生物功能菌劑及其制備方法，其特征在于所述菌種(A)為地衣芽孢桿菌(AaciTrAz1S Iicheniformis)，其制備過程是:取自然腐熟的稻桿和玉米芯，按照秸桿4份、玉米芯I份的比例合成的復(fù)合物100g，置入250ml錐形瓶中，瓶口加棉塞封堵，置于40° C培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)一周，形成復(fù)合物培養(yǎng)樣品；然后將富集的復(fù)合物培養(yǎng)樣品采用系列稀釋法進(jìn)行涂布，系列稀釋法過程是:取復(fù)合物培養(yǎng)樣品1g加入到盛裝90ml無菌水的錐形瓶中，振蕩混合均勻，融合到無菌水中，稀釋為10—1，得到一次稀釋液；再從一次稀釋液中取Iml，移入到盛裝9ml無菌水的試管中，振蕩混合均勻，稀釋為10_2，形成二次稀釋液；再從二次稀釋液中取1ml，移入到盛裝9ml無菌水的試管中，振蕩混合均勻，稀釋為10_3，形成三次稀釋液……如此逐次類推，重復(fù)以上稀釋過程，直至稀釋到10_6，形成六次稀釋液；制得含有原液10_6菌量的菌懸液；然后取原液、含量10_4的四次稀釋液、10_5的五次稀釋液、10_6的菌懸液，各取0.1ml，分別涂到覆蓋培養(yǎng)基的平板上，在高溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h ;然后取出平板，挑取形態(tài)各異的單菌落6個(gè)，分別進(jìn)行劃線純化，再置入高溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h;然后再取樣檢驗(yàn)，選擇其中生長最快的菌株作為菌種(A)，裝入錐形瓶中備用。
7.按照權(quán)利要求6所述的微生物功能菌劑及其制備方法，其特征在于所述的培養(yǎng)基是將復(fù)合物培養(yǎng)樣品200g置入加熱容器中，加水煮沸，混合均勻，取濾液300 ml，按照質(zhì)量比加2%瓊脂，尚溫尚壓滅菌后制備而成。
8.按照權(quán)利要求5所述的微生物功能菌劑及其制備方法，其特征在于所述發(fā)酵罐(5)的擴(kuò)繁培養(yǎng)過程為:種子罐出)內(nèi)的菌液通過移液管(L)導(dǎo)入發(fā)酵罐(5)中，發(fā)酵罐(5)設(shè)置攪拌器轉(zhuǎn)速180?200r/min，罐內(nèi)溫度為39.5?40.5°C，發(fā)酵罐(5)中空氣流量為15-18m3/h，壓力保持在0.05Mpa，20h后轉(zhuǎn)速調(diào)低至150r/min，Do值保持50以上，24h以后，每2?4h抽樣檢驗(yàn)一次，至24?48h檢驗(yàn)芽孢率達(dá)到80?90%時(shí)，停止攪拌、停止供氣，保壓狀態(tài)下，發(fā)酵罐(5)中形成的菌液通過成液管(W)打入儲(chǔ)存罐(9)內(nèi)，進(jìn)入儲(chǔ)存灌裝工序。
9.按照權(quán)利要求1所述的微生物功能菌劑及其制備方法，其特征在于所述的儲(chǔ)存灌裝工序的工藝過程是:通過成液管(W)將發(fā)酵罐(5)中的菌液打入經(jīng)過消毒滅菌的儲(chǔ)存罐(9)內(nèi)，常溫儲(chǔ)存；再將菌液通過菌液管(Y)打入計(jì)量灌裝罐(10)內(nèi)，充分?jǐn)嚢杈鶆?，即制成微生物功能菌劑成品；最后進(jìn)行計(jì)量灌裝輸入容器(Z)。
10.按照權(quán)利要求7所述的微生物功能菌劑及其制備方法，其特征在于所述的微生物功能菌劑成品為液體狀態(tài)，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)指標(biāo)為:顏色呈黃褐色，無異味；pH值為6.6?7.2，芽孢率達(dá)到80?90%，含菌量為14?17億/ml。
【文檔編號(hào)】C05G3/02GK104478600SQ201410786343
【公開日】2015年4月1日 申請(qǐng)日期:2014年12月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月18日
【發(fā)明者】魏承勇, 丁延芹, 劉潤清, 杜秉海, 姚良同, 王芳 申請(qǐng)人:山東大地生物科技有限公司