一種防治土傳病害的生物智能菌塊配方及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種防治植物土傳病害的活體生物智能菌塊，所述生物智能菌塊采用3種菌株ACCC40033:刺孢吸水鏈霉菌北京變種 Streptomyces hygrospinosusvar.beigingenis Taoetal 、ACCC40060:小金色鏈霉菌 Streptomyces microflavus (Yanetal.)Yanetal.和ACCC11112:枯草芽孢桿菌 Bacillussubtilis (Ehrenberg)Cohn，經(jīng)發(fā)酵干燥制得各菌株母粉后與載體輔料按比例混合壓制而成，該生物智能菌塊可以用于多種蔬菜、花卉、經(jīng)濟作物的育苗，不僅在苗期能夠防止土傳病害對植物的危害，而且在移栽到田間或溫室后，仍然能夠?qū)χ参锏耐羵鞑『ζ鸬椒浅：玫姆乐巫饔茫貏e是對黃瓜枯萎病、辣椒立枯病和西瓜猝倒病有很好的防效。
【專利說明】一種防治土傳病害的生物智能菌塊配方及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種育苗菌塊，特別是涉及一種可用于防治植物土傳病害的活體生物 智能菌塊的配方及其制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 土傳病害是土壤中的病原物在條件適宜時從作物的根部或莖基部侵害作物而引 起的病害，其病原菌主要是通過土壤有機肥料、灌溉水或者自然流水進行傳播危害，危害嚴 重的地塊可使作物減產(chǎn)30%-50%。
[0003] 土傳病害之所以越來越嚴重，難防難治，究其原因就是土傳病害的病原菌一般為 多寄生微生物，一種病原菌就可以侵染數(shù)種乃至數(shù)百種作物和雜草，使得傳統(tǒng)的輪作、品種 選擇與改進栽培方式等治理土傳病害的方法有很大的局限性。
[0004] 本發(fā)明以ACCC40033:刺抱吸水鏈霉菌北京變種 var.beigingenisTaoetal、金免J叛霉嵐Streptomycesmicroflavus(Janet al.) Yan et al?和ACCC11112:枯草芽抱桿菌(Ehrenberg) Cohn (這3個菌種均獲購于中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心)的發(fā)酵母粉為防治土傳病害的核 心成分，輔以天然載體物質(zhì)(草炭土、椰糠、糖渣)、促生劑(羥烯腺嘌呤、烯腺嘌呤)、凝結(jié)劑 (聚丙烯酰胺凝膠)、粘合劑(阿拉伯樹膠粉)、保護劑(海藻酸鉀)，用專用壓片機壓制成中間 帶寬2cm、深為lcm小孔的圓柱形菌塊(直徑4. 5cm，高2. 5cm)，制得本發(fā)明的生物智能菌塊。
[0005] 本發(fā)明的生物智能菌塊，產(chǎn)生的抗菌素不僅對多種土傳病害的病原菌使到抑制作 用，還可以對敏感的病原微生物產(chǎn)生致死作用，同時生物智能菌塊的菌種在與病原微生物 產(chǎn)生生態(tài)位點的競爭中處于有利地位，更好地保護了作物的生長。
[0006] 本發(fā)明的產(chǎn)品適用于多種蔬菜、花卉、經(jīng)濟作物的育苗以及移栽，不僅在苗期可以 防止植物土傳病害的發(fā)生，而且在移栽到田間或溫室后，仍然能夠?qū)χ参锏耐羵鞑『ζ鸬?非常好的防治作用。移栽15天后對西瓜猝倒病、辣椒立枯病、黃瓜枯萎病等植物的土傳病 害防效可達90%以上，持效期長達2-3個月；并具有對人畜安全無毒、不污染環(huán)境等有利于 生態(tài)平衡的特點，滿足了國家對生態(tài)農(nóng)業(yè)的發(fā)展戰(zhàn)略，實現(xiàn)了經(jīng)濟效益和生態(tài)效益的高度 統(tǒng)一。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 菌株 ACCC40033 為刺抱吸水鏈霉菌北京變種 Far. 辦et a/ ;菌株AC(X40060 為小金色鏈霉菌ffiicro/yaras (Yan et al.) Yan et al.;菌株 ACCC11112 為枯草芽抱桿菌(Ehrenberg) Cohn ;上述3種菌株均購自于中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心。
[0008] 本發(fā)明的生物智能菌塊是采用如下方法制備的。
[0009] 步驟一、制備發(fā)酵母粉。
[0010](1)制備菌株ACCC40033的發(fā)酵母粉：液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方：KN03-1. 2g， K2HP04-0 . 54g，NaCl-O. 55g，F(xiàn)eS04 ? 7H20-0. Olg，可溶性淀粉-25g，MgS04 ? 7H20-0. 6g， 羥烯腺嘌呤-0. 5g，烯腺嘌呤-0. lg，瓊脂-0. 25g，pH值調(diào)至7. 2,清水補齊至lOOOg。按上 述比例配置好所需發(fā)酵培養(yǎng)基的量，然后將菌株于無菌條件下接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在 30°C條件下于搖床上振蕩培養(yǎng)72小時后(有效活菌數(shù)均達到3. 0 X 109cfu/ml)制得一級種 子；然后將培養(yǎng)好的一級種子按3%的比例，接入裝有按上述比例配好的已經(jīng)滅菌并冷卻后 的發(fā)酵罐中進行發(fā)酵生產(chǎn)，發(fā)酵培養(yǎng)溫度30 °C，通氣量開始在1 :1 ( v . v . m )，培養(yǎng) 24小時后增至1:1.5( v ? v ? m )，48小時后降至1:1.2( v ? v ? m )，發(fā)酵至72 小時發(fā)酵完畢，經(jīng)過鏡檢發(fā)酵液中ACCC40033:刺孢吸水鏈霉菌北京變種的菌量達到30億 cfu/ml時為合格菌液，最后按7:3的比例將菌液與載體攪拌均勻，放入溫度在90 ± 1 °C左右 的氣流干燥機進行干燥，最后得到合格的發(fā)酵母粉。
[0011](2)制備ACCC40060的發(fā)酵母粉：液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方：KN03-L 2g，K2HP04-0.54g ，NaCl-0. 55g，F(xiàn)eS04 ? 7H20-0. Olg，可溶性淀粉-25g，MgS04 ? 7H20-0. 6g，羥烯腺嘌 呤-0. 5g，烯腺嘌呤-0. lg，瓊脂-0. 25g，pH值調(diào)至7. 2,清水補齊至1000g。按上述比例配 置好所需發(fā)酵培養(yǎng)基的量，然后將菌株于無菌條件下接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在30°C條件 下于搖床上振蕩培養(yǎng)72小時后(有效活菌數(shù)均達到3. OX 109cfu/ml)制得一級種子；然后 將培養(yǎng)好的一級種子按3%的比例，接入裝有按上述比例配好的已經(jīng)滅菌并冷卻后的發(fā)酵 罐中進行發(fā)酵生產(chǎn)，發(fā)酵培養(yǎng)溫度30 °C，通氣量開始在1 : 1.2 ( v ? v ? m )，培養(yǎng)24 小時后增至1:1. 4 ( v ? v ? m )，48小時后繼續(xù)增至1 : 1. 6 ( v ? v ? m )。發(fā)酵 至72小時發(fā)酵完畢，經(jīng)過鏡檢發(fā)酵液中ACCC40060:小金色鏈霉菌的菌量達到30億cfu/ ml時為合格菌液最后按7:3的比例將菌液與載體攪拌均勻，放入溫度在90土 1°C左右的氣 流干燥機進行干燥，最后得到合格的發(fā)酵母粉。
[0012] (3)制備ACCC11112的發(fā)酵母粉：液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方：蛋白胨-5. 3g，NaCl-5. 8g， MnS04?H20-0. 004g，羥烯腺嘌呤-0. 4g，烯腺嘌呤-0. 2g，牛肉膏-3. 3g，瓊脂-0. 25g，pH值 調(diào)至7. 0,清水補齊至1000g。按上述比例配置好所需發(fā)酵培養(yǎng)基的量，然后將菌株于無菌 條件下接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在30°C條件下于搖床上振蕩培養(yǎng)72小時后(有效活菌數(shù) 均達到3.OX109cfu/ml)制得一級種子；然后將培養(yǎng)好的一級種子按3%的比例，接入裝有 按上述比例配好的已經(jīng)滅菌并冷卻后的發(fā)酵罐中進行發(fā)酵生產(chǎn)，發(fā)酵培養(yǎng)溫度30 °C，通 氣量開始在1 : 1(v?v?m)，培養(yǎng)24小時后增至1:1.5(v?v?m)，48小 時后繼續(xù)增至1:1.2(v.v.m)。發(fā)酵至72小時發(fā)酵完畢，經(jīng)過鏡檢發(fā)酵液中 ACCC11112:枯草芽孢桿菌的菌量達到30億cfu/ml時為合格菌液，最后按7:3的比例將菌 液與載體攪拌均勻，放入溫度在90±1°C左右的氣流干燥機進行干燥，最后得到合格的發(fā)酵 母粉。
[0013] 以上所述菌液與載體攪拌干燥中，載體為6:4比例的碳酸鈣和拉開粉混合物。
[0014] 步驟二、生物智能菌塊的制備。
[0015] 按重量百分比將草炭土 58. 6%、椰糠15%、糖渣15%、羥烯腺嘌呤0. 2%、烯腺嘌呤 0. 2%、聚丙烯酰胺凝膠2%、阿拉伯樹膠粉1%、海藻酸鉀8%的比例混合均勻制成載體物質(zhì)。 然后將配置好的載體物質(zhì)與菌株ACCC40033的發(fā)酵母粉、菌株ACCC40060的發(fā)酵母粉、菌株 ACCC11112的發(fā)酵母粉，按照重量百分比10:0. 4-1 :0. 4-1:0. 4-1混拌均勻后，用專用壓片 機壓制成中間帶寬2cm、深為lcm小孔的圓柱形菌塊(直徑4. 5cm，高2. 5cm)，制得本發(fā)明所 述得生物智能菌塊。

【具體實施方式】
[0016] 為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案更加清楚明白，用以下具體實例進行說明，但本發(fā) 明不局限于這些具體實例。
[0017] 實施例1:制備本發(fā)明的生物智能菌塊。
[0018] 所使用的菌株：菌株ACCC40033為刺孢吸水鏈霉菌北京變種泣 Far. a八菌株 ACCC40060 為小金色鏈霉菌 ffiicro/yaras (Yan et al.) Yan et al.、菌株 ACCC11112:枯草芽抱桿菌 (Ehrenberg) Cohn,這3種菌株均獲購自于中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏 管理中心。
[0019]首先，制備菌株ACCC40033的發(fā)酵母粉：液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方：KN03-1.2g， K2HP04-0 . 54g，NaCl-0. 55g，F(xiàn)eS04 ? 7H20-0. 01g，可溶性淀粉-25g，MgS04 ? 7H20-0. 6g， 羥烯腺嘌呤-0. 5g，烯腺嘌呤-0. lg，瓊脂-0. 25g，pH值調(diào)至7. 2,清水補齊至1000g。按上 述比例配置好所需發(fā)酵培養(yǎng)基的量，然后將菌株于無菌條件下接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在 30°C條件下于搖床上振蕩培養(yǎng)72小時后(有效活菌數(shù)均達到3. 0 X 109cfu/ml)制得一級種 子；然后將培養(yǎng)好的一級種子按3%的比例，接入裝有按上述比例配好的已經(jīng)滅菌并冷卻后 的發(fā)酵罐中進行發(fā)酵生產(chǎn)，發(fā)酵培養(yǎng)溫度30 °C，通氣量開始在1 :1( v . v . m )，培養(yǎng) 24小時后增至1:1.5( v ? v ? m )，48小時后降至1:1.2( v ? v ? m )，發(fā)酵至72 小時發(fā)酵完畢，經(jīng)過鏡檢發(fā)酵液中ACCC40033:刺孢吸水鏈霉菌北京變種的菌量達到30億 cfu/ml時為合格菌液，最后按7:3的比例將菌液與載體攪拌均勻，放入溫度在90 ± 1 °C左右 的氣流干燥機進行干燥，最后得到合格的發(fā)酵母粉。
[0020] 其次，制備ACCC40060的發(fā)酵母粉：液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方：KN03-1. 2g ，K2HP04-0 . 54g，NaCl-0. 55g，F(xiàn)eS04 *71120-0. 01g，可溶性淀粉-25g，MgS04 *71120-0. 6g， 羥烯腺嘌呤-0. 5g，烯腺嘌呤-0. lg，瓊脂-0. 25g，pH值調(diào)至7. 2,清水補齊至1000g。按上 述比例配置好所需發(fā)酵培養(yǎng)基的量，然后將菌株于無菌條件下接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在 30°C條件下于搖床上振蕩培養(yǎng)72小時后(有效活菌數(shù)均達到3. 0 X 109cfu/ml)制得一級種 子；然后將培養(yǎng)好的一級種子按3%的比例，接入裝有按上述比例配好的已經(jīng)滅菌并冷卻后 的發(fā)酵罐中進行發(fā)酵生產(chǎn)，發(fā)酵培養(yǎng)溫度30 °C，通氣量開始在1 : 1.2 ( v . v . m )， 培養(yǎng)24小時后增至1:1.4 ( v ? v ? m )，48小時后繼續(xù)增至1 : 1.6 ( v ? v ? m )。發(fā)酵至72小時發(fā)酵完畢，經(jīng)過鏡檢發(fā)酵液中ACCC40060:小金色鏈霉菌的菌量達到30 億cfu/ml時為合格菌液最后按7:3的比例將菌液與載體攪拌均勻，放入溫度在90±1°C左 右的氣流干燥機進行干燥，最后得到合格的發(fā)酵母粉。
[0021] 再次，制備ACCC11112的發(fā)酵母粉：液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方：蛋白胨-5.3g， NaCl-5. 8g，MnS04 ? H20-0. 004g，羥烯腺嘌呤-0? 4g，烯腺嘌呤-0? 2g，牛肉膏-3. 3g，瓊 脂-0. 25g，pH值調(diào)至7. 0,清水補齊至1000g。按上述比例配置好所需發(fā)酵培養(yǎng)基的量，然 后將菌株于無菌條件下接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在30°C條件下于搖床上振蕩培養(yǎng)72小時 后(有效活菌數(shù)均達到3. OX 109cfu/ml)制得一級種子；然后將培養(yǎng)好的一級種子按3%的 比例，接入裝有按上述比例配好的已經(jīng)滅菌并冷卻后的發(fā)酵罐中進行發(fā)酵生產(chǎn)，發(fā)酵培養(yǎng) 溫度30 °C，通氣量開始在1 : 1 ( v ? v ? m )，培養(yǎng)24小時后增至1:1.5 ( v ? v ? m )，48小時后繼續(xù)增至1 : 1.2 ( v ? v ? m )。發(fā)酵至72小時發(fā)酵完畢，經(jīng)過鏡 檢發(fā)酵液中ACCC11112:枯草芽孢桿菌的菌量達到30億cfu/ml時為合格菌液，最后按7:3 的比例將菌液與載體攪拌均勻，放入溫度在90 ± 1 °C左右的氣流干燥機進行干燥，最后得到 合格的發(fā)酵母粉。
[0022] 最后，稱取草炭土5. 86kg、椰糠1. 5kg、糖漁1. 5kg、輕烯腺噪呤20g、烯腺噪呤20g、 聚丙烯酰胺凝膠200g、阿拉伯樹膠粉100g、海藻酸鉀800g、菌株ACCC40033的發(fā)酵母粉 500g、菌株ACCC40060的發(fā)酵母粉500g、菌株ACCC11112的發(fā)酵母粉500g混合攪拌制成總 量為11. 5kg的載體物質(zhì)，放入專用壓片機中壓制成中間帶寬2cm、深為lcm小孔的圓柱形菌 塊(直徑4. 5cm，高2. 5cm)，制得本發(fā)明所述得生物智能菌塊。
[0023] 拮抗試驗：將菌株ACCC40033、菌株ACCC40060和菌株ACCC11112分別在高高氏 一號固體培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉汁瓊脂培養(yǎng)基以及高氏一號與營養(yǎng)肉汁混合固體培養(yǎng)基上接種培 養(yǎng)，三點放置相互間隔3cm，每個組合重復三次進行交叉拮抗試驗，結(jié)果表明三者之間不存 在拮抗，能夠共同生長。
[0024] 實施例2 :測定本發(fā)明生物智能菌塊的生物活性。
[0025] 按本發(fā)明的制備方法制得：只含菌株ACCC40033的育苗菌塊、只含菌株 ACCC40060的育苗菌塊、只含菌株ACCC11112的育苗菌塊和本發(fā)明的生物智能菌塊。
[0026] 用以上制得的4種菌塊分別對黃瓜、辣椒和西瓜進行育苗并最后分別移栽到黃瓜 枯萎病、辣椒立枯病和西瓜猝倒病等土傳病害發(fā)生嚴重的溫室或地塊，15天后觀察黃瓜枯 萎病、辣椒立枯病和西瓜猝倒病的發(fā)病率。

【權(quán)利要求】
1. 一種防治植物土傳病害的活體生物智能菌塊，其特征是：所述的生物智能菌塊采 用3種菌株ACCC40033:刺抱吸水鏈霉菌北京變種Stre/?Far. beigingenisTao et al、kOZQA^&y. 金免J范霉儀 Streptomyces microflavus (Yan et al.) Yan et al?和 ACCC11112:枯草芽抱桿菌(Ehrenberg) Cohn，經(jīng) 發(fā)酵干燥制得3種菌株母粉后與載體輔料混合物按特定比例混合壓制而成。
2. 權(quán)利要求1所述的ACCC40033:刺孢吸水鏈霉菌北京變種和ACCC40060:小金色鏈 霉菌的液體發(fā)酵配方為：KN03-1.2g，K2HP04-0 . 54g，NaCl-0.55g，F(xiàn)eS04.740-0. Olg， 可溶性淀粉_25g，MgS04 ? 7H20-0. 6g，羥烯腺嘌呤-0. 5g，烯腺嘌呤-0. lg，瓊脂-0. 25g，pH 值調(diào)至7. 2,清水補齊至1000g。
3. 權(quán)利要求1所述的ACCC11112:枯草芽孢桿菌的液體發(fā)酵配方為：蛋白胨-5.3g， NaCl-5. 8g，MnS04 ? H20-0. 004g，羥烯腺嘌呤-0? 4g，烯腺嘌呤-0? 2g，牛肉膏-3. 3g，瓊 脂-0. 25g，pH值調(diào)至7. 0,清水補齊至1000g。
4. 權(quán)利要求1所述的載體輔料與3種菌株母粉的重量百分比比例為：10:0.4-1 : 0.4-1:0. 4-1。
5. 權(quán)利要求1所述的載體輔料混合物其成分重量百分比為：草炭土 58. 6%、椰糠15%、 糖渣15%、羥烯腺嘌呤0. 2%、烯腺嘌呤0. 2%、聚丙烯酰胺凝膠2%、阿拉伯樹膠粉1%、海藻酸鉀 8%〇
6. 權(quán)利要求1所訴的生物智能菌塊用于多種蔬菜、花卉、經(jīng)濟作物的育苗，可以對植物 苗期和移栽后土傳病害的防治作用，特別是對黃瓜枯萎病、辣椒立枯病和西瓜猝倒病有非 常好的防效。
【文檔編號】A01N63/02GK104430547SQ201410791561
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月19日
【發(fā)明者】吳景霄, 唐睿, 任承才, 杜榮鍇, 吳淑科, 王昌顯, 嚴崇澤 申請人:唐睿