一種黃花馬鈴苣苔的快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種黃花馬鈴苣苔的快速繁殖方法，包括外植體的選擇及滅菌、初代培養(yǎng)、繼代增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和接種。以幼嫩葉片為外植體，設(shè)定初代培養(yǎng)、繼代增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)的培養(yǎng)基，在溫度24～28℃、光照時間9h/d、光照強(qiáng)度1500lx條件下快速繁殖。本發(fā)明方法操作簡單實用，生根率達(dá)到100％，且植株健壯。
【專利說明】
一種黃花馬鈴苣苔的快速繁殖方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物繁殖【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種黃花馬鈴苣苔的快速繁殖方法。

【背景技術(shù)】
[0002]苦苣苔科植物是近年來國際上十分盛行的觀賞植物，全世界約有150屬3700種，我國分布有58屬470余種，該科大部分種類具有較高的觀賞價值，但大多依然沉寂在深山幽谷之中。美國、加拿大等西方國家已育成大量的園藝品種。海南苦苣苔科植物有特有屬2個，特有種10個，多數(shù)的種株型緊湊，色彩多樣鮮麗，花期長，是開發(fā)新型花丼品種的重要資源。黃花馬鈴苣笞(Oreocharis flavida Merr.)為苦苣笞科馬鈴苣笞屬多年生草本植物，是海南特有的野生花丼。葉基生，花淡黃色，適合盆栽觀賞，可直接馴化應(yīng)用。根狀莖粗而短。葉全部基生，具長柄；葉片卵形至寬卵形，稀寬橢圓形至倒卵形，長4?10厘米，寬2?6.5厘米，頂端圓形，基部近心形或圓形，邊緣近全緣或有淺鈍齒，上面密被柔毛，下面密被黃褐色絹狀綿毛，側(cè)脈每邊5?7條，在下面明顯；葉柄長2.5?10厘米，密被黃褐色絹狀綿毛。黃花馬鈴苣苔的組培快繁可以為其人工栽培提供種苗，對其應(yīng)用及資源保護(hù)有著重要的現(xiàn)實意義。本申請首次對黃花馬鈴苣苔進(jìn)行組培育苗技術(shù)研宄，為海南苦苣苔花丼的推廣應(yīng)用提供技術(shù)支撐，研宄成果將填補(bǔ)國內(nèi)和省內(nèi)研宄空白。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于提供一種黃花馬鈴苣苔的快速繁殖方法，通過利用黃花馬鈴苣苔葉片作為外植體，并利用無菌小葉片達(dá)到快速繁殖種苗的目的。
[0004]本發(fā)明具體通過以下技術(shù)方案實現(xiàn):
[0005]一種黃花馬鈴苣苔的快速繁殖方法，包括以下步驟:1)外植體的選擇及滅菌；2)初代(不定芽誘導(dǎo))培養(yǎng)；3)繼代增殖培養(yǎng)；4)生根培養(yǎng)；5)接種。
[0006]步驟(I)中所述的外植體選擇幼嫩葉片。所述的滅菌具體過程為:70%酒精浸泡10s，無菌水沖洗，用0.02% HgCl2溶液消毒3min，無菌水沖洗，用2% NaClO消毒15min，無菌水沖洗干凈。
[0007]步驟(2)中培養(yǎng)基配方:MS+6-BA0.5mg/L+NAA 0.lmg/L+益培隆 6ml/L+蔗糖30g/L，pH 值 6.5。
[0008]步驟(3)中培養(yǎng)基配方:不定芽增殖芽:MS+6-BA 0.lmg/L+NAA0.lmg/L+蔗糖30g/L，pH 值 6.5 ;無菌植株小葉片增殖芽:MS+6-BA0.5mg/L+NAA 0.lmg/L+蔗糖 30g/L，pH值 6.5 ;
[0009]步驟⑷中培養(yǎng)基配方:MS+IBA 0.5mg/L+蔗糖30g/L，pH值6.5。
[0010]本發(fā)明步驟(2)?(4)培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)溫度24?28°C，光照時間9h/d，光照強(qiáng)度 15001χο
[0011]本發(fā)明的有益效果為:本發(fā)明利用黃花馬鈴苣苔葉片作為外植體，在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中添加益培隆取得了較好的效果，生根率100%，平均每株生根6.00條，植株健壯，葉色綠。

【具體實施方式】
[0012]下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的說明，以下所述，僅是對本發(fā)明的較佳實施例而已，并非對本發(fā)明做其他形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以變更為同等變化的等效實施例。凡是未脫離本發(fā)明方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實質(zhì)對以下實施例所做的任何簡單修改或等同變化，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
[0013]實施例1
[0014]本實驗安排在海南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園林花丼研宄所組培工廠進(jìn)行，實施時間為2013年5月至2014年9月。各設(shè)置處理均接種8袋，每袋3個材料，3次重復(fù)，所有培養(yǎng)基均附加卡拉膠9g/L，鹿糖30g/L。
[0015]1、材料與方法
[0016]1.1外植體
[0017]幼嫩葉片。
[0018]1.2 方法
[0019]1.2.1無菌材料的獲得
[0020]從植株上剪下帶葉柄的幼嫩葉片，用棉花球醮洗潔精液擦拭葉片兩面，然后用自來水清洗干凈。在超凈工作臺上用70%酒精浸泡10s，無菌水沖洗1次，再用0.02% HgCl2溶液消毒3min，無菌水沖洗5次，最后用2% NaC1消毒15min，無菌水沖洗5次。葉片切成1 cm見方的小塊以葉面朝上接種于初代培養(yǎng)基中。
[0021]1.2.2初代(不定芽誘導(dǎo))培養(yǎng)
[0022]1.2.2.1培養(yǎng)基配方
[0023]MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.lmg/L+ 益培隆 6ml/L+ 蔗糖 30g/L，pH 值 6.5。
[0024]1.2.2.2 培養(yǎng)條件
[0025]培養(yǎng)溫度24?28 °C，光照時間9h/d，光照強(qiáng)度15001 x。
[0026]1.2.2.3 接種
[0027]外植體接種15d后，葉面開始膨大隆起，20d開始出現(xiàn)愈傷組織，40d在葉片邊緣、主葉脈基部和葉面處均分化出不定芽。
[0028]1.2.3繼代增殖培養(yǎng)
[0029]1.2.3.1培養(yǎng)基配方
[0030]不定芽增殖芽:MS+6_BA0.lmg/L+NAA 0.lmg/L+ 鹿糖 30g/L，pH 值 6.5。
[0031]無菌植株小葉片增殖芽:MS+6-BA0.5mg/L+NAA 0.lmg/L+ 蔗糖 30g/L，pH 值 6.5。
[0032]1.2.3.2 培養(yǎng)條件
[0033]培養(yǎng)溫度24?28°C，光照時間9h/d，光照強(qiáng)度15001x。。
[0034]1.2.3.3 接種
[0035]將誘導(dǎo)出的不定芽叢切分成單芽，接種在增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)，40d增殖系數(shù)為8.19。
[0036]無菌小葉片接入培養(yǎng)基中，20d開始出現(xiàn)愈傷組織，40d開始分化出芽，50d不定芽達(dá)到較高峰，50d不定芽誘導(dǎo)率100%，平均每葉不定芽數(shù)32.33個。
[0037]1.2.4生根培養(yǎng)
[0038]1.2.4.1培養(yǎng)基配方
[0039]MS+IBA0.5mg/L+ 蔗糖 30g/L，pH 值 6.5。
[0040]1.2.4.2 培養(yǎng)條件
[0041]培養(yǎng)溫度24?28 °C，光照時間9h/d，光照強(qiáng)度15001X。。
[0042]1.2.4.3 接種
[0043]切取高約1.5cm的不定芽接入生根培養(yǎng)基中，15d左右開始生根，30d后根系發(fā)達(dá)，生根率100%，平均每株生根7.51條，植株健壯，葉色綠。
【權(quán)利要求】
1.一種黃花馬鈴苣苔的快速繁殖方法，其特征在于包括以下步驟:1)外植體的選擇及滅菌；2)初代培養(yǎng)；3)繼代增殖培養(yǎng)；4)生根培養(yǎng)；5)接種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種黃花馬鈴苣苔的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(1)滅菌過程為:70%酒精浸泡10s，無菌水沖洗，用0.02%取(:12溶液消毒3min，無菌水沖洗，用2% NaC1消毒15min，無菌水沖洗干凈。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種黃花馬鈴苣苔的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(2)中培養(yǎng)基配方為:MS+6-BA 0.5mg/L+NAA0.lmg/L+ 益培隆 6ml/L+ 蔗糖 30g/L，pH 值 6.5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種黃花馬鈴苣苔的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(3)中培養(yǎng)基配方為:不定芽增殖芽:MS+6-BA0.lmg/L+NAA 0.lmg/L+蔗糖30g/L，pH值6.5 ;無菌植株小葉片增殖芽:MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.lmg/L+ 蔗糖 30g/L，pH 值 6.5。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種黃花馬鈴苣苔的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(4)中培養(yǎng)基配方為:MS+IBA 0.5mg/L+蔗糖30g/L，pH值6.5。
6.根據(jù)權(quán)利要求3?5中任一項所述的一種黃花馬鈴苣苔的快速繁殖方法，其特征在于:培養(yǎng)條件為溫度24?28°C，光照時間9h/d，光照強(qiáng)度15001x。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種黃花馬鈴苣苔的快速繁殖方法，其特征在于:所述的外植體選擇幼嫩葉片。
【文檔編號】A01H4/00GK104488718SQ201410811927
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2014年12月23日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月23日
【發(fā)明者】潘梅, 符瑞侃, 云勇, 黃賽, 王景飛, 呂德任, 戚華莎, 任軍方 申請人:海南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園林花卉研究所