韃靼忍冬組培配方和培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種韃靼忍冬組培配方和培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]韃靼忍冬別名桃色忍冬、新疆忍冬，忍冬科忍冬屬落葉灌木，高達(dá)3米。葉卵形或卵狀橢圓形，長2-6厘米?；ǔ蓪σ干偦üｉL1-2厘米，花冠唇形，桃紅色、紅色或白色，外面光滑，里面有毛。漿果紅色，常合生。韃靼忍冬花開繁茂燦爛，白的皎潔高貴，紅的激情似火，桃紅色的嬌艷嫵媚，各色都別具風(fēng)采!夏日，紅果燦若瑪瑙，圓如珍珠，掛滿枝梢更添火熱，因此具有很高的園林價(jià)值。
[0003]目前，韃靼忍冬常用的繁殖方法為種子繁殖、扦插繁殖，受季節(jié)的限制，繁殖系數(shù)低，目前尚未看到韃靼忍冬組培方面的報(bào)道和專利。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于提供一種韃靼忍冬組培配方和培養(yǎng)方法，通過消毒外植體，得到無菌培養(yǎng)體系，繼而利用不同種類和不同濃度的外源激素的配比，對組培苗進(jìn)行繼代增殖、生長和生根進(jìn)行篩選、調(diào)控，最后確定最佳外植體和培養(yǎng)基配方，使韃靼忍冬能不受季節(jié)的限制、快速的增殖，能適應(yīng)工廠化生產(chǎn)。
[0005]為此，本發(fā)明提供了一種韃靼忍冬組培配方，其特征在于，包括:
[0006]初代培養(yǎng)基:MS+6-BA0.5mg/L+KT 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L；
[0007]繼代增殖培養(yǎng)基:MS+6-BA2.0mg/L+KT 1.5mg/L+NAA 0.2mg/L；
[0008]生根培養(yǎng)基:1/2MS+NAA1.5mg/L；
[0009]上述培養(yǎng)基均添加3%質(zhì)量百分比蔗糖和0.65%質(zhì)量百分比瓊脂粉，pH值5.85。
[0010]優(yōu)選的，所述MS培養(yǎng)基為:工作液濃度單位為mg/L，其中包含:
[0011]大量元素:NH4NO31650、KN03 1900^CaCl2.2H20 440^MgSO4.7H20370^KH2PO4170；
[0012]微量元素:KI0.83^H3BO3 6.2^MnSO4.H2O 21.4^ZnSO4.7H20 8.6^Na2MnO4.2H200.25、CuSO4.5H20 0.025、CoC12.6H20 0.025；
[0013]鐵鹽:Na2.EDTA 37.3^FeSO4.7H20 27.8；
[0014]有機(jī)物:煙酸0.5、鹽酸吡哆素0.5、鹽酸硫胺素0.1、肌醇100、甘氨酸2。
[0015]優(yōu)選的，所述培養(yǎng)基需要經(jīng)過高壓滅菌鍋消毒25min，高壓滅菌鍋工作溫度120°C，壓強(qiáng) 115kPa。
[0016]所述6-BA為6-芐基嘌呤，所述KT為激動(dòng)素，所述NAA為奈乙酸。
[0017]本發(fā)明還提供了一種韃靼忍冬培養(yǎng)方法，包括以下幾個(gè)步驟:
[0018](I)選擇外植體，用肥皂水清洗后在接種室超凈工作臺(tái)用75%體積百分比酒精消毒Imin，接著用無菌水沖洗2遍，再用0.1 %質(zhì)量百分比升萊消毒15min，用無菌水沖洗3遍，最后用消毒過的濾紙吸干外面的水分；
[0019](2)將消毒好的外植體接種到初代培養(yǎng)基上，培養(yǎng)得到無菌的幼苗；
[0020](3)將得到無菌的幼苗接種到繼代增殖培養(yǎng)基上，培養(yǎng)得到分化苗；
[0021](4)將得到的分化苗接種到生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)得到生根苗；
[0022](5)煉苗，把得到的生根組培苗在煉苗室中不開蓋煉苗10天，然后移栽到珍珠巖:土壤=1:4的基質(zhì)中，得到成品；
[0023]所述培養(yǎng)基為:
[0024]初代培養(yǎng)基:MS+6-BA0.5mg/L+KT 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L；
[0025]繼代增殖培養(yǎng)基:MS+6-BA2.0mg/L+KT 1.5mg/L+NAA 0.2mg/L；
[0026]生根培養(yǎng)基:1/2MS+NAA1.5mg/L；
[0027]上述培養(yǎng)基均添加3%質(zhì)量百分比蔗糖和0.65%質(zhì)量百分比瓊脂粉，pH值5.85。
[0028]優(yōu)選的，所述MS培養(yǎng)基為:
[0029]工作液濃度單位為mg/L，其中包含:
[0030]大量元素:NH4NO31650、KN03 1900、CaCl2.2H20 440、MgS(k.7H20370、ΚΗ2Ρ〇4170；
[0031]微量元素:KI0.83^H3BO3 6.2^MnSO4.H2O 21.4^ZnSO4.7H20 8.6^Na2MnO4.2H200.25^CuSO4.5H20 0.025、CoC12.6H2O 0.025；
[0032]鐵鹽:Na2.EDTA 37.3^FeSO4.7H20 27.8；
[0033]有機(jī)物:煙酸0.5、鹽酸吡哆素0.5、鹽酸硫胺素0.1、肌醇100、甘氨酸2。
[0034]優(yōu)選的，所述步驟(I)選擇的外植體為當(dāng)年新生帶側(cè)芽莖段。
[0035]優(yōu)選的，所述步驟(2)至(4)選用的培養(yǎng)室條件為:培養(yǎng)溫度25°C，光照強(qiáng)度1200勒克斯，光照時(shí)間12h/d。
[0036]本發(fā)明的韃靼忍冬組培配方和培養(yǎng)方法，通過消毒外植體，得到無菌培養(yǎng)體系，繼而利用不同種類和不同濃度的外源激素的配比，對組培苗進(jìn)行繼代增殖、生長和生根進(jìn)行篩選、調(diào)控，最后確定最佳外植體和培養(yǎng)基配方，使其能適應(yīng)工廠化生產(chǎn)。通過該組培配方和方法能夠大量繁殖韃靼忍冬，滿足園林綠化需求，所生產(chǎn)的苗木形狀穩(wěn)定，生產(chǎn)周期短，能夠滿足規(guī)?；焖偕a(chǎn)。本發(fā)明能不受季節(jié)的限制、快速的增殖，繁殖周期短，能完整的繼承母本的優(yōu)良特性，為組培工廠化生產(chǎn)解決了一個(gè)難題。
【具體實(shí)施方式】
[0037]下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明:
[0038]1、韃靼忍冬培養(yǎng)基配方的配制
[0039]1.1培養(yǎng)基母液的配制和保存
[0040]MS培養(yǎng)基含有近30種營養(yǎng)成分，為了避免每次配制培養(yǎng)基都要對這幾十種成分進(jìn)行稱量，可將培養(yǎng)基中的各種成分，按原量的整數(shù)倍分別稱量，配成濃縮液，這種濃縮液叫做培養(yǎng)基母液。
[0041]母液INH4NO333g/L、KN03 38g/L、MgS04.7H20 7.4g/L、KH2P043.4g/L，母液 ΠCaCl2.2H20 8.8g/L，母液ΙΠΗ3ΒΟ3 620mg/L、MnS04.H202140mg/L、ZnSO4.7H20 860mg/L、KI83mg/L，母液IVNa2MnO4.2H20250mg/L、CuSO4.5H20 25mg/L、CoCl2.6H2O 25mg/L，母液 VNa2.EDTA3.73g/L,FeSO4.7H20 2.78g/L，母液VI肌醇 10g/L、甘氨酸0.2g/L，母液VII煙酸0.5g/L、鹽酸吡哆素(VB6)0.5g/L、鹽酸硫胺素(VBl)0.lg/L，溶液①NAA1000mg/L，溶液②KT1000mg/L，溶液③升汞lg/L，溶液④6-BA1000mg/L，溶液⑤NaOH0.5mol/L，溶液⑥HC10.5mol/Lo
[0042]配制母液1、母液Π、母液m、母液IV、母液V、母液V1、母液νπ、溶液①、溶液②、溶液③、溶液④，溶液⑤，溶液⑥各IL。
[0043]母液I和母液Π為20倍濃縮液，母液m、母液V和母液VI為100倍濃縮液，母液IV和母液W為1000倍濃縮液，保存在冰箱的冷藏室中。
[0044]1.2配制IL韃靼忍冬初代培養(yǎng)基配方需要母液I和母液Π 50ml，母液ΙΠ、母液V和母液VIlOml，母液IV和母液VHlml，溶液①0.2ml，溶液②0.5ml，溶液④0.5ml，蔗糖25g，瓊脂粉6.5g。
[0045]1.3配制IL韃靼忍冬繼代增殖培養(yǎng)基配方需要母液I和母液Π 50ml，母液ΙΠ、母液V和母液VI1ml，母液IV和母液Wlml，溶液①0.2ml，溶液②Iml，溶液④2ml，蔗糖30g，瓊脂粉6.5g。
[0046]1.4配制IL韃靼忍冬生根培養(yǎng)基配方需要母液I和母液Π 25ml，母液ΙΠ、母液V和母液VIlOml，母液IV和母液VHlml，溶液①1.5ml，蔗糖30g，瓊脂粉6.5g。
[0047]1.5用溶液⑤或溶液⑥將pH值調(diào)到5.85。
[0048]1.6把IL韃靼忍冬培養(yǎng)基配方分裝到培養(yǎng)瓶中，每瓶50ml。
[0049]1.7把裝有韃靼忍冬培養(yǎng)基配方的培養(yǎng)瓶放到高壓滅菌鍋中，消毒25min，高壓滅菌鍋工作溫度120 °C，壓強(qiáng)115kPa。
[0050]1.8把滅菌好的韃靼忍冬培養(yǎng)基放置接種室，冷卻凝固。
[0051]2、外植體的處理，選擇韃靼忍冬當(dāng)年生的帶側(cè)芽的莖段作為外植體，以下都稱作外植體，用肥皂水清外植體，晾干備用。
[0052]3、外植體接種到韃靼忍冬初代培養(yǎng)基上，外植體接種步驟都在接種室的超凈工作臺(tái)上操作。
[0053]3.1外植體首先用75%體積百分比酒精消毒lmin，用無菌水清洗2遍。
[0054]3.2外植體再用0.1 %質(zhì)量百分比升汞溶液消毒15min，用無菌水清洗3遍。
[0055]3.3用消毒過的濾紙吸干外植體表面的水分。
[0056]3.4用消毒過的鑷子把外植體接種到初代培養(yǎng)基上。
[0057]3.5每瓶培養(yǎng)基接種4個(gè)外植體。
[0058]4、外植體的培養(yǎng)，把接種外植體的培養(yǎng)基放置到培養(yǎng)室培養(yǎng)I個(gè)月，可以誘導(dǎo)出側(cè)芽，得到韃靼忍冬無菌苗。培養(yǎng)室溫度25°C，光照強(qiáng)度1200勒克斯，每天光照時(shí)間12h。
[0059]5、繼代接種和培養(yǎng)，在接種室超凈工作臺(tái)上取初代培養(yǎng)中生長良好的側(cè)芽，然后接種到韃靼忍冬繼代增殖培養(yǎng)基上，每瓶接種4個(gè)，把接種好的韃靼忍冬繼代增殖培養(yǎng)基放置到培養(yǎng)室培養(yǎng)1.5個(gè)月，增殖得到更多的無菌苗。培養(yǎng)室溫度25°C，光照強(qiáng)度1200勒克斯，每天光照時(shí)間12h。
[0060]6、生根接種和培養(yǎng)，在接種室超凈工作臺(tái)上，把繼代增殖培養(yǎng)基中無菌苗接種到生根培養(yǎng)基上，每瓶接種5株，接種好的韃靼忍冬生根培養(yǎng)基放置到培養(yǎng)室培養(yǎng)1.5個(gè)月。培養(yǎng)室溫度25°C，光照強(qiáng)度1200勒克斯，每天光照時(shí)間12h。
[0061]7、經(jīng)過生根培養(yǎng)后，成為生根苗，經(jīng)過15天開蓋煉苗，然后移栽到珍珠巖:土壤=1:4的基質(zhì)中，得到成品。
[0062]上述對本發(fā)明的實(shí)施方式作了詳細(xì)說明，但是本發(fā)明并不限于上述實(shí)施方式，在本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所具備的知識(shí)范圍內(nèi)，還可以對其作出種種變化。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種韃靼忍冬組培配方，其特征在于，包括: 初代培養(yǎng)基:MS+6-BA 0.5mg/L+KT 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L； 繼代增殖培養(yǎng)基:MS+6-BA 2.0mg/L+KT 1.5mg/L+NAA 0.2mg/L； 生根培養(yǎng)基:1/2MS+NAA 1.5mg/L ； 上述培養(yǎng)基均添加3 %質(zhì)量百分比蔗糖和0.65 %質(zhì)量百分比瓊脂粉，pH值5.85。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的韃靼忍冬組培配方，其特征在于，所述MS培養(yǎng)基為: 工作液濃度單位為mg/L，其中包含: 大量元素:NH4NO3 1650、KN03 1900、CaCl2.2H20 440^MgSO4.7H20 370^KH2PO4 170；微量元素:KI 0.83、Η3Β03 6.2、MnS04.H2O 21.4 ^ ZnSO4.7H20 8.6 ^Na2MnO4.2H200.25^CuSO4.5H20 0.025、CoC12.6H2O 0.025； 鐵鹽:Na2.EDTA 37.3^FeSO4.7H20 27.8； 有機(jī)物:煙酸0.5、鹽酸吡哆素0.5、鹽酸硫胺素0.1、肌醇100、甘氨酸2。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的韃靼忍冬組培配方，其特征在于，所述培養(yǎng)基需要經(jīng)過高壓滅菌鍋消毒25min，高壓滅菌鍋工作溫度120°C，壓強(qiáng)115kPa。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的韃靼忍冬組培配方，其特征在于，所述6-BA為6-芐基嘌呤，所述KT為激動(dòng)素，所述NAA為奈乙酸。5.一種韃靼忍冬培養(yǎng)方法，其特征在于，包括以下幾個(gè)步驟: (1)選擇外植體，用肥皂水清洗后在接種室超凈工作臺(tái)用75%體積百分比酒精消毒Imin，接著用無菌水沖洗2遍，再用0.1 %質(zhì)量百分比升萊消毒15min，用無菌水沖洗3遍，最后用消毒過的濾紙吸干外面的水分； (2)將消毒好的外植體接種到初代培養(yǎng)基上，培養(yǎng)得到無菌的幼苗； (3)將得到無菌的幼苗接種到繼代增殖培養(yǎng)基上，培養(yǎng)得到分化苗； (4)將得到的分化苗接種到生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)得到生根苗； (5)煉苗，把得到的生根組培苗在煉苗室中不開蓋煉苗10天，然后移栽到珍珠巖:土壤=1:4的基質(zhì)中，得到成品； 所述培養(yǎng)基為: 初代培養(yǎng)基:MS+6-BA 0.5mg/L+KT 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L； 繼代增殖培養(yǎng)基:MS+6-BA 2.0mg/L+KT 1.5mg/L+NAA 0.2mg/L； 生根培養(yǎng)基:1/2MS+NAA 1.5mg/L ； 上述培養(yǎng)基均添加3 %質(zhì)量百分比蔗糖和0.65 %質(zhì)量百分比瓊脂粉，pH值5.85。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的韃靼忍冬培養(yǎng)方法，其特征在于，所述MS培養(yǎng)基為: 工作液濃度單位為mg/L，其中包含: 大量元素:NH4NO3 1650、KN03 1900、CaCl2.2H20 440^MgSO4.7H20 370^KH2PO4 170；微量元素:KI 0.83、Η3Β03 6.2、MnS04.H2O 21.4 ^ ZnSO4.7H20 8.6 ^Na2MnO4.2H200.25^CuSO4.5H20 0.025、CoC12.6H2O 0.025； 鐵鹽:Na2.EDTA 37.3^FeSO4.7H20 27.8； 有機(jī)物:煙酸0.5、鹽酸吡哆素0.5、鹽酸硫胺素0.1、肌醇100、甘氨酸2。7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的韃靼忍冬培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟(I)選擇的外植體為當(dāng)年新生帶側(cè)芽的莖段。8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的韃靼忍冬培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟(2)至(4)選用的培養(yǎng)室條件為:培養(yǎng)溫度25°C，光照強(qiáng)度1200勒克斯，光照時(shí)間12h/d。
【專利摘要】本發(fā)明的韃靼忍冬組培配方和培養(yǎng)方法，通過消毒外植體，得到無菌培養(yǎng)體系，繼而利用不同種類和不同濃度的外源激素的配比，對組培苗進(jìn)行繼代增殖、生長和生根進(jìn)行篩選、調(diào)控，最后確定最佳外植體和培養(yǎng)基配方，使其能適應(yīng)工廠化生產(chǎn)。通過該組培配方和方法能夠大量繁殖韃靼忍冬，滿足園林綠化需求，所生產(chǎn)的苗木形狀穩(wěn)定，生產(chǎn)周期短，能夠滿足規(guī)?；焖偕a(chǎn)。本發(fā)明能不受季節(jié)的限制、快速的增殖，繁殖周期短，能完整的繼承母本的優(yōu)良特性，為組培工廠化生產(chǎn)解決了一個(gè)難題。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號(hào)】CN105706937
【申請?zhí)枴緾N201610168489
【發(fā)明人】李根生
【申請人】寧夏皇達(dá)生物科技股份有限公司