1.瓶內(nèi)塑型快速培育難扦插繁殖的擬石蓮屬商品小盆栽方法,其特征在于包括以下步驟:
(1)優(yōu)質(zhì)塑型生根叢苗的誘導(dǎo)和培育
①外植體的選擇與消毒
選擇無病蟲害、無損傷的擬石蓮屬植物離體葉片為外植體,于室溫陰涼干燥處晾過夜,第二天用濃度為1%v/v洗潔精水溶液洗1次后,置于自來水下沖洗0.5~1.0h,瀝干表面水分,置于超凈工作臺(tái),先用75%v/v酒精浸泡10s~15s,再用添加有Tween-20的0.05%w/w氯化汞溶液浸泡5~6min,無菌水洗2~3min,最后用添加有Tween-20的2.5%w/w次氯酸鈉溶液浸泡3~5min,無菌水洗3次~5次,每次洗2~3min,獲得無菌離體葉片,于無菌條件下,切除葉片中上部組織,保留從葉片基部至上、長度為1.5cm~2.5cm、含葉基部腋芽分生組織的葉片組織為無菌誘導(dǎo)外植體,備用;所述添加有Tween-20的0.05%w/w氯化汞溶液為在100~120毫升的0.05%w/w氯化汞溶液添加2~3滴Tween-20,所述添加有Tween-20的2.5%w/w次氯酸鈉溶液為在100~120毫升的2.5%w/w次氯酸鈉溶液中添加2~3滴Tween-20;
②再生芽苗誘導(dǎo)
將無菌誘導(dǎo)外植體斜插于盛有誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組培瓶內(nèi),于23℃~25℃、空氣相對(duì)濕度30%~50%的條件下暗培養(yǎng)10d~15d,后轉(zhuǎn)為光培養(yǎng),光培養(yǎng)條件為:溫度23℃~25℃,空氣相對(duì)濕度30%~50%,光照強(qiáng)度1000~1200lx,光照時(shí)間12~16h/d,培養(yǎng)10d~25d,所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+ZT 1.0~2.0mg/L+NAA 0.1~0.2mg/L+硫酸腺嘌呤30~50mg/L+蔗糖25~30g/L+瓊脂6.0~7.0g/L,pH值為5.5~6.0;
③再生芽苗塑型增殖培育
將通過步驟(1)②誘導(dǎo)出的叢生不定芽從葉基部以2~4個(gè)芽為一個(gè)芽叢切下,且留0.3~0.5cm的葉原基,進(jìn)行第一次塑型,第一次塑型后的每一個(gè)芽叢轉(zhuǎn)接于一個(gè)盛有增殖培養(yǎng)基的組培瓶內(nèi),在培養(yǎng)條件為:溫度23~25℃,空氣相對(duì)濕度30%~50%,光照強(qiáng)度1500~2000lx,光照時(shí)間12~16h/d的條件下培養(yǎng)20~30天;所述第一次塑型為:在每一個(gè)分切好的芽叢基部四周用滅菌接種刀尖等距或非等距縱向輕劃3~5刀微傷口,微傷口大小長為0.1~0.2cm、深為0.02~0.05cm;所述增殖培養(yǎng)基為:MS+ZT 0.2~0.3mg/L+NAA0.1~0.2mg/L+硫酸腺嘌呤30~50mg/L+蔗糖25~30g/L+活性碳300~500mg/L+瓊脂6.0~7.0g/L,pH值為5.5~6.0;
④壯苗生根和第二次塑型
無菌條件下,取步驟(1)③所培養(yǎng)的苗團(tuán),以3~5個(gè)單株苗為一叢切分為一個(gè)苗叢,具體用無菌接種刀插入苗團(tuán)的縫隙豎直向下切分為第二次塑型;后再將切分好的苗叢放入盛有壯苗生根培養(yǎng)基的組培瓶內(nèi),在與步驟(1)③相同的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)25d~30d,所述壯苗生根培養(yǎng)基為:1/2MS+NAA 0.3~0.5mg/L+蔗糖25~30g/L+活性碳300~500mg/L+瓊脂6.0~7.0g/L,pH值為5.5~6.0;
(2)塑型生根叢苗移栽入盆馴化和后期標(biāo)準(zhǔn)化培育商品小盆栽
①塑型生根叢苗移栽
將步驟(1)④培養(yǎng)獲得的生根瓶苗置于過渡溫室內(nèi),在自然溫度和自然光照條件下放置5~7d后,取出植株,洗除培養(yǎng)基,放于陰涼處晾去表面水分,移栽到裝有無土栽培基質(zhì)的花盆,澆透水;所述無土栽培基質(zhì)用草炭土∶珍珠巖∶鹿沼土按2:1:1體積比的比例混合而成;移栽后放入溫室,花盆上方搭建遮光率為70%的遮陽網(wǎng),此后每天早晚各噴霧1次水,保持溫室內(nèi)溫度為18~25℃,溫室內(nèi)空氣相對(duì)濕度為85%以上;
②標(biāo)準(zhǔn)化培育商品小盆栽
步驟(2)①移栽成活后,撤去遮陽網(wǎng),保持溫室內(nèi)溫度為18~28℃,空氣相對(duì)濕度保持為60~65%,每3~4天澆一次透水,每15天澆施一次2000倍液復(fù)合肥,所述復(fù)合肥中N﹕P2O5﹕K2O的質(zhì)量比為17﹕17﹕17;每周噴施一次70%甲基托布津可濕性粉劑1500倍液;發(fā)現(xiàn)蚜蟲時(shí),噴施10%吡蟲啉可濕性粉劑1000倍液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的瓶內(nèi)塑型快速培育難扦插繁殖的擬石蓮屬商品小盆栽方法,步驟(2)①移栽所用的花盆為高15cm、盆底內(nèi)徑8cm、盆口內(nèi)徑10cm。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的瓶內(nèi)塑型快速培育難扦插繁殖的擬石蓮屬商品小盆栽方法,步驟(1)②所述的將無菌誘導(dǎo)外植體斜插于盛有誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組培瓶內(nèi),所述斜插的斜度為30°~45°。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的瓶內(nèi)塑型快速培育難扦插繁殖的擬石蓮屬商品小盆栽方法,還包括如果還需增殖苗,則每20~30d重復(fù)步驟(1)③。