本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種露地菊花瓣組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基及方法。

背景技術(shù)：

露地栽培菊是東北林業(yè)大學(xué)的張敩方教授在引種地被菊和北京小菊的基礎(chǔ)上，經(jīng)過天然雜交、衛(wèi)星搭載后選育的一個新的地栽小菊品種群。露地菊因花多而密，花期較長，植株低矮，容易繁殖而廣泛應(yīng)用于北方城市秋季綠化。自問世以來，就以其獨(dú)特的植株低矮，開花繁密，耐粗放管理，兼具環(huán)境、社會、經(jīng)濟(jì)效益等優(yōu)勢而備受關(guān)注。

長期以來菊花通常采用分株、扦插等無性繁殖方法進(jìn)行擴(kuò)繁。但傳統(tǒng)的繁殖方法周期長，占地面積大，勞動成本高，且繁殖系數(shù)低。隨著市場需求的急劇增加，傳統(tǒng)的繁殖方法已不能滿足人們的需要。植物組織培養(yǎng)技術(shù)具有繁殖速度快、增殖效率高等特點(diǎn)，可以在較短的時間和空間上生產(chǎn)出大量的試管苗。而在外植體的選擇上花瓣不僅病毒量少，而且其組織培養(yǎng)具有取材容易、易消毒、繁殖系數(shù)高的優(yōu)點(diǎn)。因此，研發(fā)以露地菊花瓣為材料的組培快繁試驗(yàn)技術(shù)，對露地菊的工廠化生產(chǎn)具有重要意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明提供了一種露地菊花瓣組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基及方法。該培養(yǎng)基配方可顯著提高露地菊的誘導(dǎo)率、分化率和生根率。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了一種露地菊組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基包括誘導(dǎo)培養(yǎng)基、分化培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基；

本發(fā)明菊花離體育種方法按下列步驟實(shí)現(xiàn)

取露地菊‘粉翎’的花瓣為外植體，經(jīng)流水清洗1h。在無菌的條件下，將花瓣剪成長8mm的小塊，接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。

誘導(dǎo)培養(yǎng)基為0.5～2.0mg/l6-ba，1.0mg/lnaa，30g/l蔗糖和8g/l瓊脂的ms培養(yǎng)基,ph值為5.8。

將經(jīng)過誘導(dǎo)形成的愈傷組織接種到分化培養(yǎng)基中。分化培養(yǎng)基為0～1.5mg/l6-ba，0.2mg/lnaa，30g/l蔗糖和8g/l瓊脂的ms培養(yǎng)基，ph值為5.8。

將經(jīng)過分化培養(yǎng)后的幼苗接種到生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)。生根培養(yǎng)基為0.05～0.20mg/lnaa，30g/l蔗糖和8g/l瓊脂的1/2ms培養(yǎng)基,ph值為5.8。

6-ba是6-芐基腺嘌呤,為人工合成細(xì)胞分裂素，具有抑制植物葉內(nèi)葉綠素、核酸、蛋白質(zhì)分解，保綠防老；氨基酸、生長素、無機(jī)鹽等向處理部位調(diào)運(yùn)等多種效能，廣泛用農(nóng)林和園藝作物從發(fā)芽到收獲各階段。

萘乙酸，簡稱naa，是一種植物生長調(diào)節(jié)劑中的生長素類似物，常用于扦插法繁殖時使用的發(fā)根粉或發(fā)根劑中。它也可用于植物組織培養(yǎng)。其作用是促進(jìn)細(xì)胞分裂與擴(kuò)大，誘導(dǎo)形成不定根增加座果，防止落果，改變雌、雄花比率等?？山?jīng)葉片、樹枝的嫩表皮，種子進(jìn)入到植株內(nèi)，隨營養(yǎng)流輸導(dǎo)到全株。

本發(fā)明將上述2種激素以特定比例添加到培養(yǎng)基中，制得誘導(dǎo)培養(yǎng)基、分化培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基，對露地菊花瓣外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)時，可顯著提高露地菊‘粉翎’的誘導(dǎo)分化率、生根率，效果好于現(xiàn)有報道的培養(yǎng)基種類。

通過對以上技術(shù)方案進(jìn)行實(shí)驗(yàn)找出最佳一種方法，用于權(quán)利要求。

附圖說明

圖1露地菊花瓣接種3d后的生長狀況；

圖2接種10d后形成的愈傷組織；

圖3接種25d后形成的不定芽；

圖4接種35d后不定芽分化的苗；

圖5露地菊分化苗生根培養(yǎng)；

圖6生根苗上盆培養(yǎng)。

具體實(shí)施方式

以下對本發(fā)明結(jié)合具體的實(shí)例作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，并介紹本發(fā)明的相關(guān)研究結(jié)果。

1.以東北林業(yè)大學(xué)園林學(xué)院苗圃實(shí)驗(yàn)基地的露地菊‘粉翎’花瓣為例對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。

以露地菊花瓣作為外植體，將選取的花瓣經(jīng)流水清洗1h后，用濾紙將多余的水分吸干。用2％的次氯酸鈉滅菌5min后，用無菌水沖洗6次，將花瓣剪成長約8mm的小塊，接種在不同配比的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，每種處理接種30個外植體，20d后統(tǒng)計愈傷組織誘導(dǎo)情況。

1)以ms培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，加入生長素naa0.2mg·l^-1，因6-ba濃度的不同設(shè)計了4組試驗(yàn)。

表1不同6-ba濃度對露地菊‘粉翎’愈傷誘導(dǎo)率的影響

2)以ms培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，將上步得到的愈傷組織轉(zhuǎn)接在誘導(dǎo)叢生芽的分化培養(yǎng)基上(每個處理接種30瓶)，因激素濃度和種類的不同設(shè)計了4組實(shí)驗(yàn)。培養(yǎng)2周左右,觀察到愈傷組織表面陸續(xù)長出不定芽(見圖3)。

表2不同6-ba濃度對露地菊‘粉翎’的愈傷組織出芽率的影響

3)以1/2ms培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，因生長素濃度的不同設(shè)計了3種不同的生根培養(yǎng)基。將4cm高的苗切下來，轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基(每個處理接種30瓶)，7d左右觀察發(fā)現(xiàn)大部分試管苗根部開始分化出小根突，再過7d后看到約3～4cm長的根(見圖5)。

表3不同naa濃度對露地菊‘粉翎’的試管苗生根率的影響

培養(yǎng)條件：培養(yǎng)基均以ms為基本培養(yǎng)，培養(yǎng)基含蔗糖30mg·l^-1，瓊脂8mg·l^-1，培養(yǎng)基在高壓滅菌前將ph值調(diào)至5.8；培養(yǎng)溫度為25℃，光照強(qiáng)度為2000lx，光照時間為12h/d。

在試管苗高4cm，且長出根時將瓶口打開，煉苗3d后取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，移栽到土壤：蛭石：珍珠巖＝4：1：1的培養(yǎng)基質(zhì)中。放置背光處，溫度保持在20℃。

2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1)由表1可知，4號培養(yǎng)基，即ms+2.0mg/l6-ba+0.2mg/lnaa，愈傷組織誘導(dǎo)率最高，且愈傷組織結(jié)構(gòu)松散，生長狀況良好。

2)從表2可以看出，2號培養(yǎng)基，即ms+0.5mg/l6-ba+0.2mg/lnaa，分化率最高，是誘導(dǎo)叢生芽的最佳培養(yǎng)基。

3)從表3可以看出，3號培養(yǎng)基，即1/2ms+0.05mg/lnaa，生根狀況最好，生根率達(dá)100％，且根系發(fā)達(dá)、粗壯。

技術(shù)特征：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種露地菊花瓣組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基及方法。該露地菊組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基包括誘導(dǎo)培養(yǎng)基、分化培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基。誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：2.0mg/L?6?BA+1mg/L?NAA+30g/L蔗糖+8g/L瓊脂的MS培養(yǎng)基；分化培養(yǎng)基為0.5mg/L?6?BA+0.2mg/L?NAA+30g/L蔗糖+8g/L瓊脂的MS培養(yǎng)基；生根培養(yǎng)基為0.05mg/L?NAA+30g/L蔗糖+8g/L瓊脂的1/2MS培養(yǎng)基。采用本發(fā)明提供的培養(yǎng)基配方及方法可顯著提高露地菊愈傷組織誘導(dǎo)率、分化率及試管苗生根率。

技術(shù)研發(fā)人員：吳建慧;蘭鳳;牛喆;祁金洋
受保護(hù)的技術(shù)使用者：東北林業(yè)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：2017.07.27
技術(shù)公布日：2017.09.29