本發(fā)明涉及一種藤三七離體再生體系建立的方法，屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，主要應(yīng)用于藤三七種苗繁殖。

背景技術(shù)：

藤三七(boussingaultiagracilismiersvar．baselloidesbail．)，為落葵科(basellaceae)落葵薯屬(boussingaultiah．b．k．)植物，原名心形落葵薯，別稱(chēng)落葵薯、洋落葵、川七、土川七、藤子三七、小年藥、土三七、馬德拉藤、金錢(qián)珠、中枝蓮、田三七等，原產(chǎn)巴西，我國(guó)江蘇、浙江、福建、四川、貴州、云南等地均有栽培。藤三七為多年生纏繞草質(zhì)藤本植物，莖蔓肉質(zhì)，呈圓形至橢圓形，初期為淺紫紅色，纏繞性強(qiáng)，節(jié)間易發(fā)生不定根。

由于藤三七中具有各新黃烷醇和抗hiv活性成分等，所以具有相當(dāng)高的藥用保健價(jià)值，并且富含各種維生素，作為一種新興蔬菜,市場(chǎng)對(duì)其需求量增加。迄今為止，在國(guó)外和國(guó)內(nèi)的某些省份已經(jīng)有了比較完整的栽培管理理論和技術(shù)，其繁殖方式主要是以扦插為主，不能滿(mǎn)足市場(chǎng)的要求，而無(wú)性繁殖會(huì)導(dǎo)致病毒累積，品質(zhì)退化。前人對(duì)藤三七的離體培養(yǎng)已有部分研究，其中包括蔣向輝和肖樹(shù)林分別以藤三七嫩葉和帶芽莖段為外植體，通過(guò)愈傷組織手段建立組培快繁體系，為藤三七在這一領(lǐng)域的研究奠定基礎(chǔ)，但是愈傷組織分化成苗需要一定時(shí)間，而且也容易發(fā)生變異，作為商業(yè)化推廣，有一定限制。而本發(fā)明以帶芽莖段作外植體直接誘導(dǎo)不定芽，避免了愈傷組織這個(gè)過(guò)程，可以縮短周期，減少變異，更具有商業(yè)推廣前景。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種藤三七離體再生體系建立的方法，避免了愈傷組織這個(gè)過(guò)程，可以縮短周期，減少變異，更具有商業(yè)推廣前景。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，采用以下技術(shù)方案：

一種藤三七離體再生體系建立的方法，包括以下步驟：

(1)藤三七外植體的獲得；

(2)初代培養(yǎng)；

(3)繼代增殖培養(yǎng)；

(4)生根培養(yǎng)；

(5)煉苗移栽。

步驟(1)所述的藤三七外植體的獲得方法為：取2~3cm帶葉芽的野生藤三七莖段，用自來(lái)水沖洗30min；首先用75%的酒精消毒30秒；用無(wú)菌水沖洗1~2次；再將莖段放入0.1%的升汞中消毒4-12min；然后將外植體撈出放入無(wú)菌水中浸泡2min，再用無(wú)菌水分別沖洗4-5次；最后將藤三七莖段播種入ms培養(yǎng)基中培養(yǎng)獲得不定芽。放置在白光條件下，光照強(qiáng)度1500lx，光照時(shí)間14h/d，培養(yǎng)溫度為25±2℃，培養(yǎng)15d獲得不定芽。

步驟(2)所述的初代培養(yǎng)為：從長(zhǎng)勢(shì)一致的試管材料中取大小相同的不定芽作為外植體，接種在ms培養(yǎng)基中，放置在白光條件下培養(yǎng)。光照強(qiáng)度1500lx，光照時(shí)間14h/d，培養(yǎng)溫度為25±2℃，培養(yǎng)25d。

步驟(3)繼代增殖培養(yǎng)方法為：以ms為基本培養(yǎng)基，添加6-ba1.6mg/l和naa0.6mg/l；從步驟（2）中接種25d的無(wú)菌苗切取帶葉芽莖段2-3cm接入以上培養(yǎng)基中；置于培養(yǎng)室中培養(yǎng)。放置在白光條件下，光照強(qiáng)度1500lx，光照時(shí)間14h/d，培養(yǎng)溫度為25±2℃，培養(yǎng)3周。

步驟(4)所述的生根培養(yǎng)方法為：從步驟（3）中長(zhǎng)勢(shì)一致的試管材料中取大小相同的不定芽作為外植體，接種ms培養(yǎng)基加iba1.5mg/l進(jìn)行生根培養(yǎng)，放置在白光條件下培養(yǎng)。光照強(qiáng)度1500lx，光照時(shí)間14h/d，培養(yǎng)溫度為25±2℃，培養(yǎng)15d。

步驟(5)所述的煉苗移栽方法為：將經(jīng)過(guò)生根培養(yǎng)后長(zhǎng)勢(shì)較一致的生根幼苗從培養(yǎng)室中取出，放置在室溫下進(jìn)行煉苗處理，一天后打開(kāi)瓶蓋，再放置三天，然后取出洗去根上的培養(yǎng)基，栽種于菜園土栽培基質(zhì)中。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：傳統(tǒng)方法中以藤三七嫩葉和帶芽莖段為外植體，愈傷組織分化成苗需要一定時(shí)間，而且也容易發(fā)生變異，作為商業(yè)化推廣，有一定限制。而本發(fā)明以帶芽莖段作外植體直接誘導(dǎo)不定芽，避免了愈傷組織這個(gè)過(guò)程，且增殖系數(shù)高達(dá)15.31±0.28，還沒(méi)有報(bào)道超過(guò)此系數(shù)，可以縮短育苗周期，減少變異，種苗商品性高，更具有商業(yè)推廣前景。

附圖說(shuō)明

圖1無(wú)菌體系的建立。

圖2初代培養(yǎng)的過(guò)程。

圖3繼代增殖的過(guò)程。

圖4移栽的結(jié)果圖。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

1.藤三七外植體的獲得

取藤三七根部以上10cm左右至離莖頂端10cm左右部位，剪成2~3cm帶葉芽莖段為外植體，用自來(lái)水沖洗30min。首先用75%的酒精消毒30秒；用無(wú)菌水沖洗2次；再將莖段放入0.1%的升汞中消毒8min；然后將外植體撈出放入無(wú)菌水中浸泡2min，再用無(wú)菌水分別沖洗5次。最后將藤三七莖段播種入ms培養(yǎng)基中培養(yǎng)獲得不定芽，放置在白光條件下，光照強(qiáng)度1500lx，光照時(shí)間14h/d，培養(yǎng)溫度為25±2℃，培養(yǎng)15d。

2.初代培養(yǎng)

從長(zhǎng)勢(shì)一致的試管材料中取大小相同的不定芽作為外植體，接種在ms培養(yǎng)基中，然后放置在白光條件下培養(yǎng)，光照強(qiáng)度1500lx，光照時(shí)間14h/d，培養(yǎng)溫度為25±2℃，培養(yǎng)25d。獲得藤三七試管苗初代材料。

3.繼代增殖培養(yǎng)

將步驟2中的藤三七初代培養(yǎng)苗接種在附加6-ba1.6mg/l和naa0.6mg/l的ms培養(yǎng)基上，放置在白光條件下進(jìn)行培養(yǎng)，光照強(qiáng)度1500lx，光照時(shí)間14h/d，培養(yǎng)溫度為25±2℃，培養(yǎng)3周。藤三七不定芽的誘導(dǎo)效果較好，增殖系數(shù)可達(dá)15.31±0.28。

4.生根培養(yǎng)

從步驟3中的藤三七試管苗接種在ms+1.5mg/liba培養(yǎng)基中，放置在白光條件下，光照強(qiáng)度1500lx，光照時(shí)間14h/d，培養(yǎng)溫度為25±2℃，培養(yǎng)15d。生根效果好，試管苗生根率達(dá)到94.44%。

5.馴化移栽

藤三七試管苗放置在室溫下進(jìn)行煉苗處理，一天后打開(kāi)瓶蓋，再放置三天，從培養(yǎng)瓶中取出，洗去根部培養(yǎng)基，移入菜園土栽培基質(zhì)中，保濕遮陰，成活率達(dá)95%以上。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，凡依本發(fā)明申請(qǐng)專(zhuān)利范圍所做的均等變化與修飾，皆應(yīng)屬本發(fā)明的涵蓋范圍。

技術(shù)特征：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了一種藤三七離體再生體系建立的方法，包括：1）無(wú)菌體系建立，距離頂端10cm以下的藤三七莖段用HgCl2消毒8min效果最好；2）初代培養(yǎng)，以MS為基本培養(yǎng)基在白光條件下有利于藤三七莖段伸長(zhǎng)生長(zhǎng)；3）繼代增殖培養(yǎng)，藤三七試管苗在MS+6?BA?1.6mg/L+NAA?0.6mg/L培養(yǎng)基上增殖效果最好，增殖系數(shù)可達(dá)15.31±0.28；4）生根培養(yǎng)：在白光條件下，MS+1.5mg/LIBA培養(yǎng)基對(duì)誘導(dǎo)藤三七試管苗生根效果較好，試管苗生根率達(dá)到94.44%。5）移栽，煉苗4天后，移栽到菜園土栽培基質(zhì)上，成活率可達(dá)95%。

技術(shù)研發(fā)人員：劉生財(cái);賴(lài)鐘雄;邵根水;許國(guó)輝;程春振;林玉玲;陳裕坤;張梓浩
受保護(hù)的技術(shù)使用者：福建農(nóng)林大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：2017.07.29
技術(shù)公布日：2017.09.29