本發(fā)明涉及藍(lán)莓培育，特別涉及一種藍(lán)莓葉片離體再生體系的構(gòu)建方法。

背景技術(shù)：

1、藍(lán)莓的營養(yǎng)和經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高；藍(lán)莓富含維生素、礦物質(zhì)、花青素及其他抗氧化物質(zhì)，具有提高人體免疫力、軟化血管、抗癌強(qiáng)心、明目護(hù)肝功效，被聯(lián)合國糧食及農(nóng)業(yè)組織列為“人類五大健康食品之一”；由于營養(yǎng)價(jià)值高、口感獨(dú)特、酸甜適宜，藍(lán)莓深受消費(fèi)者喜愛，市場需求大，具有較好經(jīng)濟(jì)發(fā)展前景。

2、我國藍(lán)莓產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅猛，育種工作亟待加強(qiáng)。近些年國內(nèi)藍(lán)莓種植面積逐年增加；2020年我國藍(lán)莓總種植面積已達(dá)到6.64萬公頃，總產(chǎn)量約34.72萬噸，鮮果產(chǎn)量23.47萬噸，超過美國成為全球最大的藍(lán)莓生產(chǎn)國；我國藍(lán)莓商業(yè)化栽培始于2000年，現(xiàn)有藍(lán)莓栽培品種主要來自國外，缺乏自主研發(fā)品種；培育具有我國特色優(yōu)質(zhì)藍(lán)莓新品種，是發(fā)展藍(lán)莓產(chǎn)業(yè)和參與國際市場競爭的迫切需要。

3、影響藍(lán)莓組織培養(yǎng)的因素復(fù)雜，主要分為內(nèi)在因素和外在因素；內(nèi)在因素主要是基因型和取材部位等，外在因素主要是培養(yǎng)基類型、植物生長調(diào)節(jié)劑的選用和外界環(huán)境等；基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類繁多，不同組織培養(yǎng)過程適宜的種類和濃度有較大差異，因此不同物種、基因型和用途的組織培養(yǎng)均需探索最佳培養(yǎng)條件。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種藍(lán)莓葉片離體再生體系的構(gòu)建方法，具有愈傷誘導(dǎo)率高、出芽率高、生根率高的技術(shù)效果。

2、本發(fā)明的上述技術(shù)目的是通過以下技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：

3、一種藍(lán)莓葉片離體再生體系的構(gòu)建方法，包括以下步驟：

4、(1)取藍(lán)莓生長健壯且一致的無菌組培苗嫩葉，橫切成兩段接種于生芽培養(yǎng)基中，置于組織培養(yǎng)箱培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度(25±1)℃，黑暗培養(yǎng)10天，之后轉(zhuǎn)移到光照條件下，培養(yǎng)20天陸續(xù)生芽；

5、(2)步驟(1)得到的不定芽繼續(xù)光照條件下培養(yǎng)40天后，將其從葉片愈傷上切下，并將其莖段下端傷口處在300mg/l?iba溶液中浸蘸5s，再接種到生根培養(yǎng)基中，置于組織培養(yǎng)箱培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度(25±1)℃，光照條件下培養(yǎng)60天陸續(xù)生根；

6、(3)將步驟(2)得到的再生苗，移栽到人工氣候箱培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度(25±1)℃，光照條件下培養(yǎng)兩個(gè)月，然后篩選生長狀況良好的藍(lán)莓苗移栽至室溫條件下培養(yǎng)一周煉苗，之后移栽至室外栽培。

7、作為本發(fā)明的進(jìn)一步設(shè)置，在步驟(1)中，所述生芽培養(yǎng)基為wpm+2.0mg/l?zt+0.05mg/l?iba+30g/l蔗糖+7g/l瓊脂粉，ph為5.2-5.4。

8、作為本發(fā)明的進(jìn)一步設(shè)置，在步驟(2)中，所述生根培養(yǎng)基為1/2wpm+1.5mg/l?iba+0.01mg/l?naa+0.5g/l活性炭+25g/l蔗糖+7g/l瓊脂粉。

9、作為本發(fā)明的進(jìn)一步設(shè)置，在步驟(1)、步驟(2)和步驟(3)中，所述光照條件為光照強(qiáng)度12000lx，光照時(shí)間16h/d。

10、作為本發(fā)明的進(jìn)一步設(shè)置，在步驟(1)中，所述藍(lán)莓的品種為奧尼爾。

11、本發(fā)明的有益效果是：

12、1.本發(fā)明采用藍(lán)莓葉片接種于生芽培養(yǎng)基中，先黑暗培養(yǎng)10天誘導(dǎo)愈傷組織，然后再光照20天誘導(dǎo)再生不定芽，相比于直接誘導(dǎo)再生不定芽，通過暗培誘導(dǎo)愈傷組織再誘導(dǎo)再生不定芽能夠明顯提高生芽率，通過對(duì)葉片愈傷誘導(dǎo)率和生芽率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，愈傷誘導(dǎo)率為95.38％，生芽率為86.67％；同時(shí)通過本發(fā)明方法得到的不定芽極少葉片褐化，淡綠色愈傷，量多且狀態(tài)良好，葉片卷曲拱起，愈傷及葉片表面有大量叢芽，長勢快，芽呈現(xiàn)翠綠色。

13、2.本發(fā)明藍(lán)莓再生不定芽的生根率高，培養(yǎng)第60d生根率達(dá)到61.54％。

14、3.本發(fā)明將不定芽的莖段下端傷口處浸蘸在高濃度的iba溶液中，能夠明顯提高不定芽的生根率。

15、4.本發(fā)明所采用的藍(lán)莓品種為奧尼爾；不同品種藍(lán)莓的基因型存在差異，藍(lán)莓不同品種葉片離體再生差異大，基因型是影響藍(lán)莓組織培養(yǎng)的主要因素之一，本發(fā)明通過大量的探索試驗(yàn)選擇的藍(lán)莓品種為奧尼爾，相比于現(xiàn)有的其他品種，具有更高的愈傷誘導(dǎo)率、出芽率以及生根率。

技術(shù)特征：

1.一種藍(lán)莓葉片離體再生體系的構(gòu)建方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.據(jù)權(quán)利要求1所述的一種藍(lán)莓葉片離體再生體系的構(gòu)建方法，其特征在于：在步驟(1)中，所述生芽培養(yǎng)基為wpm+2.0mg/l?zt+0.05mg/l?iba+30g/l蔗糖+7g/l瓊脂粉，ph為5.2-5.4。

3.據(jù)權(quán)利要求1所述的一種藍(lán)莓葉片離體再生體系的構(gòu)建方法，其特征在于：在步驟(2)中，所述生根培養(yǎng)基為1/2wpm+1.5mg/liba+0.01mg/l?naa+0.5g/l活性炭+25g/l蔗糖+7g/l瓊脂粉。

4.據(jù)權(quán)利要求1所述的一種藍(lán)莓葉片離體再生體系的構(gòu)建方法，其特征在于：在步驟(1)、步驟(2)和步驟(3)中，所述光照條件為光照強(qiáng)度12000lx，光照時(shí)間16h/d。

5.據(jù)權(quán)利要求1所述的一種藍(lán)莓葉片離體再生體系的構(gòu)建方法，其特征在于：在步驟(1)中，所述藍(lán)莓的品種為奧尼爾。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于藍(lán)莓培育技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種藍(lán)莓葉片離體再生體系的構(gòu)建方法，包括如下步驟：(1)取藍(lán)莓生長健壯且一致的無菌組培苗嫩葉，橫切成兩段接種于生芽培養(yǎng)基中，置于組織培養(yǎng)箱培養(yǎng)，黑暗培養(yǎng)10天，之后轉(zhuǎn)移到光照條件下，培養(yǎng)20天陸續(xù)生芽；(2)將不定芽繼續(xù)培養(yǎng)40天后，將其從葉片愈傷上切下，并將其莖段下端傷口處在300mg/L?IBA溶液中浸蘸5s，再接種到生根培養(yǎng)基中，置于組織培養(yǎng)箱培養(yǎng)，光照條件下培養(yǎng)60天陸續(xù)生根；本發(fā)提供一種藍(lán)莓葉片離體再生體系的構(gòu)建方法，具有高愈傷誘導(dǎo)率高、出芽率高、生根率高的效果。

技術(shù)研發(fā)人員：夏強(qiáng)明,楊夫臣,秦曉明,解凱東,張延
受保護(hù)的技術(shù)使用者：湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹茶葉研究所
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/11/11