本發(fā)明屬于誘變育種，具體涉及一種蘆竹休眠芽輻射誘變育種方法。

背景技術：

1、蘆竹又稱“荻蘆竹”，屬禾本科蘆竹屬，是一種多年生高大叢生草本植物。目前蘆竹主要作用體現(xiàn)在經(jīng)濟、能源、環(huán)保三方面。在經(jīng)濟方面，蘆竹莖稈綜合纖維素含量高達57.71％，可作為纖維素和木質素來源，同時，蘆竹葉可以制成優(yōu)質青飼料。在能源方面，蘆竹是最有前途的生物能源作物之一，它的生物量高，灌溉和氮投入需求低，同時蘆竹根系龐大，生長迅速，能起到固土護堤和水土保持的作用。在環(huán)保方面，蘆竹可用于修復被污染的土壤和濕地，不僅可達到修復效果，還可以在修復的同時帶來一定的經(jīng)濟價值。

2、蘆竹對非生物脅迫條件(包括除草劑、鹽堿和重金屬)的耐受性高。在重金屬污染的環(huán)境中，蘆竹表現(xiàn)出良好的適應能力，同時在植物自主修復過程中也表現(xiàn)出顯著的優(yōu)勢。研究發(fā)現(xiàn)，在鎘脅迫下，蘆竹的許多形態(tài)生理特性沒有受到很大影響，對鎘脅迫具有極強的耐受性，可用于鎘污染土壤的修復。然而蘆竹不能靠種子繁育，只能通過無性生殖進行繁育。利用60co-γ射線對蘆竹休眠芽進行輻射處理，能夠誘發(fā)基因突變，產(chǎn)生多種類型的突變體，促進蘆竹種質資源創(chuàng)新和育種新品種。

技術實現(xiàn)思路

1、為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種蘆竹休眠芽輻射誘變育種方法，操作簡便，方法成熟、穩(wěn)定。

2、為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術方案為：

3、一種蘆竹休眠芽輻射誘變育種方法，其特征在于，包括以下步驟：

4、s1、選取健壯、木質化程度高而且?guī)в行菝哐康奶J竹莖稈，逐節(jié)鋸成帶有一個休眠芽的莖稈段，莖稈段長9cm，其上端距離休眠芽6cm，下端距休眠芽3cm；

5、s2、取一部分步驟s1所得的帶有休眠芽的莖稈段進行60co-γ射線輻射處理，輻射強度為2gy/min，輻射的劑量為80gy～120gy，輻射時間為40min～60min，優(yōu)選的，輻射的劑量可以為80gy、100gy、120gy，輻射時間分別為40min、50min、60min；剩余部分帶有休眠芽的莖稈段不進行60co-γ射線輻射處理，作為對照組；

6、s3、將完成60co-γ射線輻射處理的帶有休眠芽的莖稈段和對照組的帶有休眠芽的莖稈段均置于光照培養(yǎng)室中生根處理24h；

7、s4、將生根處理后的幼苗均于光照培養(yǎng)室中進行水培21天，得到根長大于3cm且芽長大于10cm的幼苗；

8、s5、將步驟s4得到的水培幼苗在含0.5mmol/l?cd2+的1/2hogland中進行培養(yǎng)，在整個生長過程中觀察并選取與對照組葉片顏色和株高存在明顯差異的突變表型，作為輻射初突變體；

9、s6、將步驟s5得到的輻射初突變體單株進行組培擴繁得到叢生芽，將叢生芽轉移到含有0.5mmol/l?cd2+的繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)一周，生長發(fā)育正常的即為目標突變體。

10、進一步地，所述的步驟s3中，用100mg/l?abt?1號生根粉溶液浸沒莖稈休眠芽進行生根處理。

11、進一步地，所述的步驟s4中，將幼苗在加入1/2hogland營養(yǎng)液的水培箱中進行水培。

12、進一步地，所述的步驟s4中，在溫度25℃，每日光照時間為16h，光照強度為18000～20000lux，濕度為60％的條件下進行水培。

13、進一步地，所述的步驟s6中，繼代培養(yǎng)基為：ms培養(yǎng)基，0.7％濃度的瓊脂粉和3％濃度的蔗糖，6-ba，iba。

14、本發(fā)明利用60co-γ輻射蘆竹休眠芽，提高了蘆竹的突變率，對輻射誘變的突變植株進行組織培養(yǎng)，可以在較短時間內(nèi)獲得遺傳性狀穩(wěn)定的突變體，從而有效地縮短了蘆竹的育種周期，克服了蘆竹自然突變育種周期長、育種效率低、變異少的缺陷，對蘆竹新品種的選育具有重要意義。

技術特征：

1.一種蘆竹休眠芽輻射誘變育種方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.如權利要求1所述的輻射誘變育種方法，其特征在于，所述的步驟s3中，用100mg/labt?1號生根粉溶液浸沒莖稈休眠芽進行生根處理24h。

3.如權利要求1所述的輻射誘變育種方法，其特征在于，所述的步驟s4中，將幼苗在加入1/2hogland營養(yǎng)液的水培箱中進行水培。

4.如權利要求1所述的輻射誘變育種方法，其特征在于，所述的步驟s4中，在溫度25℃，每日光照時間為16h，光照強度為18000～20000lux，濕度為60％的條件下進行水培。

5.如權利要求1所述的輻射誘變育種方法，其特征在于，所述的步驟s6中，繼代培養(yǎng)基為：ms培養(yǎng)基，0.7％濃度的瓊脂粉和3％濃度的蔗糖，6-ba，iba。

技術總結
本發(fā)明公開了一種蘆竹休眠芽輻射誘變育種方法，包括以下步驟：選取健壯、木質化程度高且?guī)в行菝哐康奶J竹莖稈，逐節(jié)鋸成莖稈段，取一部分進行<supgt;60</supgt;Co?γ射線輻射處理，剩余部分不進行輻射處理，作為對照組；對完成輻射處理的帶有休眠芽的莖稈段和對照組的帶有休眠芽的莖稈段，均置于光照培養(yǎng)室中生根培養(yǎng)后，所得的幼苗均于光照培養(yǎng)室中進行水培，然后將得到水培幼苗進行耐鎘篩選，在整個生長過程中觀察并選取存活并性狀與對照組不同的移栽苗，作為輻射初突變體；將得到的輻射初突變體單株進行無性擴繁，并對其進行二次耐鎘篩選，得到耐鎘突變體。本發(fā)明可以對蘆竹誘變材料進行早期篩選和快速得到穩(wěn)定遺傳的突變體，操作方便，對蘆竹新品種的選育具有重要意義。

技術研發(fā)人員：位芳,曹剛強,謝正清,武天怡,李子薇,耿俊輝,刑沄龍,梁詠,閆歌,郭佳林,田保明
受保護的技術使用者：鄭州大學
技術研發(fā)日：
技術公布日：2024/12/19