本發(fā)明涉及生物學(xué)，具體涉及一種文冠果組培快繁方法。

背景技術(shù)：

1、文冠果，無患子科車桑子亞科文冠果屬植物，落葉小喬木。文冠果原產(chǎn)于中國北部干旱寒冷地區(qū)，文冠果適應(yīng)性強(qiáng)，抗寒、抗旱和耐鹽堿能力強(qiáng)，花期長、花色多變，是優(yōu)良的園林綠化和荒漠化治理理想樹種，具有很高的園林觀賞價值和生物能源開發(fā)價值。文冠果也是我國特有的珍稀木本油料樹種，其種子富含高含量的不飽和脂肪酸。在食用、藥用和觀賞等方面展現(xiàn)出高度的綜合經(jīng)濟(jì)價值。

2、文冠果種源嚴(yán)重不足，坐果率極低，移栽難以成活，移栽野生文冠果成活的概率幾乎為零。因野生文冠果存量較少，自然條件下繁殖率低，人工種植文冠果前期成本比較高，耗費(fèi)時間較長，種植技術(shù)不成熟，種植量也比較有限。文冠果的種源不足，存在“繁花少實”及株間結(jié)實差異顯著的現(xiàn)象，扦插會受到季節(jié)和溫度的影響，利用組織培養(yǎng)技術(shù)可以從根本上解決這一問題，實現(xiàn)文冠果優(yōu)良植株快速繁殖。

3、植物組培快繁技術(shù)是依托細(xì)胞全能性，通過無菌操作和適宜的培養(yǎng)條件，在短時間內(nèi)誘導(dǎo)植物原生質(zhì)體、細(xì)胞、組織及器官等啟動、增殖和生根，獲得遺傳性質(zhì)穩(wěn)定均一的完整植株的技術(shù)。早在20世紀(jì)80年代，張桂琴和王永明等就以莖段和嫩莖為外植體，開啟了文冠果組織培養(yǎng)技術(shù)的研究。目前，基于文冠果莖段為外植體的組培技術(shù)研究已經(jīng)取得了一定成果。研究表明，以莖段為外植體進(jìn)行文冠果組織培養(yǎng)具備較高的可行性，然而，在不定芽繼代過程中易出現(xiàn)玻璃化及褐化現(xiàn)象，還存在生根困難、試管苗移栽成活率低等問題，仍不能滿足生產(chǎn)需求，需要進(jìn)一步研究解決。

4、為此，本發(fā)明旨在提供一種文冠果組培快繁方法，以解決上述問題。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是為了解決上述問題，提供一種文冠果組培快繁方法，以莖段和嫩莖為外植體，在短時間內(nèi)誘導(dǎo)文冠果外植體增殖和生根，提高了愈傷組織的誘導(dǎo)率，減少褐化，為后續(xù)文冠果快速繁殖體系的構(gòu)建打下堅實的基礎(chǔ)。

2、為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

3、本發(fā)明提供了一種文冠果組培快繁方法，所述方法包含以下步驟：

4、s1、外植體選擇：選擇文冠果的莖段作為外植體；

5、s2、消毒處理：將采取的外植體放入乙醇中消毒；消毒后用含吐溫的無菌水清洗；再用升汞振蕩消毒；再用含吐溫的無菌水清洗；最后對消毒后的外植體進(jìn)行切除并接種于培養(yǎng)基中；

6、s3、培養(yǎng)基和激素選擇：將消毒后的外植體置于含有6-ba和iaa激素的分化培養(yǎng)基m1中，m1：ms+6-ba0.3mg/l+iaa0.8mg/l+蔗糖3％+瓊脂0.7％；

7、s4、防褐化處理：在m1中培養(yǎng)15d后移入分化培養(yǎng)基m2培養(yǎng)15d，m2：ms+6-ba0.3mg/l+iaa0.8mg/l+活性炭0.5g/l+蔗糖3％+瓊脂0.7％；m2培養(yǎng)基中添加了活性炭，可以有效減輕愈傷組織褐化程度，與只在m1上培養(yǎng)的愈傷組織相比褐化程度由中度變成輕度；

8、s5、繼代培養(yǎng)：m1培養(yǎng)15d后，進(jìn)行愈傷誘導(dǎo)繼代，將m1中的外植體移入m2培養(yǎng)基，在25℃溫度，1400lx光照強(qiáng)度下進(jìn)行培養(yǎng)，每7d換一次m2培養(yǎng)基；繼代培養(yǎng)基就是愈傷(褐化)誘導(dǎo)培養(yǎng)基m2、分化培養(yǎng)基m3、生根培養(yǎng)基m5，在不同培養(yǎng)時期將長勢最優(yōu)的外植體用合適的培養(yǎng)基繼代，給足條件培養(yǎng)。

9、s6、生根培養(yǎng)：通過在生根培養(yǎng)基m5添加赤霉素來促進(jìn)生根，添加了赤霉素ga的培養(yǎng)基為生根培養(yǎng)基m6，添加劑量為0.2mg/l；添加赤霉素的生根培養(yǎng)基m6比未添加的培養(yǎng)基m5能有效緩解或避免文冠果外植體當(dāng)中的內(nèi)生菌產(chǎn)生，使再生植株更加健康茁壯。

10、選擇莖段作為外植體的消毒處理的步驟如下：

11、s1、采取將外植體放入70％的乙醇中振蕩消毒30s；

12、s2、用含吐溫的無菌水清洗3～5遍；

13、s3、再用01％升汞振蕩消毒6～10min(設(shè)置三個梯度分別為6min；8min；10min)；

14、s4、用含吐溫的無菌水清洗5～6遍；

15、s5、消毒后將莖段切除兩端部分，保留2cm左右?guī)б秆壳o段，并分別接種于事先準(zhǔn)備好的相同成分的分化培養(yǎng)基中。

16、選擇葉片作為外植體的消毒處理的步驟如下：

17、1.將外植體放入70％的乙醇中振蕩消毒30s；

18、2.用含吐溫的無菌水清洗3～5遍；

19、3.再用0.1％升汞振蕩消毒4～8min(設(shè)置三個梯度分別為4min；6min；8min)；

20、4.用含吐溫的無菌水清洗5～6遍消毒；

21、5.將葉片垂直與葉脈方向用解刨刀劃開，并分別接種于事先準(zhǔn)備好的相同成分的分化培養(yǎng)基中。

22、所述培養(yǎng)基包含分化培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基；

23、所述分化培養(yǎng)基由ms、6-ba0.3mg/l、iaa0.8mg/l組成；

24、所述生根培養(yǎng)基由1/2ms、iba0.5mg/l、naa0.5mg/l、ga0.2mg/l、蔗糖3％、瓊脂0.7％組成。

25、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本方案的有益效果：

26、文冠果傳統(tǒng)育種方式效率低，種源不足，移栽很難成活，并且難以保存母本優(yōu)良性狀，本發(fā)明通過以莖段和嫩莖為外植體，在短時間內(nèi)誘導(dǎo)文冠果外植體增殖和生根，提高了愈傷組織的誘導(dǎo)率，減少褐化，為后續(xù)文冠果快速繁殖體系的構(gòu)建打下堅實的基礎(chǔ)。

技術(shù)特征：

1.一種文冠果組培快繁方法，其特征是：所述方法包含以下步驟：

2.如權(quán)利要求1所述的一種文冠果組培快繁方法，其特征是：上述消毒處理的具體步驟如下：

3.如權(quán)利要求1所述的一種文冠果組培快繁方法，其特征是：所述生根培養(yǎng)基由1/2ms、iba0.5mg/l、naa0.5mg/l、ga0.2mg/l、蔗糖3％、瓊脂0.7％組成。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種文冠果組培快繁方法，涉及生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，其技術(shù)要點為：文冠果傳統(tǒng)育種方式效率低，種源不足，移栽很難成活，并且難以保存母本優(yōu)良性狀，通過以莖段和嫩莖為外植體，在短時間內(nèi)誘導(dǎo)文冠果外植體增殖和生根，提高了愈傷組織的誘導(dǎo)率，減少褐化，為后續(xù)文冠果快速繁殖體系的構(gòu)建打下堅實的基礎(chǔ)。

技術(shù)研發(fā)人員：李英菊,張苗苗,杜曉映,劉春麗,尹紅菊,王立芳,馬海霞,楊龍,彭雪冉
受保護(hù)的技術(shù)使用者：蘭州大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19