本發(fā)明屬于魚類遺傳選育，具體涉及一種選育牙鲆克隆改良系的方法。

背景技術(shù)：

1、現(xiàn)有的牙鲆雙單倍體(dh)和克隆系表現(xiàn)出生長慢、繁殖力弱和抗逆性差等問題。這個(gè)問題制約了魚類雙單倍體育種的規(guī)模化應(yīng)用。因此，選育生長快、繁殖力高的克隆改良系，對于解決魚類雙單倍體育種實(shí)用性應(yīng)用的問題非常重要。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于針對上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種選育牙鲆克隆改良系的方法，該方法選育出生長快、繁殖力高的克隆改良系，能解決魚類雙單倍體育種實(shí)用性應(yīng)用的問題。

2、為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種選育牙鲆克隆改良系的方法，該方法為：

3、s1、高純合度的牙鲆雌核發(fā)育二倍體制備

4、從核心種質(zhì)群體中選擇性狀優(yōu)良的牙鲆作為親本，用冷休克法誘導(dǎo)牙鲆減數(shù)分裂雌核發(fā)育，得到牙鲆雌核發(fā)育二倍體，經(jīng)微衛(wèi)星分子標(biāo)記純合性鑒定后，選留純合度大于0.8的個(gè)體1000尾牙鲆雌核發(fā)育二倍體作為后備親魚；

5、s2、牙鲆雙單倍體dh制備

6、在s1中選留后的牙鲆雌核發(fā)育二倍體中選擇性成熟期體重>3.0kg、性腺發(fā)育良好、體表無病無傷的雌性個(gè)體10尾，誘導(dǎo)有絲分裂雌核發(fā)育，用靜水壓抑制第一次卵裂，實(shí)現(xiàn)染色體加倍，獲得牙鲆有絲分裂雌核發(fā)育二倍體，即雙單倍體dh，經(jīng)過高重組率微衛(wèi)星標(biāo)記鑒定，選留純合度為1.0的個(gè)體1000尾牙鲆雙單倍體dh作為后備親魚；

7、s3、雙克隆雜交系制備

8、當(dāng)s2中選留后的雙單倍體dh培育成熟后，選擇性成熟期的雌性>1.5kg，雄性>1.0kg，性腺發(fā)育良好、體表無病無傷的雌雄各10尾雙單倍體dh個(gè)體作為親本，進(jìn)行雜交，獲得雙克隆雜交系；培育過程中，對所述雙克隆雜交系進(jìn)行生長性能評估，選留12月齡時(shí)體重>500g的個(gè)體500尾作為后備親魚；

9、s4、重組雙單倍體rdh制備

10、當(dāng)s3中選留后的雙克隆雜交系培育性成熟后，在繁殖季節(jié)選擇個(gè)體性成熟期體重>3.0kg，性腺發(fā)育良好，體表無病無傷的個(gè)體10尾作為親本，再次誘導(dǎo)有絲分裂雌核發(fā)育，用靜水壓抑制第一次卵裂，實(shí)現(xiàn)染色體加倍，得到純合的牙鲆重組雙單倍體群體，即為牙鲆rdh群體；

11、s5、牙鲆重組雙單倍體rdh的培育

12、將s4中得到的牙鲆rdh群體按照牙鲆苗種標(biāo)準(zhǔn)化培育規(guī)程進(jìn)行養(yǎng)殖，6月齡后進(jìn)行個(gè)體的pit標(biāo)記，標(biāo)記后在培育過程中每月進(jìn)行表型測定，進(jìn)行生長性能評估，12月齡時(shí)選留體重>500g，且純度為1.0的個(gè)體500尾牙鲆重組雙單倍體rdh；

13、s6、克隆改良系的制備和培育

14、當(dāng)s5中選留的牙鲆重組雙單倍體rdh培育至性成熟后，在繁殖季節(jié)選擇性成熟期體重>3.0kg，性腺發(fā)育良好，體表無病無傷的雌性個(gè)體10尾作為親本，誘導(dǎo)減數(shù)分裂雌核發(fā)育，得到牙鲆克隆系；

15、對所述牙鲆克隆系按照牙鲆苗種標(biāo)準(zhǔn)化培育規(guī)范進(jìn)行養(yǎng)殖，養(yǎng)殖過程中，對不同克隆系進(jìn)行生長性能評估，選留12月齡平均體重超過500g的家系作為候選克隆系；在性成熟期，將體重>3.0kg，且性腺發(fā)育良好，可育比例超過80％的家系作為克隆改良系。

16、優(yōu)選地，s1中所述牙鲆的品種為渤海本地經(jīng)濟(jì)魚類牙鲆(paralichthysolivaceus)。

17、優(yōu)選地，s1中所述冷休克法為：將牙鲆卵子用滅活的真鯛精子體外受精后3min，在溫度為0±0.5℃的海水中進(jìn)行冷休克處理45min后，轉(zhuǎn)移到溫度為15℃的海水中孵化。

18、優(yōu)選地，s2、s4中所述靜水壓的方法為：牙鲆卵子用滅活的真鯛精子體外受精后，在17℃的海水中孵化60min后，用65mpa的靜水壓處理6min。

19、本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)：

20、本發(fā)明選育的生長快、繁殖力高的牙鲆克隆改良系，能解決魚類雙單倍體育種實(shí)用性應(yīng)用的問題。

21、下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。

技術(shù)特征：

1.一種選育牙鲆克隆改良系的方法，其特征在于，該方法為：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種選育牙鲆克隆改良系的方法，其特征在于，s1中所述牙鲆的品種為渤海本地經(jīng)濟(jì)魚類牙鲆（paralichthys?olivaceus）。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種選育牙鲆克隆改良系的方法，其特征在于，s1中所述冷休克法為：將牙鲆卵子用滅活的真鯛精子體外受精后3min，在溫度為0±0.5℃的海水中進(jìn)行冷休克處理45min后，轉(zhuǎn)移到溫度為15℃的海水中孵化。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種選育牙鲆克隆改良系的方法，其特征在于，s2、s4中所述靜水壓的方法為：牙鲆卵子用滅活的真鯛精子體外受精后，在17℃的海水中孵化60min后，用65mpa的靜水壓處理6min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種選育牙鲆克隆改良系的方法，其特征在于，s1中所述微衛(wèi)星分子標(biāo)記純合性鑒定中微衛(wèi)星位點(diǎn)為:?poli1076tuf、poli1077tuf、poli1831tuf、poli148tuf、poli9tuf、poli107tuf、poli159tuf、poli1825tuf、poli1936tuf、po15、poli907tuf、poli212tuf、poli966tuf、poli1819tuf、po13、po25a、poli1915tuf、poli1010tuf、poli1490tuf、poli1838tuf、poli1925tuf、poli1498tuf、poli-rc27-tuf和poli1872tuf；

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種選育牙鲆克隆改良系的方法，其特征在于，s2中所述高重組率微衛(wèi)星標(biāo)記鑒定中微衛(wèi)星位點(diǎn)為:poli9tuf、poli107tuf、poli139tuf；

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了一種選育牙鲆克隆改良系的方法，該方法包括：高純合度的牙鲆雌核發(fā)育二倍體制備、牙鲆雙單倍體DH制備、雙克隆雜交系制備、重組雙單倍體rDH制備、牙鲆重組雙單倍體rDH的培育和克隆改良系的制備和培育。本發(fā)明選育生長快的、繁殖力高的牙鲆克隆改良系，能解決魚類雙單倍體育種實(shí)用性應(yīng)用的問題。

技術(shù)研發(fā)人員：王桂興,張曉彥,侯吉倫,王玉芬,任玉芹,何忠偉,劉玉峰,曹巍,任建功,張祎桐,傘利擇
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中國水產(chǎn)科學(xué)研究院北戴河中心實(shí)驗(yàn)站
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/5