本發(fā)明涉及植物組培，具體來說是一種龜背竹組織快繁方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、龜背竹?(學(xué)名：monstera?deliciosa)為天南星科龜背竹屬多年生常綠藤本植物。莖粗壯；幼葉心形無孔，長大后成廣卵形、羽狀深裂；葉脈間有橢圓形的穿孔，葉具長柄，深綠色。佛焰花序，佛焰苞舟形。龜背竹常種在廊架或建筑物旁，蔓生于棚架或貼生于墻壁，是極好的垂直綠化材料，優(yōu)質(zhì)的龜背竹品種常做盆栽以及切葉，由于其數(shù)量稀少，使得其價(jià)格極其高昂。

2、龜背竹通常以扦插繁殖和分蘗繁殖來進(jìn)行繁育種苗，但扦插及分蘗率極低，而隨著龜背竹應(yīng)用場景的不斷擴(kuò)大，扦插繁殖難于在短時(shí)間內(nèi)滿足規(guī)模化生產(chǎn)的需求，使得龜背竹價(jià)格一漲再漲。

3、公開號為：cn108184670a公開了一種龜背竹組織培養(yǎng)的方法，該方法培養(yǎng)方法取材方便，成本低、操作簡單，擴(kuò)繁速度快，繁殖系數(shù)高，具有良好的經(jīng)濟(jì)效益和生態(tài)效益，適用于規(guī)?；a(chǎn)；但卻存在消毒污染率高、初代叢生芽誘導(dǎo)率低、增殖系數(shù)低和生根率低等問題。公開號為：cn102845310a公開了一種龜背竹植物組織培養(yǎng)基配制方法，該方法能快速進(jìn)行龜背竹繁殖，但是其在培養(yǎng)過程中存在增殖系數(shù)低和生根率低等問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是針對背景技術(shù)中存在的問題，提供一種龜背竹組織快繁方法及應(yīng)用。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：龜背竹組織快繁方法，步驟包括：

3、（1）外植體選擇與清潔：選擇龜背竹近葉片5～8cm處葉柄，用自來水沖淋1～2h，后用軟毛牙刷蘸取飽和肥皂液溶液，刷洗外植體表層5～10次，最后用自來水沖洗至無明顯肥皂液殘留；

4、（2）外植體消毒：清洗完成的外植體切成2～3cm長小段，依次用酒精、漂白粉溶液和升汞消毒；

5、（3）初代叢生芽誘導(dǎo)：消毒好的外植體切去兩端傷口接種于初代叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，置于溫度25±2℃下暗培養(yǎng)10～15天，后置于溫度25±2℃，每日照光8h，光強(qiáng)2000～3000lx光暗交替培養(yǎng)50～60天；

6、所述初代叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為：改良ms+2,4-d?0.1～0.2mg/l+cppu?0.1～0.15mg/l+tdz?1.0～1.5mg/l+活性炭0.4～0.6g/l；

7、（4）繼代叢生芽增殖：誘導(dǎo)出的叢生芽切成單芽接種于繼代叢生芽增殖培養(yǎng)基中，置于溫度25±2℃，每日照光10h，光強(qiáng)2000～3000lx光暗交替培養(yǎng)50～60天；

8、所述繼代叢生芽增殖培養(yǎng)基的配方為：改良ms+2,4-d?0.05～0.08mg/l+naa?0.05～0.08mg/l+tdz?2.5～3.0mg/l+6-ba?3.0～4.0mg/l；

9、（5）壯苗培養(yǎng)：增殖的叢生芽切成單芽接種于壯苗培養(yǎng)基中，置于溫度25±2℃，每日照光10h，光強(qiáng)3000～4000lx的光暗交替下培養(yǎng)40～50天；

10、所述壯苗培養(yǎng)基的配方為：改良ms+椰汁?40～60ml/l+水解酪蛋白70～80mg/l；

11、（6）生根培養(yǎng)：壯苗后接種于生根培養(yǎng)基中，置于溫度25±2℃，每日照光10h，光強(qiáng)3000～4000lx光暗交替培養(yǎng)50～60天；

12、所述生根培養(yǎng)基的配方為：改良ms+naa?0.2～0.3mg/l+iba?0.3～0.4mg/l+活性炭0.15～0.25g/l；

13、所述改良ms為組分不變，ph調(diào)至5.2～5.4。

14、進(jìn)一步的，步驟（2）中，消毒具體為：75%酒精震搖消毒30～40s、無菌水涮洗3～4次，飽和漂白粉溶液靜置消毒50～60min、無菌水涮洗3～4次，0.05%升汞溶液震搖消毒5～6min、無菌水涮洗7～8次。

15、進(jìn)一步的，步驟（3）中，所述初代叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為：改良ms+2,4-d0.15mg/l+cppu?0.15mg/l+tdz?1.3mg/l+活性炭?0.5g/l。

16、進(jìn)一步的，步驟（4）中，所述繼代叢生芽增殖培養(yǎng)基的配方為：改良ms+2,4-d0.07mg/l+naa?0.07mg/l+tdz?2.8mg/l+6-ba?3.5mg/l。

17、進(jìn)一步的，步驟（5）中，所述壯苗培養(yǎng)基的配方為：改良ms+椰汁50ml/l+水解酪蛋75mg/l。

18、進(jìn)一步的，步驟（6）中，所述生根培養(yǎng)基的配方為：改良ms+naa0.25mg/l+iba0.3mg/l+活性炭0.2g/l。

19、本發(fā)明的有益技術(shù)效果是：

20、1.龜背竹外植體采用常規(guī)的75%酒精和0.1%升汞溶液進(jìn)行組合消毒時(shí)，當(dāng)升汞消毒時(shí)間過短時(shí)，外植體幾乎全部污染，而當(dāng)延長升汞消毒時(shí)間時(shí)，污染率隨著消毒時(shí)間的延長而下降，但外植體有較大程度受損甚至死亡，從而使得無菌體系難以建立，而當(dāng)采用75%酒精和其他消毒劑復(fù)配時(shí)，亦幾乎污染殆盡，本發(fā)明創(chuàng)造性的采用75%酒精+飽和漂白粉溶液+0.05%升汞溶液三種消毒劑復(fù)合消毒，可將污染率控制在45%以內(nèi)，外植體消毒損傷及死亡率控制在14%以內(nèi)。

21、2.經(jīng)反復(fù)多次試驗(yàn)，龜背竹對cppu以及tdz較為敏感，當(dāng)在初代培養(yǎng)時(shí)采用適宜濃度的2,4-d和cppu、tdz進(jìn)行組合時(shí)，可極大程度的誘導(dǎo)叢生芽的發(fā)生，但是，由于龜背竹對cppu過于敏感，當(dāng)在繼代增殖培養(yǎng)時(shí)繼續(xù)采用cppu，會在繼代培養(yǎng)過程中形成積累，從而使其增殖系數(shù)極為不穩(wěn)定，最終可能導(dǎo)致生產(chǎn)過程中不可控因素較多，因此在繼代增殖時(shí)本發(fā)明采用了敏感度較低的6-ba，可將增殖系數(shù)穩(wěn)定在4.0，與此同時(shí)，為便于后續(xù)生根培養(yǎng)，本發(fā)明在繼代增殖時(shí)，將2,4-d濃度降低，同時(shí)采用一定濃度的naa，不僅能達(dá)到同樣的增殖效果，還可對后續(xù)生根培養(yǎng)亦有很大程度促進(jìn)作用。

22、3.龜背竹直接采用增殖苗生根較難，猜測是由于2,4-d以及tdz可能有一定程度抑制龜背竹生根有關(guān)，因此本發(fā)明在生根前，進(jìn)行了一次壯苗，一方面有利于2,4-d以及tdz在龜背竹體內(nèi)濃度的降低，另一方面適宜濃度的椰汁和水解酪蛋的添加，有利于苗更加健壯，同時(shí)還能促進(jìn)根原基的形成，猜測椰汁內(nèi)的植物生長調(diào)節(jié)劑有促進(jìn)龜背竹的生根作用。

23、4.在龜背竹組培過程中，長期采用ms為基本培養(yǎng)基時(shí)，會導(dǎo)致一定程度的葉片及叢生芽早衰，后將?ph下調(diào)，可有效減緩早衰的發(fā)生，當(dāng)ph降低至5.2～5.4時(shí)，其早衰發(fā)生率為最低，而繼續(xù)降低時(shí)，可一定程度的導(dǎo)致酸中毒，從而一定程度導(dǎo)致苗部分死亡。

技術(shù)特征：

1.龜背竹組織快繁方法，其特征在于，步驟包括：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于：步驟（2）中，消毒具體為：75%酒精震搖消毒30～40s、無菌水涮洗3～4次，飽和漂白粉溶液靜置消毒50～60min、無菌水涮洗3～4次，0.05%升汞溶液震搖消毒5～6min、無菌水涮洗7～8次。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于：步驟（3）中，所述初代叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為：改良ms+2,4-d?0.15mg/l+cppu?0.15mg/l+tdz?1.3mg/l+活性炭?0.5g/l。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于：步驟（4）中，所述繼代叢生芽增殖培養(yǎng)基的配方為：改良ms+2,4-d?0.07mg/l+naa?0.07mg/l+tdz?2.8mg/l+6-ba?3.5mg/l。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于：步驟（5）中，所述壯苗培養(yǎng)基的配方為：改良ms+椰汁50ml/l+水解酪蛋75mg/l。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于：步驟（6）中，所述生根培養(yǎng)基的配方為：改良ms+naa0.25mg/l+iba?0.3mg/l+活性炭0.2g/l。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述方法在龜背竹組織快繁中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及植物組培技術(shù)領(lǐng)域，具體來說是一種龜背竹組織快繁方法及應(yīng)用，步驟包括：選擇龜背竹近葉片葉柄，清洗完成的外植體切成小段接種于初代叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行初代誘導(dǎo)培養(yǎng)，初代誘導(dǎo)以后進(jìn)行繼代叢生芽增殖培養(yǎng)后壯苗培養(yǎng)，最后進(jìn)行生根培養(yǎng)。本發(fā)明可將污染率控制在45%以內(nèi)，外植體消毒損傷及死亡率控制在14%以內(nèi)，初代叢生芽誘導(dǎo)率70%以上，增殖系數(shù)穩(wěn)定在4.0左右，生根率達(dá)99.8%以上，并實(shí)現(xiàn)龜背竹的快速繁殖。

技術(shù)研發(fā)人員：王德新,肖夢娜,王金莉,張媛,鄧國賓
受保護(hù)的技術(shù)使用者：西南林業(yè)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19