專利名稱:一種用于作物防病增產(chǎn)的微生物制劑及其制備方法
所屬技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于作物防病增產(chǎn)的微生物制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
作物病害如油菜菌核病、花生白絹病、茄子黃萎病、辣椒疫病、丹參根腐病、紅花枯萎病、棉花立枯病和枯萎病等土傳病害不但嚴(yán)重影響作物的產(chǎn)量和品質(zhì)，而且病害的病原菌可以在土壤中存活和隨土壤傳播。對于這些病害的防治，常用的化學(xué)藥劑不但防治效果差，而且濫用化學(xué)農(nóng)藥還會造成嚴(yán)重的農(nóng)殘污染問題。目前，國內(nèi)外針對灰霉病、立枯病、白絹病、紋枯病、枯萎病等作物病害的生物防治，分離篩選出了一些具有一定防病效果的木霉菌株，并進(jìn)行了相應(yīng)的擴(kuò)大培養(yǎng)研究，但還存在一些問題，如生產(chǎn)出的制劑適用作物少，防病范圍窄；或者生產(chǎn)原料的來源受地域限制；或者生產(chǎn)工序復(fù)雜、生產(chǎn)成本高；或者用量較大，往往每畝需用幾公斤到幾十公斤。如中國專利申請“一種微生物殺菌劑及其制備方法”，公開號CN1337164A，這種微生物殺菌劑僅適用于煙草，僅對煙草立枯病、猝倒病、黑脛病、赤星病有效，其生產(chǎn)原料煙梗的來源地域性強(qiáng)，并且生產(chǎn)過程中需要使用專用設(shè)備發(fā)酵罐。又如中國專利申請“速效抗病真菌有機(jī)肥料及其生產(chǎn)方法”，公開號CN1283599，該抗病真菌有機(jī)肥用量較大，每畝需施用40kg-50kg。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種用于作物防病增產(chǎn)的微生物制劑，該種微生物制劑生產(chǎn)周期短、成本低；原料來源廣、價格低廉；產(chǎn)孢量大；使用方便、安全；適用作物廣、防病對象多、促生增產(chǎn)作用顯著；還可減輕污染，為生產(chǎn)和發(fā)展優(yōu)質(zhì)無公害農(nóng)產(chǎn)品提供技術(shù)保證。
本發(fā)明另一目的是提供一種制備上述用于作物防病增產(chǎn)的微生物制劑的方法。
本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是一種用于作物防病增產(chǎn)的微生物制劑，它含有的組分及質(zhì)量配比為12～16份的哈茨木霉(Trichoderma harzianum)菌株T23 CGMCC No.0975，84～88份的植物粉碎材料，該植物粉碎材料的組成為玉米粉或麥麩或二者的混合物及米糠、玉米桿粉、棉籽殼粉、木屑中的一種或至少兩種的混合物。
制備上述一種用于作物防病增產(chǎn)的微生物制劑的方法，其步驟依次為(1)菌種試管培養(yǎng)采用馬鈴薯葡萄糖瓊膠固體培養(yǎng)基(PDA)，將哈茨木霉菌株T23接種于含鏈霉素40～70ppm的固體培養(yǎng)基(PDA)中，在18℃～30℃溫度下，培養(yǎng)1～7天；(2)液體發(fā)酵培養(yǎng)將玉米粉或麥麩或二者的混合物與水按1∶300～500的質(zhì)量比例混勻裝于三角瓶中，在121℃、15磅下高溫加壓消毒20～30分鐘，制得培養(yǎng)液；冷卻后將(1)步試管中培養(yǎng)出的哈茨木霉菌株T23按接種在三角瓶中，菌株與培養(yǎng)液的質(zhì)量比例為1∶400～500，并在溫度為20℃～30℃，光暗比為1∶0.8-1.2的光暗交替環(huán)境中，恒溫振蕩培養(yǎng)3～5天；(3)固體發(fā)酵培養(yǎng)將米糠、玉米桿粉、棉籽殼粉、木屑中的一種或至少兩種的混合物與水按1∶0.8～1.2的比例混勻，裝于耐溫塑料袋中，在121℃、15磅下高溫加壓消毒120～150分鐘，冷卻后倒入已消毒的培養(yǎng)床中，形成固體培養(yǎng)料；將(2)步制得的液體發(fā)酵培養(yǎng)物與該固體培養(yǎng)料按1∶8～10的質(zhì)量比例接種液體發(fā)酵培養(yǎng)物，在18℃～32℃、相對濕度90％以上、自然光照下、消毒的培養(yǎng)室內(nèi)，通風(fēng)培養(yǎng)1～3天即制成固體發(fā)酵培養(yǎng)物。
(4)制劑的制備將固體發(fā)酵培養(yǎng)物自然風(fēng)干至含水量在8％～10％，再用粉碎機(jī)粉碎，過100目篩后，測定孢子含量，菌株T23孢子含量達(dá)到3×1010個/克即為合格品。
本發(fā)明采用的哈茨木霉菌株T23，是從四川簡陽的中藥材丹參根際土壤中，利用病原菌作誘餌分離篩選而得。即采用尼龍網(wǎng)片作載體，先將消毒的尼龍網(wǎng)片放入接有病原菌的培養(yǎng)皿內(nèi)，等尼龍網(wǎng)片上長滿菌體后，將尼龍網(wǎng)片置于土樣表面，培養(yǎng)3-5天后，拮抗木霉菌即可寄生到尼龍網(wǎng)片的病原菌上，揭下尼龍網(wǎng)片放在馬鈴薯葡萄糖瓊膠固體(PDA)培養(yǎng)基上，選取木霉菌株純化培養(yǎng)，就可獲得具有拮抗作用的木霉菌株；通過對這些菌株與多種病原菌的拮抗試驗，從中篩選出拮抗作用顯著的哈茨木霉菌株T23。
該菌株對引起農(nóng)作物死苗、枯萎病、根腐病和白絹病等病害的立枯絲核菌、尖孢鐮刀菌、齊整小核菌等病原菌的拮抗指數(shù)達(dá)1級，對病原菌菌絲生長抑制率均在85％以上。
本發(fā)明采用的哈茨木霉菌株T23具有以下微生物學(xué)特性1、形態(tài)學(xué)特性孢子梗叢束疏松，環(huán)狀排列，主分枝呈樹狀，次級分枝多級，常2～3個一組，直角伸出；孢子球形、近球形、或倒卵形。
2、培養(yǎng)學(xué)特性在PDA培養(yǎng)基上，1～2天菌落為白色，老熟后轉(zhuǎn)為暗綠色。
該菌株已于2003年07月03日，在中國微生物菌種管理委員會普通微生物中心保藏，其保藏登記號為CGMCC NO.0975。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是(1)生產(chǎn)周期短，操作簡易。從菌種培養(yǎng)到制劑的生產(chǎn)全程僅需5～11天。
(2)生產(chǎn)成本低液體和固體發(fā)酵所需的培養(yǎng)料分別為玉米粉、米糠等，其來源十分豐富，價格低廉。
(3)產(chǎn)孢量大根據(jù)本方法生產(chǎn)出的液體發(fā)酵培養(yǎng)物中的木霉菌孢子含量為0.5×108～2×108個/ml；制成的微生物制劑成品中，木霉菌孢子含量在3×1010～9×1010個/克，木霉菌孢子粉的重量百分比占12％～16％，米糠、玉米粉等植物粉碎材料占84％～88％。
(4)適用作物廣，防病對象多，促生增產(chǎn)作用顯著。適用作物包括糧油作物、蔬菜、中藥材，防病對象涉及由鐮刀菌、立枯絲核菌、大麗輪枝菌、菌核菌、疫菌和齊整小核菌等病原菌引起的枯萎病、立枯病、菌核病、白絹病等化學(xué)農(nóng)藥難于防治的土傳病害，防治效果顯著，且可使作物顯著增產(chǎn)。
(5)采用本發(fā)明方法制備上述的微生物制劑，不僅可以防病、增產(chǎn)，達(dá)到提高種植效益的目的，還可減輕污染，為生產(chǎn)和發(fā)展優(yōu)質(zhì)無公害農(nóng)產(chǎn)品提供技術(shù)保證。
本發(fā)明的微生物制劑對多種作物防病增產(chǎn)的效果由下面的對比實驗證明用于油菜的試驗表明，油菜移栽時土壤穴施上述微生物制劑0.2kg/畝，能有效地減輕油菜菌核病的發(fā)生，對油菜菌核病的防治效果達(dá)62.9％，比目前常用的化學(xué)農(nóng)藥多菌靈的防治效果(55.7％)好。并且油菜的千粒重比空白對照增加5.6％，油菜增產(chǎn)5.3％。
用于花生的試驗表明，花生播種時土壤穴施上述微生物制劑0.25kg/畝，花生出苗快、整齊、缺窩少。花生出苗早1-2天，出苗率提高7個百分點(diǎn)，缺窩率下降7個百分點(diǎn)，產(chǎn)量比空白對照增產(chǎn)10.2％。
用于辣椒的試驗表明，辣椒移栽時土壤穴施上述微生物制劑0.2kg/畝，能使辣椒增產(chǎn)14.0％。
用于茄子的試驗表明，茄子移栽時土壤穴施上述微生物制劑0.2kg/畝，能有效地減輕茄子黃萎病的發(fā)生，對其黃萎病的防治效果為55.9％，比目前常用的化學(xué)農(nóng)藥多菌靈的防治效果(40.4％)好，并使茄子增產(chǎn)12.9％。
用于丹參的試驗表明，丹參播種時土壤穴施上述微生物制劑0.2kg/畝，對丹參根腐病防治效果為55.7％，與多菌靈的防治效果(57.5％)相當(dāng)；對丹參出苗有促進(jìn)作用，處理后的出苗率為83.8％，顯著高于多菌靈的71.3％和空白對照的64.4％；并使丹參增產(chǎn)8.2％。
用于川紅化的試驗表明，川紅化播種時土壤穴施上述微生物制劑0.2kg/畝，能有效控制川紅花枯萎病的發(fā)生，對其枯萎病的防治效果為70.4％，高于化學(xué)藥劑多菌靈的防治效果(60.9％)。并促進(jìn)出苗和幼苗的生長，處理后的川紅花出苗率為87.5％，顯著高于空白對照的73.9％；單株鮮重和干重分別為3.23g和0.46g，均顯著高于空白對照的2.70g和0.41g。
用于棉花的試驗表明，棉花播種時用上述微生物制劑拌種處理棉花(制劑∶棉種為1∶100)后，可有效減少棉花死苗和枯萎病的發(fā)生。對棉花立枯病的防治效果為70.0％，對棉枯萎病的防效可達(dá)60.4％，高于或相當(dāng)于化學(xué)藥劑多菌靈的防治效果(分別為54.6％和61.2％)；同時，用該微生物制劑處理后的棉花出苗率為80.9％，顯著高于空白對照的出苗率(51.6％)。
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明進(jìn)一步說明。
具體實施方式
實施例一本例的微生物制劑中植物粉碎材料的組成為玉米粉及米糠。其制備方法的步驟依次為(1)菌種試管培養(yǎng)采用馬鈴薯葡萄糖瓊膠固體培養(yǎng)基(PDA)，將哈茨木霉菌株T23接種于含鏈霉素50ppm的固體培養(yǎng)基(PDA)中，在溫度為25℃下，培養(yǎng)1～3天，具體培養(yǎng)時間以菌絲布滿培養(yǎng)基表面為準(zhǔn)。
PDA培養(yǎng)基中加入鏈霉素的目的，在于防止細(xì)菌和其它霉菌的生長。
(2)液體發(fā)酵培養(yǎng)采用玉米粉與水按1∶400的質(zhì)量比例混勻裝于三角瓶中，在121℃、15磅下高溫加壓消毒25min，制得培養(yǎng)液；冷卻后將試管中的哈茨木霉菌株T23接種在三角瓶中，哈茨木霉與培養(yǎng)液的質(zhì)量比例為1∶450，置于溫度25℃，光暗比為1∶1的光暗交替環(huán)境中，振蕩培養(yǎng)3～5天，培養(yǎng)制成液體發(fā)酵培養(yǎng)物。具體培養(yǎng)時間，以能確保液體發(fā)酵培養(yǎng)物中的菌株T23孢子含量達(dá)到0.5×108～2×108個/ml為宜。
(3)固體發(fā)酵培養(yǎng)將米糠與水按1∶1的質(zhì)量比例混勻，裝于耐溫塑料袋中，在121℃、15磅下高溫加壓消毒130min，冷卻后倒入已消毒的培養(yǎng)床中，按液體發(fā)酵培養(yǎng)物固體培養(yǎng)料為1∶9的質(zhì)量比例接種液體發(fā)酵培養(yǎng)物，在溫度25℃、相對濕度90％以上，自然光照，在消毒的培養(yǎng)室內(nèi)通風(fēng)培養(yǎng)1～3天制成固體發(fā)酵培養(yǎng)物。具體培養(yǎng)時間應(yīng)以固體發(fā)酵培養(yǎng)物中的菌株T23孢子含量能達(dá)到3×1010～9×1010個/克為宜。
(4)制劑的制備將固體發(fā)酵培養(yǎng)物自然風(fēng)干至含水量在8％～10％后，用粉碎機(jī)粉碎，過100目篩后，進(jìn)行孢子含量測定，微生物制劑中的菌株T23孢子含量達(dá)到3×1010個/克即為合格品。
實施例二本例的微生物制劑中植物粉碎材料的組成為麥麩及玉米桿粉。其制備方法的步驟依次為(1)菌種試管培養(yǎng)采用馬鈴薯葡萄糖瓊膠固體培養(yǎng)基(PDA)，將哈茨木霉菌株T23接種于含鏈霉素40ppm的固體培養(yǎng)基(PDA)中，在溫度為22℃下，培養(yǎng)1～3天，具體培養(yǎng)時間以菌絲布滿培養(yǎng)基表面為準(zhǔn)。
(2)液體發(fā)酵培養(yǎng)采用麥麩與水按1∶500的質(zhì)量比例混勻裝于三角瓶中，在121℃、15磅下高溫加壓消毒30min，制得培養(yǎng)液；冷卻后將試管中的哈茨木霉菌株T23接種在三角瓶中，哈茨木霉菌株T23與培養(yǎng)液的質(zhì)量比例為1∶500，置于溫度23℃，光暗比為1∶1.2的光暗交替環(huán)境中，振蕩培養(yǎng)3～5天，培養(yǎng)制成液體發(fā)酵培養(yǎng)物。具體培養(yǎng)時間，以能確保液體發(fā)酵培養(yǎng)物中的菌株T23孢子含量達(dá)到0.5×108～2×108個/ml為宜。
(3)固體發(fā)酵培養(yǎng)將玉米桿粉與水按1∶0.8的質(zhì)量比例混勻，裝于耐溫塑料袋中，在121℃、15磅下高溫加壓消毒150min，冷卻后倒入已消毒的培養(yǎng)床中，按液體發(fā)酵培養(yǎng)物固體培養(yǎng)料為1∶10的質(zhì)量比例接種液體發(fā)酵培養(yǎng)物，在溫度28℃、相對濕度90％以上，自然光照，在消毒的培養(yǎng)室內(nèi)通風(fēng)培養(yǎng)1～3天制成固體發(fā)酵培養(yǎng)物。具體培養(yǎng)時間以固體發(fā)酵培養(yǎng)物中的菌株T23孢子含量能達(dá)到3×1010～9×1010個/克為宜。
(4)制劑的制備同實施例一。
實施例三本例的微生物制劑中植物粉碎材料的組成為麥麩及米糠。其制備方法的步驟依次為(1)菌種試管培養(yǎng)采用馬鈴薯葡萄糖瓊膠固體培養(yǎng)基(PDA)，將哈茨木霉菌株T23接種于含鏈霉素70ppm的固體培養(yǎng)基(PDA)中，在溫度為28℃下，培養(yǎng)1～3天，具體培養(yǎng)時間以菌絲布滿培養(yǎng)基表面為準(zhǔn)。
(2)液體發(fā)酵培養(yǎng)采用麥麩與水按1∶300的質(zhì)量比例混勻裝于三角瓶中，在121℃、15磅下高溫加壓消毒20min，制得培養(yǎng)液；冷卻后將試管中的哈茨木霉菌株T23接種在三角瓶中，哈茨木霉菌株T23與培養(yǎng)液的質(zhì)量比例為1∶400，置于溫度27℃，光暗比為1∶0.8的光暗交替環(huán)境中，振蕩培養(yǎng)3～5天，培養(yǎng)制成液體發(fā)酵培養(yǎng)物。具體培養(yǎng)時間，以能確保液體發(fā)酵培養(yǎng)物中的菌株T23孢子含量達(dá)到0.5×108～2×108個/ml為宜。
(3)固體發(fā)酵培養(yǎng)將米糠與水按1∶1.2的質(zhì)量比例混勻，裝于耐溫塑料袋中，在121℃、15磅下高溫加壓消毒120min，冷卻后倒入已消毒的培養(yǎng)床中，按液體發(fā)酵培養(yǎng)物固體培養(yǎng)料為1∶8的質(zhì)量比例接種液體發(fā)酵培養(yǎng)物，在溫度22℃、相對濕度90％以上，自然光照，在消毒的培養(yǎng)室內(nèi)通風(fēng)培養(yǎng)1～3天制成固體發(fā)酵培養(yǎng)物。具體培養(yǎng)時間，以固體發(fā)酵培養(yǎng)物中的菌株T23孢子含量能達(dá)到3×1010～9×1010個/克為宜。
(4)制劑的制備同實施例一。
實施例四本例的微生物制劑中植物粉碎材料的組成為玉米粉、麥麩的混合物及棉籽殼粉。其制備方法的步驟依次為(1)菌種試管培養(yǎng)采用馬鈴薯葡萄糖瓊膠固體培養(yǎng)基(PDA)，將哈茨木霉菌株T23接種于含鏈霉素60ppm的固體培養(yǎng)基(PDA)中，在溫度為18℃下，培養(yǎng)1～7天，具體培養(yǎng)時間以菌絲布滿培養(yǎng)基表面為準(zhǔn)。
(2)液體發(fā)酵培養(yǎng)采用玉米粉與麥麩的混合物與水按1∶450的質(zhì)量比例混勻裝于三角瓶中，在121℃、15磅下高溫加壓消毒30min，制得培養(yǎng)液；冷卻后將試管中的哈茨木霉菌株T23接種在三角瓶中，哈茨木霉菌株T23與培養(yǎng)液的質(zhì)量比例為1∶450，置于20℃，光暗比為1∶0.9的光暗交替環(huán)境中，振蕩培養(yǎng)3～5天，培養(yǎng)制成液體發(fā)酵培養(yǎng)物。具體培養(yǎng)時間，以能確保液體發(fā)酵培養(yǎng)物中的菌株T23孢子含量達(dá)到0.5×108～2×108個/ml為宜。
(3)固體發(fā)酵培養(yǎng)將棉籽殼粉與水按1∶0.9的質(zhì)量比例混勻，裝于耐溫塑料袋中，在121℃、15磅下高溫加壓消毒150min，冷卻后倒入已消毒的培養(yǎng)床中，按液體發(fā)酵培養(yǎng)物固體培養(yǎng)料為1∶10的質(zhì)量比例接種液體發(fā)酵培養(yǎng)物，在溫度18℃、相對濕度90％以上，自然光照，在消毒的培養(yǎng)室內(nèi)通風(fēng)培養(yǎng)1～3天制成固體發(fā)酵培養(yǎng)物。具體培養(yǎng)時間，以固體發(fā)酵培養(yǎng)物中的菌株T23孢子含量能達(dá)到3×1010～9×1010個/克為宜。
(4)制劑的制備同實施例一。
實施例五本例的微生物制劑中植物粉碎材料的組成為玉米粉、麥麩的混合物及木屑。其制備方法的步驟依次為(1)菌種試管培養(yǎng)采用馬鈴薯葡萄糖瓊膠固體培養(yǎng)基(PDA)，將哈茨木霉菌株T23接種于含鏈霉素70ppm的固體培養(yǎng)基(PDA)中，在溫度為30℃下，培養(yǎng)1～3天，具體培養(yǎng)時間以菌絲布滿培養(yǎng)基表面為準(zhǔn)。
(2)液體發(fā)酵培養(yǎng)采用玉米粉、麥麩的混合物與水按1∶450的質(zhì)量比例混勻裝于三角瓶中，在121℃、15磅下高溫加壓消毒20min，制得培養(yǎng)液；冷卻后將試管中的哈茨木霉菌株T23接種在三角瓶中，哈茨木霉菌株T23與培養(yǎng)液的質(zhì)量比例為1∶450，置于30℃，光暗比為1∶1的光暗交替環(huán)境中，振蕩培養(yǎng)3～5天，培養(yǎng)制成液體發(fā)酵培養(yǎng)物。具體培養(yǎng)時間，以能確保液體發(fā)酵培養(yǎng)物中的菌株T23孢子含量達(dá)到0.5×108～2×108個/ml為宜。
(3)固體發(fā)酵培養(yǎng)將木屑與水按1∶1.1的質(zhì)量比例混勻，裝于耐溫塑料袋中，在121℃、15磅下高溫加壓消毒120min，冷卻后倒入已消毒的培養(yǎng)床中，按液體發(fā)酵培養(yǎng)物固體培養(yǎng)料為1∶8的質(zhì)量比例接種液體發(fā)酵培養(yǎng)物，在溫度32℃、相對濕度90％以上，自然光照，在消毒的培養(yǎng)室內(nèi)通風(fēng)培養(yǎng)1～3天制成固體發(fā)酵培養(yǎng)物。具體培養(yǎng)時間，以固體發(fā)酵培養(yǎng)物中的菌株T23孢子含量能達(dá)到3×1010～9×1010個/克為宜。
(4)制劑的制備同實施例一。
上述各實施例的微生物制劑均含有12-16份質(zhì)量的哈茨木霉菌株T23，84-88份質(zhì)量的植物碎粉材料。
上述各實施例的固體發(fā)酵培養(yǎng)中使用的容器及培養(yǎng)室消毒的具體方式均為采用熏蒸消毒，按每平方米用高錳酸鉀1g、甲醛10ml進(jìn)行熏蒸10～12小時，備用。
固體發(fā)酵培養(yǎng)時使用的植物粉碎材料既可為上述為各實施例那樣選取米糠、玉米桿份、棉籽殼份或木屑中的一種，也可以選取它們中的至少兩種的混合物。
本發(fā)明的微生物制劑在液體培養(yǎng)、固體培養(yǎng)時所使用的植物材料，也可用其它適宜培養(yǎng)哈茨木霉菌的現(xiàn)有植物材料進(jìn)行替代。
本發(fā)明的微生物制劑的制備步驟中1、菌種試管培養(yǎng)的適宜溫度為22℃～28℃，在此溫度條件下1～3天菌絲即可布滿培養(yǎng)基表面；在18℃以下，菌絲生長較慢，需6天才能布滿培養(yǎng)基表面，在30℃以上時，菌絲需7天才能布滿培養(yǎng)基表面。
2、液體發(fā)酵培養(yǎng)的適宜溫度為23℃～27℃，其培養(yǎng)時間一般為84-96小時即可滿足要求；養(yǎng)溫度在20℃以下，菌株T23孢子含量小于0.5×108個/ml，在30℃以上時，菌株T23孢子含量小于0.4×108個/ml，在23℃～27℃時，菌株T23孢子含量為0.5×108個～2×108個/ml，25℃時孢子含量達(dá)最高達(dá)2×108個/ml。
3、固體發(fā)酵培養(yǎng)的適宜溫度為22℃-28℃，培養(yǎng)時間一般為36-60小時，在18℃以下時，需培養(yǎng)4天以上，在32℃以上時，木霉生長明顯受阻，也需培養(yǎng)4天以上，在22℃需培養(yǎng)3.5天菌絲才能布滿固體發(fā)酵物表面，在25℃時，菌絲1天即可布滿固體發(fā)酵物表面。
權(quán)利要求
1.一種用于作物防病增產(chǎn)的微生物制劑，它含有的組分及質(zhì)量配比為12～16份的哈茨木霉(Trichoderma harzianum)菌株T23 CGMCC No.0975，84～88份的植物粉碎材料，該植物粉碎材料的組成為玉米粉或麥麩或二者的混合物及米糠、玉米桿粉、棉籽殼粉、木屑中的一種或至少兩種的混合物。
2.一種制備權(quán)利要求
1所述的微生物制劑的方法，其步驟依次為(1)菌種試管培養(yǎng)采用馬鈴薯葡萄糖瓊膠固體培養(yǎng)基(PDA)，將哈茨木霉菌株T23接種于含鏈霉素40～70ppm的固體培養(yǎng)基(PDA)中，在18℃～30℃溫度下，培養(yǎng)1～7天；(2)液體發(fā)酵培養(yǎng)將玉米粉或麥麩或二者的混合物與水按1∶300～500的質(zhì)量比例混勻裝于三角瓶中，在121℃、15磅下高溫加壓消毒20～30分鐘，制得培養(yǎng)液；冷卻后將(1)步試管中培養(yǎng)出的哈茨木霉菌株T23接種在三角瓶中，菌株與培養(yǎng)液的質(zhì)量比例為1∶400～500，并在溫度為20℃～30℃，光暗比為1∶0.8-1.2的光暗交替環(huán)境中，恒溫振蕩培養(yǎng)3～5天；(3)固體發(fā)酵培養(yǎng)將米糠、玉米桿粉、棉籽殼粉、木屑之一種或至少兩種的混合物與水按1∶0.8～1.2的質(zhì)量比例混勻，裝于耐溫塑料袋中，在121℃、15磅下高溫加壓消毒120～150分鐘，冷卻后倒入已消毒的培養(yǎng)床中，形成固體培養(yǎng)料；將(2)步制得的液體發(fā)酵培養(yǎng)物與該固體培養(yǎng)料按1∶8～10的質(zhì)量比例接種液體發(fā)酵培養(yǎng)物，在18℃～32℃、相對濕度90％以上、自然光照下、消毒的培養(yǎng)室內(nèi)，通風(fēng)培養(yǎng)1～3天即制成固體發(fā)酵培養(yǎng)物。(4)制劑的制備將固體發(fā)酵培養(yǎng)物自然風(fēng)干至含水量在8％～10％，再用粉碎機(jī)粉碎，過100目篩后，測定孢子含量，菌株T23孢子含量達(dá)到3×1010個/克即為合格品。
專利摘要
本發(fā)明公開了一種用于作物防病增產(chǎn)的微生物制劑及其制備方法，該種微生物制劑的主要組份及質(zhì)量配比為12～16份的哈茨木霉(Trichoderma harzianum)菌株T23CGMCC No.0975，84～88份的植物粉碎材料，該植物粉碎材料的組成為玉米粉或麥麩或二者的混合物及米糠、玉米桿粉、棉籽殼粉、木屑中的一種或至少兩種的混合物。本發(fā)明的微生物制劑，生產(chǎn)周期短、成本低；原料來源廣、價格低廉；產(chǎn)孢量大；使用方便、安全；適用作物廣、防病對象多、促生增產(chǎn)作用顯著；還可減輕污染，為生產(chǎn)和發(fā)展優(yōu)質(zhì)無公害農(nóng)產(chǎn)品提供技術(shù)保證。
文檔編號A01N63/04GKCN1488257SQ03135663
公開日2004年4月14日 申請日期2003年8月25日
發(fā)明者曾華蘭, 李瓊芳, 葉鵬盛, 何煉, 江懷仲, 譚永久, 何洪華 申請人:四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物育種栽培研究所, 四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物育種栽培研導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan