專利名稱：:云南霉素在制備生物農(nóng)藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及云南霉素的用途，尤其涉及在生物農(nóng)藥制備中的用途。
背景技術(shù)：
：我國是一個農(nóng)業(yè)大囯，每年因農(nóng)作物病蟲害損失糧食150多億斤，棉花3億多公斤，為了防止病蟲害，保證農(nóng)業(yè)的正常生產(chǎn)，長期以來，人們大量使用化學(xué)農(nóng)藥防治農(nóng)作物病蟲害?；瘜W(xué)農(nóng)藥的使用對保證農(nóng)作物正常生產(chǎn)起到有效作用，但隨著長期依賴和大量使用化學(xué)合成的化學(xué)農(nóng)藥，對生態(tài)環(huán)境已造成嚴(yán)重破壞，如土壤結(jié)構(gòu)破壞，土壤活性降低，土質(zhì)和水體嚴(yán)重污染，大量殺傷殺死有益天敵；土壤環(huán)境、水體環(huán)境以及整個生態(tài)環(huán)境的生物平衡被打破；糧食、蔬菜、水果、中藥、茶葉等幾乎所有食品中有毒農(nóng)藥殘留量嚴(yán)重超標(biāo)，已直接威脅到人類的生存和身體健康。資料表明，在我國出口農(nóng)副產(chǎn)品中，因農(nóng)藥殘留量超標(biāo)而退貨造成的損失，1997年就高達74億美元。因茶葉農(nóng)藥殘留量超標(biāo)，使得對歐洲出口的茶葉量銳減。食用殘留化學(xué)農(nóng)藥嚴(yán)重超標(biāo)的瓜果蔬菜造成人畜中毒的事件也時有發(fā)生。在1992年"世界環(huán)境與發(fā)展"大會的第21條決議中指出，要在全球范圍內(nèi)控制化學(xué)農(nóng)藥的銷售和使用。自九十年代以來，全球化學(xué)農(nóng)藥以每年2%左右的比例下降，而生物農(nóng)藥的產(chǎn)量則以每年近10%的速度遞增。新興的生物技術(shù)公司和大型化學(xué)農(nóng)藥集團紛紛投資開發(fā)生物農(nóng)藥。生物農(nóng)藥的研制和開發(fā)生產(chǎn)正成為全球商家投資的熱點。在我國，國家已將"綠色食品和生物農(nóng)藥"的發(fā)展列入了《21世紀(jì)議程》。近幾年來，天津、北京、上海、廣州等許多大中城巿的農(nóng)業(yè)管理部門紛紛出臺嚴(yán)格的生產(chǎn)管理辦法，嚴(yán)禁在蔬菜、瓜果生產(chǎn)中使用高毒性、高殘留的化學(xué)農(nóng)藥。黑龍江、云南、山東等一些省份，也打出綠色大省的大牌，大力開發(fā)"AA"和"AAA"級的綠色產(chǎn)品，嚴(yán)禁在農(nóng)作物、經(jīng)濟作物、中藥材生產(chǎn)中使用一切化學(xué)農(nóng)藥，只能使用天然的生物農(nóng)藥。生物農(nóng)藥指來源于天然的動植物、微生物的農(nóng)藥，微生物農(nóng)藥指通過微生物發(fā)酵生產(chǎn)其代謝產(chǎn)物，具有高效、低毒性、低殘留、安全的特點。在我國農(nóng)作物生產(chǎn)中，防治病蟲害每年需要使用農(nóng)藥80物農(nóng)藥的生產(chǎn)企業(yè)則不多，我囯要求國內(nèi)生物農(nóng)藥使用比例要逐年增加，微生物生物農(nóng)藥又比較容易獲得自主知識產(chǎn)權(quán)，隨著我國加入WTO，國內(nèi)的許多農(nóng)藥廠生產(chǎn)的化學(xué)農(nóng)藥由于知識產(chǎn)權(quán)困擾，不得不停止生產(chǎn)，因此，研制和開發(fā)生產(chǎn)具有我國自主知識產(chǎn)權(quán)的生物農(nóng)藥品種就顯得越來越重要。中國發(fā)明專利(公開號CN1124778A)已經(jīng)公開了云南霉素，其結(jié)構(gòu)式為(見下頁)云南霉素是從云南鏈霉菌菌株2321的發(fā)酵液中，經(jīng)離子交換樹脂提取,層析制備等方法，分離到胞嘧啶核苷二肽抗生素，已知可以作為一種抗腫瘤抗生素。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供云南霉素的新用途，即本發(fā)明所述的云南霉素在制備生物農(nóng)藥中的應(yīng)用。實際上，本發(fā)明涉及云南霉素作為防治黃瓜花葉病毒的生物農(nóng)藥的應(yīng)用。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>式中R=H〈云南霉素)R可以是K,M,NH4及SH"。Hs等涉及云南霉素作為防治煙草普通花葉病毒的生物農(nóng)藥的應(yīng)用。涉及云南霉素作為防治煙草馬鈴薯X病毒的生物農(nóng)藥的應(yīng)用。涉及云南霉素作為防治煙草馬鈴薯Y病毒的生物農(nóng)藥的應(yīng)用。涉及云南霉素作為防治煙草蝕紋病毒引起的烤煙病毒病的生物農(nóng)藥的應(yīng)用。涉及云南霉素作為防治煙草叢頂病毒引起的烤煙病毒病的生物農(nóng)藥的'應(yīng)用。同時，本發(fā)明還涉及云南霉素作為防治由黃瓜花葉病毒、煙草普通花葉病毒等病毒引起的番茄、辣椒、大白菜等作物的病毒病，作為防治花葉病、蕨葉病、小葉病、斑點病、條斑病、畸形、矮縮、黃花、壞死的病毒病的生物農(nóng)藥。*除非另有說明，本發(fā)明中所釆用的百分?jǐn)?shù)均為重量百分?jǐn)?shù)。云南霉素原藥及2%~10%云南霉素水劑為云南天豐農(nóng)藥有限公司研制生產(chǎn)，是從土壤中釆集分離得到的一株微生物經(jīng)發(fā)酵而制得。為了更好地理解本發(fā)明的實質(zhì)，下面將通過云南霉素的藥效試驗及結(jié)果來說明其在生物農(nóng)藥領(lǐng)域中的新用途。一、試驗方法按照國家對農(nóng)藥藥效試驗規(guī)定的方法，一是選擇植物長勢一致，發(fā)病較重、發(fā)病均勻的田地作正規(guī)小區(qū)比較試驗田。二是釆用小區(qū)內(nèi)全區(qū)調(diào)查法，調(diào)查各處理小區(qū)全部植株葉片，按病情嚴(yán)重度分級方法，計算各小區(qū)病情指數(shù)，防治效果，以及調(diào)查噴藥后各藥劑處理對作物的保產(chǎn)增效對比數(shù)據(jù)。三是選擇不同海拔、不同日照度的地區(qū)調(diào)查作物長勢。經(jīng)過認(rèn)真科學(xué)、客觀、規(guī)范的藥效試驗，完成了2%~1oy。不同濃度的云南霉素在植物病害上應(yīng)用量，通過比較認(rèn)為最佳濃k使用為5%云南霉素。5%云南霉素對不同的作物用量見表l。表1.<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>二、云南霉素水劑的毒性1、小鼠急性毒性口服給藥(P0)的LDs。為360mg/kg。腹腔給藥(IP)的LDs。為65mg/kg。2、大鼠急性經(jīng)口和空腹給藥毒性試驗，見表2和表3。表2云南霉素SD大鼠急性經(jīng)口毒性<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>動物染毒后未出現(xiàn)明顯中毒癥狀，在兩周觀察期內(nèi)無動物死亡，未見動物出現(xiàn)任何異常表現(xiàn)，攝食飲水、大小便均正常。兩周后剖殺，內(nèi)臟未見明顯異常改變。小結(jié)二周內(nèi)20只動物園未出現(xiàn)死亡率，對SD雌雄大鼠的急性經(jīng)口LD5Q>5000mg/kg,根據(jù)農(nóng)藥急性經(jīng)口毒性(LD5。)分級和評定標(biāo)準(zhǔn)，云南霉素屬于微毒類農(nóng)藥。表3云南霉素劉SD大鼠急性經(jīng)皮毒性試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>動物染毒后未出現(xiàn)明顯中毒癥狀，兩周后動物無死亡，兩同后剖殺存活動物，內(nèi)臟未見異常改變。小結(jié)兩周內(nèi)，20只動物未出現(xiàn)死亡，故對雌大鼠空腹給藥毒性LD5Q>5000mg/kg。根據(jù)農(nóng)藥空腹給藥毒性分級和評定標(biāo)準(zhǔn)，云葉菌素屬低毒類。3.家兔急性皮膚刺激試驗對四只家兔皮膚刺激反應(yīng)的紅斑、水腫形成評分之和的均值最高為0,表明對家兔皮膚無刺激性。三、應(yīng)用試驗示范例A.對烤煙病毒病的田間藥效試驗對照藥劑生物農(nóng)藥寧南霉素、化學(xué)農(nóng)藥毒消1.試驗地點云南省2.作物煙草3.防治對象煙草黃瓜花葉病毒(CMV)和普通花葉病毒(TMV)引起的煙草花葉病毒病、煙草蝕紋病毒(TEV)蝕紋病毒病、煙草叢頂病毒(叢頂病毒、脈紐病毒)叢頂病等病毒引起的煙草病毒病。4.調(diào)查方法釆用全區(qū)總體調(diào)查法，藥前基本沒有發(fā)病，在第一次噴藥后IO天進行第一次藥效調(diào)查，每次噴藥后IO天調(diào)查各處理病情指數(shù)，最后一次藥效調(diào)查在第四次噴藥后IO天進行，計算藥效。5.分級方法0級無病；l級r輕微花葉或少數(shù)葉片花葉；2級1/2葉片花葉,少數(shù)葉片變形或少數(shù)葉片主脈變黑;3級2/3葉片花葉變形或植株較健株矮l/2左右；4級全株葉片花葉，葉片嚴(yán)重變形或壞死，矮化。6.藥效計算按下列公式進行計算驚摔錄化、S(各級病株或病葉數(shù)x發(fā)病級值)擺病'〖目？曰數(shù)(％)=、m卡以山"抓~曰山"—，"^、100調(diào)査樣本總數(shù)X最咼發(fā)病級值防治效果(%)=麵病'=，，區(qū)病情指數(shù)環(huán)處理區(qū)病情指數(shù)7.試驗結(jié)果據(jù)觀察，有效濃度為25~150ppm,以5075ppm左右防效最佳，濃度達到lOOppm倍液時防效降低，該藥對多種作物的病毒病有較好的防治效果、對真菌病害、細(xì)菌性病害有較好的兼治作用，是一個低毒、廣泛、前景較好的農(nóng)藥。建議在大面積生產(chǎn)上應(yīng)用，5%云南霉素水劑推薦濃度為600~1000倍。實用適期應(yīng)在未發(fā)病或零星發(fā)時期進行；施藥次數(shù)以3~4次；施藥間隔時間7-10天一次。B.對香料煙病毒病田間藥效試驗1.試驗地點昌寧縣2.作物香料煙3.防治對象病毒病(同烤煙示范例A)4.調(diào)查方法釆用小區(qū)隨機5點抽樣調(diào)查法，每點取10株，按香料煙病毒病分組標(biāo)準(zhǔn)，調(diào)查50株葉片發(fā)病情況。施藥前進行病情基數(shù)調(diào)查，每次施藥后10天調(diào)査各處理病情指數(shù)，依據(jù)各處理的病情指數(shù)，計算防治效果，最后一次藥效調(diào)查在第四次施藥后io天進行。5.分級方法(同烤煙示范例A)6.藥效計算(同烤煙示范例A)7.試驗過程香料煙生育期為正季釆收后新發(fā)出的煙葉，煙株葉片發(fā)病較重，當(dāng)?shù)睾０?200米，土壤為山地紅黃壤，PH4.5-5,土壤有機質(zhì)2.5/。左右，肥為中等，土壤干燥，常年降雨量800mm,平均氣溫19°C,試驗期間4-5月降雨量100mm，平均氣溫25-3(TC,煙草種植規(guī)格40cmxl0cm,每畝16000株左右。8.施藥方法采用16型背負(fù)式手動噴霧器，按60Kg/畝藥液量均勻噴霧。在煙葉采收完，新葉長出3-5張后，花葉病毒病發(fā)病較重時噴藥。具體時間為4月19日進行藥前病情基數(shù)調(diào)查，并噴藥，間隔10天噴施，以第四次藥后調(diào)查計算藥效，施藥后未發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生藥害現(xiàn)象。9.試驗結(jié)果該田的香料煙葉已經(jīng)釆完，剩下的頂部葉片發(fā)病較重，4月19曰藥前基數(shù)調(diào)查，病情指數(shù)達到50.9~60.97%,噴藥四次后(5月"日)調(diào)查，云南霉素三個處理(50pptn、"ppm、100pp氾)病情指數(shù)都比寧南霉素下降得多，即病情增長率為負(fù)數(shù)，分別為-6.47%、-12.61%、-3.41%、-2.55%，釆用公式防治效果％=(對照區(qū)病情增長率-處理區(qū)病情增長率)/對照區(qū)病情增長率xlOO計算藥效，處理l、2、3、4的藥效分別為130.99%、160.39%、116.33%、112.21%;使用云葉菌素的l、2、3處理藥效分別比寧南霉素(處理4)高18.7%、48.18%、4.12%,特別是與寧南霉素75ppm有相同有效含量的處理2(云葉菌素75ppm),藥效高出48.18%，在本試驗中，云葉菌素藥效明顯優(yōu)于寧南霉素和毒消(防效為_13.4%)。參考文獻農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所生測室編《農(nóng)藥田間藥效試驗準(zhǔn)則》C.對辣椒病毒病的田間藥效試驗1.試驗地點隆陽區(qū)河圖鎮(zhèn)2.作物辣椒3.防治對象病毒病4.調(diào)查方法采用小區(qū)內(nèi)定析調(diào)查法(以株為單位，每小區(qū)查30株)，藥前查基數(shù)，在第二次噴藥后7天進行第一次藥效調(diào)查，每次噴藥后7天調(diào)查各處理病情指數(shù)，最后一次藥效調(diào)查在第四次噴藥后15天進行。在青辣椒成熟時，每小區(qū)分兩次采摘，計算各處理小區(qū)的產(chǎn)量和防治效果，詳見附表。5.分級方法(同烤煙示范例A)6.藥效計算(同烤煙示范例A)7.試驗過程該試驗地海拔在1650米左右，土壤為潴育型水稻土，pH5.3~5.8，土壤有機質(zhì)3%左右，排灌方便，管理精細(xì)；常年棚外降雨量1000mm左右，平均氣溫15.6'C，試驗期間5-6月降雨量200ram左右，平均氣溫19.5~20.9。C,棚內(nèi)溫度2538。C左右；供試作物(細(xì)辣椒)播種時期為2005年9月12曰，于同年11月18曰移載，種植規(guī)格長x寬，為雙行單株四壟種植；畝用廄肥1500千克/畝。8.施藥方法采用16型背負(fù)式手動噴霧器。在辣椒掛果中后期，病毒病發(fā)病均勻，病情指數(shù)在30左右，5月17日噴藥，分別施藥四次時間為5月，均勻噴霧，施藥后未出現(xiàn)藥害現(xiàn)象。9.試驗結(jié)果(l)用5%云南霉素水劑75ppm防治辣椒病毒病(黃瓜花葉病毒為主),防治效果達78.84%,防治效果明顯高于寧南霉素8.81百分點，經(jīng)方差分析，比目前大面積生產(chǎn)推廣應(yīng)用的藥劑-寧南霉素、毒消達極著水平；而云南霉素100ppm和50ppm的防治效果則與寧南霉素相當(dāng)。用藥后病株重新長出新葉和新枝，黃化斑減退，病毒病癥狀明顯消失，植株能恢復(fù)正常生長。因此，云南霉素防治病毒病效果明顯優(yōu)于寧南霉素，是一個發(fā)展前景較好的生物農(nóng)藥，建議擴大試驗、示范，加強推廣應(yīng)用。(2)在本試驗中，云南霉素在一定范圍內(nèi)隨施用濃度增加防效增加，但濃度過高時，防治則下降，以75ppm左右防效最佳，濃度達到100ppm時防效下降，可能因施用濃度過高對病毒鈍化作用不好，導(dǎo)致藥效下降。(3)施藥次數(shù)以3~4次為宜，根據(jù)病情嚴(yán)重程度施藥間隔時間可選擇710天，施藥適期，應(yīng)在病毒病表現(xiàn)癥狀初期進行。(4)辣椒產(chǎn)量噴藥后經(jīng)兩次小區(qū)產(chǎn)量采收，產(chǎn)量第一位是處理2(75ppm),平均畝產(chǎn)958.52公斤，比處理4(寧南霉素75ppm)畝產(chǎn)量861.12公斤增97.4公斤，增11.31%,比處理5(毒消)畝產(chǎn)量780公斤增178.52公斤，增22.87%,比對照畝產(chǎn)量618.52公斤增340公斤，增54.96%。說明噴施5。/。云南霉素水劑75ppm對防治辣椒病毒病挽回產(chǎn)量效果比毒消、寧南霉素好。D.對大白菜褐條病毒病的田間藥效試驗1.試驗地點隆陽區(qū)河圖鎮(zhèn)2.作物白菜3.防治對象褐條病毒病4.調(diào)查方法采用小區(qū)內(nèi)全區(qū)調(diào)査法，噴藥前進行藥前基數(shù)調(diào)查，每次噴藥后7天，調(diào)查各處理小區(qū)全部植株葉片，按大白菜褐條病毒病分級方法,計算各小區(qū)病情指數(shù)及防治效果，并目測藥害。依據(jù)4次防治后的病情指數(shù)、防治效果的平均數(shù)，求出該藥劑的病情指數(shù)及防治效果。在大白菜成熟時，每小區(qū)進行釆收，計算各處理小區(qū)的產(chǎn)量的防治效果，詳見附表5.分級方法(同烤煙示范例A)6.藥效計算(同烤煙示范例A)7.試驗過程該試驗地海拔在1660米左右，土壤為潴育型水稻土，pH5.5，土壤有機質(zhì)3%左右，排灌方便，管理精細(xì)；常年棚外降雨量lOOOmm左右，平均氣溫15.6。C,試驗期間5~6月降雨量200腿左右，平均氣溫19.5~20.9°C,棚內(nèi)溫度2538。C左右；供試作物(大白菜)播種時期為2006年5月l5曰，于同年6月7曰移載，秧齡22天，種植規(guī)格為四行單株二壟種植。8.施藥方法釆用16型背負(fù)式手動噴霧器。大白菜擺盤期，病毒病沿未發(fā)病，6月29曰噴藥，分別施藥四次時間為7月，均勻噴霧，藥效調(diào)查分別在7月份，施藥后未出現(xiàn)藥害現(xiàn)象。9.試驗結(jié)果(1)5%云南霉素的三個處理1、2、3的藥效分別為81.25%、71.88%、68.75%,比處理4(寧南霉素75ppm)62.5%分別高出18.75%、9.38%、6.25%,其中處理1(云南霉素50ppm)與處理4之間差異達極顯著水平,有相同有效含量(75ppm)的處理2和處理4之間差異達顯著水平，驗證了云南霉素防治病毒病(大白菜褐條病毒病)是明顯優(yōu)于寧南霉素的另一個生物農(nóng)藥。(2)云南霉素的三個不同濃度處理l(50ppm)、2(75ppm)、3(100卯m)之間，處理1與處理2、3差異達極顯著，處理2與處理3差異達顯著顯著水平，有隨著濃度的增加藥效反而降低的趨勢。以50卯m液防治病毒病，有高效、低成本、安全的特點，值得在生產(chǎn)上擴大示范和推廣應(yīng)用。(3)云南霉素對大白菜軟腐病有一定的兼治作用和增產(chǎn)作用。(4)在生產(chǎn)上應(yīng)用的適期是零星發(fā)病時盡早用藥，推薦濃度為800E.烤煙病毒病田間藥效試驗報告1.試驗地點金雞鄉(xiāng)2.作物烤煙3.防治對象病毒病4.調(diào)查方法采用全區(qū)總體調(diào)查法，藥前基本沒有發(fā)病，在第一次噴藥后IO天進行第一次藥效調(diào)查，每次噴藥后io天調(diào)查各處理病情指數(shù)，最后一次藥效調(diào)查在第四次噴藥后io天進行，計算藥效。5.分級方法同烤煙示范例A6.藥效計算同烤煙示范例A7.試驗過程當(dāng)?shù)睾０?650米，土壤為潴育型水稻土，PH6.8-7.0,土壤有機質(zhì)3%左右，肥為中等，土壤干燥，常年降雨量1000mm，平均氣溫15.6。C,試驗期間6-7月降雨量400mm，平均氣溫19.5-20.9'C,煙草種植規(guī)格145cmx50cm,為單壟單行單株種植，每小區(qū)種植32株左右。8.施藥方法采用16型背負(fù)式手動噴霧器，按60Kg/畝藥液量均勻噴霧。在烤煙移栽后28天，葉齡6-8片，煙株未發(fā)病時噴藥。具體時間為6月6曰進行藥前病情基數(shù)調(diào)查，并噴藥且進行調(diào)查，施藥后未發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生藥害現(xiàn)象。9.試驗結(jié)果(1)5%云南霉素水劑(50ppm)防治烤煙病毒病(普通花葉病毒為主)防效78.84%為第一位，云葉菌素(75ppm)防防效73.46%為第二位，在本試驗中與2。/。寧南霉素(75ppm)相比，藥效分別提高了l2.31%和7.49%,可以看出在相同有效用量(75卯m)和較低有效濃度(50ppm)用量條件下，云南霉素對病毒病的防治效果優(yōu)于寧南霉素和毒消。(2)5%云南霉素水劑的藥效，在一定范圍內(nèi)隨施用濃度降低而增加，以50ppm左右防效最佳，濃度達到100ppm倍液時防效降低，可能因施用濃度過高對病毒鈍化作用不好而導(dǎo)致藥效下降，建議在大面積生產(chǎn)上應(yīng)用，推薦濃度為800~1000倍。(3)5%云南霉素水劑的施用適期應(yīng)在未發(fā)病或零星發(fā)時期進行；施藥次數(shù)以3-4次為宜；施藥間隔時間7天一次為好。(4)云南霉素處理對煙株中部葉片保護較好，基本沒有發(fā)病。在第四次藥后15天，頂部葉片才開始發(fā)病，由此可見云南霉素的持效期為10-15天。(5)使用5%云南霉素的1、2、3處理，最大葉葉面積分別比空白對照大180~100cm2,比毒消大170~90cm2,比寧南霉素大100~20cm2;每株煙的有效葉片分別對照多0.75~0.19張，處理l、2分別比寧南霉素多0.38~0.31張,說明使用云南霉素防治病毒病后，對烤煙的葉面積、有效葉的作用比對照、毒消、寧南霉素好(即對烤煙的增產(chǎn)增值效果較好)。因此，云南霉素是一個優(yōu)于寧南霉素和毒消的另一個較好的生物型抗病毒藥劑。F.番薪病毒病田間藥效試驗報告1.試驗地點元謀縣2.作物番茄3.防治對象病毒病4.調(diào)查方法釆用小區(qū)內(nèi)全區(qū)調(diào)查法，噴藥前進行藥前基數(shù)調(diào)査，每次噴藥后7天，調(diào)查各處理小區(qū)全部植株葉片，按蕃茄病毒病分級方法，計算各小區(qū)病情指數(shù)及防治效果，并目測藥害。依據(jù)4次防治后的病情指數(shù)、防治效果的平均數(shù)，求出該藥劑的病情指數(shù)及防治效果。5.分級方法0級無病癥；l級明脈、輕花葉；3級心葉及中部葉片花葉；5級心葉及中部葉片花葉，少數(shù)葉片畸形，皺縮或植株輕度矮化；7級重花葉、多數(shù)葉片畸形、皺縮或植株矮化；9級重花葉、葉片明顯畸形、線葉、植株嚴(yán)重矮化，甚至死亡。6.藥效計算(同烤煙示范例A)'7.試驗過程該試驗地海拔在1300米左右，土壤肥力中等偏下，PH6.5,排灌方便，管理精細(xì)；常年降雨量1200mm左右，平均氣溫20.6°C,試驗期間8-9月降雨量500mm左右，平均氣溫21.5~23.9匸；供試作物(蕃茄)播種時期為2006年8月15曰，于9月7曰移栽，秧齡23天，種植規(guī)格為二行單株七壟種植；8.施藥方法釆用16型背負(fù)式手動噴霧器，，按60Kg/畝藥液量均勻噴霧。在蕃茄開花前期，病毒病尚未發(fā)病，9月25日進行第一次噴藥，IO月并噴藥且進行調(diào)査，施藥后未發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生藥害現(xiàn)象。9.試驗結(jié)果(1)云南霉素的三個處理1、2、3的藥效分別為81.25%、71.88°/。、68.75%、比處理4(寧南霉素75卯m)62.5%分別高出18.75%、9.38%、6.25%,其中處理l(云南霉素50ppm)與處理4之間差異達極顯著水平，有相同有效含量(75ppm)的處理2和處理4之間差異達顯著水平。綜上所述，所有云南霉素的三個處理l、2、3藥效均優(yōu)于處理4(寧南霉素75ppm)。(2)云南霉素的三個處理l、2、3之間，處理1與處理2、3差異達極顯著，處理2與處理3差異達顯著水平，有隨著濃度的降低藥效反而增加的趨勢。(3)從試驗田間的直觀防治效果看，各藥劑處理不僅對花葉病毒病有明顯的防治效果，而且對蕃茄疫病也有減輕發(fā)病的兼治作用，經(jīng)調(diào)查兼治效果達37.5-54.17%,詳見表2。(4)蕃茄產(chǎn)量噴藥后經(jīng)兩次小區(qū)產(chǎn)量采收，產(chǎn)量第一位是處理2，平均畝產(chǎn)958.52公斤，比處理3(畝產(chǎn)量887.04公斤)增71.48公斤，增8.06%，比處理4(畝產(chǎn)量861.12公斤)增97.4公斤，增11.31%,比處理1(畝產(chǎn)量809.26公斤)增149.26公斤，增18.44%,比處理5(畝產(chǎn)量780公斤)增178.52公斤，增22.87%,比對照(畝產(chǎn)量618.52公斤)增340公斤，增54.96%。說明噴施5%云葉素水劑660倍液對防治蕃菜病毒病效果較為明顯，比毒消、寧南霉素效果好，挽回產(chǎn)量損失明顯。D.大豆花葉病試驗報告1.試驗地點集賢縣2.作物大豆3.防治對象大豆花葉病毒病根腐病4.調(diào)查方法試驗設(shè)三個處理，三次重復(fù)，各小區(qū)之間隨機排列，每個小區(qū)面積30平方米，試驗區(qū)周圍種植了同一品種大豆做為保護行。每次施藥后7天進行調(diào)查，每小區(qū)隨機取五點，每點5株，共25株，調(diào)查大豆花葉病的病朱株率和病情指數(shù)。5.分級方法0級主根無病斑；l級主根上有少量病斑，病斑面積占主根表面積1/4以下；3級主根上病斑面積占主根表面積1/4—1/2之間；5級主根上病斑面積占主根表面積在1/2—3/4之間；7級莖基部和主根病斑連面一片，形成繞莖現(xiàn)象，但根部未壞死；9級根部已死亡，地上部也萎蔫死亡。6.藥效計算(同烤煙示范例A)7.試驗過程該試驗播期在5月，采用人工播種，種肥為二銨、尿素，播后鎮(zhèn)壓一次。5月下旬進行一次化學(xué)封閉滅草，其它田間管理措施同生產(chǎn)田。6月下旬大豆達到4一5片復(fù)葉期，進行首次葉噴處理，每個小區(qū)一半面積施藥，另一半不施藥。8.施藥方法采用工農(nóng)16型手動噴器常量噴霧，畝噴藥液60公斤，每7天施藥一次，共三次。9.試驗結(jié)果(1)云南霉素對大豆根腐病具有一定的防治作用；.對大豆花葉病具有顯著的防治效果，而且能提高大豆長勢，改善色澤，促進單產(chǎn)提高，在大豆病的防治上達到明顯的防效分別達到72%-80%。G.棉苗根腐病田間藥效試驗報告1.試驗地點山西省棉花所農(nóng)場2.作物棉花.3.防治對象根腐病4.調(diào)查方法棉苗出土后，調(diào)查出苗期和出苗率，然后每2天調(diào)查1次死苗。病害發(fā)生高峰后(5月中旬，棉苗1一2真葉時)，挖取取樣行的所有棉苗，進行病情分級記載，結(jié)合歷次調(diào)查的病死苗數(shù)，計算死苗率、病情指數(shù)等。病情分級按常規(guī)分級標(biāo)準(zhǔn)，即0級健苗，根部潔白，無明顯病狀；I級根部已顯病狀或病斑環(huán)繞根部1/2以下；II級病斑環(huán)繞根部1/2以上或根系全部染??；III級棉苗因病枯死。5.分級方法0級主根無病斑；l級主根上有少量病斑，病斑面積占主根表面積1/4以下；3級主根上病斑面積占主根表面積1/4—1/2之間；5級主根上病斑面積占主根表面積在1/2—3/4之間；7級莖基部和主根病斑連面一片，形成繞莖現(xiàn)象，但根部未壞死；9級根部已死亡，地上部也萎蔫死亡。6.藥效計算①相對防治效果(％)=[(對照區(qū)病情指數(shù)-處理區(qū)病情指數(shù))/對照區(qū)病情指數(shù)]xl00②相對保苗效果(％)=[(對照區(qū)死苗率-處理區(qū)死苗率)/對照區(qū)死苗率]x100棉苗素質(zhì)測定結(jié)和根病調(diào)查，在取樣行隨機選取有代表性的棉苗ioo株，經(jīng)清水沖洗晾干后，稱其鮮重，計算單株鮮重。7.試驗過程為了系統(tǒng)準(zhǔn)確地反映供試藥劑對棉花出苗和根病的影響，在每個小區(qū)的20播種行間插種取樣行，定量播種棉子300粒。播種時間均為4月。棉苗出土后，調(diào)查出苗期和出苗率，然后每2天調(diào)查1次死苗。病害發(fā)生高峰后(5月中甸，棉苗l-2真葉時)，挖取取樣行的所有棉苗，進行病情分級記載，結(jié)合歷次調(diào)查的病死苗數(shù)，計算死苗率、病情指數(shù)等。8.施藥方法小區(qū)對比排列，兩行區(qū)，4次重復(fù)。為使云葉菌素和對照藥劑能夠均勻地拌在種子表面，拌種前將定量的供試藥劑有清水稀釋增容。9.試驗結(jié)果對棉苗根腐病有著一定的防治作用，相對保苗率達88.5%。從以上試驗結(jié)果，可以得出本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有下述有益效果1.先后在棉花根腐病、辣椒病毒病、大豆花葉病毒病、煙草病毒病、番茄病毒病、大白菜病毒病、豌豆病毒病和白粉病、瓜類病毒病和白粉病等作物上作過觀察試驗和正規(guī)試驗，據(jù)觀察，在作物發(fā)病初期或發(fā)病前開始第一次噴藥，每隔710天一次，噴3-4次，使用5%云葉菌素的有效濃度為25ppm-150ppm(有效含量18克~30克/畝、次)，最佳使用濃度為50~75ppm,藥效達80%左右，超過現(xiàn)在大面積推廣的寧南霉素、毒消等藥劑平均10個百分點以上，具有明顯促進生長、提高產(chǎn)品質(zhì)量和產(chǎn)量的作用，且安全、無殘留。2.云南霉素對由黃瓜花葉病毒、煙草普通花葉病毒、煙草馬鈴薯Y病毒、煙草馬鈴薯X病毒、煙草蝕紋病毒、叢頂病毒引起的烤煙病毒病、或由黃瓜花葉病毒、煙草普通花葉病毒等病毒引起的番薪、辣椒、大白菜等作物的病毒病(花葉病、蕨葉病、小葉病、斑點病、條斑病、畸形、矮縮、黃花、壞死等病毒病)有顯著的防治效果。3.本發(fā)明的云南霉素是從土壤中釆集分離得到的一株微生物經(jīng)發(fā)酵而制得的一，微生物生物農(nóng)藥。生產(chǎn)云南霉素采用通用的發(fā)酵設(shè)備，工藝簡單、周期短，發(fā)酵液經(jīng)過濾、濃縮，得產(chǎn)品。生產(chǎn)原料以玉米粉、花生餅粉、玉米淀粉、葡萄糖等農(nóng)副產(chǎn)品為主，價廉易得，生產(chǎn)過程不存在三廢問題，不造成環(huán)境污染。生產(chǎn)過程制得的產(chǎn)品云南霉素屬高效、低毒、低殘留、安全的生物農(nóng)藥。農(nóng)作物施用云葉菌素后，在煙草、瓜果、蔬菜、糧油上不會殘留，不污染水體和土壤，利于環(huán)境保護，適用于無公害的綠色食品的生產(chǎn)，具有良好的社會效益和環(huán)境效益，符合國家可持續(xù)發(fā)展的產(chǎn)業(yè)政策和國內(nèi)外農(nóng)藥發(fā)展的方向，是二十一世紀(jì)方向性產(chǎn)品。4.云南由于得天獨厚的地理及氣候條件，煙草、瓜果、蔬菜、中草藥及茶葉等是云南省主要并且在國內(nèi)具有優(yōu)勢的經(jīng)濟作物，種植面積愈來愈大，綠色產(chǎn)品作為今后農(nóng)業(yè)種植及加工發(fā)展的方向和目標(biāo)，迫切需要無公害高效生物農(nóng)藥品種。該產(chǎn)品的開發(fā)，對云南省成為綠色產(chǎn)業(yè)的大省，提高云南省農(nóng)作物、經(jīng)濟作物、中藥材等產(chǎn)品質(zhì)量，加快地方經(jīng)濟發(fā)展，會起到很大的促進作用。5.植物病害之一的病毒病在糧食、蔬菜、煙草、水果、花丼、中藥材等所有的作物上幾乎都能發(fā)病危害，造成不同程度的危害和損失。90年代前，幾乎沒有防治藥劑，糧食、煙草等主要作物經(jīng)常嚴(yán)重受害，成為不治之癥。90年代后，出現(xiàn)了病毒靈、植病靈、毒消等藥劑，但防治效果差，且屬化學(xué)農(nóng)藥。一直到2000年后，巿場上才有了"寧南霉素"這一新型綠色環(huán)保型生物農(nóng)藥，該藥劑在防治病毒病平均藥效達到70%左右。而本發(fā)明研制成功的"云南霉素"通過山西省農(nóng)科院、云南省大理州植保站、保山巿、等不同地區(qū)的農(nóng)業(yè)植保部門在蔬菜(辣椒、大白菜)、煙草、棉花、大豆等作物上的田間試驗，其結(jié)果被一些資深專家均給予肯定是一個極具開發(fā)潛力的微生物農(nóng)藥，在烤煙、蔬菜和多種經(jīng)濟作物上有廣闊前景的生物農(nóng)藥。通過田間實驗推廣得出云南霉素在防治病毒病的平均藥效達到80.4%左右，比同一類的生物農(nóng)藥"寧南霉素"相比較防治藥效高10%,由此不難看出"云南霉素"在藥效和使用成本上均優(yōu)于寧南霉素是一個全新生物農(nóng)藥。并且"云南霉素"除了在植物病害防治上藥效較好和防治作物具有廣譜性外，其還含有多種氨基酸、維生素和微量元素，故對作物生長具有明顯調(diào)節(jié)作用，對改善農(nóng)作物品質(zhì)，提高產(chǎn)量，增加效益均有顯著作用。具體實施方式通過下面給出的具體實施例，可以進一步清楚地了解本發(fā)明。但它們并不是對本發(fā)明保護范圍的限定。實施例1云南霉素的制備，釆用以下順序的步驟A:培養(yǎng)基配料溶解固體原輔助按比例稱重加入配料罐中，加入水?dāng)嚢杈鶆?，然后通過泵打入發(fā)酵罐中。B:罐體空消即先對空罐進行消毒。將蒸汽通入發(fā)酵罐，升溫至121~123°C,保持25C:實消把培養(yǎng)基打入罐中后，加水定容，攪拌均勻后，先將蒸汽通入加套或盤管，對培養(yǎng)基進行預(yù)熱，當(dāng)罐溫升至95。C左右時，將蒸汽直接通入罐內(nèi)，將培養(yǎng)基加熱至121~123°C,并且維持2530分鐘。然后用冷卻水降溫至培養(yǎng)溫度，同時罐內(nèi)通入無菌空氣，進行保壓。D:菌種斜面種和茲子瓶母種。由培養(yǎng)室培養(yǎng)提供。E:液體種培養(yǎng)種子罐培養(yǎng)基冷卻到28~30'C。用壓差法接入茄子瓶母種，通入無菌空氣，料風(fēng)比為1:0.5V/V/niin，罐壓0.05MPa，罐溫28。C,攪拌速度140~170rpm,培養(yǎng)時間3238小時。F:發(fā)酵培養(yǎng)基經(jīng)實消滅菌冷卻到28°C，通入無菌空氣保壓。當(dāng)種子罐中液體種子生長達到質(zhì)量要求后，按接種量1012(V/V)，釆用壓差法把種子罐種子轉(zhuǎn)移到發(fā)酵罐，通入無菌空氣，料風(fēng)比為1:0.4~0.6V/V/min罐壓0.05MPa;罐溫28。C;攪拌速度110~130rpci;發(fā)酵時間為36~42小時。G:空氣空氣經(jīng)壓縮；降溫、除水、分油；進入總空氣過濾器、預(yù)空氣過濾二級除菌，進入種子罐、發(fā)酵罐前分空氣過濾除菌，無菌空氣直接進入種子罐和發(fā)酵罐。進罐前無菌空氣壓力要求達0.18~0.2MPa。H、發(fā)酵液酸化處理將發(fā)酵液從發(fā)酵罐內(nèi)壓入酸化罐，調(diào)酸、攪拌均勻。I、過濾酸化發(fā)酵液經(jīng)離心初濾或用大超初濾，再經(jīng)膜濾，膜濾所得濾液收集于貯罐。J、濃縮調(diào)配從貯槽把濾液打入單效或多效薄膜濃縮器中進行濃縮，所得濃縮液打入調(diào)配罐，經(jīng)抽檢，達到質(zhì)量要求后，加入助劑，攪拌均勻，打入貯罐，準(zhǔn)備包裝。K、成品包裝化驗合格濃縮液(半成品)輸入包裝設(shè)備，成品包裝在自動包裝線上進行，每天單班生產(chǎn)成品約1.5噸，兩班每月生產(chǎn)90實施例2取發(fā)酵液化10升，加硅藻上過濾，棄去菌絲，濾液通過200克活性炭柱(水濕裝柱，柱5.5x55cm，進行吸附，50%丙酮洗脫，每250亳升收集一份，l-4份活性部分合并，除去丙酮，水溶液約500毫升，調(diào)pH3.0,通過裝有50毫升銨型陽離子交換柱，少量水沖洗后，用IN氨水洗脫，每100毫升收集一份，l-5份活性部分合并，去除氨氣，水溶液冷凍干燥，全部冷干品通過中性氧化鋁100亳升柱脫色(甲醇濕裝)，75%甲醇，流速1亳升/分鐘，檢測UV268nm,保留時間8.3分鐘)。取該95%純度的冷干品1克，加濃鹽酸40毫升，室溫水解60小時后，去掉鹽酸氣后的殘渣，加水200亳升，通過強酸陽離子樹脂IO毫升，進行交換，水洗后，用O.1N氨水洗脫，每3亳升收集一份，11-20份活性部分合并，去氨氣后冷凍干燥得到550亳克冷干品，取150亳克該冷干品通過葡聚糖凝膠，水洗，活性部分冷凍干燥，冷干品用硅膠薄板層析分離，60%甲醇展層，分離出活性部分的冷干品純度達96%以上，即為所需的云南霉素。權(quán)利要求1.云南霉素作為防治黃瓜花葉病毒的生物農(nóng)藥的應(yīng)用。2.云南霉素作為防治煙草普通花葉病毒的生物農(nóng)藥的應(yīng)用。3.云南霉素作為防治煙草馬鈴薯X病毒的生物農(nóng)藥的應(yīng)用。4.云南霉素作為防治煙草馬鈴薯Y病毒的生物農(nóng)藥的應(yīng)用。5.云南霉素作為防治煙草蝕紋病毒引起的烤煙病毒病的生物農(nóng)藥的應(yīng)用。6.云南霉素作為防治煙草叢頂病毒引起的烤煙病毒病的生物農(nóng)藥的應(yīng)用。7.云南霉素作為防治由黃瓜花葉病毒、煙草普通花葉病毒等病毒引起的番茄、辣椒、大白菜等作物的病毒病的生物農(nóng)藥的應(yīng)用。8.云南霉素作為防治花葉病、蕨葉病、小葉病、斑點病、條斑病、畸形、矮縮、黃花、壞死的病毒病的生物農(nóng)藥的應(yīng)用。專利摘要本發(fā)明公開了云南霉素作為生物農(nóng)藥的新用途。本發(fā)明的研究結(jié)果表明云南霉素對黃瓜花葉病毒、煙草普通花葉病毒、煙草馬鈴薯X病毒、煙草馬鈴薯Y病毒、煙草蝕紋病毒引起的烤煙病毒病、煙草叢頂病毒引起的烤煙病毒病、由黃瓜花葉病毒、煙草普通花葉病毒等病毒引起的番茄、辣椒、大白菜等作物的病毒病、花葉病、蕨葉病、小葉病、斑點病、條斑病、畸形、矮縮、黃花、壞死的病毒病均具有良好的防治功效，是一種具有良好開發(fā)應(yīng)用前景的生物農(nóng)藥。文檔編號A01P1/00GKCN101107927SQ200710065850公開日2008年1月23日申請日期2007年4月29日發(fā)明者何永斌,張春華,徐滇閩,朱英杰,李朝榮,白一彬申請人:云南天豐農(nóng)藥有限公司導(dǎo)出引文BiBTeX,EndNote,RefMan